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表达NDV HN和IBDV VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌的构建及其生物学特性分析 预览
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作者 贾艳艳 刘莎莎 +9 位作者 丁轲 何雷 祖华 李静 郁川 廖成水 程相朝 李银聚 殷月兰 张春杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期567-572,共6页
为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌,并分析其生物学特性。本研究扩增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通过重叠延伸PCR扩增获得HN-VP2融合基因,构建重组质粒pYA-HN-VP2,将该重组... 为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌,并分析其生物学特性。本研究扩增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通过重叠延伸PCR扩增获得HN-VP2融合基因,构建重组质粒pYA-HN-VP2,将该重组质粒电转化至减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd中,获得表达HN-VP2融合蛋白的减毒重组菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd(pYA-HN-VP2),并分析其生化特性、遗传稳定性和毒力等生物学特性。Westernblot结果显示,重组减毒沙门菌可分泌表达HN-VP2融合蛋白,大小为84ku,且该融合蛋白分别能与相应特异性阳性血清发生反应;生物学特性结果显示,重组菌株失去了利用麦芽糖、山梨醇及乳糖等碳源的能力,其生长速度显著慢于野生菌株SL1344;毒力较野生菌株至少下降5个对数单位,且能够稳定遗传重组质粒pYA-HN-VP2。本研究为鸡新城疫-传染性法氏囊病-沙门菌病的三联口服疫苗研制奠定重要基础。 展开更多
关键词 减毒沙门菌 传染性法氏囊病 新城疫 构建 生物学特性
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gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响 预览
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作者 祖华 丁轲 +8 位作者 郁川 贾艳艳 何雷 廖成水 李静 张梦珂 邱静静 张春杰 程相朝 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第2期1-6,共6页
【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga... 【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga-miRNA-155,并将其克隆入pMD-18T载体,构建克隆载体pMD-18T-pre-gga-miRNA-155。用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA真核表达载体和pMD-18T-pre-gga-miRNA-155,将pre-gga-miRNA-155酶切回收片段与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA的酶切回收片段进行连接,构建重组真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,对其进行PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定。将重组载体转染到MDCC-MSB1细胞中,应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测gga-mi-RNA-155的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】PCR扩增获得了长度约154 bp的鸡pre-gga-mi-RNA-155基因。成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,瞬时转染MDCC-MSB1细胞后gga-miRNA-155表达水平显著增加,且MDCC-MSB1细胞的体外增殖能力增强。【结论】成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体,其可在MDCC-MSB1细胞中过表达gga-miRNA-155,且可促进MDCC-MSB1细胞的体外增殖。 展开更多
关键词 gga-miRNA-155 表达载体 MDCC-MSB1细胞 细胞增殖
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萨杜湖杂交羊生长性能、羊毛品质及血液生理生化指标测定 预览
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作者 施会彬 王玉琴 +5 位作者 何翁潭 吴至博 田志龙 祖华 丁轲 赵战勤 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期404-413,共10页
为研究萨福克羊×杜泊羊×湖羊杂交羊(萨杜湖杂交羊)生长发育情况及其对当地生态环境的适应能力,采用生产性能常规测定、显微测定和全自动血液生理生化分析仪分别测定了不同年龄阶段萨杜湖杂交羊的体重、体尺指标、羊毛品质(包... 为研究萨福克羊×杜泊羊×湖羊杂交羊(萨杜湖杂交羊)生长发育情况及其对当地生态环境的适应能力,采用生产性能常规测定、显微测定和全自动血液生理生化分析仪分别测定了不同年龄阶段萨杜湖杂交羊的体重、体尺指标、羊毛品质(包括不同部位羊毛的净毛率、细度、有髓毛和无髓毛占比、自然长度和伸直长度等指标)和成年羊血液生理生化指标。结果表明:萨杜湖杂交羊早期生长速度较快,初生阶段及周岁时公羊体斜长均显著高于母羊(P<0.05);3月龄时公羊体高、体斜长和胸围均显著高于母羊(P<0.05);6月龄时母羊体重极显著高于公羊(P<0.01),成年时期公羊体重和体高均显著高于母羊(P<0.05);其余各生长阶段内,公母羊间体重及体尺差异不显著(P >0.05)。其成年时平均净毛率较低,为45.21%;长度适中:平均自然长度为4.55cm,伸直长度为6.22cm;细度良好,为17.60μm。公母羊血液生理生化指标及其同国内绵羊参考值相比存在一定的差异,其中母羊血小板总数(PLT)和血小板压积(PCT)均极显著高于公羊(P<0.01),公羊甘油三酯(TG)和白蛋白(ALB)含量显著高于母羊(P<0.05),其余各项指标均无显著差异(P >0.05)。综上所述,萨杜湖杂交羊在生长发育等方面都有不同程度的改进和提高,本试验结果可为该品种杂交羊进一步开发利用提供参考依据。 展开更多
关键词 萨杜湖杂交羊 体重 体尺指标 羊毛品质 血液生理生化
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单增李斯特菌hly基因缺失株的构建及重要特性分析 预览
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作者 赵莹莹 贾艳艳 +5 位作者 杜付玉 祖华 廖成水 何雷 李银聚 张春杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期509-513,共5页
为构建单增李斯特菌(LM)hly基因缺失株,并分析其生物学特性和免疫保护效果,本研究利用同源重组技术获得基因缺失株LM△hly112-153,研究该缺失株对巨噬细胞的侵袭力、溶血能力并测定其LD50,同时评价该缺失株对小鼠的免疫保护效果。结果... 为构建单增李斯特菌(LM)hly基因缺失株,并分析其生物学特性和免疫保护效果,本研究利用同源重组技术获得基因缺失株LM△hly112-153,研究该缺失株对巨噬细胞的侵袭力、溶血能力并测定其LD50,同时评价该缺失株对小鼠的免疫保护效果。结果显示经PCR扩增及序列分析表明获得基因缺失株LM△hly112-153,该缺失株对巨噬细胞的侵袭能力显著下降(p<0.01);其溶血活性比野生株降低2个滴度;并且该缺失株对BALB/c小鼠的LD50为4.253×108 cfu,高于野生株3个数量级;免疫保护试验显示,经缺失株免疫的小鼠对野生株攻毒有75%的免疫保护率。本研究构建了基因缺失株LM△hly112-153,该缺失株对小鼠具有较好的免疫保护效果,以上研究为减毒李斯特菌疫苗载体的研发奠定重要基础。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 hly基因 安全性 基因缺失 同源重组
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腾冲红花油茶营养器官主要矿质元素含量年内变化分析 预览
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作者 谢胤 曹永庆 +5 位作者 祖华 尹必期 王自洪 徐志映 寸明辉 任华东 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2019年第3期97-103,共7页
以腾冲红花油茶实生40a纯林为对象,研究腾冲红花油茶叶片、枝干和根系中的氮、磷、钾、镁元素含量的年内变化规律。结果表明,腾冲红花油茶营养器官的氮、磷、钾、镁元素含量比例约为9︰1︰4︰1,各元素在叶片中的含量较高,根系中的含量... 以腾冲红花油茶实生40a纯林为对象,研究腾冲红花油茶叶片、枝干和根系中的氮、磷、钾、镁元素含量的年内变化规律。结果表明,腾冲红花油茶营养器官的氮、磷、钾、镁元素含量比例约为9︰1︰4︰1,各元素在叶片中的含量较高,根系中的含量较低。此外,各营养器官的氮、磷、钾、镁元素含量的年内变化规律不同,叶片和枝干中氮、磷、钾、镁元素含量总体上表现出'下降-上升-下降'的变化趋势,而根系中的氮、磷、镁元素含量则表现出'上升-下降-上升'的变化趋势。从1月份至3、4月份,叶片和枝干中氮、磷、钾、镁元素的含量逐渐下降,5月份各元素的含量显著升高。与叶片和枝干不同,根系中磷和镁元素在1-4月表现出明显上升趋势,而氮和钾元素含量变化不明显,5-8月,各元素表现出下降趋势。由此可知,腾冲红花油茶冬季施肥应注重磷、镁元素的施用,4月份春季追施复合肥,氮、磷、钾元素比例宜控制在9︰1︰4。 展开更多
关键词 腾冲红花油茶 营养器官
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马立克病病毒编码的miR-M11-5p宿主靶基因的筛选与鉴定 预览
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作者 刘豪丽 滕蔓 +5 位作者 李会珍 祖华 刘金玲 丁轲 张改平 罗俊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1026-1038,共13页
作为α疱疹病毒的重要成员,马立克病病毒(MDV)感染鸡可引起免疫抑制及快速发作的T细胞淋巴瘤,即马立克病(MD)。此前发现MDV基因组编码大量病毒miRNA,可能在病毒复制、潜伏感染及肿瘤发生中起重要作用。基因敲除miR-M11-5p可显著增强MDV... 作为α疱疹病毒的重要成员,马立克病病毒(MDV)感染鸡可引起免疫抑制及快速发作的T细胞淋巴瘤,即马立克病(MD)。此前发现MDV基因组编码大量病毒miRNA,可能在病毒复制、潜伏感染及肿瘤发生中起重要作用。基因敲除miR-M11-5p可显著增强MDV致病性及致瘤性,表明其可能是MD肿瘤抑制因子。为进一步揭示miR-M11-5p介导的调控机制,本研究利用鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA的cDNA为模板,通过hybrid-PCR扩增miR-M11-5p的候选宿主靶基因片段,然后连接至pMD19-T载体、转化至E.coliJM109中构建cDNA文库。对文库菌落进行PCR鉴定、测序分析以及Blast序列对比,共获得77个候选宿主靶基因,其中37个miRNA结合靶点位于候选靶基因的3'-UTR中。进一步通过双荧光素酶报告试验、miR-M11-5p过表达以及RT-qPCR分析,最终鉴定鸡MAFB、LOC776816和RFX7为miR-M11-5p的宿主靶基因。本研究为进一步阐明miR-M11-5p在MDV肿瘤发生中的调控机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 马立克病病毒 微小RNA miR-M11-5p hybrid-PCR 靶基因 实时荧光定量PCR
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鼠伤寒沙门菌SL1344 sseK2基因的克隆表达及生物信息学分析
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作者 张晓洁 张春杰 +3 位作者 贾艳艳 杨亚东 廖成水 祖华 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期339-345,共7页
为研究鼠伤寒沙门菌SL1344株SseK2蛋白的生物学特性,通过PCR扩增sseK2基因,构建原核表达质粒pET-32a-sseK2,经大肠杆菌BL21(DE3)表达、纯化后经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,对sseK2基因编码的氨基酸进行生物信息学分析。结果显示,鼠... 为研究鼠伤寒沙门菌SL1344株SseK2蛋白的生物学特性,通过PCR扩增sseK2基因,构建原核表达质粒pET-32a-sseK2,经大肠杆菌BL21(DE3)表达、纯化后经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,对sseK2基因编码的氨基酸进行生物信息学分析。结果显示,鼠伤寒沙门菌SseK2蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达,纯化获得较高纯度的蛋白。生物信息学分析显示,SseK2蛋白为可溶性蛋白,由348个氨基酸组成,分子质量约39.57 ku。该蛋白不含信号肽、无跨膜区,为膜外蛋白,包含4个N-糖基化位点、3个O-糖基化位点、56个磷酸化位点、15个B细胞线性结合位点和8个T细胞结合位点以及10个二硫键。其蛋白二级结构中以α-螺旋(Hh)占33.05%,无规则卷曲(Cc)占27.30%为主。成功构建了原核表达载体,并对其进行生物信息学分析,为进一步研究sseK2基因的生物学功能及在沙门菌致病机制中的作用奠定了良好基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 sseK2基因 原核表达 生物信息学分析
禽腺病毒血清4型河南株的分离鉴定及对鸡胚致病性的研究 被引量:1
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作者 李京帅 李银聚 +6 位作者 张春杰 程相朝 吴庭才 祖华 贾艳艳 李静 廖成水 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第4期479-483,共5页
为探明河南省某鸡场疑似禽腺病毒血清4型发病鸡群的感染情况和病毒特征,本试验对发病鸡群进行了病毒分离鉴定,并研究所分离到的病毒对鸡胚的致病性。采集发病鸡群鸡肝,处理后经尿囊腔接种SPF鸡胚.尿囊液禽腺病毒血清4型PCR鉴定和he... 为探明河南省某鸡场疑似禽腺病毒血清4型发病鸡群的感染情况和病毒特征,本试验对发病鸡群进行了病毒分离鉴定,并研究所分离到的病毒对鸡胚的致病性。采集发病鸡群鸡肝,处理后经尿囊腔接种SPF鸡胚.尿囊液禽腺病毒血清4型PCR鉴定和hexon基因序列分析,尿囊液经过浓缩定量和梯度稀释,接种SPF鸡胚,观察鸡胚病变,计算ELD50,同时荧光定量PCR测定病毒在鸡胚肝和尿囊液中的载量。结果显示,在鸡胚尿囊液中扩增出大小934bp的基因片段,序列分析表明,该序列与禽腺病毒血清4型同源性为98.2%~99.8%。感染病毒的鸡胚的胚体矮小、发育不良,肝肿大、质脆,呈黄色或棕黄色,胸肌、腿肌明显出血,病毒裁量和鸡胚病变与接种剂量有关。该毒株的ELD50为1.36×10^7 copies/μL,相同时间内病毒在肝中的载量高于尿囊液。本试验为进一步开展禽腺病毒血清4型的研究和防控提供了必要的参考依据。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 分离鉴定 鸡胚 ELD50
鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达 预览
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作者 尤钊 左珂朦 +5 位作者 祖华 丁轲 王垚垚 刘彤 张梦珂 邱静静 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第7期1791-1797,共7页
为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组... 为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中提取总RNA,经反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增,将扩增的特异性RORα基因片段连接pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-RORα,再用SalⅠ和BamHⅠ双酶切克隆载体pMD18-T-RORα和真核表达载体pEGFP-N1,将酶切回收的RORα与pEGFP-N1片段进行连接,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-RORα,经PCR、酶切和测序验证准确性后,将其转染MSB1细胞,于转染后48h荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,并采用实时荧光定量PCR检测鸡RORα在MSB1细胞中的表达水平。结果显示,从构建的重组质粒pEGFP-N1-RORα中可扩增出大小约1 600bp的特异性片段,用SalⅠ和BamHⅠ可切出大小约4 700和1 600bp的两条带。实时荧光定量PCR结果显示,转染MSB1细胞48h后,与对照组相比,重组真核表达载体转染组中鸡RORα基因mRNA水平显著增加(P〈0.05)。表明本试验成功构建了鸡RORα的真核表达载体,该载体可在MSB1细胞中表达鸡RORα,为进一步研究鸡RORα对MSB1细胞增殖的影响奠定基础。 展开更多
关键词 甲酸相关孤核受体α(RORα)基因 真核表达载体 MSB1细胞 表达
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旋毛虫5′-nucleotidase基因特征与克隆表达 预览
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作者 廖成水 王晓利 +7 位作者 杜付玉 郁川 祖华 张春杰 李银聚 吴庭才 刘明远 程相朝 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期971-976,共6页
目的 研究旋毛虫5′-nucleotidase基因的序列结构特征及其蛋白克隆表达。方法 从旋毛虫获得5′-nucleotidase基因的序列,利用生物信息学方法进行系统性分析,并进行原核表达。结果 旋毛虫5′-nucleotidase基因大小为1653bp,编码550个氨基... 目的 研究旋毛虫5′-nucleotidase基因的序列结构特征及其蛋白克隆表达。方法 从旋毛虫获得5′-nucleotidase基因的序列,利用生物信息学方法进行系统性分析,并进行原核表达。结果 旋毛虫5′-nucleotidase基因大小为1653bp,编码550个氨基酸,119个氨基酸残基组成,理论相对分子质量(Mr)为62kD,分子式为C2800H4358N742O803S23,等电点为6.13,属于稳定存在的亲水蛋白质。该蛋白含有21个氨基酸组成的信号肽,同时具有跨膜区域,此外还含有3个N-糖基化位点、2个O-糖基化位点、20个磷酸化位点、28个B细胞线性结合位点和13个T细胞结合位点。二级结构中,α-螺旋占43.27%(238个),伸展链占22.73%(125个),β-折叠占7.82%(43个),无规则卷曲占26.18%(144个)。SDS-PAGE显示,5′-nucleotidase基因在原核表达系统中呈可溶性形式表达,重组蛋白大小约为74kD。结论 成功克隆了旋毛虫5′-nucleotidase基因,对其进行序列分析和原核表达,为进一步探究5′-nucleotidase蛋白在旋毛虫感染过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 旋毛虫 5′-nucleotidase 克隆 原核表达 生物信息学
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gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响 预览
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作者 祖华 丁轲 +11 位作者 郁川 贾艳艳 何雷 廖成水 李静 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 张梦珂 邱静静 罗俊 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期2496-2504,共9页
为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检... 为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MDCC-MSB1细胞的细胞周期与凋亡的变化,Transwell检测MDCC-MSB1细胞的迁移、侵袭能力的变化。结果显示,gga-miR-155模拟物可显著上调MDCC-MSB1细胞gga-miR-155表达水平,促进MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞减少,S和G2期细胞增加,同时凋亡减少,迁移、侵袭能力增加;gga-miR-155抑制物可显著下调MDCCMSB1细胞gga-miR-155表达水平,抑制MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时凋亡增加,迁移、侵袭能力下降。结果表明,gga-miR-155可促进MDCC-MSB1细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。 展开更多
关键词 gga-miR-155 MDCC-MSB1细胞 细胞增殖 细胞凋亡 迁移 侵袭
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鸡传染性法氏囊病毒感染对B淋巴细胞线粒体能量代谢的影响
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作者 杨丹芳 李银聚 +5 位作者 张春杰 祖华 贾艳艳 何雷 王臣 韩海锋 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期446-452,共7页
为研究鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)感染对宿主免疫细胞线粒体代谢的影响和从代谢方面揭示致病机制,本试验以IBDV毒株感染DT40细胞,分别于病毒感染后24,48,72和96h取样,细胞计数并分离细胞线粒体,通过线粒体染色,检测线粒体蛋白含量,线... 为研究鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)感染对宿主免疫细胞线粒体代谢的影响和从代谢方面揭示致病机制,本试验以IBDV毒株感染DT40细胞,分别于病毒感染后24,48,72和96h取样,细胞计数并分离细胞线粒体,通过线粒体染色,检测线粒体蛋白含量,线粒体膜电位,线粒体ATP水平,肉碱脂酰转移酶和NADH-CoQ还原酶活性,线粒体脂酰-CoA和NADH、NAD^+的含量及NADH/NAD^+比值,初步评估IBDV感染对宿主细胞线粒体生物氧化的影响。结果表明,IBDV感染DT40细胞48h后,线粒体蛋白含量显著降低(P〈0.01),肉碱脂酰转移酶和NADH-CoQ还原酶活性在感染后24h开始下降(P〈0.05),48h后显著被抑制(P〈0.01);脂酰-CoA和ATP含量在感染后48h显著降低(P〈0.01),NADH/NAD+比值显著增高(P〈0.01)。说明IBDV感染DT40细胞后不但对线粒体造成了损伤,而且脂酰CoA的转运和NADH呼吸链受到抑制,导致线粒体能量代谢障碍。本研究从代谢角度为进一步探索IBDV感染对鸡细胞的致病机理提供依据。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病毒 DT40细胞 线粒体 能量代谢
腾冲细香核桃营养成分分析 预览
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作者 祖华 舒相才 +2 位作者 杨忠品 谢胤 王自洪 《林业调查规划》 2018年第5期134-136,159共4页
选择3个腾冲细香核桃样品送农业部农产品质量监督检验测试中心(昆明)进行检测,结果表明,腾冲细香核桃含蛋白质为17.2%,达到特级标准;含粗脂肪为62.12%,达到Ⅱ级标准;含亚油酸、油酸、棕榈酸、α-亚麻酸、硬脂酸5种脂肪酸,其中不饱和脂... 选择3个腾冲细香核桃样品送农业部农产品质量监督检验测试中心(昆明)进行检测,结果表明,腾冲细香核桃含蛋白质为17.2%,达到特级标准;含粗脂肪为62.12%,达到Ⅱ级标准;含亚油酸、油酸、棕榈酸、α-亚麻酸、硬脂酸5种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸含量达91.57%;维生素C含量为7.56 mg/100 g;氨基酸总量为6.1%,其中人体必须氨基酸占氨基酸总量的25.57%;含磷、钾、钙、钠、镁、铁、锌、铜、锰等矿质营养,营养价值较高,可作为腾冲市的主栽品种。 展开更多
关键词 腾冲细香核桃 营养成分 蛋白质 脂肪酸 维生素C 氨基酸 矿质元素
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副猪嗜血杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立 预览
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作者 侯魁 丁轲 +2 位作者 刘守业 祖华 赵战勤 《河南科技大学学报:自然科学版》 北大核心 2017年第6期59-62,69共5页
为了建立一种简便、快速、灵敏、特异的副猪嗜血杆菌(Hps)检测方法,以Hps的16S rRNA保守区域片段为靶序列,选择6个特异性区域,设计4条特异性引物F3、B3、FIP和BIP。经优化反应体系、检测灵敏性和特异性,建立Hps的环介导等温扩增(LAM... 为了建立一种简便、快速、灵敏、特异的副猪嗜血杆菌(Hps)检测方法,以Hps的16S rRNA保守区域片段为靶序列,选择6个特异性区域,设计4条特异性引物F3、B3、FIP和BIP。经优化反应体系、检测灵敏性和特异性,建立Hps的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。研究结果表明:该方法的最优反应体系是引物c(F3)∶c(FIP)或c(B3)∶c(BIP)为1∶4、Mg^2+浓度为2 mmol/L、d NTPs浓度为6 mmol/L,最低检出量为0.241pg/μL DNA。该方法灵敏度是PCR法的100倍,且能够特异性检测出Hps,不能检测出猪链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和金黄色葡萄球菌。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 16S RRNA 环介导等温扩增 灵敏性 特异性
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鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的表达纯化及其生物学特性的研究 被引量:3
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作者 田文静 廖成水 +7 位作者 王晓利 郁川 祖华 张梦珂 李婧 张春杰 李银聚 程相朝 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第7期810-816,共7页
为研究鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的生物学特性,利用PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC基因,构建重组表达质粒pET-32a-FliC,经大肠杆菌Rosetta(DE3)表达、镍离子亲和层析法纯化后用SDS-PAGE和Western-blot方法分析。重组蛋白与巨噬... 为研究鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的生物学特性,利用PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC基因,构建重组表达质粒pET-32a-FliC,经大肠杆菌Rosetta(DE3)表达、镍离子亲和层析法纯化后用SDS-PAGE和Western-blot方法分析。重组蛋白与巨噬细胞RAW264.7共孵育,ELISA和CCK-8法分别检测巨噬细胞细胞因子和巨噬细胞增殖情况。重组蛋白免疫小鼠后不同时间点检测血清抗体效价和细胞因子水平。结果显示,鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC在大肠杆菌中呈可溶性表达,且可获得纯度较高的重组鞭毛蛋白。50 ng/mL和500 ng/mL重组鞭毛蛋白可刺激巨噬细胞增殖,同时促进巨噬细胞分泌IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IFN-γ和TNF-α。重组蛋白免疫小鼠后效价在第3周达到1∶128 000,同时小鼠血清细胞因子的分泌量呈倒V型变化。研究结果为后续进一步研究FliC蛋白在细菌感染、侵袭和免疫方面的作用研究提供了参考数据。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 鞭毛蛋白 FLIC 巨噬细胞
湖羊肌肉营养特点及肌纤维组织学特性 预览 被引量:2
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作者 王玉琴 田志龙 +10 位作者 施会彬 钟甲丽 任国艳 李元晓 刘玉梅 吴秋珏 王建平 张自强 丁轲 祖华 赵战勤 《动物营养学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期2867-2874,共8页
为了研究湖羊肌肉营养特点及肌纤维组织学特性,分别测定了不同年龄(初生、断奶、成年)湖羊肌肉中常规营养成分(水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙、磷)、18种氨基酸的含量以及不同年龄湖羊不同部位肌肉(臂三头肌、股二头肌、背... 为了研究湖羊肌肉营养特点及肌纤维组织学特性,分别测定了不同年龄(初生、断奶、成年)湖羊肌肉中常规营养成分(水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙、磷)、18种氨基酸的含量以及不同年龄湖羊不同部位肌肉(臂三头肌、股二头肌、背最长肌)的肌纤维组织学特性(肌纤维直径、肌纤维密度)。结果表明:随着年龄的增长,肌肉中水分含量显著降低(P〈0.05),粗脂肪、粗蛋白质、粗灰分、钙和磷的含量逐渐增加,且成年羊与初生羔羊和断奶羔羊之间差异显著(P〈0.05)。湖羊肌肉中苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸的含量随着年龄的增长而显著增加(P〈0.05),非必需氨基酸含量随着年龄的增长大致呈增加趋势。在湖羊肌肉的所有氨基酸中含量最高的是谷氨酸,其次是天冬氨酸。不同年龄湖羊的肌纤维直径均表现为背最长肌〈股二头肌〈臂三头肌,肌纤维密度均表现为背最长肌〉股二头肌〉臂三头肌,且同龄湖羊3个部位之间的肌纤维密度均差异显著(P〈0.05)。相同部位的肌肉,其肌纤维直径随年龄的增长而增大,肌纤维密度随年龄的增长而减小,且不同年龄间差异显著(初生羔羊与断奶羔羊的臂三头肌除外)(P〈0.05)。综上可知,湖羊肌肉营养丰富,氨基酸种类齐全,肌纤维组织学特性在不同年龄和不同部位间存在差异,断奶羔羊肉营养更丰富,更具香、嫩等特点。 展开更多
关键词 湖羊 肌肉 营养成分 肌纤维组织学特性
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植物乳杆菌DPP8对蛋鸡生产性能、血清生化指标和蛋品质的影响 被引量:2
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作者 祖华 丁轲 +7 位作者 丁盼盼 李旺 李元晓 刘一尘 贾艳艳 曹平华 王玉琴 赵战勤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1608-1612,1642共6页
选取300只43周龄罗曼粉蛋鸡,随机分为5组,每组3个重复,每个重复20只鸡,对照组(Ⅰ组)饲喂基础日粮,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组在饲喂基础日粮基础上分别添加2.0×106、2.0×107、2.0×108、2.0×109 CFU/g的L.plantarum DPP... 选取300只43周龄罗曼粉蛋鸡,随机分为5组,每组3个重复,每个重复20只鸡,对照组(Ⅰ组)饲喂基础日粮,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组在饲喂基础日粮基础上分别添加2.0×106、2.0×107、2.0×108、2.0×109 CFU/g的L.plantarum DPP8制剂。预试期1周,试验期9周。结果显示:(1)Ⅱ组和Ⅲ组的产蛋率显著高于对照组(P〈0.05);Ⅳ组的料蛋比显著低于其余各组(P〈0.05)。(2)Ⅲ组的血钙水平显著高于对照组(P〈0.05),血糖水平极显著低于对照组(P〈0.01)显著低于Ⅱ组(P〈0.05);与对照组相比,Ⅳ组血清的钙、磷水平均显著增加(P〈0.05),总白蛋白水平显著降低(P〈0.05),血糖水平极显著降低(P〈0.01);Ⅴ组的血磷水平显著增加(P〈0.05),血钙水平极显著增加(P〈0.01),血糖含量显著降低(P〈0.05);Ⅲ组的血清总白蛋白水平显著低于其余各组(P〈0.05)。(3)与对照组相比,各试验组的蛋黄颜色、蛋白高度和哈氏单位均极显著提高(P〈0.01);Ⅲ组和Ⅳ组的蛋壳厚度显著提高(P〈0.05),Ⅴ组的蛋壳厚度极显著提高(P〈0.01)。结果表明,饲料中添加一定量的L.plantarum DPP8具有改善蛋鸡生产性能和提高蛋鸡蛋品质的作用,其中按照2.0×108 CFU/g剂量添加效果最好。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 蛋鸡 生产性能 血清生化指标 蛋品质
鼠伤寒沙门菌sipB基因缺失对菌体糖酵解的影响 预览
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作者 李静 陈松彪 +7 位作者 张春杰 程相朝 李银聚 何雷 祖华 颜云飞 刘慧 金二伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期27-30,共4页
为研究鼠伤寒沙门菌sipB基因编码蛋白与菌体糖酵解的关系,本研究对sipB基因缺失前后菌株丙酮酸、乳酸以及ATP含量进行检测,结果显示,sipB基因缺失后菌体丙酮酸、乳酸含量降低,而ATP含量升高,表明菌体糖酵解减弱,获取能量的方式发... 为研究鼠伤寒沙门菌sipB基因编码蛋白与菌体糖酵解的关系,本研究对sipB基因缺失前后菌株丙酮酸、乳酸以及ATP含量进行检测,结果显示,sipB基因缺失后菌体丙酮酸、乳酸含量降低,而ATP含量升高,表明菌体糖酵解减弱,获取能量的方式发生改变。该结果为分析sipB基因编码蛋白与菌体糖酵解的关系,以及为研究sipB基因与菌体死亡的关系奠定基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 sipB基因 糖酵解
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OCT蛋白对猪链球菌生物被膜形成和细胞黏附的影响 被引量:1
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作者 梅京京 汪洋 +5 位作者 易力 张建康 程相朝 张春杰 祖华 吴庭才 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期192-197,共6页
根据GenBank中猪链球菌鸟氨酸氨甲酰转移酶基因(oct)序列(GenBank登录号:NZ_CP007497)设计引物,克隆猪链球菌ZY05719株的oct基因,构建p ET-28a-oct原核表达质粒并在大肠杆菌Rosetta中诱导表达,重组OCT蛋白即鸟氨酸氨甲酰转移酶用... 根据GenBank中猪链球菌鸟氨酸氨甲酰转移酶基因(oct)序列(GenBank登录号:NZ_CP007497)设计引物,克隆猪链球菌ZY05719株的oct基因,构建p ET-28a-oct原核表达质粒并在大肠杆菌Rosetta中诱导表达,重组OCT蛋白即鸟氨酸氨甲酰转移酶用镍亲和层析柱纯化后,研究它对猪链球菌生物被膜形成的影响及介导猪链球菌黏附PK-15细胞的作用。结果显示,克隆出1 014 bp的oct基因,并检测出纯化的40 ku OCT融合蛋白具有良好的反应原性,且能提高猪链球菌形成生物被膜的能力及降低黏附PK-15细胞的作用。本研究成功克隆并表达了ZY05719株的oct基因,初步揭示了其生物学功能,为深入研究鸟氨酸氨甲酰转移酶在猪链球菌致病机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 鸟氨酸氨甲酰转移酶 生物被膜 细胞黏附
低氧诱导因子-1α在旋毛虫感染过程中的动态变化 预览
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作者 廖成水 王臣 +8 位作者 王晓利 王安琪 祖华 郁川 汪洋 李世杰 陈贯超 程相朝 刘明远 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期664-666,共3页
为了解旋毛虫感染过程中血清和膈肌低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的动态变化,本研究将旋毛虫ISS534株经口服感染90只大鼠,并于感染后不同时间各取6只大鼠收集血清和膈肌,采用荧光定量PCR和ELISA方法检测各时间点膈肌HIF-1αmRNA水平和血... 为了解旋毛虫感染过程中血清和膈肌低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的动态变化,本研究将旋毛虫ISS534株经口服感染90只大鼠,并于感染后不同时间各取6只大鼠收集血清和膈肌,采用荧光定量PCR和ELISA方法检测各时间点膈肌HIF-1αmRNA水平和血清HIF-1α水平。结果显示,旋毛虫发育成成虫至产生新生幼虫期间血清和膈肌HIF-1α含量无明显变化,产生新生幼虫后血清和膈肌HIF-1α水平逐渐升高,而且分别在6d和7 d时HIF-1α含量与感染前相比差异显著(p〈0.05),随后呈逐渐上升趋势。血清HIF-1α含量直至9 d达到峰值并保持平稳状态,从14 d开始逐渐下降;而膈肌HIF-1α含量于9 d达到峰值后开始逐渐下降至肌幼虫形成,感染30 d血清和膈肌HIF-1α水平下降至感染前状态。结果表明,HIF-1α水平在旋毛虫感染过程中呈倒V型走势,HIF-1α可能是参与调控旋毛虫感染的重要因子。 展开更多
关键词 旋毛虫 低氧诱导因子-1Α 血清 膈肌 动态变化
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