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低氧和复氧对日本沼虾抗氧化酶活力及组织结构的影响 预览
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作者 杨明 孙盛明 +9 位作者 乔慧 张文宜 龚永生 蒋速飞 熊贻伟 许蕾 赵才源 王亚冰 胡宇宁 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期493-503,共11页
为研究低氧胁迫及恢复后日本沼虾(Macrobrachium nipponense)抗氧化酶活力和组织结构的变化,将体重(2.0±0.2) g 的日本沼虾暴露于(2.0±0.2) mg/L 低氧环境中 24 h,设定溶解氧(6.0±0.2) mg/L 为对照组,每组设置 3 个重复... 为研究低氧胁迫及恢复后日本沼虾(Macrobrachium nipponense)抗氧化酶活力和组织结构的变化,将体重(2.0±0.2) g 的日本沼虾暴露于(2.0±0.2) mg/L 低氧环境中 24 h,设定溶解氧(6.0±0.2) mg/L 为对照组,每组设置 3 个重复,于低氧胁迫 0 h、6 h、12 h、24 h 及复氧 1 h、6 h、12 h、24 h 分别采集实验组及对照组鳃、肝胰腺及肌肉组织,测定这些组织的抗氧化酶活力,并进行组织切片观察。实验结果表明,低氧胁迫期间肌肉组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力先升高后下降, 3 种酶活力在低氧胁迫 12 h 时显著高于对照组(P<0.05),复氧阶段肌肉组织中 SOD、CAT 酶活力呈波动性变化, GPX 酶活力在复氧 24 h 时显著低于对照组(P<0.05)。鳃组织中 SOD、CAT 和 GPX 酶活力在低氧胁迫 12 h 时显著高于对照组(P<0.05), GPX 酶活力在复氧 24 h 时显著高于对照组(P<0.05)。在低氧胁迫期间肝胰腺 SOD、CAT 和 GPX 酶活力在低氧 6 h 均达到最大值并显著高于对照组(P<0.05),复氧阶段 3 种酶活力均呈现波动性变化,肝胰腺中丙二醛(MDA)含量在低氧及复氧阶段均显著高于对照组(P<0.05)。低氧胁迫及恢复并未对肌肉组织结构产生明显的影响。鳃组织在低氧胁迫期间鳃小片上皮细胞与支柱细胞排列发生紊乱,次级层片发生肥大的现象且有红细胞流入,泌氯细胞形态发生变化且细胞数目有所增加,但复氧后均得到一定程度的恢复。肝胰腺组织在低氧胁迫期间 B 细胞数量逐渐降低,胞内运转泡体积减小,复氧阶段 B 细胞数量及体积恢复明显。结果表明急性低氧胁迫能够导致日本沼虾肝胰腺和鳃组织结构损伤并引起抗氧化酶活力发生显著变化,且 24 h 恢复期不足以让日本沼虾在低氧胁迫中完全恢复。 展开更多
关键词 日本沼虾 低氧胁迫 酶活力 组织切片 半致死浓度
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日本沼虾几丁质酶1C(MnCht1C)基因的克隆及表达分析
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作者 张文宜 张世勇 +6 位作者 陈校辉 乔慧 蒋速飞 熊贻伟 金舒博 龚永生 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第2期723-732,共10页
本研究从日本沼虾精巢均一化cDNA文库中筛选到一条MnCht1C表达序列片段(expressed sequence tags,EST),该序列具有完整的基因编码区,编码区长度为1 473 bp,编码490个氨基酸。MnCht1C编码的蛋白质具有完整的几丁质酶结构,N端的前23个... 本研究从日本沼虾精巢均一化cDNA文库中筛选到一条MnCht1C表达序列片段(expressed sequence tags,EST),该序列具有完整的基因编码区,编码区长度为1 473 bp,编码490个氨基酸。MnCht1C编码的蛋白质具有完整的几丁质酶结构,N端的前23个氨基酸为信号肽,第24-406位氨基酸序列为几丁质酶催化结构域(catalytic domain),第407-433位氨基酸序列为Ser/Thr富含区(S/T-rich linker),其作用在于连接催化结构域与几丁质结合结构域。qPCR分析MnCht1C在日本沼虾各组织和各发育阶段表达情况,研究发现其主要在肝胰腺、肠、眼柄、表皮、精巢5种组织中表达;幼体发育时期不表达,而直至变态时期才开始表达。MnCht1C在日本沼虾整个蜕壳周期的表达呈波动性,蜕壳中期表达水平最高,随着蜕壳这一生理过程的完成,其表达水平也相应地下降直至蜕壳间期无表达水平检出,随着新一轮蜕壳的进行,其表达水平又开始逐渐升高。本研究结果为研究几丁质酶基因在日本沼虾和其他甲壳动物蜕壳及生殖发育中的作用提供参考。 展开更多
关键词 日本沼虾 几丁质酶1C 蜕壳 基因表达
青虾冷休克蛋白Y-box编码基因的cDNA全长克隆与表达分析 预览
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作者 孙盛明 +4 位作者 戈贤平 朱健 乔慧 金舒博 张文宜 《水产学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1345-1354,共10页
为研究冷休克蛋白Y-box基因在青虾应答环境胁迫过程中所起的调控作用,实验应用RACE PCR技术首次克隆了青虾的冷休克蛋白Y-box基因全长c DNA序列,并利用在线软件对其序列特征进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR技术对其在青虾不同... 为研究冷休克蛋白Y-box基因在青虾应答环境胁迫过程中所起的调控作用,实验应用RACE PCR技术首次克隆了青虾的冷休克蛋白Y-box基因全长c DNA序列,并利用在线软件对其序列特征进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR技术对其在青虾不同组织及环境胁迫过程中的表达变化特征进行分析。青虾冷休克蛋白Y-box基因c DNA全长1501 bp,包括84 bp的5′末端非翻译区(UTR),876 bp的开放阅读框(ORF),541 bp的3′UTR,开放阅读框编码291个氨基酸。氨基酸相似度比对显示,青虾冷休克蛋白Y-box基因富含高度保守的冷休克结构域。系统进化树分析显示,青虾冷休克蛋白Y-box基因与水蚤等节肢动物冷休克Y-box聚类一支,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示,冷休克蛋白Y-box基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量在肝胰腺组织中最高,使用荧光定量PCR检测青虾冷休克蛋白Y-box基因在低温胁迫和恢复条件下在肝胰腺中的m RNA时空表达情况,结果显示,与对照组相比冷休克蛋白Y-box在肝胰腺中的表达量分别在低温和低氧胁迫3,6和12 h出现了显著上调,而在恢复刺激后其表达量与对照组差异不显著。此外,本实验对Y-box进行了原核表达,为进一步研究Y-box基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 青虾 冷休克蛋白 低温 低氧 原核表达
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青虾Ran基因的克隆、表达及其在卵巢发育中的功能 预览 被引量:1
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作者 卜宗元 +7 位作者 孙盛明 乔慧 金舒博 张文宜 龚永生 蒋速飞 熊贻伟 吴滟 《中国水产科学》 CSCD 北大核心 2017年第3期459-469,共11页
本研究应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponensis)Ran(Ras related nuclear protein,Ras相关核蛋白)基因全长cDNA序列,该基因cDNA全长1191 bp,包括218 bp的5'UTR,648 bp的开放阅读框(ORF),405 bp的3'UTR,编码215个氨... 本研究应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponensis)Ran(Ras related nuclear protein,Ras相关核蛋白)基因全长cDNA序列,该基因cDNA全长1191 bp,包括218 bp的5'UTR,648 bp的开放阅读框(ORF),405 bp的3'UTR,编码215个氨基酸。青虾Ran基因属于P-loop-NTPase超级家族,拥有PTZ00132跨结构域,多肽分子量约为24.57 kDa,理论等电点7.13。系统进化树分析表明,在动物界进化中非常保守的青虾Ran多肽与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)聚为一支,具有最近的亲缘关系。使用荧光定量PCR技术检测Ran基因在成体青虾不同组织和卵巢不同发育期的表达差异,结果显示,Ran基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量在卵巢中最高,是精巢表达量的7-8倍;随着卵巢的发育,Ran基因的表达水平呈现上升趋势,在卵巢消退期又恢复到较低水平。RNA干扰后,实验组Ran基因表达量显著低于对照组(P〈0.05),同时卵巢发育关键基因Vg(vitellogenin)在卵巢中的表达量也显著低于对照组(P〈0.05),推测Ran基因参与雌性卵巢发育过程并对Vg基因的表达起到调控作用。 展开更多
关键词 青虾 Ran基因 克隆 卵巢发育 RNA干扰
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RNAi在甲壳动物中的研究进展 预览
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作者 李法君 付春鹏 +2 位作者 李明爽 李群峰 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期460-472,共13页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一类在真核生物中广泛存在的,由双链RNA介导的转录后基因沉默机制。作为一项研究基因功能的有力工具,RNAi技术已经被广泛应用在线虫、果蝇、斑马鱼和小鼠等生物的基因组学研究中。近来在甲壳动物中,... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一类在真核生物中广泛存在的,由双链RNA介导的转录后基因沉默机制。作为一项研究基因功能的有力工具,RNAi技术已经被广泛应用在线虫、果蝇、斑马鱼和小鼠等生物的基因组学研究中。近来在甲壳动物中,通过RNAi技术取得了众多的科研成果。文章从免疫、生长发育、蜕皮、生殖、性别调控、渗透压调节和代谢等几个方面进行了综述。进而对RNAi技术在甲壳动物中的研究前景进行了展望,旨在为以后更好地研究甲壳动物的基因功能和调控网络提供参考。 展开更多
关键词 RNA干扰 基因沉默 甲壳动物 基因功能 调控机制
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microRNA在水产动物中的研究进展 预览 被引量:1
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作者 李法君 李明爽 +3 位作者 付春鹏 李群峰 罗永巨 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期976-992,共17页
miRNAs是一类在真核生物中广泛存在的非编码小分子RNA,通过与靶mRNA互补配对在转录水平上对基因的表达进行负调控,导致mRNA的翻译抑制或降解。大量研究表明,miRNA在躯体发育、癌症、细胞分化、细胞增殖与凋亡、脂肪代谢等方面发挥作用... miRNAs是一类在真核生物中广泛存在的非编码小分子RNA,通过与靶mRNA互补配对在转录水平上对基因的表达进行负调控,导致mRNA的翻译抑制或降解。大量研究表明,miRNA在躯体发育、癌症、细胞分化、细胞增殖与凋亡、脂肪代谢等方面发挥作用。近来在水产动物中,有关miRNA的研究取得了众多的科研成果,然而对其进行全面总结的报道较缺乏。本文综述了miRNA在水产动物中的研究进展,结果显示miRNA在水产动物中表现为多样化的生物学功能,本文也对其研究前景进行了展望,旨在为以后更好地研究水产动物miRNA的功能提供参考。 展开更多
关键词 鱼类 甲壳动物 水产动物 MIRNA 负调控
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青虾幼虾发育时期性腺发育组织学研究 预览
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作者 金舒博 张颖 +7 位作者 关海红 蒋速飞 熊贻伟 乔慧 张文宜 龚永生 吴滟 《水产学杂志》 CAS 2016年第4期11-16,共6页
采用组织切片及类固醇激素含量测定等方法,研究青虾Macrobrachium nipponense幼虾发育第1~31d的精巢、卵巢及促雄腺发育的起始时间、发育过程及成熟时间。结果表明:青虾幼虾发育到第10d(PL10)时促雄腺呈索状结构开始发育,随后经历增... 采用组织切片及类固醇激素含量测定等方法,研究青虾Macrobrachium nipponense幼虾发育第1~31d的精巢、卵巢及促雄腺发育的起始时间、发育过程及成熟时间。结果表明:青虾幼虾发育到第10d(PL10)时促雄腺呈索状结构开始发育,随后经历增殖期(PL10)、合成期(PL13)和分泌期(PL19)3个发育阶段发育成熟,形成完整的促雄腺。青虾精巢和卵巢均在幼虾发育第13d(PL13)开始发育,精巢形成不规则排列的精原细胞,而卵巢生殖上皮开始分化为椭圆或多边形的卵原细胞。精巢经精原细胞期(PL13)、精母细胞期(PL16)、精细胞期(PL19)和精子期(PL22)4个发育阶段成熟,此时成熟的精巢生精小管内充满成熟的精子。卵巢经卵原细胞期(PL13)、初级卵母细胞期(PL16)、次级卵母细胞期(PL16)和卵子期(PL19)4个时期发育成熟,此时卵巢充满成熟卵子。从PL1到PL22,睾酮分泌量逐渐增加,维持在稳定水平至PL25后逐渐下降;从PL1到PL19,17β-雌二醇的分泌量逐渐增加,维持在稳定水平至PL25后逐渐下降。本研究显示:促雄腺与精巢发育过程均持续10d,但促雄腺早于精巢3d开始发育和成熟,这可为性别和生殖相关基因的筛选及性别调控机制的研究提供参考。 展开更多
关键词 青虾 组织学观察 类固醇激素测定 性腺发育 性早熟
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二次投喂法与传统投喂法对青虾养殖商品率的影响试验 预览
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作者 王明宝 +2 位作者 黄春贵 张敏 邹宏海 《现代农业科技》 2016年第14期255-256,258共3页
针对池塘秋季青虾养殖中普遍存在个体出现分化严重及大量秋繁苗等问题,对饲料投喂方法进行了改进,采用二次投喂法,并与传统投喂法进行对比,结果表明:二次投喂法满足了小虾的营养需求,适口性好,促进了小虾生长,提高了大规格虾比例,增加... 针对池塘秋季青虾养殖中普遍存在个体出现分化严重及大量秋繁苗等问题,对饲料投喂方法进行了改进,采用二次投喂法,并与传统投喂法进行对比,结果表明:二次投喂法满足了小虾的营养需求,适口性好,促进了小虾生长,提高了大规格虾比例,增加了商品虾的产量。 展开更多
关键词 青虾 二次投喂法 传统投喂法 商品率
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青虾精(卵)母细胞特有因子Gtsf1基因的克隆及其时空表达分析 预览 被引量:1
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作者 梁国霞 +8 位作者 乔慧 白鸿坤 张文宜 李法君 蒋速飞 熊贻伟 龚永生 金舒博 吴滟 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期261-267,共7页
为了研究青虾性早熟现象,在实验室构建的青虾精卵巢表达谱中发现一个Gtsyi同源EST序列,采用RACE技术克隆获得青虾Gtsfi基因cDNA序列长349bp(GenBank登录号:KR349325),开放阅读框(Open read-ingframe,ORF)为240bp,编码79个氨... 为了研究青虾性早熟现象,在实验室构建的青虾精卵巢表达谱中发现一个Gtsyi同源EST序列,采用RACE技术克隆获得青虾Gtsfi基因cDNA序列长349bp(GenBank登录号:KR349325),开放阅读框(Open read-ingframe,ORF)为240bp,编码79个氨基酸。生物信息学分析预测青虾Gtsyi蛋白包含1个zf-U11-48K结构域,并发现该蛋白无信号肽,属于非分泌蛋白。系统进化树分析表明青虾Gtsf1蛋白与昆虫纲的蝽类(Lygushes.perus)亲缘关系最近。组织表达分析结果显示,Gtsf1基因在性腺中表达很高,特别是在卵巢中表达最高(为精巢的6倍),其他组织中表达极低。卵巢不同发育时期表达结果发现,发育初期GtsfL基因表达水平较低,随着卵巢的发育,该基因的表达水平呈现显著上升趋势(P〈0.05),在成熟期达到最高峰,在消退期显著下降并恢复到较低水平(P〈0.05)。胚胎和胚后不同发育时期结果显示,Gtsf1基因在胚胎发育早期表达水平较高,囊胚期时显著升高并达到峰值(P〈0.05),从原肠期显著下降直至变态后第10天该基因表达水平维持较低水平(P〈0.05)。以上研究结果表明Gtsf1基因与生殖密切相关,特别是在卵巢发育过程中有关,且呈正相关趋势。同时,岱坍基因可能主要参与青虾胚胎早期发育的调控。研究首次在甲壳动物中克隆获得Gtsf1基因,并分析Gtsf1基因在青虾中的时空表达模式,研究结果将为进一步研究青虾Gtsf1基因功能和青虾性腺发育调控规律奠定基础,也为其他甲壳动物的生殖相关研究提供参考。 展开更多
关键词 青虾 Gtsf1 卵巢发育 性腺 时空表达
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科研创新团队的创优建设对创新能力的影响评价 被引量:2
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作者 吴滟 刘伟娜 +1 位作者 徐跑 《科研管理》 CSSCI 北大核心 2015年第S1期110-115,共6页
以某农业科研创新团队为例,通过分析团队科技人才结构、科研经费投入、发表论文、获得专利及科技奖励等相关情况,对该团队在获得优秀称号和奖励前后的科技创新能力进行对比和评估。研究表明,创优获奖后,该团队研究人员的整体结构更趋合... 以某农业科研创新团队为例,通过分析团队科技人才结构、科研经费投入、发表论文、获得专利及科技奖励等相关情况,对该团队在获得优秀称号和奖励前后的科技创新能力进行对比和评估。研究表明,创优获奖后,该团队研究人员的整体结构更趋合理,团队在SCI论文发表、实用新型专利、软件著作权的授权方面取得了长足的进步。研究显示,创建优秀农业科研创新团队对团队科研创新能力有良好的促进作用,科研团队在获得更充裕、更合理的科研投入后,能够取得更高层次的科技成果产出。优秀团队的建设为科技创新团队的管理及发展提供了参考。 展开更多
关键词 农业 科研 创新团队 创新能力 影响评价
青虾泛素特异性蛋白酶9基因Usp9全长cDNA序列的克隆及表达分析 预览 被引量:1
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作者 袁晖 周巧 +4 位作者 张世勇 孙盛明 乔慧 张文宜 《中国农学通报》 2015年第17期28-37,共10页
本研究首次克隆了青虾的Usp9(ubiquitin-specific protease9)基因全长cDNA序列,并在青虾中使用荧光定量PCR技术首次检测了Usp9基因在不同组织和发育阶段中的表达变化。青虾Usp9基因cDNA全长1259bp,包括162bp的5’UTR,978bp的开放... 本研究首次克隆了青虾的Usp9(ubiquitin-specific protease9)基因全长cDNA序列,并在青虾中使用荧光定量PCR技术首次检测了Usp9基因在不同组织和发育阶段中的表达变化。青虾Usp9基因cDNA全长1259bp,包括162bp的5’UTR,978bp的开放阅读框以及116bp的3’UTR。氨基酸序列比对分析显示,青虾Usp9蛋白与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)、凤仙花熊蜂(Bombus impatiens)及灰短尾负鼠(Monodelphis domesfica)的蛋白相似度分别为99%、97%和95%。应用MEGA5.1软件对青虾与其他物种的Usp9氨基酸进行系统进化树分析,结果表明,青虾Usp9与同为甲壳纲的钩额型蚤状潘聚为一支,具有最近的亲缘关系。采用荧光定量PCR技术检测了Usp9基因的时空表达,水温28℃时,Usp9基因在青虾发育的后幼体发育期第5天PL5出现表达高峰。Usp9基因在6种成体组织中均有表达,表达水平依次为:脑〉腹神经〉精巢〉卵巢〉肌肉〉肠。而在雌雄组织差异表达分析表明,精巢中Usp9基因表达量比卵巢的比值为2.86,脑组织中雄虾的表达量比雌虾为2.27,差异均为极其显著俨〈0.01)。这表明Usp9基因的表达和雄性偏向基因趋势是一致的(雄性表达:雌性表达≥1.5)。本研究为进一步开展青虾Usp9基因功能等相关研究奠定了基础,并可为青虾性别的遗传调控机制研究提供参考。 展开更多
关键词 青虾 泛素特异性蛋白酶9 基因克隆 时空表达
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酶解制备日本沼虾游离精子方法的研究 预览 被引量:1
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作者 颜跃弟 +7 位作者 乔慧 白鸿坤 孙盛明 蒋速飞 熊贻伟 龚永生 金舒博 张文宜 《中国农学通报》 2015年第2期107-111,共5页
为了获得数量多且存活的游离青虾精子,首次采用胰蛋白酶消化日本沼虾精荚的方法,获得了游离日本沼虾的精子。通过观察游离精子形态,并经台盼蓝染色,以每克精荚所获得形态正常、结构完整且不被染色的存活精子数为依据,探究胰蛋白酶处理... 为了获得数量多且存活的游离青虾精子,首次采用胰蛋白酶消化日本沼虾精荚的方法,获得了游离日本沼虾的精子。通过观察游离精子形态,并经台盼蓝染色,以每克精荚所获得形态正常、结构完整且不被染色的存活精子数为依据,探究胰蛋白酶处理的最佳条件。在p H 7.1的条件下,设计三因素四水平正交试验,设置不同酶浓度(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%)、处理时间(5 min、10 min、15 min、20 min)和处理温度(30℃、35℃、40℃、45℃),根据正交试验结果确定酶处理最佳反应条件。结果表明,酶浓度对获得游离精子影响最大,其次是处理温度和处理时间。酶处理的最适条件为:酶浓度0.8%,处理时间10 min,处理温度40℃。经优化验证试验,表明上述理论组合确为最佳组合。本研究通过酶解法获得较多数量的存活游离精子,为进一步研究日本沼虾精子提供了获得游离精子的方法。 展开更多
关键词 日本沼虾 精荚 游离精子 胰蛋白酶 正交试验
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X射线灭活活体日本沼虾精子的初步研究 预览
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作者 颜跃弟 +9 位作者 梁国霞 乔慧 白鸿坤 蒋速飞 熊贻伟 龚永生 金舒博 张文宜 吕洋 吴滟 《中国农学通报》 2015年第20期35-38,共4页
为检测X射线对日本沼虾精子的灭活效果,利用X射线对雄性日本沼虾进行不同时间的照射处理,将处理后的雄虾与刚完成生殖脱壳的雌虾交配。待雌虾产卵后,计数雌虾抱卵天数,并在显微镜下观察卵的畸形情况。X射线管照射强度为100 k V,5 m A,源... 为检测X射线对日本沼虾精子的灭活效果,利用X射线对雄性日本沼虾进行不同时间的照射处理,将处理后的雄虾与刚完成生殖脱壳的雌虾交配。待雌虾产卵后,计数雌虾抱卵天数,并在显微镜下观察卵的畸形情况。X射线管照射强度为100 k V,5 m A,源距10 cm,照射时间为0、30、60、90、120 min。结果发现:照射30 min组的抱卵天数及卵的畸形率较0 min组无变化,卵的畸形率为0,卵能正常发育至孵化出膜。随着照射时间的增加,在30-90 min之间,雌虾抱卵天数逐渐减少,且所抱卵的畸形率呈上升趋势。照射120 min组的抱卵天数较90 min组变化不大,卵的畸形率达100%。在本试验照射时间范围(0-120 min)内,灭活日本沼虾精子遗传物质的最佳照射时间为90-120 min。 展开更多
关键词 日本沼虾 X射线 抱卵天数 畸形率 遗传物质
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日本沼虾过氧化物还原酶基因的克隆及其表达分析 预览 被引量:2
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作者 孙盛明 戈贤平 +2 位作者 朱健 张世勇 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期474-483,共10页
利用 cDNA 末端快速克隆方法获得了青虾(Macrobrachium nipponense)的过氧化物还原酶基因(Prx)全长cDNA序列。该基因cDNA全长878 bp,包括72 bp的5′末端非翻译区,594 bp的开放阅读框(ORF),212 bp的3′末端非翻译区,开放阅读框编码... 利用 cDNA 末端快速克隆方法获得了青虾(Macrobrachium nipponense)的过氧化物还原酶基因(Prx)全长cDNA序列。该基因cDNA全长878 bp,包括72 bp的5′末端非翻译区,594 bp的开放阅读框(ORF),212 bp的3′末端非翻译区,开放阅读框编码198个氨基酸。氨基酸相似度比对显示,所分离的青虾过氧化物还原酶基因包括两个半胱氨酸残基的区域“FYPLDFTFVCPTEI”和“GEVCPA”。系统进化树分析表明,青虾过氧化物还原酶基因与南美白对虾(Litopenaeus vannamei)过氧化物还原酶聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量 PCR 检测显示,过氧化物还原酶基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量由低到高依次为肠道、心脏、卵巢、肌肉、鳃、肝胰腺。使用荧光定量PCR检测青虾在低氧胁迫和复氧条件下肝胰腺中的过氧化物还原酶基因mRNA的时空表达情况,结果显示,与对照组相比,实验组青虾过氧化物还原酶在肝胰腺和鳃组织中的表达量分别在低氧胁迫12~24 h 和复氧6 h出现了3次明显上调,由此推测过氧化物还原酶基因参与低氧应激分子过程。本研究结果可为进一步了解青虾低氧应激分子机制提供参考。 展开更多
关键词 日本沼虾 过氧化物还原酶 基因克隆 低氧胁迫 定量PCR
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青虾血蓝蛋白基因的克隆、表达分析及多克隆抗体的制备 预览 被引量:1
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作者 孙盛明 戈贤平 +3 位作者 朱健 张世勇 乔慧 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期235-243,共9页
应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)的Hc基因全长cDNA序列,并对该基因序列特征进行了分析。青虾Hc基因cDNA全长2235 bp,包括10 bp的5′末端非翻译区(UTR),2074 bp的开放阅读框(ORF),151 bp的3′UTR,开放阅读框编码... 应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)的Hc基因全长cDNA序列,并对该基因序列特征进行了分析。青虾Hc基因cDNA全长2235 bp,包括10 bp的5′末端非翻译区(UTR),2074 bp的开放阅读框(ORF),151 bp的3′UTR,开放阅读框编码688个氨基酸。蛋白相似度比对显示,青虾血蓝蛋白含有典型的6个保守的铜离子结合位点。系统进化树分析表明,青虾Hc与脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda) Hc聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示, Hc基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量在肝胰腺中最高;使用荧光定量PCR检测青虾Hc基因在低氧胁迫和复氧条件下在肝胰腺中的mRNA时空表达情况,结果显示,经低氧和复氧刺激后,与对照组相比, Hc 在肝胰腺中的表达量分别在低氧胁迫12 h、24 h 和复氧6 h出现了3次明显上调,由此推测Hc基因参与低氧应激分子过程。此外,本研究通过血蓝蛋白的分离纯化技术制备了多克隆抗体,本研究结果可为更进一步的了解青虾血蓝蛋白的生理功能提供理论支撑。 展开更多
关键词 青虾 血蓝蛋白 基因克隆 低氧胁迫 复氧刺激 多克隆抗体
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青虾transformer-2基因RNA干扰规律的研究 预览 被引量:2
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作者 江丰伟 +6 位作者 乔慧 张文宜 蒋速飞 熊贻伟 孙盛明 龚永生 金舒博 《中国农学通报》 CSCD 2014年第32期32-37,共6页
通过对青虾性别调控相关基因transformer-2(tra-2)的RNA干扰规律进行研究,探讨了tra-2基因RNA干扰的最适注射部位、注射剂量、干扰效果以及干扰规律等。通过对青虾肌肉、心脏、围心腔和眼柄基部注射比较发现,围心腔注射死亡率最低,适... 通过对青虾性别调控相关基因transformer-2(tra-2)的RNA干扰规律进行研究,探讨了tra-2基因RNA干扰的最适注射部位、注射剂量、干扰效果以及干扰规律等。通过对青虾肌肉、心脏、围心腔和眼柄基部注射比较发现,围心腔注射死亡率最低,适宜RNA干扰研究。采用4μg/g的dsRNA剂量进行时间依赖性干扰试验,RT-PCR检验注射后第1,7,14天的卵巢tra-2表达量,结果显示第7天基因表达量出现显著降低(P〈0.05)。不同剂量水平(0.4μg/g、4μg/g以及12μg/g)干扰研究发现,0.4μg/g dsRNA没有干扰结果,4μg/g和12μg/g剂量的干扰效果均显著。与4μg/g的剂量相比,12μg/g的dsRNA能在较短时间内起到明显的干扰效果,且能持续较长的时间,表明干扰规律会随着剂量的改变而变化。但两组tra-2的最低表达量分别为正常水平的23%和21%,无显著差异(P〉0.05)。 展开更多
关键词 青虾 RNAI transformer-2 注射剂量 注射部位 干扰规律
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青虾高血糖激素基因全长cDNA序列的克隆及表达分析 预览 被引量:8
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作者 金舒博 王宁 +5 位作者 乔慧 吴滟 龚永生 蒋速飞 熊贻伟 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期82-92,共11页
本研究首次克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)高血糖激素(crustacean hyperglycemic homone,CHH)基因全长cDNA序列,并使用荧光定量PCR技术首次检测了CHH基因在青虾不同组织中的表达。青虾CHH基因cDNA全长1 017 bp,包括241 bp的5... 本研究首次克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)高血糖激素(crustacean hyperglycemic homone,CHH)基因全长cDNA序列,并使用荧光定量PCR技术首次检测了CHH基因在青虾不同组织中的表达。青虾CHH基因cDNA全长1 017 bp,包括241 bp的5′UTR,408 bp的开放阅读框(ORF),355 bp的3′UTR,开放阅读框编码135个氨基酸。成熟肽包含6个CHH家族中位置保守的Cys残基。青虾CHH成熟肽C端为GK,确定为ES型CHH基因。蛋白相似度比对显示,所分离的青虾CHH被归为CHH家族I型肽。系统进化树分析表明,青虾CHH多肽与罗氏沼虾聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示,CHH基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量由高到依次为眼柄、精巢、腹神经节、脑、肠、肝、心脏、卵巢。以卵巢为参照其表达量设为1时,眼柄与精巢CHH基因表达量分别为卵巢的500倍和250倍,由此推测CHH基因可能与雄性生殖过程相关。 展开更多
关键词 青虾 ES型高血糖激素 CDNA 定量PCR
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中华绒螯蟹遗传育种研究进展 预览 被引量:9
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作者 张世勇 +1 位作者 乔慧 孙盛明 《中国农学通报》 CSCD 2013年第20期39-45,共7页
中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)是中国淡水渔业的重要组成部分。在近几十年的发展过程中,其人工育苗和养殖业得到了迅速的发展,而且其商业价值也日益增加,已经成为中国水产养殖的支柱产业。经过好几代人的努力,中华绒螯蟹遗传育种研... 中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)是中国淡水渔业的重要组成部分。在近几十年的发展过程中,其人工育苗和养殖业得到了迅速的发展,而且其商业价值也日益增加,已经成为中国水产养殖的支柱产业。经过好几代人的努力,中华绒螯蟹遗传育种研究取得了许多重要成果。为此本研究主要从分子标记、性别调控、抗病育种和家系选育4个方面对中华绒螯蟹近年来的研究进行了总结,并提出了未来中华绒螯蟹育种的主要发展方向以及亟待解决的问题。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 遗传育种 分子标记 抗病育种 家系选育
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青虾咽侧体抑制激素基因全长cDNA序列的克隆及表达分析 预览 被引量:2
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作者 卜宪飞 李真真 +5 位作者 乔慧 吴滟 龚永生 蒋速飞 熊贻伟 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期116-124,共9页
咽侧体抑制激素(Allatostatin,AST)是一类由几至几十个氨基酸构成的神经肽类激素,在甲壳动物中刺激下颌器官合成甲基法尼酯,影响甲壳动物的蜕皮和生殖。然而AST基因在甲壳动物中的克隆和表达却罕见报道。研究克隆了青虾的AST基因全长c... 咽侧体抑制激素(Allatostatin,AST)是一类由几至几十个氨基酸构成的神经肽类激素,在甲壳动物中刺激下颌器官合成甲基法尼酯,影响甲壳动物的蜕皮和生殖。然而AST基因在甲壳动物中的克隆和表达却罕见报道。研究克隆了青虾的AST基因全长cDNA序列,在甲壳动物中使用荧光定量PCR技术检测了AST基因在不同组织中的表达。青虾AST基因cDNA全长2995 bp,包括242 bp的5′非编码区(UTR),647 bp的3′UTR,2106 bp的开放阅读框(ORF)。开放阅读框编码701个氨基酸,可转录翻译出35个AST多肽,在C末端都具有相同的Y/FXFGL-amide结构,属于A型-AST。氨基酸序列比对显示保守氨基酸为Tyr、Ala、Phe、Gly、Leu。蛋白相似度比对显示,AST多肽在无脊椎动物的进化中是相对保守的。系统进化树分析表明,青虾AST多肽与罗氏沼虾聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示,AST基因在所有被检测组织中均有表达,由高到低依次为:肝胰脏〉肠道〉精巢〉脑〉心脏〉卵巢。对青虾AST基因全长cDNA序列克隆和表达的研究为更进一步的了解AST多肽在青虾中的重要功能奠定了基础。 展开更多
关键词 青虾 咽侧体抑制激素 基因克隆 基因表达
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青虾产业的现状与发展 预览
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作者 《科学养鱼》 北大核心 2013年第8期4-5,共2页
一、青虾产业的现状目前青虾养殖面积约500万亩,包括单养和套养。范围扩展至18个省(市),主产地是长三角地区。据2011年《中国渔业年鉴》公布,年养殖产量约22.56万吨,2万吨以上的省市有:江苏10.5万吨、安徽4.2万吨、浙江2.1... 一、青虾产业的现状目前青虾养殖面积约500万亩,包括单养和套养。范围扩展至18个省(市),主产地是长三角地区。据2011年《中国渔业年鉴》公布,年养殖产量约22.56万吨,2万吨以上的省市有:江苏10.5万吨、安徽4.2万吨、浙江2.1万吨、湖北2.1万吨、江西2.0万吨。 展开更多
关键词 虾产业 养殖面积 长三角地区 主产地 青虾 套养 单养 渔业
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