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ENO1在胃癌干细胞中表达及其与胃癌侵袭转移的相关性研究
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作者 舒雄 刘辉琦 +5 位作者 潘韵芝 孙力超 遇珑 孙立新 杨治华 《中国肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期143-149,共7页
[目的]探讨ENO1在胃癌干细胞中的表达及其对胃癌侵袭转移的影响。[方法]以胃癌SNU-5模型,实时荧光定量PCR和双色细胞免疫荧光检测ENO1在其分选的CD44~+细胞中的表达情况。运用慢病毒载体稳定干扰SUN-5中ENO1的表达,并用实时荧光定量PCR... [目的]探讨ENO1在胃癌干细胞中的表达及其对胃癌侵袭转移的影响。[方法]以胃癌SNU-5模型,实时荧光定量PCR和双色细胞免疫荧光检测ENO1在其分选的CD44~+细胞中的表达情况。运用慢病毒载体稳定干扰SUN-5中ENO1的表达,并用实时荧光定量PCR和Western blot检验干扰效率。流式细胞术分选稳定干扰ENO1的SNU-5中CD44~+细胞后(shRNA-ENO1),实时荧光定量PCR检测其Oct-4、Sox 2以及干性相关基因Nanog的表达,同时分别进行细胞成球实验、体外侵袭与体内致瘤的胃癌干细胞生物学特性研究,Western blot检测ENO1对胃癌干细胞侵袭转移影响的相关分子机制。[结果] SNU-5的CD44~+细胞中ENO1基因和蛋白表达明显高于CD44-细胞,并建立稳定干扰ENO1的SUN-5。shRNA-ENO1细胞中干性基因Oct-4、Sox 2和Nanog中m RNA的表达显著低于PLV-Ctr细胞(P<0.05)。与PLV-Ctr细胞相比较,shRNA-ENO1细胞的自我更新能力、侵袭能力和肿瘤重量显著降低。Western blot检测shRNA-ENO1细胞中Vimentin、Snail和N-cadherin下调表达,同时E-cadherin上调表达,并伴随AKT和PI3K的磷酸化水平降低,提示ENO1的作用可能通过PI3K/AKT信号通路激活。[结论] ENO1在胃癌干细胞中高表达,其在调控胃癌侵袭转移能力中发挥重要作用。 展开更多
关键词 胃癌干细胞 ENO1 CD44 侵袭 信号通路
采用肝癌球体细胞筛选鉴定识别肝癌干细胞的单抗 预览
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作者 孙力超 杨婧 +3 位作者 孙立新 张媛 杨治华 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2019年第3期193-199,共7页
目的采用肝癌球体细胞筛选鉴定识别肝癌干细胞的单抗,为靶向肿瘤干细胞治疗肝癌提供候选治疗单抗。方法采用无血清悬浮培养的方法富集培养肝癌干细胞。通过细胞免疫荧光、顺铂耐药实验、Real-timePCR、裸鼠皮下成瘤实验等方法筛选、鉴... 目的采用肝癌球体细胞筛选鉴定识别肝癌干细胞的单抗,为靶向肿瘤干细胞治疗肝癌提供候选治疗单抗。方法采用无血清悬浮培养的方法富集培养肝癌干细胞。通过细胞免疫荧光、顺铂耐药实验、Real-timePCR、裸鼠皮下成瘤实验等方法筛选、鉴定抗肝癌干细胞单抗。采用免疫组织化学的方法鉴定单抗识别的抗原在肝癌组织中的表达情况。质谱鉴定抗原。结果MHCC97L细胞能在无血清悬浮培养条件下形成细胞球,并能被PKH26染料标记。流式细胞检测发现MHCC97L球体细胞中CD90表达比例较亲本细胞提高了3.4倍。无血清成球抑制实验获得6株显著抑制MHCC97L细胞在无血清成球的单抗,抑制率分别为54.67%,50.33%,45.73%,42.26%,39.11%,37.63%。细胞免疫荧光结果显示单抗28C10和CD90在MHCC97L细胞中能共定位。Real-TimePCR检测结果显示MHCC97L28C10^+细胞Sox-2和Oct-4表达显著高于MHCC97L28C10-细胞。流式细胞检测,在MHCC97L及其sphere细胞中28C10^+细胞比例分别为7.98%和10.7%,28C10^+细胞比例提高了1.34倍。流式细胞术分选获得的28C10^+细胞的体外成球能力、侵袭能力显著高于28C10-细胞。CCK-8法检测结果显示28C10^+细胞较28C10-细胞显示出对化疗药物顺铂的耐药,IC50分别为1.96μg/mL和1.16μg/mL。裸鼠致瘤实验结果显示,28C10^+细胞裸鼠皮下接种2×10^4cells/只,2个月可形成肿瘤,成瘤率为40%。另外1只未形成肿瘤的裸鼠形成了肺部转移灶(1/5)。免疫组化检测显示单抗28C10的靶抗原阳性率为72.0%(77/107),而在癌旁组织中低表达,差异有统计学意义。质谱结果显示28C10识别的抗原为HSP90α。结论采用MHCC97L球体细胞模型成功鉴定一株特异识别肝癌干细胞的单抗,为靶向肝癌干细胞的抗体治疗奠定基础。 展开更多
关键词 肝癌 肿瘤干细胞 单克隆抗体 CD90 HSP90Α
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抗胃癌干细胞单克隆抗体的筛选鉴定及功能研究 预览
3
作者 遇珑 舒雄 +3 位作者 刘军 孙力超 杨治华 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第15期2315-2319,共5页
目的:筛选鉴定靶向胃癌干细胞的功能性单克隆抗体,为胃癌干细胞靶向治疗提供抗体候选药物。方法:以胃癌细胞系BGC-823为模型,采用流式细胞术分选CD44+细胞后检测其自我更新和致瘤能力。双色细胞免疫荧光检测单抗11H5和CD44在BGC-82... 目的:筛选鉴定靶向胃癌干细胞的功能性单克隆抗体,为胃癌干细胞靶向治疗提供抗体候选药物。方法:以胃癌细胞系BGC-823为模型,采用流式细胞术分选CD44+细胞后检测其自我更新和致瘤能力。双色细胞免疫荧光检测单抗11H5和CD44在BGC-823细胞中的表达情况。流式细胞术分选11H5+细胞后检测其自我更新能力、细胞增殖和耐药能力。结果:流式细胞术分选CD44+细胞成球率明显高于CD44-细胞[(27.2±1.6)% vs (12.9±1.2)%](P〈0.01),CD44+细胞的致瘤性比CD44-细胞至少高100倍。细胞免疫荧光结果显示单抗11H5识别的抗原能与CD44在BGC-823细胞上共定位。流式细胞术分选11H5+细胞体外成球率明显高于11H5-细胞[(21.4±2.0)% vs (6.2±1.0)%](P〈0.01),耐药性也明显高于11H5-细胞(IC50值:0.986 μmol/L vs 0.315 μmol/L)。抗体体外功能研究发现,单抗11H5能显著抑制BGC-823细胞成球,抑制率达到47.9%。单抗11H5能抑制其sphere细胞的增殖,抑制率为44.9%(P〈0.05)。经单抗11H5作用的耐药能力显著降低(IC50值:0.52 μg/ml vs 0.64 μg/ml)。结论:单克隆抗体11H5是一株抗胃癌干细胞的功能性单抗,为胃癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。 展开更多
关键词 胃癌干细胞 单克隆抗体 成球 耐药
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肝癌干细胞CD90^+和ESA^+亚群生物学特性研究
4
作者 刘辉琦 舒雄 +4 位作者 孙立新 遇珑 孙力超 杨治华 《大连医科大学学报》 CAS 2018年第5期394-398,407共6页
目的 研究肝癌干细胞不同亚群CD90+和ESA+细胞的生物学特性,为肝癌的治疗及预后判定提供新的思路。方法 采用活细胞流式细胞术检测肝癌细胞系MHCC97L中肝癌干细胞标志物CD90、ESA的表达情况,并分选ESA+,CD90+细胞,通过... 目的 研究肝癌干细胞不同亚群CD90+和ESA+细胞的生物学特性,为肝癌的治疗及预后判定提供新的思路。方法 采用活细胞流式细胞术检测肝癌细胞系MHCC97L中肝癌干细胞标志物CD90、ESA的表达情况,并分选ESA+,CD90+细胞,通过甲基纤维素成球实验、Transwell、CCK8法进行体外生物学特征研究。结果 肝癌细胞系MHCC97L中CD90+和ESA+细胞表达比例分别为2.37%和3.70%。ESA+细胞成球率明显高于ESA-细胞[成球率(35.6±2.1)% vs.(9.6±1.4)%, P〈0.01],CD90+细胞成球率明显高于CD90-细胞[成球率(29.2±1.3)% vs.(7.4±0.6)%](P〈0.01),ESA+细胞成球率明显高于CD90+细胞且ESA+细胞sphere球体积明显大于CD90+细胞体积;ESA+细胞较ESA-细胞侵袭能力提高2.12倍[(282±15.1 vs. 133±12.4),P〈0.01],CD90+细胞较CD90-细胞侵袭能力提高2.04倍[(231±18.1 vs. 113±10.2),P〈0.01]。CD90+细胞耐药性明显强于ESA+细胞[IC50(0.98 μg/mL vs. 0.36 μg/mL)],ESA+细胞增殖能力明显强于CD90+细胞。结论 肝癌组织中存在不同的干细胞亚群ESA+细胞及CD90+细胞,这些亚群具有不同的生物学特性,影响肝癌的耐药、侵袭,了解肝癌中不同干细胞亚群的表达情况可用于指导临床个体化治疗。 展开更多
关键词 肝癌 肿瘤干细胞 CD90 ESA
高转移肺癌细胞株的建立及其肿瘤干细胞生物学特性 预览
5
作者 遇珑 舒雄 +3 位作者 刘军 孙力超 杨治华 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期83-87,共5页
目的研究高转移肺腺癌细胞株的肿瘤干细胞生物学特征。方法肺腺癌细胞系A549接种裸鼠皮下成瘤后,取肺的转移灶,通过机械分离法获取肺转移细胞,体外扩大培养后,再次接种裸鼠。如此反复接种裸鼠,获得稳定肺转移的细胞株A549-V13。采用无... 目的研究高转移肺腺癌细胞株的肿瘤干细胞生物学特征。方法肺腺癌细胞系A549接种裸鼠皮下成瘤后,取肺的转移灶,通过机械分离法获取肺转移细胞,体外扩大培养后,再次接种裸鼠。如此反复接种裸鼠,获得稳定肺转移的细胞株A549-V13。采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定A549-V13存在肿瘤干细胞。流式细胞术(FACS)检测和分选A549和A549-V13中肿瘤干细胞标志物CD133的表达并进行体内外生物学特征实验。结果建立稳定高转移A549-V13细胞株。无血清悬浮培养A549-V13,7天后形成的球形细胞团中存在单个PKH26阳性细胞。FACS检测显示,与A549中CD133~+细胞相比,高转移A549-V13细胞株中CD133~+细胞的表达比例显著提高4.85倍。A549-V13中CD133~+细胞具有更强的自我更新能力,侵袭能力提高1.42倍,耐药能力也显著增强,其IC50提高1.26倍,A549-V13的CD133~+细胞在裸鼠皮下接种2×10~2个细胞3月致瘤4/6,而接种2×10~2个A549的CD133~+细胞3月才致瘤2/6。结论建立高转移肺癌细胞株A549-V13,伴随CD133~+细胞表达比例的增加,其体内外生物学功能显著增强。 展开更多
关键词 人肺癌细胞 肿瘤干细胞 靶向治疗 CD133 CD90
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抗肝癌干细胞单克隆抗体的鉴定及功能 预览
6
作者 遇珑 舒雄 +3 位作者 何永燕 孙力超 杨治华 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第17期2693-2698,共6页
目的:鉴定可靶向肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞靶向治疗提供抗体候选药物。方法:以肝癌细胞系Bel7402-V3为模型,采用流式细胞术分选ESA~+细胞后检测其耐药能力及致瘤能力。双色细胞免疫荧光检测单抗3G7和ESA识别的抗原... 目的:鉴定可靶向肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞靶向治疗提供抗体候选药物。方法:以肝癌细胞系Bel7402-V3为模型,采用流式细胞术分选ESA~+细胞后检测其耐药能力及致瘤能力。双色细胞免疫荧光检测单抗3G7和ESA识别的抗原蛋白在Bel7402-V3细胞中的表达情况,同时采用此法检测sphere中PKH26与3G7的共染情况。流式细胞术分选3G7~+细胞后检测其自我更新能力,并采用CCK-8法检测其耐药能力;甲基纤维素成球实验,检测单抗3G7对细胞自我更新能力的影响;CCK-8法检测单抗3G7对细胞增殖和耐药能力的影响。结果:流式细胞术分选ESA~+细胞的耐药性明显高于ESA-细胞,其IC(50)值分别为2.30μmol/L、0.49μmol/L(P〈0.01),ESA~+细胞的致瘤性较ESA-细胞高至少40倍。细胞免疫荧光结果显示单抗3G7识别的抗原分子能与ESA在Bel7402-V3细胞上共定位,并能与标识干细胞的PKH26染料共染。流式细胞术分选3G7~+细胞体外成球率明显高于3G7~-细胞[(30.4±3.4)%vs(8.8±1.8)%](P〈0.01),耐药性也明显较高(IC(50)值:1.014μmol/L vs 0.365μmol/L)。抗体体外功能研究发现,单抗3G7能显著抑制Bel7402-V3的甲基纤维素成球,抑制率达到37.2%;同时,单抗3G7能抑制sphere细胞的增殖,抑制率为41.7%(P〈0.01);经单抗3G7处理过细胞的耐药能力显著降低,实验组与对照组的IC(50)分别为0.56μg/ml和0.68μg/ml。结论:单克隆抗体3G7是一株抗肝癌干细胞的功能性单抗,为肝癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。 展开更多
关键词 肝癌干细胞 单克隆抗体 成球 耐药
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碘[^131I]爱克妥昔单抗注射液免疫反应活性的分析方法 预览
7
作者 贾莹莹 崔海平 +2 位作者 沈振芳 王晓静 《核化学与放射化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期121-125,共5页
研究建立了碘[^131I]爱克妥昔单抗注射液免疫反应活性检验分析方法。用活细胞结合百分数法,对细胞选择、反应时间、反应温度和分离方法进行研究,并应用该方法分析爱克妥昔单抗注射液免疫活性的稳定性及批间变异系数。结果表明:选择CEA... 研究建立了碘[^131I]爱克妥昔单抗注射液免疫反应活性检验分析方法。用活细胞结合百分数法,对细胞选择、反应时间、反应温度和分离方法进行研究,并应用该方法分析爱克妥昔单抗注射液免疫活性的稳定性及批间变异系数。结果表明:选择CEA表达阳性的LS180活细胞,反应时间为16h,反应温度为4℃,分离方法为直接分离法。该方法批间变异系数小于10%,重复性好,可以用于分析碘[^131I]爱克妥昔单抗注射液的免疫反应活性。 展开更多
关键词 ^131I 单克隆抗体 免疫反应活性
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胃癌干细胞单克隆抗体联合顺铂靶向治疗胃癌的实验研究 预览 被引量:1
8
作者 遇珑 舒雄 +3 位作者 何永燕 孙力超 杨治华 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第7期1001-1005,共5页
目的:探讨靶向胃癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗胃癌的疗效。方法:采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定胃癌SNU-5细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体21A3识别的抗原蛋白与PKH26~+细胞及特异性... 目的:探讨靶向胃癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗胃癌的疗效。方法:采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定胃癌SNU-5细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体21A3识别的抗原蛋白与PKH26~+细胞及特异性抗原(CD90)在SNU-5细胞中的表达情况。无血清悬浮培养法检测流式细胞术分选出的21A3~+细胞的自我更新能力以及21A3对SNU-5细胞自我更新能力的影响。CCK8法检测21A3对细胞顺铂耐药能力的影响。裸鼠体内治疗实验分析21A3联合顺铂对SNU-5移植瘤生长的抑制作用。结果:SNU-5细胞无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26~+细胞。细胞免疫荧光显示,单克隆抗体21A3识别的抗原分子能与PKH26和CD90在SNU-5细胞上共定位。21A3~+细胞体外成球率高于21A3-细胞。21A3~+细胞具有更高的耐药性,21A3~+细胞和21A3-细胞的IC_(50)分别为0.104μmol/L和0.025μmol/L。单克隆抗体21A3能够显著抑制SNU-5细胞的无血清成球,抑制率为37.5%。经21A3处理后的SNU-5细胞,耐药能力下降,其IC_(50)为0.001μg/ml,而对照组的IC_(50)为0.003μg/ml。抗体体内治疗实验结果显示,10、5、2.5mg/kg的2 1 A3组的肿瘤生长抑制率分别为80.6%、69.6%和59.2%,10mg/kg 21A3~+顺铂组的肿瘤生长抑制率为90.6%,顺铂组的肿瘤生长抑制率为55.8%。结论:单克隆抗体21A3是抗胃癌干细胞的功能性单克隆抗体。 展开更多
关键词 胃癌干细胞 单克隆抗体 顺铂 21A3 SNU-5 CD90
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胃癌干细胞中差异表达microRNA对其生物学特性的影响
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作者 潘韵芝 舒雄 +4 位作者 孙力超 遇珑 孙立新 杨治华 《中国肿瘤》 CAS CSCD 2017年第9期733-739,共7页
[目的]探讨胃癌干细胞中差异表达microRNA及其对胃癌干细胞生物学特性(自我更新、侵袭、耐药能力)的调控作用。[方法]采用无血清悬浮培养法和干细胞标志物流式分选术分离人胃癌干细胞;分别采用胃癌细胞球形成实验、体外侵袭、耐药实... [目的]探讨胃癌干细胞中差异表达microRNA及其对胃癌干细胞生物学特性(自我更新、侵袭、耐药能力)的调控作用。[方法]采用无血清悬浮培养法和干细胞标志物流式分选术分离人胃癌干细胞;分别采用胃癌细胞球形成实验、体外侵袭、耐药实验鉴定胃癌干细胞的生物学特性;microRNA表达谱芯片检测人胃癌干细胞中差异表达microRNA;采用定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测相关差异表达microRNA的表达情况,验证microRNA芯片结果;相关microRNA抑制剂干扰后,分别进行胃癌细胞球形成实验、体外侵袭与耐药实验检测microRNA对人胃癌干细胞自我更新、侵袭、耐药能力的影响。[结果 ]成功分离得到人胃癌干细胞CD44(+)亚群,其具有典型的肿瘤干细胞生物学特性:较强的自我更新能力、侵袭和耐药能力。与CD44(-)细胞亚群相比,人胃癌干细胞CD44(+)细胞亚群高表达miRNAs共有17个;低表达miRNAs共有33个。采用q PCR技术验证microRNA表达谱芯片相关结果,得到:CD44(+)亚群中miR-196a-5p、miR-155-5p、miR-30a、miR-30b、miR-30c表达上调,miR-1246、miR-195-5b表达下调。抑制相关高表达microRNA(miR-196a-5p、miR-155-5p、miR-30a、miR-30b、miR-30c)表达后,肿瘤干细胞的自我更新能力、侵袭和耐药能力均下降。[结论 ]胃癌干细胞中具有多种差异表达microRNA,microRNA对胃癌干细胞生物学特性具有调控作用。 展开更多
关键词 胃癌干细胞 CD44 自我更新 侵袭 耐药
高转移胃癌细胞株的建立及其肿瘤干细胞的生物学特征
10
作者 遇珑 舒雄 +5 位作者 刘辉琦 刘军 孙力超 孙立新 杨治华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期486-491,共6页
目的:建立高转移胃癌细胞株并研究其肿瘤干细胞生物学特征。方法:将胃癌细胞株SNU-5接种至裸鼠皮下成瘤后,取肺部转移灶,通过机械分离法并反复接种裸鼠,获取细胞株SNU-5-V12,采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定SNU-5-V12细胞中存在肿... 目的:建立高转移胃癌细胞株并研究其肿瘤干细胞生物学特征。方法:将胃癌细胞株SNU-5接种至裸鼠皮下成瘤后,取肺部转移灶,通过机械分离法并反复接种裸鼠,获取细胞株SNU-5-V12,采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定SNU-5-V12细胞中存在肿瘤干细胞。流式细胞术分析SNU-5和SNU-5-V12细胞中CD44肿瘤干细胞标志物表达情况,分选SNU-5和SNU-5-V12细胞中CD44^+细胞并进行体外生物学特征研究及裸鼠致瘤实验。结果:建立高转移SNU-5-V12细胞株,SNU-5-V12细胞无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。流式分析显示高转移SNU-5-V12细胞中干细胞标志物CD44比例显著高于SNU-5细胞[(72.9±1.5)%vs(8.96±1.2)%],且SNU-5-V12的CD44^+细胞比SNU-5的CD44^+细胞具有更强的自我更新能力[成球率(27.8±1.7)%vs(20.4±1.0)%,P〈0.01],转移细胞数增加1.64倍[(329.5±7.5)vs(200±2.0)个,P〈0.01],耐药能力也显著增强[IC50:(0.286 vs 0.196)μg/ml,P〈0.01],裸鼠皮下接种2×10^2个CD44^+SNU-5-V12细胞2个月2/6裸鼠可致瘤,而CD44^+SNU-5细胞需要接种2×10^4个细胞2个月时仅1/6裸鼠致瘤。结论:获得高转移胃癌细胞株SNU-5-V12,其CD44^+细胞体内外功能显著增强,为胃癌干细胞的靶向治疗提供有价值的细胞模型。 展开更多
关键词 胃癌 肿瘤干细胞 转移 CD44
一株胃癌干细胞功能性单克隆抗体的鉴定及功能研究 被引量:1
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作者 矫婕 舒雄 +5 位作者 刘辉琦 孙力超 遇珑 孙立新 杨治华 《肿瘤学杂志》 CAS 2016年第4期284-290,共7页
[目的]从抗人胃癌干细胞单克隆抗体杂交瘤库中筛选鉴定识别胃癌干细胞的单克隆抗体,并证明其具有抑制胃癌干细胞自我更新能力和侵袭功能的功能性单抗,为靶向人胃癌干细胞治疗胃癌提供有治疗潜能的单抗候选药物。[方法]采用无血清培养、P... [目的]从抗人胃癌干细胞单克隆抗体杂交瘤库中筛选鉴定识别胃癌干细胞的单克隆抗体,并证明其具有抑制胃癌干细胞自我更新能力和侵袭功能的功能性单抗,为靶向人胃癌干细胞治疗胃癌提供有治疗潜能的单抗候选药物。[方法]采用无血清培养、PKH26染色及流式细胞术等方法确定人胃癌细胞系SNU-5中存在肿瘤干细胞,可作为研究抗人胃癌干细胞单抗的细胞模型。应用双色免疫荧光、流式细胞分选等技术分析鉴定单克隆抗体25G5是识别胃癌干细胞的单克隆抗体。用肿瘤干细胞的成球生长实验、Transwell侵袭实验及耐药性实验研究分析25G5单抗对胃癌干细胞功能的影响。[结果]SNU-5细胞在无血清培养基中存活并增殖成球形生长,SNU-5球体细胞中表达胃癌干细胞标志物CD44^+和CD90^+的细胞比例分别为72.4%和8.55%,较亲本细胞分别提高了21.3倍和2.4倍,表明SNU-5中存在有CD44^+、CD90^+的胃癌干细胞。细胞免疫荧光结果显示25G5单抗识别的抗原分子与CD44、CD90胃癌干细胞标志物共染表达于胃癌干细胞膜上。流式细胞术分选的25G5^+细胞的成球率为(21.4±0.3)%,显著高于25G5-细胞(12.3±0.7)%和亲本细胞(16.1±1.0)%。Transwell侵袭实验、细胞耐药性实验和动物体内致瘤实验结果显示25G5^+细胞的侵袭能力和耐药能力也显著高于25G5-细胞和亲本细胞,表明25G5单抗识别的细胞是具有自我更新、高侵袭、高耐药性特征的肿瘤干细胞。体外功能研究发现,单抗25G5能显著抑制SNU-5胃癌细胞在无血清培养液中的成球生长,抑制率可达46.4%,也能显著地抑制SNU-5成球细胞(Sphere细胞)的侵袭,抑制率达58.4%。单抗25G5是一株能显著抑制SNU-5中肿瘤干细胞自我更新和侵袭能力的功能性抗人胃癌干细胞单抗。[结论]单克隆抗体25G5是一株抗胃癌干细胞的功能性单抗,为胃癌干细胞靶向治疗的候选抗体 展开更多
关键词 人胃癌细胞 肿瘤干细胞 单克隆抗体 CD44 CD90
HSP90α和HSP90β在肝癌中共同上调表达 被引量:8
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作者 杨婧 曹凯悦 +3 位作者 孙立新 遇珑 孙力超 《中国肿瘤》 CAS 2016年第5期391-394,共4页
[目的]探讨热休克蛋白90α(HSP90α)和HSP90β在肝癌中的表达及意义。[方法]采用免疫组化法检测103例肝癌组织和79例非肝癌相关组织(正常肝组织,肝炎,肝硬化)中HSP90α和HSP90β的表达,并分析其与肝癌临床病理特征的关系。[结果 ]... [目的]探讨热休克蛋白90α(HSP90α)和HSP90β在肝癌中的表达及意义。[方法]采用免疫组化法检测103例肝癌组织和79例非肝癌相关组织(正常肝组织,肝炎,肝硬化)中HSP90α和HSP90β的表达,并分析其与肝癌临床病理特征的关系。[结果 ]肝癌组织中,HSP90α和HSP90β的阳性表达率分别为82.52%和85.44%,均显著高于非癌组织(P〈0.05)。HSP90α高表达与肝癌分化程度相关(P〈0.05),而与患者性别、病理类型、病理分期无关(P〉0.05)。HSP90β高表达与肝癌分化程度和TNM分期相关(P〈0.05),而与患者性别、病理类型无关(P〉0.05)。Spearman相关性分析显示,HSP90α和HSP90β在肝癌组织中协同表达(r=0.535,P〈0.001)。[结论 ]HSP90α和HSP90β在肝癌组织中共同表达上调,可能可作为肝癌潜在的诊断和治疗靶点。 展开更多
关键词 HSP90Α HSP90β 肝癌
肝癌高转移细胞株的肿瘤干细胞生物学特性研究 预览 被引量:2
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作者 遇珑 舒雄 +4 位作者 刘辉琦 刘军 孙力超 杨治华 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第14期2175-2180,共6页
目的:建立高转移肝癌细胞株,研究其肿瘤干细胞生物学特征,为靶向人肝癌干细胞治疗提供有价值的细胞模型。方法:肝癌细胞系Bel7402接种裸鼠皮下,成瘤后,取小鼠肺部转移灶,通过机械分离法,获取肺部肝转移细胞,体外扩大培养后,再次... 目的:建立高转移肝癌细胞株,研究其肿瘤干细胞生物学特征,为靶向人肝癌干细胞治疗提供有价值的细胞模型。方法:肝癌细胞系Bel7402接种裸鼠皮下,成瘤后,取小鼠肺部转移灶,通过机械分离法,获取肺部肝转移细胞,体外扩大培养后,再次接种裸鼠。如此反复接种裸鼠,获得稳定肺转移肝癌细胞株Bel7402-V13。采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定Be17402-V13中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术分析亲本Bel7402和Bel7402-V13中肿瘤干细胞标志物ESA的表达情况,分选Bel7402和Bel7402-V13中ESA+细胞并进行体外生物学特征研究及裸鼠致瘤实验。结果:建立高转移Bel7402-V13细胞株,Bel7402-V13细胞无血清悬浮培养7d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。与Bel7402中ESA+细胞相比,流式分析显示干细胞标志物[3人比例高转移丑<;17402-V13显著提高5.67倍(17.6±0.4¥33.1±1.5)。3(;17402-V13中ESA+细胞具有更强的自我更新能力[成球率:(94.8±7.5)%vs(52.3±6.9)%,P<0.01],侵袭能力提高1.51倍(397.7±79.4v262.0±40.1,P<0.01),耐药能力也显著增强(IC5。:0.286v0.196,P<0.01),ESA+细胞Bel7402-V13在裸鼠皮下接种2xl02个细胞3月即可致瘤(3/6),而接种2xl02个ESA+细胞Bel7402细胞3月才能致瘤(1/6)。结论:获得高转移肝癌细胞株Be17402-V13,伴随ESA+细胞增加,其体内外功能显著增强,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有价值的细胞模型。 展开更多
关键词 人肝癌细胞 肿瘤干细胞 靶向治疗 ESA CD90
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靶向上皮特异性抗原阳性肝癌干细胞单克隆抗体联合顺铂治疗肝癌的实验研究 被引量:2
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作者 何永燕 遇珑 +5 位作者 容雁 孙立新 孙力超 杨治华 李力 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期333-339,共7页
目的探讨靶向肝癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗肝癌的疗效。方法采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体15D2识别的抗原蛋白与PKH26阳性细胞及上皮... 目的探讨靶向肝癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗肝癌的疗效。方法采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体15D2识别的抗原蛋白与PKH26阳性细胞及上皮特异性抗原(ESA)在Bel7402-V3细胞中的表达情况。无血清悬浮培养法检测流式细胞术分选出的15D2阳性细胞的自我更新能力以及15D2对Bel7402.V3细胞自我更新能力的影响。CCK8法检测15D2对细胞顺铂耐药能力的影响。裸鼠体内治疗实验分析15D2联合顺铂对Bel7402.V3移植瘤生长的抑制作用。结果Bel7402-V3细胞无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。细胞免疫荧光显示,单克隆抗体15D2识别的抗原分子能与PKH26和ESA在Bel7402-V3细胞上共定位。15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的体外成球率分别为(30.4±3.4)%和(8.8±1.8)%,差异有统计学意义(P〈0.05)。15D2阳性细胞具有更高的顺铂耐药性,15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为1.014和0.365μmol/L。单克隆抗体15D2能够显著抑制Bel7402.V3细胞的无血清成球,抑制率为37.5%。经15D2处理后的Bel7402-V3细胞,顺铂耐药能力明显下降,其Ic50为0.211μg/ml,而对照组的IC50为0.325μg/ml。抗体体内治疗实验结果显示,50、25、12.5mg/kg15D2组的肿瘤生长抑制率分别为82.6%、71.4%和60.0%,50mg/kg15D2+顺铂组的肿瘤生长抑制率为91.0%,顺铂组的肿瘤生长抑制率为56.7%。结论单克隆抗体15D2是抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体,为肝癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。 展开更多
关键词 肝肿瘤 细胞系 肿瘤 肿瘤干细胞 抗体 单克隆 顺铂 上皮特异性抗原 抗药性
杂交瘤单抗15B7靶向抑制ESA阳性肝癌干细胞的体外侵袭能力和顺铂耐药性
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作者 杨婧 莫文秀 +5 位作者 刘辉琦 遇珑 孙立新 杨治华 孙力超 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期597-603,共7页
目的 :研究一株杂交瘤细胞分泌的识别上皮特异性抗原(epithelial specii c antigen,ESA)阳性肝癌干细胞的单克隆抗体(简称单抗)15B7的体外功能,为靶向肝癌干细胞的肝癌治疗提供候选抗体药物。方法 :采用无血清悬浮培养及PKH26染... 目的 :研究一株杂交瘤细胞分泌的识别上皮特异性抗原(epithelial specii c antigen,ESA)阳性肝癌干细胞的单克隆抗体(简称单抗)15B7的体外功能,为靶向肝癌干细胞的肝癌治疗提供候选抗体药物。方法 :采用无血清悬浮培养及PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞球中存在肿瘤干细胞。采用FCM法和双色细胞免疫荧光法检测ESA和单抗15B7识别的抗原蛋白在Bel7402-V3细胞中的表达情况。采用无血清悬浮培养法观察单抗15B7作用对Bel7402-V3细胞球自我更新能力的影响,细胞计数试剂盒-8法检测单抗15B7对Bel7402-V3细胞的顺铂耐药性的影响,Transwell实验检测单抗15B7对Bel7402-V3细胞侵袭能力的影响。结果 :Bel7402-V3细胞经无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球体中存在单个PKH26染色阳性的肿瘤干细胞。单抗15B7识别的抗原分子能与ESA一起共定位于Bel7402-V3细胞。单抗15B7能显著抑制Bel7402-V3细胞在无血清培养液中成球(P〈0.05),抑制率达32.4%;单抗15B7能够有效降低Bel7402-V3细胞的顺铂耐药性(P〈0.05),实验组与未经单抗15B7处理的对照组半数抑制浓度分别为0.14μg/m L和0.27μg/m L;此外,单抗15B7亦能抑制Bel7402-V3细胞的侵袭能力(P〈0.05),抑制率达30.7%。结论 :杂交瘤单抗15B7在体外能够显著抑制ESA阳性肝癌干细胞的自我更新、耐药和侵袭能力,推测其可作为肝癌干细胞靶向治疗的有价值的候选抗体药物。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肿瘤干细胞 抗体 单克隆 肿瘤浸润 抗药性 肿瘤 上皮特异性抗原
单细胞克隆肝癌干细胞向间充质样细胞的分化潜能 被引量:1
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作者 刘虹麟 彭亮 +6 位作者 王在 许世清 娄晋宁 杨治华 王培刚 张文健 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期245-250,共6页
目的:探讨单细胞克隆肝癌干细胞(liver cancer stem cell,LCSCs)向间充质样细胞分化的潜能。方法:通过有限稀释法获得单个细胞来源的LCSC克隆,采用RT-PCR法鉴定干细胞标志物;将该单细胞克隆分别用成骨、软骨和脂肪诱导分化培养基培... 目的:探讨单细胞克隆肝癌干细胞(liver cancer stem cell,LCSCs)向间充质样细胞分化的潜能。方法:通过有限稀释法获得单个细胞来源的LCSC克隆,采用RT-PCR法鉴定干细胞标志物;将该单细胞克隆分别用成骨、软骨和脂肪诱导分化培养基培养3周后,采用Real-time PCR及特殊染色技术比较诱导前后LCSC表达成骨、软骨及脂肪细胞特异标志物的差异。结果:单细胞克隆的LCSC表达多种干细胞标志物、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、干细胞因子受体、C-kit、巢蛋白(nestin)、CD34、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2)、CD133。分化诱导培养3周后,成骨方向诱导的细胞茜素红染色呈现橘红色钙结节形成,软骨方向诱导的细胞阿尔新蓝染色显示蓝色蛋白多糖沉积,脂肪方向诱导的细胞油红O染色显示大量脂滴形成。Real-time PCR结果显示,诱导后成骨细胞特异标志物骨钙素和Ⅰ型胶原、软骨细胞特异标志物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原、脂肪细胞特异标志物脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA表达均较对照组显著上调(Ⅰ型及Ⅱ型胶原间为P〈0.05,其他指标间均为P〈0.01)。结论:LCSC具有可塑性,在特定的微环境下具有向间充质样细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 肝癌干细胞 单细胞克隆 间充质样细胞 多向分化潜能 可塑性
一株抗胰腺癌干细胞单克隆抗体的鉴定及功能研究 被引量:1
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作者 孙立新 解亦斌 +3 位作者 遇珑 杨治华 孙力超 《肿瘤研究与临床》 CAS 2014年第9期577-582,共6页
目的 对一株抗胰腺癌干细胞单克隆抗体(简称:单抗)进行初步鉴定和体外功能研究,为靶向胰腺癌干细胞治疗胰腺癌提供候选单抗药物.方法 应用无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌细胞系PANC-1中肿瘤干细胞的存在.流式细胞术检测PANC-1... 目的 对一株抗胰腺癌干细胞单克隆抗体(简称:单抗)进行初步鉴定和体外功能研究,为靶向胰腺癌干细胞治疗胰腺癌提供候选单抗药物.方法 应用无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌细胞系PANC-1中肿瘤干细胞的存在.流式细胞术检测PANC-1细胞中有干细胞标志物CD44+CD24+的细胞比例.双色细胞免疫荧光检测CD24和单抗15D2识别的抗原蛋白在PANC-1细胞中的表达情况.无血清悬浮培养法观察单抗15D2对PANC-1成球细胞自我更新的影响.CCK-8法检测单抗15D2对PANC-1细胞增殖和耐药的影响.免疫组织化学检测单抗15D2识别的靶抗原在人胰腺癌、癌旁组织中的表达情况.结果 PANC-1细胞能在无血清培养液中存活、增殖并形成细胞球,成球率为(2.5±0.5)%.PANC-1球体细胞中CD44+ CD24+细胞的比例较亲本细胞提高了11.4倍,其中CD44+ CD24+细胞占CD24+细胞的97%,在此体系中用CD24作为PANC-1细胞干细胞标志物.细胞免疫荧光结果显示单抗15D2识别的抗原分子在细胞膜上表达,并能与CD24在PANC-1细胞共定位.抗体体外功能研究发现,单抗15D2能显著抑制PANC-1细胞在无血清培养液中成球,抑制率达到22%.同时,单抗15D2联合吉西他滨能显著抑制PANC-1球体细胞的增殖,联合组和对照组IC50分别为0.10、0.39 μmol/L.免疫组织化学检测结果显示,单抗15D2所识别的抗原蛋白在76.9%(11/13)的人胰腺癌组织中表达阳性,而在癌旁组织中表达阳性率仅为10.0%(1/10),差异有统计学意义(P<0.05).结论 抗胰腺癌干细胞单抗15D2体外能够显著抑制胰腺癌干细胞的自我更新和耐药能力,为胰腺癌干细胞的靶向治疗提供有应用价值的候选抗体药物. 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 肿瘤干细胞 抗体 单克隆 CD24
抗胰腺癌干细胞单克隆抗体的筛选和鉴定 预览
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作者 孙立新 遇珑 +5 位作者 解亦斌 莫文秀 刘辉琦 杨治华 孙力超 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第7期1492-1496,共5页
目的:从抗胰腺癌干细胞单抗库中筛选、鉴定识别胰腺癌干细胞的功能性单抗,为胰腺癌干细胞靶向治疗提供候选抗体药物。方法:无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌HPAC细胞系中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术检测HPAC的干细胞标志物CD13... 目的:从抗胰腺癌干细胞单抗库中筛选、鉴定识别胰腺癌干细胞的功能性单抗,为胰腺癌干细胞靶向治疗提供候选抗体药物。方法:无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌HPAC细胞系中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术检测HPAC的干细胞标志物CD133在球体细胞中的阳性比例,检测20株杂交瘤单抗在HPAC亲本和球体细胞中的阳性表达。双色荧光标记流式细胞术检测CD133和单抗在HPAC亲本和球体细胞中的共表达比例;无血清悬浮培养法观察单抗15E9对HPAC成球细胞自我更新的影响。CCK一8法检测单抗15E9对HPAC细胞增殖和耐药的影响。结果:HPAC细胞能在无血清培养基中存活、增殖并形成细胞球,成球率为4.8%±0.6%。HPAC球体细胞中CD133’细胞的比例较亲本细胞提高至11.6倍。20株候选杂交瘤单抗中有3株单抗能识别HPAC球体细胞中CD133’细胞,其中单抗15E9共染比例为3.5%,并能显著抑制HPAC细胞的成球,抑制率达到30.4%。单抗15E9联合吉西他滨能显著抑制HPAC球体细胞的增殖,联合组和对照组Ic50分别为30.8nmol/L和58.1nmol/L。结论:本研究成功筛选出1株杂交瘤单抗可以识别胰腺癌干细胞,并且可识别CD133+的胰腺癌干细胞;体外功能显示该抗体具有抑制HPAC干细胞的自我更新能力,抗体干预后显著降低HPAC耐药能力,可能是潜在的胰腺癌干细胞的靶向治疗抗体药物。 展开更多
关键词 胰腺癌 肿瘤干细胞 单克隆抗体 靶向治疗 CD133
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肿瘤干细胞多靶点联合治疗效果分析 被引量:2
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作者 莫文秀 孙立新 +3 位作者 王佳佳 遇珑 杨治华 《中国肿瘤》 CAS 2014年第2期162-169,共8页
[目的]探讨有效的肿瘤生物治疗新思路,用肝癌细胞系Bel7402-V3为细胞模型检测联合单克隆抗体9A9和15D2对其干性功能(自我更新、侵袭和耐药)的影响。[方法]采用活细胞流式免疫荧光术检测单独抗体、联合抗体与肿瘤干细胞标志物ESA在Bel7... [目的]探讨有效的肿瘤生物治疗新思路,用肝癌细胞系Bel7402-V3为细胞模型检测联合单克隆抗体9A9和15D2对其干性功能(自我更新、侵袭和耐药)的影响。[方法]采用活细胞流式免疫荧光术检测单独抗体、联合抗体与肿瘤干细胞标志物ESA在Bel7402-V3亲本及sphere细胞中的表达;甲基纤维素成球实验和Transwell小室侵袭实验分别检测抗体对Bel7402-V3亲本细胞成球能力和侵袭能力的影响;CCK8法及IC50法检测联合抗体对Bel7402-V3亲本细胞耐药能力的影响。[结果]流式荧光结果显示:标志物ESA、单抗15D2、单抗9A9所识别的细胞比例在Bel7402-V3 sphere细胞中比在亲本细胞中分别富集了2.6倍、4.1倍、2.0倍;在Bel7402-V3亲本和sphere细胞中,联合单抗与标志物共染比例(9A9+15D2与ESA)大于单抗分别与标志物共染比例之和[(9A9+ESA)+(15D2+ESA)];单抗9A9与15D2联合时对Bel7402-V3亲本细胞的成球抑制率和侵袭抑制率均明显高于等浓度的单种单抗对Bel7402-V3亲本细胞的功能抑制;经联合单抗处理的Bel7402-V3亲本细胞耐药能力较经等浓度单种单抗处理的细胞耐药能力显著降低[9A9+15D2:IC50为0.32μg/ml,9A9:IC50为0.58μg/ml,15D2:IC50为0.56μg/ml。[结论]肿瘤干细胞中存在不同亚群,其在不同的信号通路或基因水平上发挥了不同的作用。联合多靶点的抗体治疗能显著提高疗效。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 单克隆抗体 联合 多靶点 9A9 15D2
人胃癌CD90+干细胞可能影响胃癌的转移和患者的预后 被引量:3
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作者 王佳佳 孙立新 +5 位作者 孙力超 莫文秀 遇珑 杨治华 刘骞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期230-236,共7页
目的:分离并鉴定人胃癌细胞系SNU-5中的肿瘤干细胞,探讨人胃癌CD90+干细胞对胃癌转移和预后的影响。方法:无血清悬浮培养及PKH26染色确定SNU-5细胞系中是否存在肿瘤干细胞,流式细胞术分析SNU-5亲本及球体细胞中肿瘤干细胞标志物的... 目的:分离并鉴定人胃癌细胞系SNU-5中的肿瘤干细胞,探讨人胃癌CD90+干细胞对胃癌转移和预后的影响。方法:无血清悬浮培养及PKH26染色确定SNU-5细胞系中是否存在肿瘤干细胞,流式细胞术分析SNU-5亲本及球体细胞中肿瘤干细胞标志物的表达,分选CD90+SNU.5细胞并进行体外生物学特征研究及SCID鼠致瘤实验。收集肿瘤医院腹部外科95例胃癌患者肿瘤病理标本,免疫组化方法检测胃癌组织中CD90的表达。结果:SNU-5细胞无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。无血清悬浮培养可将CD90+SNU-5细胞富集6.1倍,且CD90可在球体细胞中与标示干细胞的PKH26共染。CD90+SNU-5细胞较CD90-SNU-5细胞和亲本SNU-5细胞具有更高的自我更新能力[成球率(7.7±1.1)% υs (1.3±0.4)%、(1.8±0.3)%,均P〈0.01]和侵袭能力[侵袭细胞数(283.34±30.2) υs (48.0±7.5)、(156.7±7.2)个,均P〈0.01]。CD90+SNU-5细胞在重症联合免疫缺陷(severe combinedimmuned eficency,SCID)小鼠皮下接种2×102个细胞6周即可致瘤(1/6),而接种2×102个CD90-SNU-5细胞10周才能致瘤(1/6)。95例胃癌患者组织中CD90的表达与胃癌的远处转移显著相关(P〈0.01),且CD90阳性胃癌患者的生存期明显短于CD90阴性的患者(P〈0.01)。结论:人胃癌细胞系SNU-5中存在具有更强自我更新及侵袭能力的CD90+干细胞,人胃癌组织中CD90+干细胞数量与肿瘤的转移与患者生存期明显相关。 展开更多
关键词 胃癌 肿瘤干细胞 CD90 转移 预后
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