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小鼠大脑皮质星形胶质细胞原代培养与鉴定
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作者 许寒晓 蒋烨 +6 位作者 罗道朋 李强明 令狐艳 李丽娜 于常海 资江 戈果 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期2966-2971,共6页
为探讨简便、高效的大脑皮质星形胶质细胞体外培养方法,本研究取新生24 h内的ICR小鼠大脑皮层,采用物理方法将其分成约1 mm^3,震荡过滤后进行培养。通过拍照的方式记录原代培养1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和原代培养14 d后... 为探讨简便、高效的大脑皮质星形胶质细胞体外培养方法,本研究取新生24 h内的ICR小鼠大脑皮层,采用物理方法将其分成约1 mm^3,震荡过滤后进行培养。通过拍照的方式记录原代培养1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和原代培养14 d后再传代培养14 d(记为P2-14 d)细胞形态;通过实时定量PCR和Western blotting比较原代培养1周、2周、3周、4周、5周和原代培养2周后再传代培养2周(即P2-2)的星形胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因和蛋白水平变化。选取GFAP、S100-β和谷氨酸转运蛋白(excitatory amino acid transporter 1,EAAT1)标记星形胶质细胞,微管相关蛋白(microtubuleassociated protein 2,MAP-2)、离子钙接头蛋白-1(ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba-1)和髓鞘相关糖蛋白(myelin associated glycoprotein,MAG)抗体分别标记神经元、小胶质细胞和少突胶质细胞。通过免疫荧光染色鉴定细胞种类及纯度。研究结果显示细胞生长良好,原代培养4周星形胶质细胞内GFAP比2周、3周、5周和传代培养2周的细胞更加稳定。经免疫荧光鉴定,星形胶质细胞纯度在95%以上。本实验采用相对较简单经济的方法培养出高纯度且生理状态相对较稳定的原代星形胶质细胞,该细胞模型不仅可以用于星形胶质细胞生理功能研究,还可以用于中枢神经系统相关疾病的体外研究。 展开更多
关键词 星形胶质细胞 原代培养 大脑皮质 小鼠
运动解剖学教学模式改良的思考 预览
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作者 李琳 孙宝飞 +3 位作者 肖朝伦 李强明 资江 《黔南民族医专学报》 2019年第2期152-154,共3页
运动解剖学是人体解剖学的分支,是一门应用性较强的形态学科,是在人体解剖学基础上研究运动对人体形态结构和生长发育的影响,以及人体机械运动规律与体育运动技术关系[1]。对于高校体育专业学生来说,运动技术是一项必备技能,学生专业素... 运动解剖学是人体解剖学的分支,是一门应用性较强的形态学科,是在人体解剖学基础上研究运动对人体形态结构和生长发育的影响,以及人体机械运动规律与体育运动技术关系[1]。对于高校体育专业学生来说,运动技术是一项必备技能,学生专业素质直接体现在运动技能水平高低上。只有掌握运动解剖学知识,了解人体构成,加强理论知识与运动实践的联系,精进锻炼方式方法,才能进一步提高运动技术水平。解剖学知识的理论学习远远不能够满足学生的需要,要有相应的实验教学来配合,让理论联系实际,将书本上学习到的知识应用到生活实践中,改良传统的实验教学模式,才能更好地培养学生的创新能力及提高学生的实践能力和综合素质。 展开更多
关键词 运动解剖学 教学模式 改良
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小鼠大脑皮质星形胶质细胞的原代培养及鉴定
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作者 高帆 资江 +1 位作者 曹文鹏 李玉美 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第7期3149-3152,共4页
为了体外分离培养小鼠大脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)。取新生24 h内ICR乳鼠,超净台内断头取脑,体视显微镜下剥除脑膜、血管及海马,获得完整的大脑皮层组织,经手术刀切碎组织,旋涡震荡,过两次尼龙筛网以制备单细胞悬液,接种于35... 为了体外分离培养小鼠大脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)。取新生24 h内ICR乳鼠,超净台内断头取脑,体视显微镜下剥除脑膜、血管及海马,获得完整的大脑皮层组织,经手术刀切碎组织,旋涡震荡,过两次尼龙筛网以制备单细胞悬液,接种于35 mm塑料培养皿,倒置相差显微镜下观察细胞形态学状况,培养至3~4周,进行星形胶质细胞标记性蛋白胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光鉴定细胞纯度。本研究表明,倒置相差显微镜下观察细胞于接种后2~3 d大部分贴壁,生长至7 d左右即铺满皿底,3~4周细胞生长成熟,胞体较大,形状不规则,呈“铺路石”(cobblestone-like structure)状,免疫荧光鉴定可见GFAP阳性细胞占细胞总数比例达95%以上。通过以上方法可获得高纯度星形胶质细胞,为下一步实验提供大量生长状态良好的细胞。 展开更多
关键词 星形胶质细胞 原代培养 GFAP
小鼠小脑颗粒神经元的原代培养与鉴定
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作者 罗道朋 许寒晓 +5 位作者 李强明 资江 贾熙华 李丽娜 于常海 戈果 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第6期2615-2620,共6页
本研究通过体外分离培养及鉴定原代小鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neurons,CGNs),为神经科学研究提供原代神经元细胞模型。取生后第7天的ICR乳鼠小脑,在解剖体视镜下剥离脑膜及血管,经刀片切碎、0.25%胰酶消化、移液器吹打... 本研究通过体外分离培养及鉴定原代小鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neurons,CGNs),为神经科学研究提供原代神经元细胞模型。取生后第7天的ICR乳鼠小脑,在解剖体视镜下剥离脑膜及血管,经刀片切碎、0.25%胰酶消化、移液器吹打、70μm尼龙滤网制备单细胞悬液,差速贴壁后接种于新鲜配置的培养基。倒置相差显微镜观察不同时间CGNs的形态变化。采用神经元的标记蛋白微管相关蛋白-2(microtubule associated protein 2,MAP2),星形胶质细胞的标记蛋白胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),小胶质细胞的标记蛋白(type 3 complement receptor,CR3/CD11b)进行免疫荧光检测培养的原代CGNs纯度。原代培养CGNs接种20 min后即贴壁良好,培养24 h后细胞伸出突起,培养第7天神经元成熟,形成丰富的轴突,树突和胞间突触连接。经免疫荧光鉴定,CGNs纯度可达95%以上。成功体外分离培养出高纯度的原代CGNs,可应用于CGNs的体外研究。 展开更多
关键词 小脑颗粒神经元 小鼠 原代培养 免疫荧光 高纯度
姜黄素对大鼠脊髓损伤后氧化应激及胶质纤维酸性蛋白表达的影响
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作者 曹文鹏 高帆 +5 位作者 资江 孙宝飞 肖朝伦 李玉美 罗时鹏 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第7期2655-2659,共5页
本实验探讨姜黄素治疗大鼠脊髓损伤后对氧化应激及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillaryacidic protein)表达的影响。将30只大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、模型组、姜黄素(姜黄素组,100 mg/kg),每组10只。假手术组仅咬除椎板... 本实验探讨姜黄素治疗大鼠脊髓损伤后对氧化应激及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillaryacidic protein)表达的影响。将30只大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、模型组、姜黄素(姜黄素组,100 mg/kg),每组10只。假手术组仅咬除椎板,暴露脊髓;模型组、姜黄素组制备脊髓半横断损伤模型。姜黄素组术后即刻按照100 mg/kg剂量腹腔注射姜黄素。模型组腹腔注射等体积DMSO。每日注射1次,连续7 d。假手术组不作处理。在术后当天、7 d、14 d和21 d对3组大鼠行BBB运动功能评分。用化学比色法测定3组术后24 h大鼠血浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力。免疫荧光染色观察GFAP的表达,计算阳性细胞数。结果表明,与模型组比较,术后14 d和21 d,姜黄素组BBB评分显著提高((p〈0.05);与模型组比较,术后24 h后姜黄素组SOD活力显著提高(p〈0.05);与模型组比较,姜黄素组脊髓损伤部位GFAP阳性细胞数明显减少((p〈0.05)。根据本研究结果,我们推断姜黄素在治疗脊髓损伤过程中,可能是通过降低细胞氧化应激水平,进而抑制GFAP表达,发挥对脊髓损伤的治疗作用。 展开更多
关键词 脊髓损伤 姜黄素 氧化应激 GFAP
单纯下鼻甲低温等离子射频消融术治疗老年鼻中隔偏曲伴慢性肥厚性鼻炎的效果 预览 被引量:7
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作者 姚期 资江 《中国老年学杂志》 北大核心 2017年第14期3550-3552,共3页
目的 探究单纯下鼻甲低温等离子射频消融术对老年鼻中隔偏曲伴慢性肥厚性鼻炎患者的治疗效果。方法 122例老年鼻中隔偏曲伴慢性肥厚性鼻炎患者,采用随机数字表法分为观察组和对照组各61例,观察组行单纯下鼻甲低温等离子射频消融术,对照... 目的 探究单纯下鼻甲低温等离子射频消融术对老年鼻中隔偏曲伴慢性肥厚性鼻炎患者的治疗效果。方法 122例老年鼻中隔偏曲伴慢性肥厚性鼻炎患者,采用随机数字表法分为观察组和对照组各61例,观察组行单纯下鼻甲低温等离子射频消融术,对照组行下鼻甲成形术,比较两组临床疗效、手术指标、通气功能、并发症。结果 观察组有效率明显高于对照组的(P〈0.05);观察组手术时间、术中出血量明显低于对照组(P〈0.05);观察组鼻腔最小截面积(MCA)、鼻腔容积(NV)明显高于对照组,鼻气道阻力(NAR)、鼻腔通气评估量表(NOSE)评分明显低于对照组(P〈0.05);并发症:观察组术后并发症明显低于对照组的(P〈0.05)。结论 低温等离子射频消融术有助于缓解老年鼻中隔偏曲伴慢性肥厚性鼻炎患者临床症状,改善通气功能并减少术后并发症,提高效果。 展开更多
关键词 鼻中隔偏曲 慢性肥厚性鼻炎 低温等离子射频消融术 通气功能
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松树皮提取物对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 预览 被引量:5
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作者 姚期 资江 孙宝飞 《中国实验动物学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期632-636,共5页
目的探讨IL-6/STAT3/miR-21在松树皮提取物对脑缺血再灌注损伤小鼠的神经治疗作用和机制。方法将120只KM小鼠随机分为正常对照组、假手术组、14d及28d模型组、14d及28d治疗组,每组20只,采取双侧颈总动脉夹闭法制作脑缺血再灌注损伤模型... 目的探讨IL-6/STAT3/miR-21在松树皮提取物对脑缺血再灌注损伤小鼠的神经治疗作用和机制。方法将120只KM小鼠随机分为正常对照组、假手术组、14d及28d模型组、14d及28d治疗组,每组20只,采取双侧颈总动脉夹闭法制作脑缺血再灌注损伤模型;治疗组在处死前7d给予松树皮提取物原花青素灌胃治疗,对照组和假手术组采用等量生理盐水灌胃。检测各组小鼠学习、记忆能力的差异及海马组织病理学改变、白介素6、STAT3、pSTAT3蛋白、miR-21的表达水平。结果同时间节点治疗组小鼠比模型组小鼠学习记忆能力强;治疗组尼氏体排列紊乱,其中一部分细胞形态不规则,胞质着色相对较浅,但比模型组好;28d模型组IL6表达水平低于14d模型组,同时间点治疗组海马组织中的IL-6较模型组明显减少;海马组织中STAT3总蛋白含量各组间差异无显著性(P>0.05),同时间点治疗组pSTAT3含量低于模型组;海马组织中miR21在14、28d治疗组的表达低于同时间点模型组,且随时间的延长而降低。结论松树皮提取物原花青素能通过有效抑制IL-6,显著降低STAT3磷酸化水平,最终降低miR-21表达,从而发挥减轻小鼠脑缺血再灌注脑损伤的作用。 展开更多
关键词 松树皮提取物 原花青素 缺血再灌注损伤 学习记忆 小鼠
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NF-κB信号通路在小鼠脑缺血再灌注细胞凋亡中的作用 预览 被引量:2
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作者 朱晓瓞 资江 +5 位作者 孙宝飞 李玉美 罗时鹏 肖朝伦 贺菊芳 《中风与神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期484-488,共5页
目的初探核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路在小鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)细胞凋亡中的作用。方法通过夹闭小鼠双侧颈总动脉建立动物模型。模型组分为3 h、6 h、12 h、1 d、... 目的初探核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路在小鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)细胞凋亡中的作用。方法通过夹闭小鼠双侧颈总动脉建立动物模型。模型组分为3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d,共8组。TTC染色确定脑缺血损伤区域,TUNEL法检测不同时间缺血区细胞凋亡数,原位杂交法和Western blotting检测NF-κB信号通路靶基因/蛋白Bcl-2和C-myc mRNA及蛋白表达。PDTC抑制NF-κB信号通路后,TUNEL法和原位杂交检测建模后1 d、7 d、14 d神经细胞凋亡数及Bcl-2和C-myc mRNA变化情况。结果各模型组海马CA3区凋亡细胞数量、Bcl-2 mRNA和C-myc mRNA阳性细胞数及二者蛋白表达量高于正常组和假手术组(P〈0.05);PDTC抑制NF-κB信号通路后,各抑制组与对应时间点模型组相比,Bcl-2 mRNA阳性细胞数减少,TUNEL阳性细胞数和C-myc mRNA阳性细胞数增加(P〈0.05)。结论 CIRI早期即出现有凋亡细胞数的增加,并在其后较长一段时间内细胞凋亡过程仍存在着持续性的进展;NF-κB信号通路在CIRI病程进展中对神经细胞凋亡起抑制作用,其机制可能通过Bcl-2诱导和C-myc抑制共同发挥调节作用。 展开更多
关键词 脑缺血再灌注 细胞凋亡 NF-ΚB信号通路 BCL-2 C-MYC 小鼠
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小鼠骨髓间充质干细胞体外扩增和分化为神经元样细胞的实验研究 预览 被引量:2
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作者 朱晓瓞 资江 +5 位作者 孙宝飞 李玉美 罗时鹏 肖朝伦 贺菊芳 《中风与神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2016年第10期868-872,共5页
目的 体外分离和扩增小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并观察不同方法诱导BMSCs向神经元样细胞分化的差异,以寻找一种效果理想的BMSCs体外诱导方法。方法 取昆明小鼠双股骨骨髓,采用全骨髓贴壁法体... 目的 体外分离和扩增小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并观察不同方法诱导BMSCs向神经元样细胞分化的差异,以寻找一种效果理想的BMSCs体外诱导方法。方法 取昆明小鼠双股骨骨髓,采用全骨髓贴壁法体外纯化扩增BMSCs,流式细胞术检测其表面标志物,并对其进行成脂、成骨诱导鉴定。分别用化学诱导法和共培养法诱导BMSCs分化为神经元样细胞,比较两种方法所获得的神经元样细胞的细胞形态。结果 采用全骨髓贴壁法能有效分离小鼠BMSCs,随着传代次数的增加能得到逐渐纯化的BMSCs,而过多的传代次数则出现细胞生长速度缓慢、核固缩、脱离等衰老征象。流式细胞术检测结果显示P4代BMSCs阳性表达CD29和Sca-1,而阴性表达CD11b。具有成脂、成骨诱导分化的能力。共培养法诱导第5天可见神经细胞样形态且细胞突起数量较多并有分支;化学诱导法培养第7天细胞出现较长突起,形成神经样结构。结论 采用全骨髓贴壁法能有效分离纯化小鼠BMSCs,通过共培养法诱导BMSCs分化为神经元样细胞效果优于化学诱导法。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓间充质干细胞 扩增 分化 神经元样细胞
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肱骨骨折合并桡神经损伤的治疗体会 预览 被引量:1
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作者 陈实 资江 杨忠奎 《黔南民族医专学报》 2016年第1期26-27,29共3页
目的:剖析桡神经的解剖及肱骨骨折伴有桡神经损伤明显的治疗方案和手术时机。方法:收集2010年1月至2015年1月于我院就诊且有完整随访资料的肱骨骨折伴桡神经损伤患者53例。根据其手术时间将53例患者分为A、B两组,A组为损伤后1周内手... 目的:剖析桡神经的解剖及肱骨骨折伴有桡神经损伤明显的治疗方案和手术时机。方法:收集2010年1月至2015年1月于我院就诊且有完整随访资料的肱骨骨折伴桡神经损伤患者53例。根据其手术时间将53例患者分为A、B两组,A组为损伤后1周内手术31例,B组为1周后手术22例,手术方式根据患者实际情况行骨折复位内固定术、手术探查施行神经外膜缝合、神经松解术、神经移植术,然后对各组的神经恢复良好率进行观察比较。结果:53例患者骨折均愈合,按桡神经功能评分标准,优29例(54.7%),良17例(32.1%),可4例(7.5%),差3例(5.7%),优良率达86.8%。其中A组优22例(71.0%),良6例(19.3%),可2例(6.5%),差1例(3.2%),优良率达90.3%;B组优7例(31.8%),良11例(50.0%),可2例(9.1%),差2例(9.1%),优良率为81.8%,组间差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:肱骨骨折伴桡神经损伤的病例,神经损伤较严重者应尽早手术,争取神经的恢复;同时选用不同的手术方式处理桡神经对其恢复也是非常重要的。 展开更多
关键词 肱骨骨折 桡神经 损伤 治疗
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大鼠脑皮质少突胶质细胞培养与鉴定 预览 被引量:1
11
作者 周静 谢骐骥 +2 位作者 资江 孙宝飞 戈果 《黔南民族医专学报》 2016年第1期1-3,12共4页
目的:改进少突胶质细胞体外培养方法。方法:取新生24 h内SD大鼠大脑皮质组织,采用机械性吸管吹打的方法获取细胞悬液,进行种植培养,恒温摇床结合无血清培养的方法纯化少突胶质细胞,Galc免疫细胞化学法鉴定少突胶质细胞。结果:纯化后... 目的:改进少突胶质细胞体外培养方法。方法:取新生24 h内SD大鼠大脑皮质组织,采用机械性吸管吹打的方法获取细胞悬液,进行种植培养,恒温摇床结合无血清培养的方法纯化少突胶质细胞,Galc免疫细胞化学法鉴定少突胶质细胞。结果:纯化后的少突胶质细胞,胞体圆形或椭圆形,折光性强,突起少,经Galc免疫细胞化学染色,阳性细胞胞浆和突起呈棕黄色,少突胶质细胞纯度达95%。结论:采用此种方法培养出的少突胶质细胞纯化度高,且方便简易。 展开更多
关键词 细胞培养 少突胶质细胞 免疫细胞化学
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神经干细胞移植治疗周围神经损伤的研究进展 预览 被引量:2
12
作者 贺菊芳 资江 《贵州医科大学学报》 CAS 2016年第10期1117-1121,共5页
周围神经是由脑和脊髓发出的神经根、神经丛、神经干及神经末梢组成的混合神经,包括运动、交感及感觉3种纤维,周围神经损伤后会引起不同程度的神经感觉、运动及交感功能障碍。近年来,周围神经损伤的比率逐年增高,约占创伤患者的2.8%,50... 周围神经是由脑和脊髓发出的神经根、神经丛、神经干及神经末梢组成的混合神经,包括运动、交感及感觉3种纤维,周围神经损伤后会引起不同程度的神经感觉、运动及交感功能障碍。近年来,周围神经损伤的比率逐年增高,约占创伤患者的2.8%,50%以上的患者在治疗后,运动和感觉功能未恢复到正常。 展开更多
关键词 神经干细胞 周围神经 神经损伤 细胞移植 综述
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大鼠坐骨神经损伤手术时机选择的实验研究 预览
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作者 贺菊芳 资江 +5 位作者 戈果 田广 朱晓瓞 高帆 曹文鹏 方丽丽 《贵州医科大学学报》 CAS 2016年第10期1122-1127,1132共7页
目的:构建大鼠坐骨神经V度损伤模型,探寻坐骨神经损伤后最佳手术缝合时机。方法:将42只成年SD大鼠随机均分为对照组、模型组、0、6、12、24及48 h缝合组,对照组仅暴露坐骨神经、模型组剪断右侧股骨段坐骨神经,0、6、12、24及48 h缝合... 目的:构建大鼠坐骨神经V度损伤模型,探寻坐骨神经损伤后最佳手术缝合时机。方法:将42只成年SD大鼠随机均分为对照组、模型组、0、6、12、24及48 h缝合组,对照组仅暴露坐骨神经、模型组剪断右侧股骨段坐骨神经,0、6、12、24及48 h缝合组在剪断右侧股骨段坐骨神经后的相应时点缝合坐骨神经,各组分别于手术后第7、14、21及28天时取坐骨神经损伤段,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达、采用Western Blot检测VEGF蛋白表达、HE染色法观察坐骨神经轴突排列分布及髓鞘的改变、透射电镜观察突触形态结构的变化、TUNEL法检测神经细胞的凋亡,比较各组术后神经修复效果。结果:免疫组织化学结果显示,VEGF蛋白在模型组和6 h缝合组术后第7天时表达高于其他组(P〈0.05);Western Blot结果显示术后第7天时6 h缝合组术后VEGF蛋白表达高于其他缝合组(P〈0.05),HE染色、透射电镜及TUNEL检测结果显示,6 h缝合组与其他缝合组比较,坐骨神经形态学变异程度较小,且凋亡细胞数少。结论:坐骨神经损伤后6 h时给予缝合处理神经修复效果最好,其机制可能与VEGF表达升高有关。 展开更多
关键词 坐骨神经 创伤和损伤 模型 动物 血管内皮生长因子 大鼠 Sprague Dawley 手术时机
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SD大鼠胚胎神经干细胞悬浮培养与鉴定 预览 被引量:1
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作者 贺菊芳 资江 +2 位作者 朱晓瓞 方丽丽 王俊婕 《贵州医科大学学报》 CAS 2016年第10期1128-1132,共5页
目的:研究神经干细胞(NSCs)的分离、培养及鉴定方法。方法:以孕12.5 d SD胚胎鼠端脑为组织来源,应用无血清悬浮培养技术培养、扩增NSCs;NSCs传代2次后,应用Nestin免疫荧光检测NSCs的干细胞特性,Brd U标记法检测细胞增殖能力;诱导贴... 目的:研究神经干细胞(NSCs)的分离、培养及鉴定方法。方法:以孕12.5 d SD胚胎鼠端脑为组织来源,应用无血清悬浮培养技术培养、扩增NSCs;NSCs传代2次后,应用Nestin免疫荧光检测NSCs的干细胞特性,Brd U标记法检测细胞增殖能力;诱导贴壁分化后,对分化细胞进行NSE、GFAP免疫荧光鉴定;扫描电镜观察神经球及单个细胞表型。结果:培养出大量悬浮生长的NSCs球,Nestin及Brd U表达阳性;神经球诱导分化后表达NSE、GFAP,表明NSCs可分化为神经元和星形胶质细胞;HE染色可见NSCs细胞核巨大,胞质较少;扫描电镜可观察到单个NSC表面较光滑,且神经球表面的NSCs连接较疏散。结论:应用无血清培养技术体外培养扩增出的胚胎神经干细胞具有自我更新和多向分化能力,经诱导后可分化为神经元和星形胶质细胞。 展开更多
关键词 神经干细胞球 无血清 悬浮培养 多向分化 大鼠 Sprague Dawley
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c-Jun氨基末端激酶在镉致小鼠脑原代星形胶质细胞凋亡中的作用 被引量:1
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作者 姚云 戈果 +4 位作者 周静 谢骐骥 令狐艳 罗道朋 资江 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期487-492,F0003共7页
目的利用原代培养的小鼠脑星形胶质细胞(astrocytes,AS),探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是否参与镉致小鼠脑星形胶质细胞凋亡的过程。方法原代培养的小鼠脑星形胶质细胞给予0-20μmol/L镉染毒0-24 h,倒置相差显微镜观察细... 目的利用原代培养的小鼠脑星形胶质细胞(astrocytes,AS),探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是否参与镉致小鼠脑星形胶质细胞凋亡的过程。方法原代培养的小鼠脑星形胶质细胞给予0-20μmol/L镉染毒0-24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;给予0-20μmol/L镉染毒9、12 h,采用MTT法检测细胞存活率;给予0-20μmol/L镉染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;给予0-20μmol/L镉染毒0-12 h,采用蛋白印迹(Western blotting)法检测JNK磷酸化蛋白的表达水平。结果镉浓度为5-20μmol/L时,随染毒剂量的升高及作用时间的延长,细胞形态发生明显改变:细胞间网络连接松散,突起消失,胞体收缩成球形,贴壁能力下降,最终脱落,漂浮于培养液中。与对照组比较,各浓度镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P〈0.01);且随着镉染毒浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度镉染毒12 h后小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均升高,差异有统计学意义(P〈0.01);且随着镉染毒浓度的升高,小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组比较,5-20μmol/L镉染毒3 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,20μmol/L镉染毒6 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量升高,10-20μmol/L镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P〈0.05);与0 h比较,0-20μmol/L镉染毒3-12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P〈0.05);且随着镉浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK的表达量均呈上升趋势。结论镉可能通过上调JNK磷酸化蛋白的表达水平来诱导小鼠脑星形胶质细胞的凋亡。 展开更多
关键词 氯化镉 星形胶质细胞 细胞凋亡 c-Jun氨基末端激酶信号转导通路
三氧化二砷暴露原代培养大鼠海马神经元凋亡及Bax和Bcl-2表达的初步观察 被引量:2
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作者 魏绍峰 孙宝飞 +2 位作者 张兵 程寿峰 资江 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2016年第8期693-695,共3页
目的探讨砷诱导原代培养大鼠海马神经元凋亡及Bax和Bcl-2的表达情况。方法离体培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,以不同浓度三氧化二砷(0、10、50、100μmol/L)染毒24 h,分析神经元凋亡率,以蛋白印迹法检测海马神经元Bcl-2和Bax蛋白表... 目的探讨砷诱导原代培养大鼠海马神经元凋亡及Bax和Bcl-2的表达情况。方法离体培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,以不同浓度三氧化二砷(0、10、50、100μmol/L)染毒24 h,分析神经元凋亡率,以蛋白印迹法检测海马神经元Bcl-2和Bax蛋白表达。结果染砷组处理24 h后同对照组比较,海马神经元凋亡率升高,差异具有统计学意义(P〈0.01),凋亡率随染砷浓度的增加而增加,具有明显的剂量-反应关系。Western blot分析显示随着染砷剂量的增加,Bcl-2/Bax的比值逐渐减小。结论三氧化二砷对大鼠海马神经元有直接毒性作用,并随染砷剂量增加凋亡加重,其机制是可能通过Bcl-2与Bax途径诱导凋亡。 展开更多
关键词 海马神经元 凋亡 Bcl-2 BAX
原花青素对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护机制 预览 被引量:2
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作者 张文艳 孙宝飞 +5 位作者 资江 肖朝伦 罗时鹏 令狐艳 杨丹 《贵阳医学院学报》 CAS 2015年第4期352-355,共4页
目的:探讨原花青素对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护机制。方法:120只昆明小鼠随机分成正常对照组、假手术组、14 d模型组、14 d治疗组、28 d模型组、28 d治疗组;采用小鼠双侧颈总动脉结扎缺血15 min、再灌注15 min,反复3次构建脑缺... 目的:探讨原花青素对小鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护机制。方法:120只昆明小鼠随机分成正常对照组、假手术组、14 d模型组、14 d治疗组、28 d模型组、28 d治疗组;采用小鼠双侧颈总动脉结扎缺血15 min、再灌注15 min,反复3次构建脑缺血再灌注损伤模型;各治疗组在处死前7 d连续给予松树皮提取物灌胃治疗,其余各组灌注等量生理盐水,小鼠处死后取各组海马组织用ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)的表达,westen blot法检测海马内核因子-κB(NF-κB)的表达。结果:各治疗组脑组织TNF-α、IL-6及NF-κB蛋白表达水平与同时点模型组比较均明显降低,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:原花青素对脑缺血再灌注损伤小鼠神经保护机制可能是通过降低NF-κB、TNF-α以及IL-6表达而实现。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注损伤 原花青素 炎症 肿瘤坏死因子-Α 白介素-6 核因子-ΚB
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Wnt通路信号蛋白β-链蛋白、糖原合成酶激酶-3β在小鼠脑缺血再灌注损伤后的表达变化
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作者 傅马 资江 +4 位作者 罗时鹏 肖朝伦 孙宝飞 李玉美 《中国血液流变学杂志》 CAS 2015年第3期258-262,F0002,F0003共7页
目的:初步探讨Wnt信号通路中相关因子在小鼠脑缺血再灌注损伤中的表达规律。方法将96只1月龄健康昆明雄性小鼠随机分为正常组、假手术组和缺血再灌注后1 d、7 d、14 d、28 d组,采用夹闭小鼠双侧颈总动脉制作脑缺血再灌注损伤模型。通... 目的:初步探讨Wnt信号通路中相关因子在小鼠脑缺血再灌注损伤中的表达规律。方法将96只1月龄健康昆明雄性小鼠随机分为正常组、假手术组和缺血再灌注后1 d、7 d、14 d、28 d组,采用夹闭小鼠双侧颈总动脉制作脑缺血再灌注损伤模型。通过Y-迷宫检测小鼠学习记忆能力,TTC染色和透射电镜观察小鼠海马形态结构,免疫组织化学染色方法检测β-链蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达变化。结果小鼠脑缺血再灌注后身体出现神经功能损伤症状,同时学习记忆能力明显下降。脑片TTC染色海马区出现白色梗死灶,透射电镜显示海马区神经元细胞水肿,线粒体肿胀,核固缩,核膜间隙扩大。免疫组化显示正常组和假手术组中β-catenin呈弱阳性,GSK-3β呈阳性。脑缺血再灌注损伤后,GSK-3β阳性细胞呈低表达,21 d升高;而β-catenin在缺血再灌注后脑组织中均有表达,且阳性表达于7 d达到高峰,随后开始下降,28 d降至正常,两者呈显著负相关(P<0.05)。结论初步证实夹闭小鼠双侧颈总动脉成功构建脑缺血再灌注损伤模型,同时Wnt信号通路参与脑缺血再灌注损伤的发生。 展开更多
关键词 脑缺血再灌注 β-catenin GSK-3 β
松树皮原花青素对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 预览 被引量:1
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作者 张文艳 孙宝飞 +5 位作者 资江 肖朝伦 王玉林 罗时鹏 令狐艳 《贵阳医学院学报》 CAS 2015年第5期450-454,共5页
目的:探讨松树皮提取物原花青素对缺血再灌注小鼠脑损伤海马神经元的保护作用。方法:120只雄性昆明小鼠随机分成正常对照组、假手术组、14 d模型组、28 d模型组、14 d治疗组、28 d治疗组,采取小鼠双侧颈总动脉结扎缺血15 min,再灌注15... 目的:探讨松树皮提取物原花青素对缺血再灌注小鼠脑损伤海马神经元的保护作用。方法:120只雄性昆明小鼠随机分成正常对照组、假手术组、14 d模型组、28 d模型组、14 d治疗组、28 d治疗组,采取小鼠双侧颈总动脉结扎缺血15 min,再灌注15 min构建脑缺血再灌注损伤模型,治疗组给予松树皮提取物原花青素灌胃治疗,Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力的变化,造模后第14、28天处死小鼠,HE染色法观察小鼠脑组织病理形态学改变,透射电子显微镜观察海马神经元超微结构的改变。结果:Morris水迷宫结果显示模型组小鼠学习记忆能力降低,与模型组相比,治疗组小鼠学习记忆能力有所提升;14 d模型组脑细胞数量较假手术组明显减少,胞浆着色浅,胞核移位,治疗组尼氏体排列欠规律,部分细胞形态不规则,胞浆着色相对较浅,但比模型组好;电镜下,小鼠海马CA3区神经元在14 d模型组损伤严重,神经元胞体水肿、出现核固缩溶解现象,存在细胞器溶解后形成的空泡,线粒体嵴可见有断裂,细胞出现凋亡小体,28 d模型组有所恢复,14 d和28 d治疗组神经元较同期模型组轻。结论:松树皮提取物原花青素对脑缺血再灌注损伤小鼠具有保护作用。 展开更多
关键词 松树皮提取物 原花青素 再灌注损伤 海马 显微镜检查 电子 扫描 细胞保护
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慢性砷中毒对骨骼肌超微结构的影响 预览
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作者 孙宝飞 王恒 +4 位作者 康朝胜 资江 季亮 肖朝伦 罗时鹏 《黔南民族医专学报》 2015年第3期165-167,232共4页
目的:观察慢性砷中毒对小鼠骨骼肌形态学的变化,研究慢性砷中毒对小鼠骨骼肌的损伤机制。方法:将60只昆明种小鼠分为对照组、高、低剂量染砷组,检测各组小鼠血、尿以及骨骼肌中含砷量,采用电镜(透射)观察小鼠骨骼肌细胞内超微结构... 目的:观察慢性砷中毒对小鼠骨骼肌形态学的变化,研究慢性砷中毒对小鼠骨骼肌的损伤机制。方法:将60只昆明种小鼠分为对照组、高、低剂量染砷组,检测各组小鼠血、尿以及骨骼肌中含砷量,采用电镜(透射)观察小鼠骨骼肌细胞内超微结构的变化。结果:各染砷组小鼠血、尿及骨骼肌中含砷量明显高于对照组(P〈0.01);透射电镜显示正常组小鼠骨骼肌细胞结构未见异常,低砷染毒组骨骼肌细胞出现轻度损伤,高砷染毒组细胞出现Z线漂移,局部Z线消失,线粒体出现肿胀、内部嵴断裂,部分发生空泡样改变。结论:慢性砷中毒明显损伤小鼠骨骼肌细胞超微结构,并随浓度增加损害加重。 展开更多
关键词 砷中毒 超微结构 骨骼肌 小鼠
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