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尼罗罗非鱼无乳链球菌Sip蛋白乳酸菌活载体口服疫苗的研制及其免疫效果 预览
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作者 蔡玉臻 刘志刚 +3 位作者 卢迈新 可小丽 高风英 曹建萌 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期661-670,共10页
链球菌病是威胁我国罗非鱼养殖产业健康发展的重要病害之一。为研制出免疫效果好、操作简便的罗非鱼链球菌病疫苗,本研究构建重组表达无乳链球菌Sip蛋白的穿梭质粒pNZ8124-Sip,通过酶切和测序验证后电转化乳酸乳球菌NZ9000,获得能够诱... 链球菌病是威胁我国罗非鱼养殖产业健康发展的重要病害之一。为研制出免疫效果好、操作简便的罗非鱼链球菌病疫苗,本研究构建重组表达无乳链球菌Sip蛋白的穿梭质粒pNZ8124-Sip,通过酶切和测序验证后电转化乳酸乳球菌NZ9000,获得能够诱导重组表达无乳链球菌Sip蛋白的乳酸菌活菌载体疫苗。采用SPS-PAGE电泳摸索最佳诱导浓度和诱导时间以获得最大表达量,通过镍柱纯化目的蛋白并进行Westernblot检测;利用不同浓度的重组乳酸菌活载体疫苗灌胃口服免疫尼罗罗非鱼,采用间接ELISA法测定免疫后血清抗体水平变化,通过人工腹腔注射感染无乳链球菌获得相对免疫保护率。研究结果显示,构建的重组乳酸乳球菌可通过nisin诱导表达大小为48ku特异性蛋白,与目的蛋白大小一致;PAGE电泳显示,重组蛋白主要以可溶蛋白和包涵体2种形式存在,其中胞内可溶性蛋白浓度达7.65mg/mL;诱导表达的最佳条件为100ng/mL nisin诱导6h;Westernblot检测结果显示,诱导蛋白可与鼠抗His标签抗体特异性结合。口服免疫结果显示,中浓度组(2.24×10^10CFU/mL)和低浓度组(2.24×10^9CFU/mL)免疫2次能够显著提高尼罗罗非鱼的血清抗体水平和抗无乳链球菌感染能力,中浓度免疫组的相对免疫保护率最高为41.0%。本研究可为罗非鱼链球菌病口服疫苗的研究奠定基础,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 无乳链球菌 Sip蛋白 乳酸菌活载体疫苗 免疫保护效果
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尼罗罗非鱼TRAF4基因的克隆、表达及功能分析
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作者 韩雪晴 高风英 +5 位作者 卢迈新 刘志刚 曹建萌 王淼 衣萌萌 张德锋 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期381-392,共12页
肿瘤坏死因子受体相关因子4 (tumor necrosis factor receptor associated factors 4, TRAF4)是TRAFs家族中比较特殊的一员,生物学功能较多且较复杂。为了明确TRAF4基因在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程中的作用,本研究首... 肿瘤坏死因子受体相关因子4 (tumor necrosis factor receptor associated factors 4, TRAF4)是TRAFs家族中比较特殊的一员,生物学功能较多且较复杂。为了明确TRAF4基因在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程中的作用,本研究首先通过反转录PCR和分段扩增获得尼罗罗非鱼TRAF4基因c DNA (GenBank No. MH986338)及基因组序列,并进行基因和蛋白质结构等生物信息学分析;然后利用qRT-PCR技术检测该基因在健康个体中的组织表达、受精后不同发育阶段的表达以及人工感染无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)后的表达特征;最后构建重组真核表达载体,分析TRAF4在人胚肾细胞293T中的亚细胞定位及其在Nuclear factorκB (NF-κB)通路中的作用。结果显示,TRAF4基因的cDNA序列为4 483 bp,开放阅读框为1 413 bp,可编码470个氨基酸。基因组序列分析发现,TRAF4基因含7个外显子和6个内含子。氨基酸序列分析发现,TRAF4存在1个环指(RING-finger)结构域、3个TRAF类型的锌指(zinc-finger)结构域、1个甲基多巴和TRAF同源物(meprin and TRAF-homology, MATH)结构域。组织分析表明,TRAF4基因在所检测的11个组织/器官中均有表达,脑中表达最高,脾中表达最低;该基因在受精后不同发育阶段均有表达。人工感染无乳链球菌后,尼罗罗非鱼TRAF4基因在肠、鳃、脾、肾和血液中的表达量均发生不同程度的变化,在鳃和血液中显著升高,在肠和肾中的表达量均低于对照组(0 h组)。亚细胞定位和双荧光素酶报告分析显示,TRAF4在293T细胞中主要定位于细胞质,可增强NF-κB活性。综上所述,TRAF4基因在尼罗罗非鱼的免疫应答中发挥重要作用,本研究为深入探讨TRAF4基因在罗非鱼抗感染免疫中的作用机制提供了基础资料。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体相关因子4基因(TRAF4) 尼罗罗非鱼 基因表达 转染
3个不同尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)群体MHC ⅡA基因多态性和遗传分化
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作者 张栋 庞纪彩 +1 位作者 高风英 卢迈新 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1532-1539,共8页
MHC ⅡA作为主要组织相容性复合体的重要成分之一,在鱼类的免疫系统中发挥重要作用,具有高度多态性。本研究从广东省3个不同养殖地区的91尾尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的个体中获得了MHC ⅡA的第二外显子区域序列共501条,长度为6... MHC ⅡA作为主要组织相容性复合体的重要成分之一,在鱼类的免疫系统中发挥重要作用,具有高度多态性。本研究从广东省3个不同养殖地区的91尾尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的个体中获得了MHC ⅡA的第二外显子区域序列共501条,长度为647~742 bp。对该序列进行分析,共发现12个不同的等位基因。三个群体中核苷酸序列变异百分比为34.73%~60.78%,氨基酸变异百分比为68.24%~78.82%,其中惠州群体的变异比例最高(60.78%和78.82%)。单倍型多样性和核苷酸多样性分析表明:惠州群体的遗传多样性最为丰富。群体间分化指数(Fst)、中性检测(Tajima检测)、平均基因流、平均K2-P遗传距离和AMOVA分析的各项数据表明MHC ⅡA基因的第二外显子区域在3个不同群体间遗传分化不显著,存在一定的基因交流。本研究发现的MHC ⅡA基因的高度多态性及遗传结果,为尼罗罗非鱼抗病品种的选育以及种质资源的保护奠定了重要的基础资料。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 MHC ⅡA 多态性 遗传分化
罗非鱼源无乳链球菌肠道拮抗芽孢杆菌的筛选及其生物学特性 被引量:1
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作者 高艳侠 张德锋 +5 位作者 可小丽 刘志刚 衣萌萌 王淼 韩雪晴 卢迈新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期926-938,共13页
【目的】从健康尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肠道中筛选一株对罗非鱼源无乳链球菌等病原菌具有拮抗功能的益生菌。【方法】取健康尼罗罗非鱼肠道,匀浆后进行10倍系列梯度稀释,然后涂布BHI平板,培养1–2d,挑取单克隆菌落。采用点... 【目的】从健康尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肠道中筛选一株对罗非鱼源无乳链球菌等病原菌具有拮抗功能的益生菌。【方法】取健康尼罗罗非鱼肠道,匀浆后进行10倍系列梯度稀释,然后涂布BHI平板,培养1–2d,挑取单克隆菌落。采用点种法初步筛选对罗非鱼源无乳链球菌有拮抗作用的菌株,选取其中一株拮抗效果较好的菌株LF01,通过形态学、生理生化特征以及分子生物学分析,对LF01菌株进行鉴定。然后对LF01菌株的生长特性、水解淀粉和酪蛋白能力、药物敏感特性、抗菌谱和生物安全性进行测定和分析。【结果】根据菌落形态和生长时间的差异,从健康尼罗罗非鱼肠道中筛选出64株细菌,通过拮抗试验筛选出6株具有明显拮抗效果的菌株,其中LF01菌株的拮抗效果最好。根据LF01的形态、生理生化特征和gyr A基因的进化分析,确定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。LF01菌株的最适生长温度为30°C,最适p H值为7,最适盐度为5‰,而且该菌株具有水解淀粉和酪蛋白的功能。药敏试验结果显示,LF01菌株对多数抗生素敏感,仅对杆菌肽耐药。拮抗试验结果显示LF01株对无乳链球菌、海豚链球菌、迟缓爱德华氏菌、鮰爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、舒氏气单胞菌、维氏气单胞菌、简氏气单胞菌、鰤鱼诺卡氏菌等病原菌均具有拮抗作用,其中对鰤鱼诺卡氏菌的拮抗作用最强,平均抑菌圈直径达28.3 mm。生物安全试验表明,LF01菌株对尼罗罗非鱼、斑马鱼(Danio rerio)和乌鳢(Channa argus)等3种鱼均无致病性,具有良好的安全性。【结论】本研究筛选了一株贝莱斯芽孢杆菌LF01株,该菌的生物安全性良好,而且可拮抗常见的水产病原菌,具有防控多种水产经济动物疾病的潜力,应用前景十分广阔。 展开更多
关键词 贝莱斯芽孢杆菌 无乳链球菌 点种法 抑菌 药敏试验
无乳链球菌感染对吉富罗非鱼行为的影响及其机制
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作者 衣萌萌 王淼 +4 位作者 李忠徽 张德锋 刘志刚 高风英 卢迈新 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期799-808,共10页
在罗非鱼养殖过程中,无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染会导致罗非鱼行为异常,并严重危害罗非鱼产业的健康发展。为了研究无乳链球菌感染后吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)行为变化的生理机制,本研究采用qRT-PCR和免疫荧光... 在罗非鱼养殖过程中,无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染会导致罗非鱼行为异常,并严重危害罗非鱼产业的健康发展。为了研究无乳链球菌感染后吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)行为变化的生理机制,本研究采用qRT-PCR和免疫荧光的方法,以人工腹腔注射感染无乳链球菌的吉富罗非鱼为研究对象,检测感染前后吉富罗非鱼脑组织和肠道组织中无乳链球菌含量、行为变化以及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)在其小脑、肠道和胃中的表达情况。结果表明,吉富罗非鱼脑组织和肠道组织中无乳链球菌的含量分别从人工感染后的第6和第0小时开始急剧增加,均在第18小时达到高峰,其中脑组织峰值61.2 copies/mg,肠道组织峰值1 800.5 copies/mg;实验鱼在人工感染后的第12小时出现无定向乱窜、持续旋转游动的异常行为,并且这种异常行为一直持续到实验结束或实验鱼死亡;在人工感染前和感染后的实验鱼小脑、肠道和胃中均发现5-HT阳性反应,但是小脑和肠道中5-HT的阳性反应随着病原感染时间延长呈现变弱的趋势,在实验第18小时时荧光强度分别为9.1和6.9,而胃组织中5-HT阳性反应随着病原感染时间延长呈现先升高后降低的趋势,在实验末期到达最低值3.1。因此可以推测,无乳链球菌感染罗非鱼后,通过调控脑中枢神经系统和外周消化道系统中的5-HT使罗非鱼产生无定向乱窜和持续旋转的异常行为。本研究从5-HT的角度解释无乳链球菌感染后罗非鱼的异常行为,可为研究感染病原后鱼类冲动行为的机制提供新的研究思路。 展开更多
关键词 无乳链球菌 罗非鱼行为 5-HT
罗非鱼“粤闽1号”不同养殖模式养殖效果分析 预览
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作者 王淼 祁文龙 +3 位作者 高菲菲 曹建萌 刘志刚 卢迈新 《科学养鱼》 2019年第5期18-19,共2页
罗非鱼'粤闽1号'采用了GMT等育种技术,获得了不需要雄性激素处理的全雄罗非鱼,具有生长快、出肉率高等特点,已在云南、广东、福建、海南和广西等省进行了中试,取得了显著效果。由于罗非鱼性成熟早、繁殖周期短、繁殖力强,在生... 罗非鱼'粤闽1号'采用了GMT等育种技术,获得了不需要雄性激素处理的全雄罗非鱼,具有生长快、出肉率高等特点,已在云南、广东、福建、海南和广西等省进行了中试,取得了显著效果。由于罗非鱼性成熟早、繁殖周期短、繁殖力强,在生产养殖中雌、雄鱼混养易使成鱼规格不整齐,从而影响经济效益。且罗非鱼的生长过程中雄鱼比雌鱼生长快40%~50%,在相同条件下,若进行单性(雄性)养殖,可极大地提高单位面积产量和商品鱼的规格。 展开更多
关键词 罗非鱼 混养模式 养殖效果 鱼种规格 放养规格 罗氏沼虾苗
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鱼体健康状况评价研究进展 预览
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作者 王淼 衣萌萌 卢迈新 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期226-232,共7页
鱼体的生长速度、摄食状况、器官和组织的发育、抗病力、环境适应能力以及对环境变化的自我调节能力等,都与鱼体健康状况密切相关。随着水产养殖业的迅速发展,如何科学地评价鱼体的健康状况显得愈发重要。文章综述了目前常用的几种鱼体... 鱼体的生长速度、摄食状况、器官和组织的发育、抗病力、环境适应能力以及对环境变化的自我调节能力等,都与鱼体健康状况密切相关。随着水产养殖业的迅速发展,如何科学地评价鱼体的健康状况显得愈发重要。文章综述了目前常用的几种鱼体健康状况评价方法及存在的问题,探讨了利用现代计算机技术及生物技术,开发鱼体健康状况评价新方法的可行性,以期为水产养殖鱼体的健康评价提供新思路。 展开更多
关键词 鱼体 健康 定性评价 定量评价
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一株异养硝化巨大芽胞杆菌的分离鉴定及其脱氮性能研究
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作者 李忠徽 王淼 +3 位作者 衣萌萌 王瑞宁 陈文伟 卢迈新 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1331-1340,共10页
生物法脱氮处理养殖废水是目前最经济有效的方法之一。硝化菌在生物法脱氮过程中起着重要作用。为筛选具有高效脱氮能力的异养硝化细菌,本研究通过富集培养及平板分离纯化,从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)循环水养殖车间用水中筛选... 生物法脱氮处理养殖废水是目前最经济有效的方法之一。硝化菌在生物法脱氮过程中起着重要作用。为筛选具有高效脱氮能力的异养硝化细菌,本研究通过富集培养及平板分离纯化,从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)循环水养殖车间用水中筛选出1株异养硝化细菌P5-2。通过对其进行形态观察、生理生化反应鉴定及16S r RNA基因序列分析,确定该菌株为巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)。革兰氏染色结果表明该菌株为革兰氏阳性菌;胞外酶性能测定表明该菌株可以有效利用淀粉及酪蛋白;生长特性研究结果表明,当培养温度为30℃、盐度为10‰、pH为7时菌株生长最快,最先进入指数生长期及稳定期。硝化特性实验结果显示,碳源、碳氮比、溶氧量等环境因素均可以影响菌株对氨氮的去除效果;当以柠檬酸钠为碳源、碳氮比为15、pH为7、转速为180 r/min时菌株去除氨氮的效果最佳,24 h的氨氮去除率达99.07%。本研究筛选获得1株高效异养硝化细菌P5-2,并进行了硝化性能研究,为其在处理养殖废水的实际应用提供了基础资料。 展开更多
关键词 异养硝化 芽胞杆菌 氨氮 硝化作用
结合线粒体D-loop序列和SSR标记对宝石鲈养殖群体遗传多样性的分析 预览
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作者 赵立祥 董浚键 +4 位作者 孙成飞 田园园 胡婕 卢迈新 叶星 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第3期37-46,共10页
采用线粒体D-loop序列及SSR标记分析广东4个宝石鲈(Scortum barcoo)养殖群体的遗传多样性。D-loop序列分析显示,长度为598bp的D-loop片段上有14个多态性位点,共定义8个单倍型。4个群体单倍型多样性指数、核苷酸多样性指数分别为0.0000~0... 采用线粒体D-loop序列及SSR标记分析广东4个宝石鲈(Scortum barcoo)养殖群体的遗传多样性。D-loop序列分析显示,长度为598bp的D-loop片段上有14个多态性位点,共定义8个单倍型。4个群体单倍型多样性指数、核苷酸多样性指数分别为0.0000~0.5435、0.00000~0.00176,表明4个群体遗传多样性水平均较低。利用11个SSR位点分析显示,4个群体期望杂合度(He)=0.396~0.516、PIC=0.320~0.420,说明各群体遗传多样性处于中低水平。虽然二种方法获得的遗传分化指数FST上存在差异,分别为0.4035(D-loop)和0.0445(SSR),但二种分析结果均显示4个广东群体的遗传多样性较低、亲缘关系较近,因此有必要引进原种以丰富国内养殖群体的遗传多样性。 展开更多
关键词 宝石鲈(Scortum barcoo) D-LOOP 微卫星 遗传多样性 遗传距离
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尼罗罗非鱼肠道及养殖环境中菌群结构与链球菌病的相关性 预览
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作者 刘志刚 卢迈新 +2 位作者 可小丽 王淼 张德锋 《水产学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1635-1647,共13页
为研究尼罗罗非鱼肠道和池塘养殖环境中菌群结构变化与链球菌病暴发的相关性,实验采用16S rDNA高通量测序方法对比分析发病和健康池塘水体、底泥和尼罗罗非鱼肠道菌群的结构特征。结果显示,底泥中微生物多样性最高,水体和肠道中微生物... 为研究尼罗罗非鱼肠道和池塘养殖环境中菌群结构变化与链球菌病暴发的相关性,实验采用16S rDNA高通量测序方法对比分析发病和健康池塘水体、底泥和尼罗罗非鱼肠道菌群的结构特征。结果显示,底泥中微生物多样性最高,水体和肠道中微生物多样性次之;肠道菌群与水体中菌群的相似性较高,而与底泥中菌群相似性较低;发病组的尼罗罗非鱼肠道和池塘底泥中微生物的多样性均低于健康组,而发病组池塘水体中微生物多样性高于健康组。OTU聚类分析发现,发病与健康尼罗罗非鱼肠道微生物差异极显著,大部分健康尼罗罗非鱼肠道微生物样品单独聚为一支。菌群结构组成分析结果表明,虽然发病组和健康组水体或底泥中优势菌群结构组成的差异较小,但在非优势菌群中存在一定差异,发病组水体中变形菌门和梭杆菌门的比例显著高于健康组水体,疣微菌门和浮霉菌门的丰度显著低于健康组水体;发病组池塘底泥中厌氧粘细菌属、甲烷丝菌属和枝芽孢菌属等具有降解有机质和生态修复功能,菌群的丰度显著低于健康组底泥,而具有致病能力的曼氏杆菌属丰度却显著高于健康组底泥。发病组尼罗罗非鱼肠道菌群中链球菌属、分枝杆菌属和曼氏杆菌属等致病菌群的丰度显著高于健康组尼罗罗非鱼肠道,而乳球菌属、鲸杆菌属和红球菌属等益生菌的丰度显著低于健康尼罗罗非鱼肠道。无乳链球菌普遍存在于发病和健康养殖环境,以及尼罗罗非鱼肠道中,无乳链球菌的丰度在发病和健康养殖环境之间无显著差异,但其在发病尼罗罗非鱼肠道中的丰度要显著高于健康组。研究表明,尼罗罗非鱼链球菌病发病池塘水体和底泥中有益菌丰度降低和致病菌丰度的升高反映其养殖环境出现恶化,尼罗罗非鱼链球菌病的暴发与肠道微生态平衡破坏后无乳链球菌丰度增加密切相关,� 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 链球菌病 肠道微生物 环境微生物 16S rDNA高通量测序
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尼罗罗非鱼Ikaros基因的克隆及表达分析 预览
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作者 陈昆平 刘志刚 +7 位作者 卢迈新 高风英 张德锋 可小丽 曹建萌 朱华平 王淼 衣萌萌 《水生生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期77-85,共9页
为揭示尼罗罗非鱼Ikaros基因结构特征及其在抗病原感染中的免疫调控机制,实验采用RT-PCR和RACE方法克隆了尼罗罗非鱼Ikaros的cDNA序列以及利用PCR和染色体步移技术克隆了Ikaros的基因组DNA序列,通过荧光定量PCR分析了Ikaros mRNA的组织... 为揭示尼罗罗非鱼Ikaros基因结构特征及其在抗病原感染中的免疫调控机制,实验采用RT-PCR和RACE方法克隆了尼罗罗非鱼Ikaros的cDNA序列以及利用PCR和染色体步移技术克隆了Ikaros的基因组DNA序列,通过荧光定量PCR分析了Ikaros mRNA的组织分布及其对无乳链球菌感染的响应。结果表明,克隆的尼罗罗非鱼Ikaros基因组DNA为20454 bp,包括7个内含子和8个外显子,经可变剪接可形成6种不同的mRNA剪接异构体,其编码的氨基酸序列均具有Ikaros家族典型的锌指结构域且与硬骨鱼类Ikaros氨基酸序列同源性较高(70.6%—93.7%)。Ikaros基因在尼罗罗非鱼各组织中均有表达,在血液中的表达量最高,其次为胸腺、脾脏和头肾。人工感染无乳链球菌后,血液、胸腺、脾脏、头肾中Ikaros基因的相对表达量均显著上调,并在48h达到峰值,这表明Ikaros基因参与调控尼罗罗非鱼抵御无乳链球菌的免疫应答反应。研究可为进一步探索Ikaros基因在罗非鱼抗病原感染中的作用机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 Ikaros基因 mRNA剪接异构体 无乳链球菌 表达
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尼罗罗非鱼无乳链球菌荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系 预览
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作者 师红亚 董浚键 +4 位作者 张德锋 孙成飞 田园园 卢迈新 叶星 《水产学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期291-302,共12页
为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系,本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cps E、cps K和neu A,通过q RT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化,同... 为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系,本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cps E、cps K和neu A,通过q RT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化,同时通过比色法测定了不同培养温度下GBS荚膜唾液酸含量的变化,通过人工感染实验分析了不同水温条件下GBS对罗非鱼的致病性。结果显示,cps E、cps K和neu A编码的氨基酸序列均具有保守的与荚膜多糖合成相关的酶活性位点,Cps E、Neu A与已知鱼源GBS(Ia和Ib型)和人源GBS(Ia、Ib和II~IX型)相应序列的同源性均达到97%以上,而Cps K与鱼源、人源的序列同源性则分别为56%~100%和27%~100%。在不同培养温度下GBS cps K和neu A基因表达水平的变化与荚膜唾液酸含量的变化一致;在较高温度(28和34°C)下培养的GBS荚膜唾液酸含量及菌株攻毒后罗非鱼的死亡率均随温度的升高而递增,而在22°C下培养的GBS唾液酸含量最高,攻毒后罗非鱼的死亡率却最低。本研究结果表明,GBS Cps K和Neu A在GBS荚膜多糖的唾液酸化中起重要作用,较低温度下GBS荚膜唾液酸的高含量有助于其在宿主体内的潜伏,而较高水温条件下细菌的强致病性可能还与除荚膜唾液酸外的某些重要的毒力因子的表达有关。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 无乳链球菌(GBS) 温度 荚膜多糖合成基因 荚膜唾液酸 致病力
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尼罗罗非鱼IPS-1基因SNP位点的筛选及其与链球菌抗性的关联分析 被引量:1
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作者 高风英 卢迈新 +4 位作者 曹建萌 刘志刚 朱华平 可小丽 杨先乐 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期20-33,共14页
抗病相关SNP标记的筛选是抗病选育的基础与前提。为获得与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)链球菌(Streptococcus agalactiae)抗性性状相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymophisms, SNPs)标记,本研究通过克隆测序或... 抗病相关SNP标记的筛选是抗病选育的基础与前提。为获得与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)链球菌(Streptococcus agalactiae)抗性性状相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymophisms, SNPs)标记,本研究通过克隆测序或PCR产物直接测序法,从20个亲本家系的39尾尼罗罗非鱼的β干扰素启动子刺激物1(interferon-b promoter stimulator 1, IPS-1)基因的测序序列中筛选得到36个SNPs位点。通过snapshot分型法对子代中的链球菌敏感群体(susceptible group, SG)(82尾)和抗性群体(resistance group, RG)(84尾)进行分型,并利用Popgen32软件统计分析IPS-1基因各SNPs 位点在两个群体的多态性和遗传参数,结果显示,多态信息含量(polymorphism information content, PIC)介于0.02-0.37,所检测SNPs位点呈现出低度或中度多态。通过SNP位点与链球菌抗性/敏感性状之间的关联分析,发现位点S8(T-3059C)与链球菌敏感性状显著相关(P<0.05)。利用Haploview 4.2软件分析IPS-1基因中的36个SNPs位点所形成的单倍块和连锁不平衡情况,结果显示,36个位点可构成6个单倍块和22个单倍型;其中单倍块2中的单倍型H2-3(GTTG)和单倍块3中的H3-4(TTDGTTGAGCGCCA)、H3-2(CCDGTTGAGCGCCA)3个单倍型与尼罗罗非鱼链球菌敏感性状显著相关(P<0.05),单倍块3中的单倍型H3-5(TCDGTTGAGCGCCA)则与尼罗罗非鱼链球菌抗性性状显著相关(P<0.05)。上述结果表明,筛选到的尼罗罗非鱼IPS-1基因的1个SNPs位点和4个单倍型可作为抗链球菌病尼罗罗非鱼选育的候选分子标记。该研究可为抗链球菌病尼罗罗非鱼新品系的选育提供了资料基础。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 IPS-1 SNPS 单倍型 无乳链球菌
吉富尼罗罗非鱼Ikaros基因5′调控区的克隆、序列分析及抗无乳链球菌相关SNP位点筛选 预览
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作者 陈昆平 卢迈新 +5 位作者 刘志刚 高风英 曹建萌 张德锋 李庆勇 胡欣欣 《中国水产科学》 CSCD 北大核心 2018年第2期237-250,共14页
为获得尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)抗链球菌病相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)标记,本研究通过染色体步移法克隆了尼罗罗非鱼Ikaros基因5′调控区序列,长度为4178 bp,并使用生物信息学软件对Ikaros基... 为获得尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)抗链球菌病相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)标记,本研究通过染色体步移法克隆了尼罗罗非鱼Ikaros基因5′调控区序列,长度为4178 bp,并使用生物信息学软件对Ikaros基因的启动子和转录调控元件进行预测和分析。利用PCR产物直接测序法从亲本(P0)尼罗罗非鱼Ikaros基因5′调控区中筛查到5个SNPs,分别为SNP1(g.562,G>A)、SNP2(g.217,G>T)、SNP3(g.–53,C>T)、SNP4(g.–220,T>C)和SNP5(g.–579,T>C)。利用Snapshot技术对子一代(F1)尼罗罗非鱼易感群体和抗病群体进行相应SNPs的基因分型,分析两个群体遗传多样性参数,结果显示多态信息含量(polymorphism information content,PIC)值在0.0872~0.3747之间,表明Ikaros基因5′调控区中所有SNPs的多态性均较低。Ikaros基因5′调控区SNPs与抗链球菌病性状关联分析结果表明,SNP2、SNP3、SNP4和SNP5的基因型频率和等位基因频率在易感群体和抗病群体中存在显著差异(P<0.05)。连锁不平衡分析结果显示Ikaros基因5′调控区SNPs可形成1个单倍块和5种单倍型,其中GGCTT单倍型与抗病性显著相关(P<0.05),GGTCT和GTCCC单倍型与易感性显著相关(P<0.05)。此外,还发现SNP2和SNP5处于完全连锁状态(r2=1,LOD=57.25,D′=1),可作为罗非鱼抗链球菌病遗传育种的标签SNP。综上所述,在Ikaros基因5?调控区筛选到4个抗链球菌病相关SNPs和1个单倍型(GGCTT),均可作为尼罗罗非鱼分子育种的候选分子标记。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 Ikaros基因5′调控区 单核苷酸多态性 无乳链球菌
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尼罗罗非鱼NOD1基因SNP位点和单倍型与抗无乳链球菌感染的关联分析
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作者 高风英 卢迈新 +4 位作者 曹建萌 刘志刚 王淼 可小丽 杨先乐 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期1949-1961,共13页
核苷酸结合和寡聚化结构域1 (nucleotide binding and oligomerization domain 1, NOD1)基因在鱼类先天免疫中发挥重要作用。为获得与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)抗性性状相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymo... 核苷酸结合和寡聚化结构域1 (nucleotide binding and oligomerization domain 1, NOD1)基因在鱼类先天免疫中发挥重要作用。为获得与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)抗性性状相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymophisms, SNPs)标记,本研究克隆了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)NOD1基因组序列(GenBank No. MF479261),并通过克隆测序或PCR产物直接测序法,从20个亲本家系的39尾尼罗罗非鱼的NOD1基因的测序序列中筛选得到44个SNPs位点。通过SNaPshot分型法对子代中的无乳链球菌敏感群体(susceptible group, SG)(83尾)和抗性群体(resistance group, RG)(83尾)进行分型,并利用Popgen 32软件统计分析NOD1基因各SNPs位点在两个群体的多态性和遗传参数。结果显示,对44个SNPs位点中的24个位点进行了成功分型。24个位点的多态信息含量(polymorphism information content, PIC)介于0.09~0.37,所检测SNPs位点呈现出低度或中度多态。通过SNP位点与无乳链球菌抗性/敏感性状之间的关联分析,发现位点SNP5 (G-2284C)与无乳链球菌易感性状显著相关(P<0.05)、SNP13 (G-8956C)与无乳链球菌抗性性状显著相关(P<0.05),SNP12 (G-8955C)与无乳链球菌抗性/敏感性状均显著相关。利用Haploview 4.2软件分析NOD1基因中的24个SNPs位点所形成的单倍块和连锁不平衡情况,结果显示24个位点可构成5个单倍块和16个单倍型,其中单倍块4中的单倍型H4-2(AC)与尼罗罗非鱼无乳链球菌抗性性状显著相关(P<0.05)。上述结果表明,尼罗罗非鱼NOD1基因的3个SNPs位点SNP5、SNP13和SNP12以及单倍型H4-2(AC)可作为分子标记辅助选育的候选分子标记。该研究可为抗链球菌尼罗罗非鱼新品系的选育提供资料基础。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 核苷酸结合和寡聚化结构域1基因(NOD1) SNPs 单倍型 无乳链球菌
翘嘴鳜主要形态性状与体重的相关性及雌雄形态性状差异分析 预览 被引量:5
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作者 董浚键 孙成飞 +4 位作者 田园园 曾庆凯 师红亚 卢迈新 叶星 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第2期76-84,共9页
为了解翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)主要形态性状与体重的相关性,以及雌雄形态性状的差异,本研究测量了同塘养殖的2837尾翘嘴鳜的7个生长相关性状,包括全长、体高、头长、眼径、尾柄全长和尾柄高与体重。采用相关分析、通径分析和多元线... 为了解翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)主要形态性状与体重的相关性,以及雌雄形态性状的差异,本研究测量了同塘养殖的2837尾翘嘴鳜的7个生长相关性状,包括全长、体高、头长、眼径、尾柄全长和尾柄高与体重。采用相关分析、通径分析和多元线性回归分析方法,分析各形态性状与体重的相关关系,并从中随机取雌雄个体各150尾建立多元回归方程,并另随机取120尾进行雌雄判别验证。结果显示,在各形态性状中,全长、体高与体重的相关系数最大。通过建立回归方程组并进行偏回归系数检验,发现头长和尾柄高与体重的相关性不显著,故剔除这2个性状后作进一步分析。通径分析显示,全长和体高对体重的直接作用最大,且大于间接作用;单性状及两两性状协同对体重的决定系数显示,全长及体高对体重的单独决定程度最高,且二者的协同作用也最大;4个性状对体重的决定系数总和(Σd)达0.896,说明这4个性状与体重有较大的相关性,拟合的多元回归方程具有较大的参考意义。建立雌雄鱼判别回归方程并分析验证显示,对于体重小于200 g的个体其雌雄性别判别的准确率较高。本研究可为翘嘴鳜生长性状选择评价指标的确定提供参考,将有助于提高选育种效率。 展开更多
关键词 翘嘴鳜 形态性状 体重 相关关系 多元回归 通径分析
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罗非鱼"粤闽1号"及其繁育群体的遗传多样性和遗传关系分析 预览
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作者 刘志刚 卢迈新 +1 位作者 曹建萌 高风英 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第6期31-41,共11页
罗非鱼“粤闽1号”是用尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)和奥利亚罗非鱼(0.aureus)培育的全雄罗非鱼新品种。采用同工酶电泳技术和线粒体DNA控制区序列分析方法,对罗非鱼“粤闽1号”及其繁育群体的遗传多样性、遗传结构及群体之间的遗... 罗非鱼“粤闽1号”是用尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)和奥利亚罗非鱼(0.aureus)培育的全雄罗非鱼新品种。采用同工酶电泳技术和线粒体DNA控制区序列分析方法,对罗非鱼“粤闽1号”及其繁育群体的遗传多样性、遗传结构及群体之间的遗传关系进行研究。同工酶电泳结果显示,酯酶(EsT)和乳酸脱氢酶(LDH)的酶谱具有组织和群体特异性。肌肉和脾脏中的EST表达量极低,而肝脏中的EST表达量较高,LDH在3种组织中均有较高表达,但酶谱存在差异。在罗非鱼“粤闽1号”及其繁育群体中,共检测到10条EST酶带和5条LDH酶带,多态性位点比例(P)为12.50%~71.43%,平均观测杂合度(H0)为0.0417~0.6143,Hardy—Weinberg遗传偏离指数(D)为一0.2347~0.9072。线粒体DNA控制区序列分析结果显示,mtDNAD.100p区的碱基组成无显著差异,均呈现出‘A+T碱基偏向性(63.39%)。在罗非鱼“粤闽1号”及其繁育群体中,共发现20种单倍型,核苷酸多样性指数(Pi)为0-0.0519,奥尼罗非鱼雌鱼(WYl)、尼罗罗非鱼雌鱼(XX)、尼罗罗非鱼雄鱼(XY)和罗非鱼“粤闽1号”(XY2)群体的只值(0.0440~0.0519)明显高于超雄尼罗罗非鱼(YYl)、超雄奥尼罗非(YY2)和奥利亚罗非鱼雌鱼(WZ)群体的Pi值(0~0.0009)。各群体之间的遗传分化指数(FST)为一0.0115-0.9963,XY2与WYl群体之间、XX与XY群体之间以及WZ和YY2群体之间的遗传分化不显著(FST<0.05,P>0.05)。XY2群体与尼罗罗非鱼群体(XX群体和XY群体)和奥利亚罗非鱼群体(WZ群体)之间的平均遗传距离分别为0.0639和0.0695。在NJ系统进化树中,XX、XY、YYl和XY2群体聚为一支,WYl、WZ和YY2群体聚为另一支。本研究揭示了罗非鱼“粤闽1号”的生化和分子遗传特征,为其种质鉴定、繁育群体的构建和优良性状的稳定遗传提供理论基础。 展开更多
关键词 罗非鱼“粤闽1号” 同工酶 线粒体DNA控制区 遗传多样性 遗传关系
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不同水温下无乳链球菌在尼罗罗非鱼体内的动态分布及其消除规律 预览
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作者 郭富强 张德锋 +3 位作者 曹建萌 刘志刚 可小丽 卢迈新 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第6期81-88,共8页
本研究以腹腔注射无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,WC1535菌株)后的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)为研究对象,研究不同水温下无乳链球菌在尼罗罗非鱼体内的动态分布及消除规律。首先,分析25℃、29℃和33℃3个实... 本研究以腹腔注射无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,WC1535菌株)后的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)为研究对象,研究不同水温下无乳链球菌在尼罗罗非鱼体内的动态分布及消除规律。首先,分析25℃、29℃和33℃3个实验组罗非鱼的感染累积死亡率;其次,对3个实验组罗非鱼进行无乳链球菌的体外分离、培养和计数;然后,分析感染后不同实验组罗非鱼脑、肝脏、脾脏和肾脏组织中无乳链球菌的浓度。结果显示,随着水温的升高罗非鱼的累积死亡率也随之升高,25℃、29℃和33℃组的累积死亡率分别为6.67%、25.56%和78.90%。菌落统计结果显示,随着水温的升高,无乳链球菌在罗非鱼体内的增殖速度加快,同时,单位质量组织(脑、肝脏、脾脏和肾脏)中无乳链球菌的最大载菌量也随之升高。本研究还发现,无乳链球菌在罗非鱼脾脏中的浓度最高,在肾脏中的存活时间最长。综上可知,尼罗罗非鱼感染无乳链球菌后,体内各组织中链球菌的增殖、消除速度均与水温密切相关。本研究为研究无乳链球菌的致病机制奠定基础,也为通过合理调控水温及施药等措施防治尼罗罗非鱼链球菌病的暴发提供科学依据。 展开更多
关键词 温度 尼罗罗非鱼 无乳链球菌 动态分布 消除规律
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中国罗非鱼主养区无乳链球菌流行菌株的菌毛岛屿及其血清型分型 预览
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作者 袁伟 张德锋 +3 位作者 可小丽 刘志刚 高风英 卢迈新 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期490-494,共5页
为了解近年来中国罗非鱼主养区无乳链球菌流行特征,本研究通过PCR扩增和测序等方法对2007年~2016年分离纯化得到的263株罗非鱼无乳链球菌进行菌毛岛屿和血清型分型分析。菌毛岛屿分型结果显示:263株罗非鱼无乳链球菌可分为两种菌毛岛... 为了解近年来中国罗非鱼主养区无乳链球菌流行特征,本研究通过PCR扩增和测序等方法对2007年~2016年分离纯化得到的263株罗非鱼无乳链球菌进行菌毛岛屿和血清型分型分析。菌毛岛屿分型结果显示:263株罗非鱼无乳链球菌可分为两种菌毛岛屿类型:PI-2b型(40株)和PI-1+PI-2b型(218株),其中PI-1+PI-2b型无乳链球菌是主要的流行菌株,占总数的82.9%。其余5株无乳链球菌的菌毛岛屿基因缺失,不含菌毛岛屿。分子血清型分析结果显示,所有的无乳链球菌分为两种血清型:Ia型258株(98.1%)和Ib型5株(1.9%)。所有Ib型无乳链球菌的菌毛岛屿均有缺失,仅含有2b-AP1基因。进一步分析表明,Ia-(PI-2b)型无乳链球菌是2011年之前主要的流行株型,而Ia-(PI-1+PI-2b)型无乳链球菌为近6年来广泛流行的株型。Ia型是我国罗非鱼无乳链球菌最流行的分子血清型,同时PI-2b是最重要的菌毛岛屿(98.1%)。本研究为罗非鱼无乳链球菌的流行病学和疾病防控提供调查依据。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 菌毛岛屿 分子血清型
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尼罗罗非鱼β2m基因SNP位点和单倍型与无乳链球菌抗性的关联分析 预览
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作者 张栋 高风英 +4 位作者 卢迈新 曹建萌 刘志刚 可小丽 王淼 《水生生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期903-912,共10页
β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)作为MHCⅠ类分子的亚基,在鱼类的免疫系统中发挥重要作用。实验采用直接测序法从P0代尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的β2m基因组序列中筛选到30个SNPs,其中1个SNP位于5?UTR,16个SNPs位于外显... β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)作为MHCⅠ类分子的亚基,在鱼类的免疫系统中发挥重要作用。实验采用直接测序法从P0代尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的β2m基因组序列中筛选到30个SNPs,其中1个SNP位于5?UTR,16个SNPs位于外显子区域(15个非同义突变位点,1个同义突变位点),9个SNPs位于内含子区域,4个SNPs位于3?UTR。利用snapshot分型法对F1代的102尾易感群体和102尾抗病群体进行基因分型,并通过Popgen32和PIC-CALC软件统计分析尼罗罗非鱼β2m基因序列的SNPs的He、Ho、Ne和PIC等遗传参数,表明易感群体中7个SNPs属于中度多态水平(0.25<PIC<0.5),抗病群体中25个SNPs属于中度多态水平(0.25<PIC<0.5)。采用SPSS 23.0软件分析了30个SNPs在F1代2个群体中的基因型频率和等位基因频率,分析其与链球菌抗性或易感性状之间的相关性。结果表明:24个SNPs的基因型和等位基因频率与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)抗性/易感性状显著相关(P<0.05)。通过连锁不平衡分析发现30个SNPs构成4个单倍块和14种单倍型。其中,4个单倍型与无乳链球菌抗性性状显著相关(P<0.05),4个单倍型与易感性状显著相关(P<0.05)。标签SNP分析发现,单倍块2中的4个SNPs和单倍块3中的13个SNPs彼此之间高度连锁(r2>0.9),这意味着我们在β2m基因中发现2个htSNPs。研究筛选到的与链球菌抗性/易感性状相关的SNP位点及单倍型具有辅助尼罗罗非鱼抗链球菌病品种选育的潜力。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 Β2M SNPS 无乳链球菌 连锁不平衡 单倍型 标签SNPs
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