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胆固醇-25-羟化酶基因抗病毒功能研究进展 预览
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作者 吕丽霞 赵贵民 +3 位作者 侯佩莉 潘伟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期113-118,共6页
胆固醇-25-羟化酶(cholesterol-25-hydroxylase,CH25H)为干扰素刺激基因,可通过其酶活性产物25-羟基胆固醇(25-hydroxycholesterol,25HC)发挥广谱的抗病毒作用。本文对CH25H的结构、酶活作用、脂肪代谢通路、抗病毒功能以及在免疫中的... 胆固醇-25-羟化酶(cholesterol-25-hydroxylase,CH25H)为干扰素刺激基因,可通过其酶活性产物25-羟基胆固醇(25-hydroxycholesterol,25HC)发挥广谱的抗病毒作用。本文对CH25H的结构、酶活作用、脂肪代谢通路、抗病毒功能以及在免疫中的作用进行了综述。 展开更多
关键词 胆固醇25-羟化酶 25-羟基胆固醇 抗病毒作用 干扰素刺激基因
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Viroporins在病毒感染中的作用 预览
2
作者 徐亚茹 侯佩莉 +3 位作者 赵贵民 潘伟 《动物医学进展》 北大核心 2019年第8期106-109,共4页
Viroporins是一类由病毒编码的小分子疏水性跨膜蛋白,具有1个~3个跨膜结构域,通过寡聚化形成离子通道,主要通过其离子通道活性来增加膜的渗透性,进而影响细胞运输、离子通量以及细胞器之间的连接和交换等基本生物学过程。病毒编码的Viro... Viroporins是一类由病毒编码的小分子疏水性跨膜蛋白,具有1个~3个跨膜结构域,通过寡聚化形成离子通道,主要通过其离子通道活性来增加膜的渗透性,进而影响细胞运输、离子通量以及细胞器之间的连接和交换等基本生物学过程。病毒编码的Viroporins不仅与病毒致病性有关,还参与调节宿主细胞的电化学平衡,并影响病毒的复制,因此它们有望成为抗病毒治疗的靶点。不同病毒的Viroporins在结构上具有不同的特点以及对病毒复制的影响、诱导的宿主细胞生物学反应,包括细胞自噬、细胞凋亡、细胞焦亡等方面具有不同的作用。随着生物技术的发展,Viroporins的结构和功能被研究的越来越透彻,为发现新的和更有效的病毒感染抑制剂提供参考。 展开更多
关键词 动物病毒 Viroporins 复制 宿主反应
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表达牛流行热病毒G蛋白的重组狂犬病病毒的构建及鉴定
3
作者 赵忠欣 孙培录 +7 位作者 盖微微 燕丽娜 傅倩芸 许彤 郑学星 郑文文 夏咸柱 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第2期116-121,共6页
目的以狂犬病病毒(RABV)弱毒株SAD株为载体,构建表达牛流行热病毒(BEFV)G蛋白的重组病毒SAD-BG。方法利用反向遗传技术将BEFV的G蛋白基因ORF插入到SAD株基因组的伪基因区,获得感染性克隆,与辅助质粒共转染BHK-21细胞,获得重组病毒SAD-B... 目的以狂犬病病毒(RABV)弱毒株SAD株为载体,构建表达牛流行热病毒(BEFV)G蛋白的重组病毒SAD-BG。方法利用反向遗传技术将BEFV的G蛋白基因ORF插入到SAD株基因组的伪基因区,获得感染性克隆,与辅助质粒共转染BHK-21细胞,获得重组病毒SAD-BG株。结果与结论通过RT-PCR、免疫荧光染色鉴定,表明BEFV G蛋白基因存在于重组病毒基因组,且能表达自身RABV G蛋白与外源BEFV G蛋白。通过BHK-21细胞和NA细胞鉴定重组病毒的生长特性,在NA细胞中重组病毒的滴度高于亲本SAD株,可达1.3×108FFU/ml。成功构建了表达BEFV G蛋白的重组病毒SAD-BG,为进一步研制预防狂犬病和牛流行热(BEF)的二联疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 牛流行热病毒 G蛋白 二联疫苗
A型口蹄疫病毒多肽抗原表位的原核表达及多克隆抗体的制备 预览
4
作者 程凯慧 沈付娆 +5 位作者 邹积振 苗自利 解晓莉 张亮 杨宏军 《江苏农业科学》 2019年第8期184-187,共4页
为构建A型口蹄疫病毒多肽抗原表位的原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术将不同株的A型口蹄疫病毒抗原表位A-A10-61-VP1(第141~160位氨基酸)、A-A10-61-VP1(第200~212位氨基酸)、A22Iraq-VP1(第136~164位氨基酸)串联,在其... 为构建A型口蹄疫病毒多肽抗原表位的原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术将不同株的A型口蹄疫病毒抗原表位A-A10-61-VP1(第141~160位氨基酸)、A-A10-61-VP1(第200~212位氨基酸)、A22Iraq-VP1(第136~164位氨基酸)串联,在其间引入合适的linker序列,重组得到pET-28a(+)质粒中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达重组蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体。成功构建了A型口蹄疫病毒抗原表位原核表达载体,获得高纯度重组蛋白和含A型口蹄疫病毒抗体的兔抗血清,为A型口蹄疫病毒诊断试剂盒的研发和A型口蹄疫病毒表位多肽疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 抗原表位 重组蛋白 多肽疫苗
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术区间隔缝合对腋臭术后并发症的预防 预览
5
作者 齐贺斌 张雅丽 +1 位作者 徐楠 《河北医药》 CAS 2019年第17期2694-2696,共3页
目的探讨术区间隔缝合对腋臭术后并发症的预防。方法收集2014年4月至2017年12月手术治疗的腋臭患者228例,常规小切口方法彻底清除大汗腺。将95例采用常规术后弹力绷带加压包扎患者设为对照组,经术区间隔缝合后弹力绷带加压包扎的133例... 目的探讨术区间隔缝合对腋臭术后并发症的预防。方法收集2014年4月至2017年12月手术治疗的腋臭患者228例,常规小切口方法彻底清除大汗腺。将95例采用常规术后弹力绷带加压包扎患者设为对照组,经术区间隔缝合后弹力绷带加压包扎的133例患者设为治疗组,比较2组术后血肿、皮肤坏死、切口愈合率。结果治疗组术后皮下血肿、皮肤坏死、切口延迟愈合率均优于对照组(P<0.05)。随访1年,按照Skin和Park腋臭程度分级,治疗组2例Ⅰ级,对照组1例Ⅰ级。对照组2例治疗组3例虽呈0级、但患者自觉复发,予以棉签檫拭双侧腋窝后患者自嗅后无异味,经心理疏导患者满意。结论经常规小切口治疗腋臭术后,术区间隔缝合能有效降低术后并发症和复发率,手术方便、无需特殊耗材,有临床推广价值。 展开更多
关键词 臭汗症 间隔缝合 加压包扎
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牛副流感病毒3型感染MDBK细胞后影响天然免疫基因表达的筛选与验证 预览
6
作者 赵贵民 吕丽霞 +3 位作者 乔军 夏咸柱 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期9-16,共8页
为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1 MOI基因C型SD2014 BPIV... 为筛选与验证牛副流感病毒3型(BPIV3)感染MDBK细胞后天然免疫相关基因的差异表达变化,通过细胞病变观察、Western blot验证病毒HN蛋白表达,以及病毒增殖复制动力学曲线,确定病毒复制情况。利用转录组测序技术,对1 MOI基因C型SD2014 BPIV3毒株感染MDBK细胞的12 h对照组与感染组的差异表达基因进行筛选,最后收集BPIV3感染MDBK不同时间点细胞样本,应用RT-qPCR在转录水平验证了天然免疫相关显著差异基因的表达变化情况。结果表明,BPIV3毒株在MDBK细胞上有较强的复制能力,从病毒感染12 h的转录组数据中获得了1 401个显著差异基因,经过筛选获得了9个与天然免疫相关的基因,最后在转录水平验证了MDA5、IRF7、STAT1、ISG65、TRIM25等9个与天然免疫相关基因的表达变化,并验证了其上、下游通路或同一家族基因的表达变化。结果表明,筛选与验证的BPIV3感染MDBK细胞差异表达天然免疫相关基因,为宿主细胞影响病毒复制的分子机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 牛肾上皮细胞 转录组学 天然免疫 筛选
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牛冠状病毒S蛋白抗原表位基因的串联表达及抗血清制备 预览
7
作者 程凯慧 沈付娆 +6 位作者 邹积振 朱彤 苗自利 张亮 解晓莉 杨宏军 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第10期59-61,66共4页
为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa~403 aa、771 aa~784 aa)的基因串联体R,将其重组到pET-28a(+)质粒中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱... 为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa~403 aa、771 aa~784 aa)的基因串联体R,将其重组到pET-28a(+)质粒中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达抗原表位融合蛋白,用纯化的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果显示,成功构建了BCoV抗原表位基因重组表达质粒,获得了融合蛋白的抗血清,Western-Blot检测显示,该抗血清可与BCoV的融合蛋白特异性结合。表明成功构建了BCoV抗原表位基因原核表达载体并获得了BCoV抗血清,本研究为BCoV诊断试剂盒的开发和BCoV多表位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 抗原表位 串联表达 抗血清
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RNA-Seq技术在动物病毒传染病学研究中的应用 被引量:1
8
作者 侯佩莉 +1 位作者 赵贵民 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1244-1249,共6页
病原与宿主相互作用,是构成感染的基本因素,RNA—Seq技术的发展推动病原与宿主相互作用研究,已进入全方位系统分析整个转录组水平,能够从整体水平研究差异表达基因以及基因功能,揭示特定生物学过程以及病毒致病的分子机理。现主要... 病原与宿主相互作用,是构成感染的基本因素,RNA—Seq技术的发展推动病原与宿主相互作用研究,已进入全方位系统分析整个转录组水平,能够从整体水平研究差异表达基因以及基因功能,揭示特定生物学过程以及病毒致病的分子机理。现主要介绍了RNA—Seq原理、技术特点及其在动物病毒感染研究中的应用,简略地分析了该技术的不足之处,并对其应用进行了展望。 展开更多
关键词 RNA—Seq 病毒感染 宿主 差异基因
牛副流感病毒3型(BPIV3)P蛋白磷酸化位点与功能性结构域分析 被引量:2
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作者 赵贵民 侯佩莉 +2 位作者 贾春涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期231-237,共7页
为解析牛副流感病毒3型(BPIV3)SD2014分离株P蛋白磷酸化位点与功能性结构域,首先对P基因全长进行克隆测序,并与SD0835株P基因进行比较;再利用DNAStar中的MegAlign软件,以ClustalW方法比较了副黏病毒不同种属15株参考毒株的P蛋白... 为解析牛副流感病毒3型(BPIV3)SD2014分离株P蛋白磷酸化位点与功能性结构域,首先对P基因全长进行克隆测序,并与SD0835株P基因进行比较;再利用DNAStar中的MegAlign软件,以ClustalW方法比较了副黏病毒不同种属15株参考毒株的P蛋白氨基酸序列的同源关系,并对23株牛、人和猪副流感病毒3型P蛋白氨基酸序列进行比对筛选保守的氨基酸位点;运用在线Netphos2.0Server和NetPhosK1.0 Server软件分别预测BPIV3 SD2014毒株P蛋白潜在的磷酸化位点和特异性磷酸化蛋白激酶作用位点,最后将P蛋白4个主要功能性结构域氨基酸位置与潜在磷酸化位点一一对应。结果发现,SD2014毒株P基因核苷酸序列与SD0835株同源性为99%,P蛋白氨基酸序列与猪副流感病毒3型(SPIV3)同源性最高为73.2%。P蛋白在398~479aa含有1段螺旋卷曲结构,推测是介导P蛋白四聚体的形成以及与L蛋白的相互作用的位点,同时发现PKC是唯一一个贯穿于所有功能结构域的蛋白激酶。本研究为进一步解析P蛋白磷酸化在调控BPIV3转录与复制过程中的作用奠定基础,同时也为研究P蛋白的生物学功能提供支撑。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 P蛋白 磷酸化住点 结构域 转录与调控
不同生物型BVDV感染宿主细胞后差异基因分析 预览 被引量:2
10
作者 程凯慧 朱彤 +6 位作者 侯佩莉 苗自利 张亮 解晓莉 杨宏军 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第11期3113-3120,共8页
为深人研究牛场中普遍存在的持续性感染,探讨不同生物型牛病毒性腹泻病毒(bovineviraldianrhea3-rus,BVDV)转化的分子机制,本试验将致细胞病变型BVDVCCP型BVDV)和非致细胞病变型BVDV(NCP型BVDV)感染MDBK细胞,观察细胞变化,感染后12.72h... 为深人研究牛场中普遍存在的持续性感染,探讨不同生物型牛病毒性腹泻病毒(bovineviraldianrhea3-rus,BVDV)转化的分子机制,本试验将致细胞病变型BVDVCCP型BVDV)和非致细胞病变型BVDV(NCP型BVDV)感染MDBK细胞,观察细胞变化,感染后12.72h期间每间隔12h收集1次细胞,同时对24、48h收集的细胞进行转录组学分析。结果显示,不同生物型BVDV感染宿主细胞2)h后,与感染NCP型BVDV的细胞相比,感染CP型BVDV的MDBB细胞中上调差异表达的基因2849个,下调差异表达的基因3347个,48h后,上调差异表达的基因2D33个,下调差异表达的基因2831个。对差异基因的GO功能分析结果表明,差异基因参与的分子功能主要有催化活性、结合活性、酶调节活性、分子转导活性和蛋白结合转录因子活性等;Pathway显著性富集分析结果显示,差异表达基因主要参与细胞自噬、细胞凋亡、免疫调节因子等相关的信号通路。本试验结果可为进一步揭示病毒致病的分子机制、控制BVDV和研制其候选疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 致细胞病变型BVDV 非致细胞病变型BVDV 差异基因 GO功能分析 Pathway显著性分析
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某规模化牛场口蹄疫免疫抗体水平检测及分析 预览 被引量:1
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作者 程凯慧 宋玲玲 +6 位作者 朱彤 苗自利 张亮 谷祖烨 杨宏军 《山东农业科学》 2017年第6期123-125,共3页
为了解某规模化牛场口蹄疫病毒(FMDV)的抗体水平及疫苗的免疫效果,本研究应用液相阻断ELISA检测技术对2012—2015年出生牛的380份血清进行A型FMDV和O型FMDV的抗体水平检测。结果表明,该牛场A型FMDV和O型FMDV的抗体阳性率分别为74.7%、... 为了解某规模化牛场口蹄疫病毒(FMDV)的抗体水平及疫苗的免疫效果,本研究应用液相阻断ELISA检测技术对2012—2015年出生牛的380份血清进行A型FMDV和O型FMDV的抗体水平检测。结果表明,该牛场A型FMDV和O型FMDV的抗体阳性率分别为74.7%、85.5%,整体免疫水平偏低。 展开更多
关键词 A型口蹄疫 O型口蹄疫 抗体水平 免疫程序
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牛病毒性腹泻病毒致病分子机制的研究进展 被引量:3
12
作者 侯佩莉 +3 位作者 赵贵民 夏咸柱 李光鹏 《内蒙古大学学报:自然科学版》 北大核心 2017年第4期452-457,共6页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)常侵害牛等多种动物,引起一种极为复杂,呈多种临床症状的牛病毒性腹泻-黏膜病,严重危害全球畜牧业的健康发展.BVDV致病机理非常复杂,给该病的防控和净化带来极大的困难.文章从BVDV分子生物学、病毒感染细胞、... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)常侵害牛等多种动物,引起一种极为复杂,呈多种临床症状的牛病毒性腹泻-黏膜病,严重危害全球畜牧业的健康发展.BVDV致病机理非常复杂,给该病的防控和净化带来极大的困难.文章从BVDV分子生物学、病毒感染细胞、免疫逃逸、细胞凋亡等方面进行综述,对BVDV与宿主相互作用研究进行了展望,有助于阐明BVDV致病及产生持续性感染的机制. 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 持续性感染 免疫逃逸 细胞凋亡
口蹄疫病毒致病分子机制的研究进展 被引量:2
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作者 侯佩莉 +3 位作者 赵贵民 夏咸柱 李光鹏 《内蒙古大学学报:自然科学版》 北大核心 2017年第4期458-463,共6页
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的,在世界范围内对偶蹄的家畜和野生动物都具有高度传染性.口蹄疫病毒感染后可诱导细胞凋亡、逃避先天免疫系统、产生免疫抑制,并形成持续感染.本文对口蹄疫病毒感染后的上述进程进行了综述,以更好地了解口蹄... 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的,在世界范围内对偶蹄的家畜和野生动物都具有高度传染性.口蹄疫病毒感染后可诱导细胞凋亡、逃避先天免疫系统、产生免疫抑制,并形成持续感染.本文对口蹄疫病毒感染后的上述进程进行了综述,以更好地了解口蹄疫病毒与宿主相互作用的分子机制,为口蹄疫防控和新型疫苗的研发提供策略. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 细胞凋亡 免疫逃逸 持续性感染
牛副流感3型病毒Nano-PCR、LAMP方法的建立及初步应用 预览 被引量:1
14
作者 李健友 李家伟 +2 位作者 王超 郭利 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第10期2837-2844,共8页
试验旨在建立牛副流感3型病毒(bovine parainfluenza type-3 virus,BPIV3)纳米PCR(Nano-PCR)与环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)新型快速分子检测技术,对其进行特异性和敏感性对比试验,并对10份... 试验旨在建立牛副流感3型病毒(bovine parainfluenza type-3 virus,BPIV3)纳米PCR(Nano-PCR)与环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)新型快速分子检测技术,对其进行特异性和敏感性对比试验,并对10份临床样品进行了检测。特异性与敏感性试验结果显示,建立的Nano-PCR和LAMP方法只对BPIV3特异,而对牛呼吸道合胞体病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒无交叉反应;建立的Nano-PCR和LAMP方法具有相同的敏感性,均是普通PCR的10倍,最低核酸检出量均为4.16×102拷贝/μL。临床检测结果显示,建立的两种方法阳性符合率为100%,且阳性检出率均高于普通PCR。因此,本试验建立的Nano-PCR和LAMP方法为BPIV3的临床诊断提供了更快速、敏感、可靠的工具。 展开更多
关键词 牛副流感3型病毒(BPIV3) Nano-PCR LAMP
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改良真皮内缝合法在整形美容外科的应用 预览 被引量:1
15
作者 《武警后勤学院学报:医学版》 CAS 2017年第4期330-332,共3页
缝合是外科手术的操作技术之一,其主要目的是对合创口边缘,消除死腔,促进愈合。整形美容外科较为理想的缝合技术是分层缝合,可保证创缘的准确对合,松紧度适宜;彻底止血后由内向外依次创缘缝合,能预防错位。本研究将我院整形美容外科收... 缝合是外科手术的操作技术之一,其主要目的是对合创口边缘,消除死腔,促进愈合。整形美容外科较为理想的缝合技术是分层缝合,可保证创缘的准确对合,松紧度适宜;彻底止血后由内向外依次创缘缝合,能预防错位。本研究将我院整形美容外科收治患者96例的资料整理如下,探究改良真皮内缝合法的临床价值。 展开更多
关键词 改良真皮内缝合法 整形美容 临床效果
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新大地煤矿穿层钻孔终孔层位优化模拟研究 预览
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作者 《能源技术与管理》 2017年第3期34-36,共3页
针对新大地煤矿15101工作面邻近层穿层钻孔布置层位仅靠工程经验确定、缺乏科学依据的问题,根据15101工作面的现场实际条件,建立了FLUENT数值计算模型,对不同终孔层位下穿层钻孔的抽采效果进行了数值模拟。模拟结果表明,当终孔层位过高... 针对新大地煤矿15101工作面邻近层穿层钻孔布置层位仅靠工程经验确定、缺乏科学依据的问题,根据15101工作面的现场实际条件,建立了FLUENT数值计算模型,对不同终孔层位下穿层钻孔的抽采效果进行了数值模拟。模拟结果表明,当终孔层位过高或过低时,穿层钻孔控制范围无法有效覆盖距离较远的煤层,出现瓦斯超限;当穿层钻孔终孔位于裂隙带中上部,即距离15-#煤底板51.06 m时,15101工作面上隅角未出现瓦斯超限。 展开更多
关键词 本煤层瓦斯 数值模拟 瓦斯抽采 参数优化
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牛副流感病毒3型抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用 预览 被引量:7
17
作者 杨建乐 赵贵民 +3 位作者 侯佩莉 李杰 《动物医学进展》 北大核心 2016年第11期19-24,共6页
旨在建立牛副流感病毒3型(BPIV3)抗体间接ELISA检测方法。克隆NP-HN截短串联基因并构建原核表达载体pET28a(+)-NP-HN,诱导纯化NP-HN重组蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立BPIV3抗体间接ELISA检测方法,进一步与病毒中和试验... 旨在建立牛副流感病毒3型(BPIV3)抗体间接ELISA检测方法。克隆NP-HN截短串联基因并构建原核表达载体pET28a(+)-NP-HN,诱导纯化NP-HN重组蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立BPIV3抗体间接ELISA检测方法,进一步与病毒中和试验和进口ELISA试剂盒进行比较,应用本方法对270份临床血清样本进行了检测。结果表明,表达的NP-HN重组蛋白大小为44ku,具有良好的反应原性,建立的ELISA检测方法特异性强,与牛的主要呼吸道病原如牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等均无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数小于8%,与病毒中和试验和进口商品化ELISA试剂盒的总符合率分别为96.67%和98.89%。对采自山东、辽宁和天津的270份临床血清样本检测后总的阳性率为82.59%(223/270)。建立的BPIV3抗体间接ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可应用于BPIV3的流行病学调查和抗体检测研究。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 NP-HN基因 原核表达 酶联免疫吸附试验 抗体检测
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我国家畜布鲁氏菌病流行现状与诊断技术研究进展 预览 被引量:18
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作者 赵贵民 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2016年第16期33-39,共7页
布鲁氏菌病是由细胞内寄生的布鲁氏菌引起的一种危害极其严重的人畜共患传染病,本文详细分析了布鲁氏菌病在我国人畜间最新流行现状,重点介绍了布鲁氏菌分型及诊断技术,特别是免疫与自然感染鉴别诊断技术的最新研究进展,同时对今后... 布鲁氏菌病是由细胞内寄生的布鲁氏菌引起的一种危害极其严重的人畜共患传染病,本文详细分析了布鲁氏菌病在我国人畜间最新流行现状,重点介绍了布鲁氏菌分型及诊断技术,特别是免疫与自然感染鉴别诊断技术的最新研究进展,同时对今后我国布鲁氏菌病的防控提出了建议. 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 防控 鉴别诊断 群体监测 现场诊断
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牛Mx1基因重组慢病毒载体的构建及沉默Mx1细胞的获得
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作者 刘文浩 +2 位作者 夏咸柱 胡桂学 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2030-2034,共5页
采用RT—PCR技术从牛肾细胞中扩增出Mx1基因,构建牛Mx1基因过表达重组载体;针对牛Mx1mRNA序列设计shRNA引物对,构建针对牛Mx1的RNAi载体。将牛Mx1的过表达载体和RNAi栽体共转染293T细胞,利用Westernblot方法检测牛Mx1蛋白的表达情... 采用RT—PCR技术从牛肾细胞中扩增出Mx1基因,构建牛Mx1基因过表达重组载体;针对牛Mx1mRNA序列设计shRNA引物对,构建针对牛Mx1的RNAi载体。将牛Mx1的过表达载体和RNAi栽体共转染293T细胞,利用Westernblot方法检测牛Mx1蛋白的表达情况,筛选有效沉默牛Mx1的shRNA;将有效沉默Mx1的RNAi载体转染牛胎儿气管原代上皮细胞,经流式细胞分选,Westernblot检测,获得沉默牛Mx1的稳定细胞系。结果表明,成功构建了牛Mx1过表达重组载体pcDNA3.1-Mx1和RNAi载体RNAi—Mx1A、RNAi—Mx1B、RNAi—Mx1C,筛选到RNAi—Mx1A沉默牛Mx1效果最好;经流式细胞分选和Westernblot检测,获得有效沉默牛Mx1的牛胎儿气管原代上皮细胞,为进一步探讨牛Mx1抗病毒作用及机制的研究奠定试验基础。 展开更多
关键词 牛Mx1基因 胎儿原代气管上皮细胞 RNA干扰
基于口蹄疫病毒非结构蛋白3AB/2C的ELISA鉴别检测试剂盒的研制与应用 被引量:2
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作者 董林 王金良 +4 位作者 王艳萍 李金林 沈志强 《畜牧与兽医》 北大核心 2016年第11期71-76,共6页
基于口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB/2C,研制快速鉴别口蹄疫自然感染和疫苗接种的ELISA检测试剂盒。诱导表达3AB/2C蛋白,His亲和层析纯化目的蛋白;以纯化的3AB/2C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法,优化ELISA反应条件;标准化ELISA操... 基于口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB/2C,研制快速鉴别口蹄疫自然感染和疫苗接种的ELISA检测试剂盒。诱导表达3AB/2C蛋白,His亲和层析纯化目的蛋白;以纯化的3AB/2C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法,优化ELISA反应条件;标准化ELISA操作规程和试剂盒组分,组装ELISA试剂盒,进行特异性、敏感性、符合率、重复性、血清交叉反应、保存期等性能评价;分离临床牛血清进行应用性检测,评价ELISA试剂盒适用性。结果获得了大小约51 ku可溶性表达3AB/2C蛋白,亲和层析纯化后纯度可达90%以上;确定最适抗原包被浓度为3.25μg/m L,血清稀释度1∶80,封闭液为2%乳清蛋白,封闭条件为37℃1 h 4℃10 h;试剂盒敏感性97.5%、特异性98.3%,批内、批间变异系数分别为3.40%~6.71%和5.20%~8.44%;与3种商品化试剂盒符合率分别为98.90%、98.02%和96.72%;试剂盒4℃条件下保存期可达12个月;1 457份临床样品检测,FMDV感染阳性率6.41%~30.35%。本研究研制的鉴别ELISA试剂盒检测结果可靠、稳定性好,能有效鉴别FMDV自然感染和疫苗免疫,可为FMD综合防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫 3AB/2C 鉴别检测 ELISA试剂盒
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