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改进的^18O同位素标记法标记蛋白质多肽 预览 被引量:2
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作者 赵焱 卢庄 +2 位作者 贾伟 应万涛 钱小红 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 91-94,共4页
针对^18O同位素标记反应两个重要影响因素——肽段分散度和胰酶灭活方法,进行了标记条件的改进和灭活方法的优化。在H21^8O中加入RapigestTM SF助溶剂并微波辅助加热,使α-酪蛋白胰酶酶切肽段的标记效率得到明显改进(^18O/^16O峰面积... 针对^18O同位素标记反应两个重要影响因素——肽段分散度和胰酶灭活方法,进行了标记条件的改进和灭活方法的优化。在H21^8O中加入RapigestTM SF助溶剂并微波辅助加热,使α-酪蛋白胰酶酶切肽段的标记效率得到明显改进(^18O/^16O峰面积比值〉99%)。标记后,对胰酶进行还原烷基化化学修饰彻底灭活,使标记后的肽段稳定性显著提高,放置6d不发生回交反应。对标准蛋白质甲状腺球蛋白酶切肽段混合物标记后的质谱实验结果表明:优化的标记方法能快速稳定地标记蛋白质酶切多肽。 展开更多
关键词 18O同位素标记 多肽 蛋白质组
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天冬氨酸作为非特异性吸附抑制剂在二氧化钛选择性富集磷酸肽中的应用 预览 被引量:6
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作者 迟明 毕炜 +5 位作者 卢庄 宋丽娜 贾伟 张养军 钱小红 蔡耘 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期 152-157,共6页
二氧化钛富集法作为目前使用最为广泛的金属氧化物富集磷酸肽的方法,在富集过程中常常对富含天冬氨酸和谷氨酸的酸性非磷酸化肽段存在一定的非特异性吸附作用。这些肽段与磷酸化肽段一同被富集,降低了磷酸肽富集的选择性。传统方法中使... 二氧化钛富集法作为目前使用最为广泛的金属氧化物富集磷酸肽的方法,在富集过程中常常对富含天冬氨酸和谷氨酸的酸性非磷酸化肽段存在一定的非特异性吸附作用。这些肽段与磷酸化肽段一同被富集,降低了磷酸肽富集的选择性。传统方法中使用的非特异性吸附抑制剂常会对质谱的电喷雾离子源造成污染,因而限制了其在液相色谱-质谱联用(LC-MS)系统中的应用。本研究将天冬氨酸作为一种新型的非特异性吸附抑制剂加入到二氧化钛富集体系中,并分别对3种和9种标准蛋白质酶切肽段混合物进行富集实验,同时与添加另一种非特异性吸附抑制剂——谷氨酸以及不添加任何非特异性吸附抑制剂的富集体系进行了富集效果的比较。结果表明,天冬氨酸可以有效地提高二氧化钛对磷酸肽富集的选择性。将添加天冬氨酸的二氧化钛富集体系应用于鼠肝全蛋白质磷酸肽的富集中,同样取得了很好的效果,表明天冬氨酸在复杂的生物样本的磷酸肽富集中也同样具有良好的应用前景。此外,由于天冬氨酸在反相色谱中极易被洗脱去除,从而避免了传统抑制剂对LC-MS系统离子源的污染问题。 展开更多
关键词 二氧化钛 富集 非特异性吸附抑制剂 天冬氨酸 磷酸肽 鼠肝
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麦胚凝集素亲和色谱富集糖肽过程中的肽键裂解 预览 被引量:2
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作者 卢庄 王京兰 +5 位作者 贾伟 杨兵 蔡耘 邓玉林 张玉奎 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期 19-23,共5页
蛋白质的糖基化是最重要的翻译后修饰之一,与蛋白质结构和功能的关系密切。凝集素亲和色谱是蛋白质糖基化研究中很常用的工具,不同的凝集素可以对不同的单糖或寡糖有特异的富集作用。麦胚凝集素(WGA)由于其特异作用的糖型广泛存在... 蛋白质的糖基化是最重要的翻译后修饰之一,与蛋白质结构和功能的关系密切。凝集素亲和色谱是蛋白质糖基化研究中很常用的工具,不同的凝集素可以对不同的单糖或寡糖有特异的富集作用。麦胚凝集素(WGA)由于其特异作用的糖型广泛存在而成为使用最多的凝集素之一。在本研究中,发现将WGA用于糖肽亲和富集会导致部分肽段的降解,从而导致后续的肽段序列分析的失败。本文用4种标准蛋白质对这种现象进行了验证,结果表明肽段的降解可以发生在多个位点,其中较多地发生在酪氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸的羧基端。这一结果提示:在糖蛋白质组研究中,如果应用WGA富集糖肽并采用质谱进行鉴定,则采用半酶切或非特异性酶切的检索策略更为合适。 展开更多
关键词 麦胚凝集素亲和色谱 糖肽 肽键 断裂 蛋白质组学
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基于膜超滤的糖肽富集新方法 预览
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作者 卢庄 贾伟 +4 位作者 宋丽娜 蔡耘 邓玉林 张玉奎 钱小红 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期 644-648,共5页
建立了一种用于糖肽富集的新型超滤方法,采用截留相对分子质量为3000μ的超滤膜,截取相对分子质量大于3000μ的组分,同时完成糖肽的富集、样本的脱盐及浓缩,简化了操作过程并减少了样本损失。用4种标准蛋白酶切肽段混合物测试方法... 建立了一种用于糖肽富集的新型超滤方法,采用截留相对分子质量为3000μ的超滤膜,截取相对分子质量大于3000μ的组分,同时完成糖肽的富集、样本的脱盐及浓缩,简化了操作过程并减少了样本损失。用4种标准蛋白酶切肽段混合物测试方法的有效性,结果表明,采用超滤方法富集后的样品可以多鉴定1个糖肽,且所有鉴定的糖肽丰度远高于未富集的样品。将该方法用于人血浆样本,血浆全酶切肽段的1个SCX组分用超滤法富集后,其鉴定的糖肽数量超过未富集组分的6倍,且糖肽富集的选择性大于85%。该方法为糖蛋白质组学的研究及糖相关生物标志物的开发提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 N-连接糖肽 超滤 富集
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规模化蛋白质生物质谱鉴定中肽段氨基端环化修饰现象 预览 被引量:2
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作者 卢庄 赵丽艳 +4 位作者 张养军 蔡耘 邓玉林 张玉奎 钱小红 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第7期 950-954,共5页
对蛋白质样品制备中引入的氨基酸残基的一种现象——蛋白质酶切肽段氨基端的环化修饰现象的初步研究结果显示,很多以谷氨酰胺(Q)或氨乙酰化修饰的半胱氨酸(CAM_C)残基起始的肽段会发生氨基端的环化修饰,且修饰反应不完全,在同一... 对蛋白质样品制备中引入的氨基酸残基的一种现象——蛋白质酶切肽段氨基端的环化修饰现象的初步研究结果显示,很多以谷氨酰胺(Q)或氨乙酰化修饰的半胱氨酸(CAM_C)残基起始的肽段会发生氨基端的环化修饰,且修饰反应不完全,在同一样本中修饰与非修饰两种状态常同时存在,并且环化修饰后的肽段的反相色谱保留时间发生延迟。在数据库检索时添加环化修饰,可以提高蛋白质的鉴定成功率。本研究结果为大规模的蛋白质质谱数据解析提供了有价值的参考。 展开更多
关键词 肽段氨基端 环化 规模化 蛋白质鉴定
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基于强阳离子交换色谱分离的磷酸化肽段富集策略 预览 被引量:5
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作者 隋少卉 王京兰 +4 位作者 卢庄 蔡耘 张养军 蔚文峰 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期 195-199,共5页
为了在短时间内获得相对含量高的磷酸化肽段,以标准磷酸化蛋白质为模型对强阳离子交换色谱(SCX)分离磷酸化肽段体系的缓冲溶液和梯度设置进行了研究,并用酵母酶切肽段混合物考察了该路线在较复杂的样品中的应用。实验结果表明优化后... 为了在短时间内获得相对含量高的磷酸化肽段,以标准磷酸化蛋白质为模型对强阳离子交换色谱(SCX)分离磷酸化肽段体系的缓冲溶液和梯度设置进行了研究,并用酵母酶切肽段混合物考察了该路线在较复杂的样品中的应用。实验结果表明优化后的体系能够在30min内分离出磷酸肽段,而且非磷酸化肽段的干扰很少,这样便相对提高了磷酸化肽段在质谱仪中的响应强度,重要的是该体系可以对复杂样品进行很好的分离。这说明SCX用于规模化磷酸化肽段富集的策略是可行的。本研究为磷酸化蛋白质组学规模化分析提供了实用技术。 展开更多
关键词 磷酸化 位点 强阳离子交换色谱 富集 蛋白质组学
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糖蛋白组学研究技术进展及其应用 预览 被引量:1
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作者 卢庄 王京兰 +1 位作者 蔡耘 钱小红 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 335-338,共4页
蛋白质的糖基化修饰与蛋白质功能密切相关,糖蛋白组学的相关研究已成为蛋白质组学研究的一个重要分支。本文在综述目前常用的糖蛋白组学技术方法的基础上,重点介绍了近两年出现的新技术策略及其应用。
关键词 糖蛋白组学 质谱 糖基化修饰
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等电聚焦分离与^18O稳定同位素标记联用的磷酸化蛋白质组学定量方法研究 预览 被引量:5
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作者 隋少卉 王京兰 +5 位作者 贾伟 卢庄 刘金风 宋丽娜 蔡耘 钱小红 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第8期 1017-1023,共7页
磷酸化蛋白质组学定量分析,要对磷酸化修饰富集技术和定量技术进行研究。基于此,本研究采用^18O稳定同位素标记技术对胰蛋白酶酶解肽段混合物进行标记,并对其标记时间和标记后胰蛋白酶的变性条件进行优化。结果表明:在pH=4~5的KH2PO4... 磷酸化蛋白质组学定量分析,要对磷酸化修饰富集技术和定量技术进行研究。基于此,本研究采用^18O稳定同位素标记技术对胰蛋白酶酶解肽段混合物进行标记,并对其标记时间和标记后胰蛋白酶的变性条件进行优化。结果表明:在pH=4~5的KH2PO4缓冲体系中,37℃,标记反应持续19~24h,除了C-端肽之外,几乎所有的肽段都可达到100%标记;采用TCEP可以有效地抑制16O-^18O回标现象。建立了与18O标记技术兼容性良好的IPG-IEF技术对磷酸化肽段进行选择性富集,富集后共从HepG2细胞中鉴定到491个磷酸化位点、362个磷酸化肽段和356个磷酸化蛋白,表明IPG-IEF在大规模磷酸化肽段分离富集中是有效的;最后与高准确度高灵敏度高分辨率的LTQ-FTICR质谱仪联用,建立了基于^18O-IPG-IEF-LTQ-FTICR的磷酸化蛋白质组定量技术。实验结果表明,该技术可以实现磷酸化肽段的有效定性和定量。本研究为磷酸化蛋白质组学定量研究提供了实用技术。 展开更多
关键词 18O标记技术 等电聚焦 傅里叶交换离子回旋质谱(LTQ-FTICR-MS) 磷酸化蛋白质组定性与定量
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^18 O稳定同位素标记定量蛋白质组研究技术的建立与优化 预览 被引量:9
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作者 钱林艺 应万涛 +4 位作者 刘新 卢庄 蔡耘 何建勇 钱小红 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期 161-165,共5页
建立了^18O稳定同位素标记方法,用于复杂体系蛋白质相对定量分析.对影响蛋白质标记稳定性的实验条件进行了比较和优化.结果表明,采用酶切后标记的方法,酶切肽段在胰酶催化下,在pH 5.0的K2HPO4/KH2PO4缓冲体系中,37℃^18O标记反应16 h,... 建立了^18O稳定同位素标记方法,用于复杂体系蛋白质相对定量分析.对影响蛋白质标记稳定性的实验条件进行了比较和优化.结果表明,采用酶切后标记的方法,酶切肽段在胰酶催化下,在pH 5.0的K2HPO4/KH2PO4缓冲体系中,37℃^18O标记反应16 h,绝大部分肽段即可达到100%的标记效率.对多个16O/^18O 成对肽段峰强度的动态范围及定量准确度进行了考察.结果表明,^18O标记方法是一种简便、稳定、可靠的相对定量方法,10倍动态范围内,标记率相对标准偏差在18.4%以内,^16O/^18O峰强度呈很好的线性关系.本实验考察了标记后的肽段在不同溶液体系中的稳定性,为复杂样品的预处理和预分离的溶液条件提供了依据. 展开更多
关键词 稳定同位素标记 ^18O 定量蛋白质组学 质谱 液相色谱
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基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱研究重组人促红细胞生成素一级结构 预览 被引量:7
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作者 卢庄 王杉 +7 位作者 代景泉 王京兰 张养军 应万涛 徐友宣 钱小红 吴侔天 蔡耘 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期 591-597,共7页
建立了生物质谱研究rhEPO 一级结构的系列方法,包括分子量、唾液酸含量以及N-糖含量等糖基化性质的测定方法,并用于4种国产rhEPO 样品的分析;在此基础上优化酶切条件,使测定的肽质量指纹谱(PMF)的覆盖率均达到98%,成功鉴定了4个样品... 建立了生物质谱研究rhEPO 一级结构的系列方法,包括分子量、唾液酸含量以及N-糖含量等糖基化性质的测定方法,并用于4种国产rhEPO 样品的分析;在此基础上优化酶切条件,使测定的肽质量指纹谱(PMF)的覆盖率均达到98%,成功鉴定了4个样品中的全部N-糖基化位点以及对分子中两对二硫键进行了结构确证,测定4个样品分子量分别为:27754.1±27.4Da、27941.4±23.2 Da、27682.5±22.0 Da和27914.7±22.5 Da;唾液酸含量分别为:5.0%、4.8%、5.6%和5.4%;糖含量分别为:34.3%、34.7%、34.1%和34.6%.此外还对4种产品在O-连接糖型及N-连接糖型上的区别做了初步探讨. 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱 重组人促红细胞生成素 肽质量指纹谱 二硫键 N-连接糖基化位点 糖型结构
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肽类兴奋剂检测技术进展 预览
11
作者 卢庄 《体育科技文献通报》 2005年第1期11-12,共2页
1989年国际奥委会将肽类激素定位新的一类兴奋剂,这一类兴奋剂均属于内源性物质,目前还没有国际奥委会认可的检测方法,本文介绍了肽类兴奋剂目前检测方法的研究进展,重点是对目前研究较多的生长激素(hGH)和促红细胞生成素(EPO)的检测... 1989年国际奥委会将肽类激素定位新的一类兴奋剂,这一类兴奋剂均属于内源性物质,目前还没有国际奥委会认可的检测方法,本文介绍了肽类兴奋剂目前检测方法的研究进展,重点是对目前研究较多的生长激素(hGH)和促红细胞生成素(EPO)的检测技术进展进行了介绍和评述。 展开更多
关键词 技术进展 兴奋剂检测 检测方法 反兴奋剂斗争 国际奥委会 生长激素 肽类 胰岛素样生长因子1 内源性物质 促红细胞
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糖蛋白的质谱分析策略 预览
12
作者 蔡耘 代景泉 +4 位作者 张养军 卢庄 王京兰 应万涛 钱小红 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2004年第B10期 131-132,共2页
Glycoprotein is a kind of proteins widely distributed in the bodies of animals and plants. The identification of its characteristic is very difficult due to the complexity of its structure. In this paper, a serious of... Glycoprotein is a kind of proteins widely distributed in the bodies of animals and plants. The identification of its characteristic is very difficult due to the complexity of its structure. In this paper, a serious of methods for glycoprotein analysis was established by mass spectrum. The molecular weight, quantity of N-glycans and sialic acids were determined by matrix-assisted laser desorption time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOFMS) directly. The glycosylation sites of glycoprotein were confirmed by its PMF,which produced by the combination digestion of PNGase F and Endoproteinase. The sequence of glycopeptide was detected by liquid chromatography-mass spectrometry (LCMS). The recombined biotechnologic productions including rhEPO,proUK and Spike protein of SARS coronavirus were well characterized by using these methods. 展开更多
关键词 糖蛋白 质谱分析 分子量 糖基化位点 糖链结构
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肽类兴奋剂检测技术进展 被引量:3
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作者 卢庄 蔡耘 钱小红 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期537-542,545共7页
1989年国际奥委会将肽类激素定为新的一类兴奋剂,这一类兴奋剂均属于内源性物质,目前还没有国际奥委会认可的检测方法,本文介绍了肽类兴奋剂目前检测方法的研究进展,重点是对目前研究较多的生长激素(hGH)和促红细胞生成素(EPO)的检... 1989年国际奥委会将肽类激素定为新的一类兴奋剂,这一类兴奋剂均属于内源性物质,目前还没有国际奥委会认可的检测方法,本文介绍了肽类兴奋剂目前检测方法的研究进展,重点是对目前研究较多的生长激素(hGH)和促红细胞生成素(EPO)的检测技术进展进行了介绍和评述。 展开更多
关键词 肽类激素 兴奋剂检测 GH 内源性物质 生长激素 检测方法 研究进展 国际奥委会 促红细胞生成素(EPO) 评述
提租限高值得探讨 预览
14
作者 卢庄 《北京房改》 2000年第10期 33-34,共2页
关键词 北京 住房制度改革 公有住房租金
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实验犬尘肺X线不规则形小阴影与病理对照的观察 预览
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作者 卢庄 孙明山 +5 位作者 王文举 常莹华 项福泉 姜恩昭 刘冠民 马维仁 《工业卫生与职业病》 CAS CSCD 1991年第4期 198-202,共5页
本文对实验性尘肺不规则形小阴影为主的X线表现与病理所见进行对比观察,证实X线不规则形小阴影病理基础主要是由支气管及其分支系统及其周围组织的间质纤维化,以及支气管、细支气管周及肺实质内散在的条索状、斑片状粉尘纤维灶的重合、... 本文对实验性尘肺不规则形小阴影为主的X线表现与病理所见进行对比观察,证实X线不规则形小阴影病理基础主要是由支气管及其分支系统及其周围组织的间质纤维化,以及支气管、细支气管周及肺实质内散在的条索状、斑片状粉尘纤维灶的重合、组合等因素综合而成。 展开更多
关键词 尘肺 不规则形小阴影 X线诊断 病理
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韩国外贸政策及韩中贸易发展
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作者 卢庄 《国际贸易》 北大核心 1992年第5期 27-29,共3页
<正> 在过去近30年中,韩国在经济发展上所取得的成就,令世人瞩目.当60年代初,韩国开始着手实施第一个经济发展五年计划时,与韩国国情相仿的不止一个国家,但唯独韩国经济得到如此高速的发展,其重要原因应归结于韩国国民强有力的、... <正> 在过去近30年中,韩国在经济发展上所取得的成就,令世人瞩目.当60年代初,韩国开始着手实施第一个经济发展五年计划时,与韩国国情相仿的不止一个国家,但唯独韩国经济得到如此高速的发展,其重要原因应归结于韩国国民强有力的、执着的开发意志.正是这种开发意志,促使我国把外向型开发战略作为发展经济政策的基本原则,用以克服国内资源、资本短缺和市场狭小等不利因素.外向型开发战略的基本宗旨,是在利用引进外资来弥补国内资本不足的同时,扩大出口型实业,通过提高规模经济效益和专业化程 展开更多
关键词 外贸政策 韩国 中国 对外贸易
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变浆系统后备电池在线监测及电压均衡系统以及方法 预览
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作者 姜由之 张延迟 +2 位作者 孙玺 卢庄 刘洋 《电子制作》 2015年第5X期34-,共1页
本论文是关于一种变浆系统后备电池在线监测及电压均衡系统以及方法,特别是涉及一种大型风电机组的变浆系统后备电池在线监测及电压均衡系统以及方法。其不仅可以及时、准确地监测蓄电池组中每节电池的具体参数,依此在远端的监控主机上... 本论文是关于一种变浆系统后备电池在线监测及电压均衡系统以及方法,特别是涉及一种大型风电机组的变浆系统后备电池在线监测及电压均衡系统以及方法。其不仅可以及时、准确地监测蓄电池组中每节电池的具体参数,依此在远端的监控主机上对变桨控制器进行对应的操作,而且在监测的过程中通过对各个蓄电池组单体进行电压均衡操作,使蓄电池组长期处于健康稳定的状态。 展开更多
关键词 变桨系统 监测 蓄电池
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