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萘哌地尔衍生物治疗小鼠前列腺增生的实验研究 预览 被引量:1
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作者 殷爱强 朱柳 +2 位作者 麦亚映 袁牧 清声 《陕西医学杂志》 CAS 2011年第9期 1112-1115,共4页
目的:探讨萘哌地尔衍生物(GYYM)对丙酸睾酮诱发的雄性小鼠良性前列腺增生(BPH)模型的影响方法:用激素法诱发小鼠前列腺增生,称重法测定前列腺湿重,计算前列腺指数;光镜下观察前列腺组织形态变化,并进行形态定量学分析。结果:GYY... 目的:探讨萘哌地尔衍生物(GYYM)对丙酸睾酮诱发的雄性小鼠良性前列腺增生(BPH)模型的影响方法:用激素法诱发小鼠前列腺增生,称重法测定前列腺湿重,计算前列腺指数;光镜下观察前列腺组织形态变化,并进行形态定量学分析。结果:GYYM各剂量组治疗4周后,均可降低小鼠前列腺湿重指数。光镜下可见:GYYM剂量依赖性地使增生的腺上皮乳头减少或消失,上皮细胞呈低立方或扁平状,均使BPH小鼠前列腺腺体平均最小直径、最大直径及平均面积减小(P〈0.05)。结论:GYYM具有抗前列腺增生的作用。 展开更多
关键词 前列腺增生/化学诱导 前列腺增生/药物疗法 前列腺增生/病理学 肾上腺素 能α拮抗剂/治疗应用 动物 实验 小鼠
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中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡的机制 预览
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作者 刘新艳 清声 +5 位作者 王桂平 红娥 朱柳 袁牧 楼晓华 腾脉坤 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期257-260,共4页
目的通过检测内皮细胞Bcl-2和caspase3的表达水平,探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的可能机制。方法采用血管内消化法原代培养牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)。实验分为不同浓度的CCVAF组(1.25,2.5,5,10 mg/L)... 目的通过检测内皮细胞Bcl-2和caspase3的表达水平,探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的可能机制。方法采用血管内消化法原代培养牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)。实验分为不同浓度的CCVAF组(1.25,2.5,5,10 mg/L)和对照组(等体积的培养基)。采用流式细胞仪检测CCVAF作用24 h后各组BAVEC的Bcl-2表达水平;采用比色法测定caspase3的活性。结果经CCVAF作用后,流式细胞仪测定各组均未见到有阳性峰出现在M1,抗凋亡蛋白Bcl-2表达并没有受到药物的影响。而与对照组相比,capase3活性在1.25mg/L组即出现升高,此后随浓度的增加而升高,呈剂量依赖性(r=0.929,P〈0.05)。各浓度组加入capase3活性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)后,capase3活性明显降低,但仍然高于对照组(P〈0.05)。结论 CCVAF不影响内皮细胞Bcl-2的表达,而能够上调capase3的活性。其可能不经Bcl-2影响的线粒体所在的凋亡通路调节细胞的凋亡。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒 内皮细胞 BCL-2 capase3 凋亡 血管生成 肿瘤
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中华眼镜蛇毒活性组分抑制微血管形成研究 预览
3
作者 朱柳 清声 +5 位作者 刘新艳 红娥 袁牧 王桂平 楼晓华 滕脉坤 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期364-368,共5页
目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抗血管生成的作用。方法采用原代培养牛肺主动脉内皮细胞克隆形成实验、Transwell小室趋化实验及大鼠胸主动脉环体外无血清培养微血管样结构形成实验,分别观察CCVAF对内皮细胞克隆形成、细胞迁移... 目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抗血管生成的作用。方法采用原代培养牛肺主动脉内皮细胞克隆形成实验、Transwell小室趋化实验及大鼠胸主动脉环体外无血清培养微血管样结构形成实验,分别观察CCVAF对内皮细胞克隆形成、细胞迁移及大鼠动脉环微血管生成的影响。结果 CCVAF浓度为1.25,2.5,5.0μg/mL时,其对内皮细胞克隆形成抑制率分别为17.7%,40.3%,62.9%,呈浓度依赖性(r=0.982,P〈0.05),而对内皮细胞迁移抑制率分别为20.5%,59.0%,73.5%,呈浓度依赖性(r=0.902,P〈0.05);大鼠动脉环培养至第13天,CCVAF组较溶剂对照组微血管生成率下降了86.5%,CCVAF+VEGF组较VEGF对照组微血管生成率下降了88.1%。结论 CCVAF能够抑制内皮细胞克隆的形成、Hela细胞诱导的内皮细胞迁移和大鼠动脉环微血管的生成。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒 细胞迁移 动脉环体外培养 血管生成
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眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞生长及其生化机制初探 预览 被引量:1
4
作者 朱柳 清声 +5 位作者 袁牧 刘新艳 王桂平 红娥 楼晓华 滕脉坤 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期 361-364,共4页
目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抑制新生牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)生长的作用及其生化机制。方法用MTT法测定CCVAF抑制BAVEC的增殖活性,用伊红-考马斯亮蓝法观察细胞骨架,罗丹明-鬼笔环肽荧光探针F-actin骨架蛋白定位,... 目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抑制新生牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)生长的作用及其生化机制。方法用MTT法测定CCVAF抑制BAVEC的增殖活性,用伊红-考马斯亮蓝法观察细胞骨架,罗丹明-鬼笔环肽荧光探针F-actin骨架蛋白定位,荧光标记流式细胞法测荧光强度表胞内钙离子浓度[Ca^2+]i及分光光度法测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO)的含量。结果CCVAF(0.625-20μg/mL)剂量依赖性地抑制内皮细胞的生长,IC50=2.45μg/mL。CCVAF与BAVEC共同孵育后,引起细胞间连接减少,细胞F-actin分布混乱;细胞上清液中LDH活力及NO的含量及胞内[Ca^2+]i分别增加。结论CCVAF抑制BAVEC增殖,可能与CCVAF导致细胞骨架改变,LDH及NO分泌量及胞内Ca^2+浓度增加等生化机制有关。 展开更多
关键词 蛇毒 中华眼镜蛇毒 内皮 骨架 一氧化氮
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中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡 预览 被引量:3
5
作者 刘新艳 清声 +5 位作者 红娥 朱柳 王桂平 袁牧 楼晓华 腾脉坤 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期 822-826,共5页
目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venomactive factor,CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的作用。方法采用荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine artefia pulmonalis vascular endothelial cells,BA... 目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venomactive factor,CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的作用。方法采用荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine artefia pulmonalis vascular endothelial cells,BAVEC)凋亡形态学、DNA、细胞周期以及凋亡指数的影响。结果经AO染色、流式细胞仪分析均证实CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡。荧光显微镜下观察到CCVAF各浓度(0.15625、0.3125、0.625、1.25μmol·L^-1)组处理的内皮细胞,核染色质固缩或断裂成片段状,染色不均匀,出现凋亡小体,凋亡细胞的比例随浓度升高而增加,0.625μmol·L^-1组视野内凋亡细胞最多;流式细胞仪分析结果表明CCVAF在浓度低于0.625μmol·L^-1,细胞生长被阻滞在S期,1.25μmol·L^-1时则被阻滞在G0/G1期,且细胞凋亡率随浓度升高而逐渐增加。结论CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡,通过此途径抑制内皮细胞的生长增殖,这可能是其对抗血管生成的机制。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒 内皮细胞 细胞凋亡 血管生成 肿瘤
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中华眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞增殖及其机制探讨 预览 被引量:1
6
作者 朱柳 清声 +4 位作者 袁牧 刘新艳 王桂平 楼晓华 腾脉坤 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期 355-358,共4页
目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor,CCVAF)对新生牛肺主动脉血管内皮细胞增殖的抑制作用,并探讨其抑制细胞增殖的胞内机制。方法采用胰酶消化法体外培养新生牛肺主动脉血管内皮细胞,将不同浓度的CCVA... 目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor,CCVAF)对新生牛肺主动脉血管内皮细胞增殖的抑制作用,并探讨其抑制细胞增殖的胞内机制。方法采用胰酶消化法体外培养新生牛肺主动脉血管内皮细胞,将不同浓度的CCVAF与细胞在高血清、VEGF条件下共孵育,应用MTT法检测细胞增殖,免疫组化方法检测各组C—myc,C—fos,PCNA表达。结果CCVAF终浓度为1.25,2.5,5.0μg/ml,对常规培养的细胞增殖抑制率分别为22%,54%,83%,对VEGF诱导的体外培养的细胞增殖抑制率分别为18%,39%,72%,对高血清诱导的细胞增殖抑制率分别为20%,44%,79%;CCVAF终浓度为2.5μg/ml,C—myc,C—fos及PCNA阳性细胞标记指数比对照组分别降低89.7%,47、1%及88.0%。结论CCVAF可抑制常规培养的、VEGF及高血清诱导的新生牛肺主动脉血管内皮细胞增殖,这种抑制作用呈剂量依赖性;抑制胞内C—myc,C—fos,PCNA的表达可能是其抑制细胞增殖的机制之一。CCVAF抑制血管内皮细胞增殖作用可能在抗血管生成方面具有重要意义。 展开更多
关键词 蛇毒 中华眼镜蛇毒 血管内皮细胞 细胞增殖 胞内机制
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青蒿琥酯诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究 预览 被引量:5
7
作者 孔恒 清声 +6 位作者 朱柳 袁牧 王肃生 冀航 张志华 梁刚 黄宗海 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期 970-974,共5页
目的探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕,采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后,取第3~5代成纤维细胞,采用含60、120和240mg/LArt培... 目的探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)诱导皮肤瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及机制。方法取自愿捐献的人耳垂增生性瘢痕,采用组织块贴壁法进行细胞培养。经免疫组织化学染色鉴定后,取第3~5代成纤维细胞,采用含60、120和240mg/LArt培养液各5ml培养作为实验组,仅加入等量的培养液作为对照组。于倒置显微镜及透射电镜观察,采用流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期。另取第3~5代成纤维细胞,实验组采用30、60和120mg/LArt培养液,对照组仅加入等量的培养液,观察细胞内钙离子的变化。结果原代成纤维细胞呈典型的梭形贴壁生长,免疫组织化学鉴定细胞波形蛋白呈阳性表达;倒置显微镜下观察Art在60~240mg/L浓度范围内抑制成纤维细胞生长且呈剂量及时间依赖性,细胞出现凋亡征象;透射电镜观察,各实验组出现染色质浓缩,沿着核膜排列,甚至核碎裂现象。细胞周期分析显示各实验组与对照组比较,凋亡细胞比例、处于G0~G1、S、G2~M期细胞数差异均有统计学意义(P〈0.05),实验组均出现典型的凋亡峰,且随药物浓度增加,峰值越大。Art在30~120mg/L作用成纤维细胞24h可引起细胞内钙离子浓度持续增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论Art通过作用于成纤维细胞周期诱导细胞凋亡,细胞内钙离子浓度升高可能是其诱导成纤维细胞凋亡的机制之一。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 青蒿琥酯 成纤维细胞 凋亡 钙离子浓度
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眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的保护试验 预览
8
作者 黄月玲 丘剑峰 +2 位作者 刘寒英 清声 王桂平 《中国医药导报》 2007年第07X期 120-121,共2页
目的:制备特异性高的鸡眼镜王蛇毒卵黄抗体,并对其进行体外和体内保护试验。方法:用眼镜王蛇毒免度母鸡,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体IgY,用水溶解法提取IgY,进行小鼠体外中和试验和体内保护试验。结果:沐外、体内保护试验显示... 目的:制备特异性高的鸡眼镜王蛇毒卵黄抗体,并对其进行体外和体内保护试验。方法:用眼镜王蛇毒免度母鸡,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体IgY,用水溶解法提取IgY,进行小鼠体外中和试验和体内保护试验。结果:沐外、体内保护试验显示,6mg/kg的IgY可有效中和小鼠体内低剂量(≤3LD50)的蛇毒,对致死剂量蛇毒有很好的保护效应。结论:从卵黄中制备的抗眼镜王蛇毒IgY可有效地中和眼镜王蛇毒。 展开更多
关键词 卵黄抗体(IgY) 体内保护作用 体外中和试验
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中华眼镜蛇毒F组分抗血小板聚集的作用机制
9
作者 张梅 清声 +3 位作者 李卫 覃媛 黄劭 孔天翰 《中华生物医学工程杂志》 2007年第5期 269-271,共3页
目的探讨中华眼镜蛇毒F组分抑制血小板聚集的作用机制。方法用比浊法测定中华眼镜蛇毒F组分对二磷酸腺苷、花生四烯酸和血小板活化因子诱导血小板聚集作用的影响,流式细胞术观察中华眼镜蛇毒F组分对荧光标记的单克隆抗体CD41(FITC—C... 目的探讨中华眼镜蛇毒F组分抑制血小板聚集的作用机制。方法用比浊法测定中华眼镜蛇毒F组分对二磷酸腺苷、花生四烯酸和血小板活化因子诱导血小板聚集作用的影响,流式细胞术观察中华眼镜蛇毒F组分对荧光标记的单克隆抗体CD41(FITC—CD41)和CD61(FITC—CD61)与血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)结合的影响。结果中华眼镜蛇毒F组分明显抑制二磷酸腺苷、花生四烯酸和血小板活化因子诱导的血小板聚集,其作用呈现一定程度的剂量依赖关系。中华眼镜蛇毒F组分可以明显降低单克隆抗体CD41(抗GPⅡb)与血小板的结合率,而对单克隆抗体CD61(抗GPⅢa)与血小板的结合率没有影响。结论中华眼镜蛇毒F组分可以抑制多种激动剂诱导的血小板聚集,其机制和中华眼镜蛇毒F组分与血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物的结合有关。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒液类 血小板聚集 血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物
抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其对眼镜王蛇毒的中和作用 预览 被引量:3
10
作者 王桂平 刘新艳 +1 位作者 朱柳 清声 《中国临床药理学与治疗学》 CSCD 2007年第11期 1250-1254,共5页
目的:探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法:采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估... 目的:探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法:采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒的中和作用。结果:嗜硫色谱法制备的卵黄抗体具有良好的免疫活性,并且对眼镜王蛇毒素显示较好的中和效应,在体外6mg/kg抗眼镜王蛇毒卵黄抗体可有效地中和约4LD50(约1.6mg/kg)的眼镜王蛇毒素,而在体内可有效地中和约3LD50(约1.2mg/kg)的眼镜王蛇毒素。结论:抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有良好的中和作用,本项目为抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的进一步研究开发提供实验依据。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体 免疫活性 中和作用
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中华眼镜蛇毒活性组分选择性抑制内皮细胞增殖 预览 被引量:6
11
作者 刘新艳 清声 +4 位作者 红娥 朱柳 王桂平 楼晓华 腾脉坤 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期 184-188,共5页
目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom activefactor,CCVAF)对内皮细胞增殖的选择性抑制作用。方法实验分对照组和不同浓度的CCVAF组,应用MTT法分析CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pulmonalis vascular endo... 目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom activefactor,CCVAF)对内皮细胞增殖的选择性抑制作用。方法实验分对照组和不同浓度的CCVAF组,应用MTT法分析CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pulmonalis vascular endothelial cells,BAVEC)、SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMC)、人胚肺成纤维细胞HLF以及人支气管上皮细胞HBE生长增殖的影响;并运用直线回归分析统计对比CCVAF在不同时间点对BAVEC的IC50及上述各细胞的24hIC50。结果CCVAF呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:6、12、24、48、72h其IC50分别为4.955、4.932、2.443、3.048、3.133mg·L^-1,24h抑制作用最强;观察此时浓度与抑制作用的关系,0.625、1.25、2.5、5、10、20mg·L^-1,抑制率分别是4.41%、30.94%、61.81%、86.17%、96.05%、98.68%,10mg·L^-1抑制率即达高峰,且各浓度组抑制作用与对照组相比差异有显著性(P〈0.05)。CCVAF抑制内皮细胞增殖具有一定的选择性,作用24h后,抑制BAVEC生长的作用明显高于其它3种细胞,对BAVEC、HLF、HBE、SMC的24h IC50分别为2.443、22.233、35.318、32.810mg·L^-1。结论CCVAF能够选择性抑制内皮细胞增殖,这在抗血管生成及其靶向治疗研究中可能具有重要意义。 展开更多
关键词 眼镜蛇毒 内皮细胞 血管生成 选择性 肿瘤
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卵黄抗体用于蛇毒抗原检测的初步研究 预览 被引量:5
12
作者 王桂平 清声 +3 位作者 刘新艳 朱柳 覃媛 黄劭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期 1351-1354,共4页
目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶... 目的在常规ELISA检测中,以卵黄抗体取代哺乳动物来源的IgG类抗体,以探讨卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标;将卵黄抗体及相应酶标抗体应用于常规ELISA中,对国内常见蛇毒样品抗原(包括眼镜王蛇毒、眼镜蛇毒、金环蛇毒、银环蛇毒、五步蛇毒及广东园斑蝰蛇毒)进行检测,并进行灵敏度、精确度、特异性及交叉反应等分析.结果检测的灵敏度可达32 μg·L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32~750 μg·L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);初步应用表明卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500 μg·L-1)时存在轻度交叉反应,不干扰实验检测,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显,干扰实验检测;应用本方法对低(100 μg·L-1)、中(300 μg·L-1)、高(1 000 μg·L-1)不同浓度的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内变异系数均在1%~3%之内,板间变异系数在8%以内.结论 特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,具有灵敏度高、特异性较强等优点.该研究将为蛇伤诊断试剂盒的研制提供相应的理论依据. 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体(IgY) 酶联免疫吸附试验(ELISA) IGG类抗体
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中华眼镜蛇毒F组份对血小板活化时蛋白酪氨酸磷酸化的影响 预览 被引量:2
13
作者 张梅 清声 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 293-295,共3页
目的:观察中华眼镜蛇毒F组份抑制血小板聚集的胞内信号转导机制.方法:实验分6组:(1)空白组;(2)对照组;(3)-(6)实验组加入浓度为100、30、10、3 mg/L F组份.用比浊法测定血小板聚集率.用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定血小板内... 目的:观察中华眼镜蛇毒F组份抑制血小板聚集的胞内信号转导机制.方法:实验分6组:(1)空白组;(2)对照组;(3)-(6)实验组加入浓度为100、30、10、3 mg/L F组份.用比浊法测定血小板聚集率.用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定血小板内蛋白酪氨酸磷酸化的表达.结果:F组份呈浓度依赖性抑制二磷酸腺苷(ADP)引起的分子量为76、66和37.5 kD蛋白酪氨酸磷酸化的表达,其中30、100mg/L给药组中,3个分子量蛋白与对照组比较均有显著差异,P<0.05.F组份对ADP引起血小板聚集作用的抑制同降低76、66和37.5 kD 3个分子量蛋白酪氨酸磷酸化的表达呈明显的正相关(r=0.9367,P<0.01).结论:中华眼镜蛇毒F组份通过抑制分子量为76、66和37.5 kD蛋白的酪氨酸磷酸化表达,对血小板胞内信号转导过程发生影响,可能是其抗栓机制之一. 展开更多
关键词 眼镜蛇毒液类 血小板聚集 印迹法 蛋白质 蛋白质酪氨酸磷酸化 信号转导
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中华眼镜蛇毒组分抑制肺癌细胞H1299的血管生长因子VEGF和Bfgf 预览 被引量:5
14
作者 红娥 清声 +4 位作者 刘新艳 朱柳 LOU Xiao-hua 楼晓华 腾脉坤 《中国临床药理学与治疗学》 CSCD 2005年第9期 970-973,共4页
目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299 VEGF、bFGF表达的抑制作用.方法:采用RT-PCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGF mRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量.结果:不同浓度的(2.0、4.0... 目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299 VEGF、bFGF表达的抑制作用.方法:采用RT-PCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGF mRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量.结果:不同浓度的(2.0、4.0 μg·ml-1)CCVAF对H1299 bFGF mRNA水平有降低作用,其中 4.0 μg·ml-1 CCVAF作用7 h后bFGF mRNA的表达明显降低,但对VEGF mRNA的表达无明显影响.CCVAF作用H1299细胞24 h后,其细胞上清中VEGF、bFGF的含量较对照组明显减少(P<0.05),且呈剂量依赖性.结论:CCVAF可抑制H1299细胞bFGF mRNA和蛋白的表达及VEGF蛋白的表达. 展开更多
关键词 中华眼镜蛇毒 肺癌细胞 RT-PCR ELISA VEGF BFGF
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卵黄抗体用于眼镜王蛇毒抗原检测的初步研究 预览
15
作者 王桂平 刘新艳 +3 位作者 朱柳 覃媛 黄劭 清声 《中国药学:英文版》 CAS 2005年第3期 193-197,共5页
目的探讨抗蛇毒卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标; ELISA的实验条件及相关参数通过棋盘滴定法确定,并进行特异性、灵敏度、精... 目的探讨抗蛇毒卵黄抗体应用于蛇毒检测的可行性.方法以甲醛减毒的眼镜王蛇毒抗原免疫莱航母鸡,制备抗眼镜王蛇毒抗体;采用过碘酸钠法对特异卵黄抗体进行酶标; ELISA的实验条件及相关参数通过棋盘滴定法确定,并进行特异性、灵敏度、精确度及稳定性等测定.结果本检测方法的灵敏度可达32 μg·L-1,并且眼镜王蛇毒抗原浓度在32~750 μg·L-1的范围内,线性关系较好(r=0.963);卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有较高的特异性,与蝰蛇科的五步蛇毒、园斑蝰蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科的金环及银环蛇毒仅在高剂量(剂量大于500 μg·L-1)时存在轻度交叉反应,但与眼镜蛇毒之间交叉反应明显.应用本方法对不同浓度(100、 300、 1 000 μg·L-1)的眼镜王蛇毒样品检测,结果平均板内相对标准差在1%~3%之内,板间相对标准差在8%以内;稳定性实验显示:卵黄抗体置于37 ℃条件6天,其检测结果与4 ℃条件下无显著差异 (P>0.05).结论特异的卵黄抗体应用于微量蛇毒检测研究是可行的,但仍需要进一步研究以降低交叉反应. 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体 母鸡 酶联免疫吸附测定 交叉反应
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青蒿琥酯对成纤维细胞和内皮细胞的选择性研究 预览 被引量:5
16
作者 孔恒 清声 《中国临床药理学与治疗学》 CSCD 2005年第6期 687-690,共4页
目的:探讨青蒿琥酯(Art)是否对成纤维细胞增殖有特异的细胞选择作用.方法:选用人胚肺成纤维细胞株(HLF)、人皮肤瘢痕成纤维细胞(HSF)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用免疫组化法鉴别细胞;MTT法检测青蒿琥酯对上述3种细胞存活与增殖的影响;... 目的:探讨青蒿琥酯(Art)是否对成纤维细胞增殖有特异的细胞选择作用.方法:选用人胚肺成纤维细胞株(HLF)、人皮肤瘢痕成纤维细胞(HSF)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用免疫组化法鉴别细胞;MTT法检测青蒿琥酯对上述3种细胞存活与增殖的影响;光镜观察青蒿琥酯作用下细胞形态学的改变;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA的变化.结果:青蒿琥酯在30~240 mg·L-1浓度范围内作用细胞 24 h 对两种来源的成纤维细胞的增殖都具有明显的抑制作用(P<0.05),对血管内皮细胞增殖抑制作用不明显(P>0.05).药物作用 24 h 后,HLF、HSF、HUVEC细胞的IC50分别为:64、60、600 mg·L-1.光镜下见两种成纤维细胞用药组细胞变圆,突起变短变少,胞浆颗粒增多;而内皮细胞在形态上无明显的变化.琼脂糖凝胶电泳结果显示在240 mg·L-1浓度作用 24 h,两种成纤维细胞的DNA出现梯带状的电泳图谱,而内皮细胞的DNA无梯状条带.结论:青蒿琥酯对来源于肺和皮肤的成纤维细胞的增殖具有抑制作用,而对血管内皮细胞生长增殖无明显的影响.该药还能诱导两种成纤维细胞凋亡,而对脐静脉内皮细胞无明显诱导凋亡的作用. 展开更多
关键词 青蒿琥酯 成纤维细胞 血管内皮细胞 MTT选择作用
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中华眼镜蛇毒组分F的体外抗血管生成活性研究 预览 被引量:3
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作者 刘晓颖 清声 +1 位作者 覃媛 黄劭 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2005年第5期 273-275,共3页
目的研究中华眼镜蛇毒组分F对血管内皮细胞黏附功能的抑制作用和体外的抗血管生成活性.方法MTT快速测定法测定组分F对原代培养的血管内皮细胞对纤维蛋白原(Fg)、纤连蛋白(Fn)、Matrigel的黏附作用的影响;采用平面拟毛细血管生成培养法,... 目的研究中华眼镜蛇毒组分F对血管内皮细胞黏附功能的抑制作用和体外的抗血管生成活性.方法MTT快速测定法测定组分F对原代培养的血管内皮细胞对纤维蛋白原(Fg)、纤连蛋白(Fn)、Matrigel的黏附作用的影响;采用平面拟毛细血管生成培养法,观察组分F对血管生成的抑制效应.结果组分F可抑制血管内皮细胞的黏附功能,对细胞黏附Fn、Fg和Matrigel 3种物质的作用从1.2 μg/ml浓度起即有抑制效应(P<0.05),且均呈浓度依赖性,组分F对细胞黏附Fg和Matrigel的抑制作用较其对Fn的作用强(P<0.05);组分F可抑制内皮细胞在培养基质中生成血管样网状结构的反应,并且随浓度的不同抑制程度有明显不同.结论中华眼镜蛇毒组分F具有体外抗血管生成活性. 展开更多
关键词 蛇毒 中华眼镜蛇毒 体外 血管生成 抑制
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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的制备 预览 被引量:7
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作者 王桂平 清声 +1 位作者 覃媛 黄劭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期 1426-1429,共4页
目的研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程.方法以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体,应用嗜硫色谱柱HiTrap IgY Purification HP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇... 目的研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程.方法以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体,应用嗜硫色谱柱HiTrap IgY Purification HP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体;以间接ELISA法及双向免疫抗散法测定抗体的效价、特异性及免疫活性;采用福林酚法测定蛋白含量;采用SDS-PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度;抗体的特异性及交叉反应采用酶联免疫吸附法进行进行验证.结果母鸡初次免疫第9天即有抗体产生,初次免疫60天后抗体效价超过105;卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后,经SDS-PAGE 检测为电泳纯, 纯化后抗体效价较纯化前提高4倍,每枚蛋中平均可获得较纯抗体97.5 mg ;所获取的抗体具有高度特异性,与蝰蛇科属的其它蛇毒无交叉反应,与眼镜蛇科蛇毒存在不同程度交叉反应(蛇毒浓度大于500 μg·L-1时明显).结论本研究首次研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体,开拓了我国蛇伤治疗的新领域,并分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础,同时也促进其它抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制. 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体(IgY)
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中华眼镜蛇毒活性组分抑血管内皮细胞增殖和黏附实验研究 预览 被引量:5
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作者 刘晓颖 清声 覃嫒 《血栓与止血学》 2004年第1期 19-21,共3页
目的:研究眼镜蛇毒在抗血管生成方面的生物活性.方法:采用Sephadex阳离子交换柱和分子筛分离中华眼镜蛇毒原毒,以MTT法评价和筛选分离各蛋白峰对培养内皮细胞的抑生长活性;MTF快速测定法测定活性峰对内皮细胞与纤维蛋白原(Fbg)、纤连蛋... 目的:研究眼镜蛇毒在抗血管生成方面的生物活性.方法:采用Sephadex阳离子交换柱和分子筛分离中华眼镜蛇毒原毒,以MTT法评价和筛选分离各蛋白峰对培养内皮细胞的抑生长活性;MTF快速测定法测定活性峰对内皮细胞与纤维蛋白原(Fbg)、纤连蛋白(Fn)、Matrigel的黏附作用的影响.结果:经两步分离后从中华眼镜蛇毒中获得一可特异性抑制内皮细胞生长的活性蛋白峰,该活性组分可抑制内皮细胞的黏附功能,对细胞黏附Fn、Fbg和Matrigel等3种物质的作用从1.2 μg/ml浓度起即有抑制效应(P<0.05),且均呈浓度依赖性;组分对细胞黏附Fbg和Hatrigel的抑制作用较其对Fn的作用强(P<0.05).结论;眼镜蛇毒中可能含有可抑制血管生成的活性物质,在抗血管生成方面有良好的研究价值. 展开更多
关键词 中华眼镜蛇 毒活性组分 血管内皮细胞 细胞增殖 黏附实验 细胞培养
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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的研制及初步应用 被引量:12
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作者 清声 王桂平 +2 位作者 王薇 覃媛 黄劭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期 695-698,共4页
目的研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程. 方法以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体,应用嗜硫色谱柱HiTrap IgY Purification HP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇... 目的研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程. 方法以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡,母鸡免疫应答后,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体,应用嗜硫色谱柱HiTrap IgY Purification HP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体;以间接ELISA法及双向免疫扩散测定抗体的效价、特异性及免疫活性;采用Lowry氏法测定蛋白含量;采用SDS-PAGE法测定相对分子质量(Mr)及鉴定抗体纯度.结果母鸡初次免疫第9天即有抗体产生,初次免疫60 d后抗体效价超过1∶100 000,卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后,经SDS-PAGE检测为电泳纯, 纯化后抗体效价较纯化前提高4倍,每枚蛋中平均可获得较纯抗体97.5mg.动物体外中和试验表明,特异性IgY能有效中和眼镜王蛇毒,阻止眼镜王蛇毒对小白鼠的攻击. 结论研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体,分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础,同时也促进其他抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制. 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 鸡卵黄抗体 免疫 表达 特异性 体外中和试验 抗体产生 纯化 动物体 电泳
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