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临床路径下的案例教学模式开展于血液学教学中的价值研究 预览
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作者 《科技视界》 2019年第14期181-182,共2页
目的:探讨临床路径下的案例教学模式开展于血液学教学中的价值研究。方法:选取我院64名临床医学生,随机分为观察组与对照组各32例,对比教学效果。结果:观察组各项测评成绩均高于对照组(P<0.05);观察组各项满意度均高于对照组(P<0.... 目的:探讨临床路径下的案例教学模式开展于血液学教学中的价值研究。方法:选取我院64名临床医学生,随机分为观察组与对照组各32例,对比教学效果。结果:观察组各项测评成绩均高于对照组(P<0.05);观察组各项满意度均高于对照组(P<0.05)。结论:临床路径下的案例教学模式开展于血液学教学中的价值显著,值得推广。 展开更多
关键词 临床路径 案例教学 血液学
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携带CUEDC1基因的慢病毒载体的构建及其对MOLT-4细胞株增殖和集落形成能力的影响
2
作者 庄万传 +1 位作者 孟凡静 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期1257-1262,共6页
目的:构建过表达人CUEDC1的慢病毒载体pCDH-CUEDC1,利用慢病毒介导的感染获得稳定表达重组质粒的MOLT-4细胞,分析过表达CUEDC1对MOLT-4细胞增殖和集落形成能力的影响。方法:利用RT-PCR的方法获得CUEDC1全长片段,将CUEDC1DNA片段酶切回... 目的:构建过表达人CUEDC1的慢病毒载体pCDH-CUEDC1,利用慢病毒介导的感染获得稳定表达重组质粒的MOLT-4细胞,分析过表达CUEDC1对MOLT-4细胞增殖和集落形成能力的影响。方法:利用RT-PCR的方法获得CUEDC1全长片段,将CUEDC1DNA片段酶切回收后克隆至慢病毒转移质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro(以下简称pCDH),获得pCDH-CUEDC1慢病毒重组质粒。经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒并感染人白血病细胞系MOLT-4,通过流式细胞仪分选获得稳定表达的白血病细胞系,应用real-timePCR和Westernblot方法分别检测稳定转染细胞系的CUEDC1mRNA和CUEDC1的表达。应用CCK-8法和集落形成试验测定CUEDC1对MOLT-4细胞增殖和集落形成能力的影响。结果:经限制性内切酶检测及基因测序证实成功构建了携带CUEDC1的重组慢病毒载体;病毒感染MOLT-4细胞后经流式细胞仪分选获得GFP阳性细胞。实时定量PCR及Westernblot证实,病毒感染后CUEDC1的mRNA和蛋白表达上调;CCK-8法及集落形成试验显示,过表达CUEDC1促进MOLT-4细胞的增殖和集落形成能力,与对照组相比,均有统计学差异(P<0.05)。结论:成功构建了表达CUEDC1的慢病毒载体,CUEDC1可以促进MOLT-4细胞的增殖和集落形成能力。 展开更多
关键词 CUEDC1 慢病毒载体 白血病 载体构建 MOLT-4细胞
一种新的高亲和力的人源化抗CD19CAR-T细胞的构建及体外功能验证 被引量:1
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作者 张常晓 程海 +5 位作者 韩笑 齐昆明 陈伟 曹江 徐开林 《中华血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期465-470,共6页
目的构建人源化抗CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T),通过体外实验验证其杀伤白血病细胞的能力。方法将人CD19的鼠源抗体(FMC63)进行了人源化改造,获得高亲和力的人源化CD19抗体;构建携带人源化CD19CAR慢病毒载体,感染T细胞获得人源... 目的构建人源化抗CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T),通过体外实验验证其杀伤白血病细胞的能力。方法将人CD19的鼠源抗体(FMC63)进行了人源化改造,获得高亲和力的人源化CD19抗体;构建携带人源化CD19CAR慢病毒载体,感染T细胞获得人源化CD19CAR-T细胞(hCART19);按不同效靶比将效应细胞[hCART19、未转染的T细胞(阴性组)及对照病毒转染的T细胞(对照组)]及靶细胞(CHO-K1-CD19及Raji细胞)混合培养,LDH释放实验及ELISA法检测hCART19杀伤白血病细胞的能力及细胞因子释放水平;白血病小鼠模型检测hCART19的杀瘤效果。结果LDH释放实验证实随着效靶比的不断增加,对靶细胞的杀伤率逐渐增加,当效靶比为10:1时hCART19组的杀伤率最大,在Raji细胞中为(87.56±1.99)%,明显高于阴性组[(19.31±1.16)%]及对照组[(21.35±1.19)%](P值均〈0.001)。ELISA法检测显示Raji细胞作为靶细胞时,hCART19组IL-2水平[(10.56±0.88)pg/ml]及IFN-γ[(199.02±12.66)pg/ml]较阴性组[IL-2:(3.55±0.26)pg/ml;IFN-γ:(37.63±0.85)pg/ml]及对照组[IL-2:(2.92±0.32)pg/ml;IFN-γ:(52.07±3.33)pg/ml]明显升高(P值均〈0.001)。以上实验在CHO-K1-CD19细胞作为靶细胞时也出现了相似的结果。给予白血病小鼠模型尾静脉分别注射hCART19、对照病毒转染的T细胞及未转染的T细胞,结果显示hCART19组小鼠存活时间〉40d,另外两组小鼠在20~30d全部死亡,差异有统计学意义(χ2=11.73,P=0.008)。结论成功构建了具有抗白血病活性的人源化CD19CAR-T细胞,为下一步的临床研究奠定了基础。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体T细胞 CD19 人源化抗体 白血病
OCT4A基因对K562细胞生物学活性的影响
4
作者 孟凡静 曹江 +5 位作者 陈翀 宋旭光 陈伟 徐开林 庄万传 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期330-335,共6页
目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-O... 目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度。实验分为空白对照、p LVX空质粒、p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA和非特异sh RNA共5组。Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达。CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线。采用Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-x L和BAX m RNA表达变化。结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA。Western blot证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达。CCK-8法检测显示,p LVX-OCT4A-Zs Green1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而p LVX-OCT4A sh RNA组K562细胞增殖活性显著降低(P〈0.05)。感染后p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)%和(7.25±0.57)%(P〈0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化。OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P〉0.05),而BCL-x L基因表达则明显升高(P〈0.01)。结论:成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1及PLB-OCT4A sh RNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达。OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-x L基因上调有关。 展开更多
关键词 OCT4A基因 K562细胞 白血病 细胞凋亡
一种改良的Ph~+急性淋巴细胞白血病小鼠模型快速建立方法
5
作者 祁娜 王雪 +4 位作者 闫志凌 王林 陈翀 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期341-346,共6页
目的:改良建立Ph~+急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠模型的方法,为Ph~+ALL提供更加便捷的研究工具。方法:使用Mig190逆转录病毒转染BABL/c小鼠前体B细胞,输注同系小鼠,建立Ph~+ALL模型;应用外周血涂片,流式细胞术鉴定免疫表型,RT-PCR... 目的:改良建立Ph~+急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠模型的方法,为Ph~+ALL提供更加便捷的研究工具。方法:使用Mig190逆转录病毒转染BABL/c小鼠前体B细胞,输注同系小鼠,建立Ph~+ALL模型;应用外周血涂片,流式细胞术鉴定免疫表型,RT-PCR和Western blot方法鉴定BCR-ABL转录和蛋白表达,并分离发病小鼠的白血病细胞进行再次输注。结果:Mig190逆转录病毒转染后小鼠发生急性淋巴细胞白血病,在血涂片观察到原始和幼稚淋巴细胞,免疫分型示白血病细胞CD19+;RT-PCR和Western blot均检测到BCR-ABL,符合Ph~+ALL的免疫表型和分子生物学特征;再次输注未经照射的同系小鼠能迅速发生B-ALL。结论:改良建立的Ph~+ALL小鼠模型,能够为研究Ph~+ALL提供更简便而有效的工具。 展开更多
关键词 Ph阳性急性淋巴细胞白血病 小鼠模型 逆转录病毒载体 前体B细胞
PSMB5对多发性骨髓瘤细胞增殖和硼替佐米耐药的影响及其机制研究
6
作者 莫慧敏 +4 位作者 韩丹阳 刘蕊 马训 周萍 徐开林 《中华血液学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1053-1057,共5页
目的探讨蛋白酶体D5亚单位(PSMB5)基因对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖和硼替佐米(BTZ)耐药的影响及其机制。方法以MM细胞株RPMI8226细胞和BTZ耐药细胞株RPMI8226/BTZ100(简称BTZ100)细胞为研究对象,采用慢病毒转染的方法建立过... 目的探讨蛋白酶体D5亚单位(PSMB5)基因对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖和硼替佐米(BTZ)耐药的影响及其机制。方法以MM细胞株RPMI8226细胞和BTZ耐药细胞株RPMI8226/BTZ100(简称BTZ100)细胞为研究对象,采用慢病毒转染的方法建立过表达和下调PSMB5表达的MM稳转细胞系;CCK8法检测PSMB5对MM细胞增殖和BTZ耐药性的影响;流式细胞术检测PSMB5对细胞凋亡的影响;Westernblot法检测PSMB5对凋亡相关基因Bax、Bcl-2、P—Akt和Cleavedcaspase.3表达的影响。结果①成功构建稳定过表达和下调PSMB5表达的RPMI8226和BTZ100细胞系。②PSMB5表达与RPMI8226和BTZ100细胞增殖呈正相关(P值均〈0.05)。③下调PSMB5表达后,在相同浓度的BTZ作用下RPMI8226细胞活力较对照组降低[作用24h时IC50分别为(7.01±0.47)、(9.64±0.55)nmol/L,t=6.289,P=0.003],过表达后的细胞活力较对照组升高[IC50分别为(10.99±0.58)、(9.51±0.37)nmol/L,t=3.724,P=0.020]。④PSMB5表达可促进BTZ诱导的RPMI8226、BTZ100细胞凋亡,与对照组比较,差异均有统计学意义(P值均〈0.05)。⑤下调PSMB5表达可上调Bax和Cleavedcaspase-3表达,降低Bcl-2和p-Akt表达,而过表达则相反。结论下调PSMB5表达可通过激活凋亡信号通路促进MM细胞凋亡,增强MM细胞对BTZ的敏感性。提示PSMB5可能是治疗MM的潜在靶点。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 细胞增殖 抗药性 肿瘤 蛋白酶体B5亚单位 硼替佐米
长链非编码RNA在肿瘤发生及发展中的作用机制 被引量:1
7
作者 仝玉雪 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2017年第4期314-317,共4页
长链非编码RNA(1ncRNA)是一类转录本长度〉200个核苷酸的非编码RNA(ncRNA),其在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。IncRNA具有多种生物学功能,可以通过诱饵分子、支架分子和向导分子等形式,在表观遗传学水平、转录水平及转录后水... 长链非编码RNA(1ncRNA)是一类转录本长度〉200个核苷酸的非编码RNA(ncRNA),其在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。IncRNA具有多种生物学功能,可以通过诱饵分子、支架分子和向导分子等形式,在表观遗传学水平、转录水平及转录后水平,调控蛋白质编码基因的表达。IncRNA与肿瘤细胞生长和凋亡、侵袭和转移等生物学行为密切相关。进一步阐明IncRNA在肿瘤发生、发展过程中的作用机制,有望为研究者开发肿瘤诊断和治疗的新方法提供思路。笔者拟就IncRNA调控基因表达的作用机制,及其在肿瘤诊断及治疗中的作用进行综述。 展开更多
关键词 RNA 长链非编码 基因表达调控 肿瘤
PTPN11对急性髓系白血病细胞株生物学行为的影响 预览
8
作者 岳俊帅 +1 位作者 曾令宇 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期963-968,共6页
目的:检测PTPN11在急性髓系白血病(AML)细胞株中的表达水平,探讨过表达PTPN11对AML细胞株生物学行为的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应、实时定量PCR和Western blot等方法检测5种AML细胞株(HEL、U937、K562、KG-1、HL-60)中PTPN11的... 目的:检测PTPN11在急性髓系白血病(AML)细胞株中的表达水平,探讨过表达PTPN11对AML细胞株生物学行为的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应、实时定量PCR和Western blot等方法检测5种AML细胞株(HEL、U937、K562、KG-1、HL-60)中PTPN11的表达水平;应用RT-PCR技术扩增PTPN11全长片段,通过酶切、连接,构建PCDH-PTPN11重组慢病毒载体;通过三质粒系统进行慢病毒包装,获得过表达PTPN11(Lv-PTPN11)及空载体(Lv-Ctrl)的慢病毒颗粒,感染HEL及U937细胞;应用Q-PCR及Western blot检测病毒感染后PTPN11的表达水平。通过CCK-8及Annexin V/7-AAD试剂盒检测过表达PTPN11对AML细胞增殖及凋亡的影响。结果:5种AML细胞株均表达PTPN11,限制性内切酶酶切和基因测序证实成功构建了携带过表达PTPN11的慢病毒载体,Q-PCR及Western blot均证实慢病毒转染细胞后可有效上调PTPN11表达,CCK-8法检测细胞增殖显示Lv-PTPN11组细胞OD值较对照组增高(P<0.05),Annexin V/7-AAD检测显示Lv-CUEDC1组凋亡细胞比例较对照组减少(P<0.05)。结论:5种急性髓系白血病细胞株均表达PTPN11基因,成功构建了过表达PTPN11的慢病毒载体,获得稳定上调PTPN11表达的HEL及U937细胞株;过表达PTPN11可促进AML细胞增殖,抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 PTPN11 急性髓系白血病 白血病细胞 生物学行为
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BRD4拮抗剂GSK525762A对SUP-B15细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制 预览
9
作者 王雪 祁娜 +5 位作者 马莎 闫志凌 王林 陈翀 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1654-1658,共5页
目的:探讨BRD4拮抗剂GSK525762A对费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病SUP-B15细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:选择不同浓度的GSK525762A处理SUP-B15细胞,采用CCK-8法检测细胞活力并绘制增殖抑制曲线,应用Annexin V/7-AAD双... 目的:探讨BRD4拮抗剂GSK525762A对费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病SUP-B15细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:选择不同浓度的GSK525762A处理SUP-B15细胞,采用CCK-8法检测细胞活力并绘制增殖抑制曲线,应用Annexin V/7-AAD双染流式细胞术检测细胞存活与凋亡,定量PCR检测C-MYC、CDK6、BCL2的转录变化。结果:GSK525762A能显著抑制SUP-B15细胞增殖,且具有量-效关系和时-效关系。GSK525762A能够诱导SUP-B15细胞凋亡;GSK525762A能够使抑凋亡基因C-MYC、CDK6、BCL2表达减低。结论:GSK525762A能抑制SUP-B15细胞增殖并诱导其凋亡,其机制主要与下调C-MYC、CDK6、BCL2转录有关。 展开更多
关键词 BRD4 GSK525762A 急性淋巴细胞白血病 SUP-B15细胞
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费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病小鼠模型的建立和鉴定 预览 被引量:2
10
作者 王雪 祁娜 +6 位作者 马莎 宋旭光 闫志凌 王林 陈翀 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1324-1328,共5页
目的:建立Ph+急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠模型,为Ph+ALL研究提供工具。方法:用M ig190逆转录病毒转染BABL/c小鼠骨髓细胞产生CML样小鼠,分选CML样小鼠BCR-ABL+B细胞,输注同系小鼠建立Ph+ALL模型;应用流式细胞术鉴定免疫表型,RT... 目的:建立Ph+急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠模型,为Ph+ALL研究提供工具。方法:用M ig190逆转录病毒转染BABL/c小鼠骨髓细胞产生CML样小鼠,分选CML样小鼠BCR-ABL+B细胞,输注同系小鼠建立Ph+ALL模型;应用流式细胞术鉴定免疫表型,RT-PCR和Western blot鉴定BCR-ABL转录和蛋白表达。结果:M ig190逆转录病毒转染后小鼠迅速发生CM L样病变,输注来自CM L样小鼠的BCR-ABL+B细胞后受鼠均发生急性淋巴细胞白血病,免疫分型显示白血病细胞CD19+;RT-PCR和Western Blot均检测到BCR-ABL,符合Ph+ALL的免疫表型和分子生物学特征。结论:成功开发了一种新型Ph+ALL小鼠模型的建立方法,能够为研究Ph+ALL提供一有力工具。 展开更多
关键词 Ph阳性急性淋巴细胞白血病 BCR-ABL 白血病动物模型 逆转录病毒载体
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ADAM10抑制剂GI254023X对Jurkat细胞的增殖和凋亡作用及机制研究 预览
11
作者 马莎 徐杰 +6 位作者 王雪 曹江 李振宇 曾令宇 陈翀 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期950-955,共6页
目的:探讨ADAM10抑制剂GI254023X对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:选择不同浓度的GI254023X处理Jurkat细胞,采用CCK-8法检测并绘制增殖抑制曲线,Annexin V/7-AAD双染检测细胞存活与凋亡,Western b... 目的:探讨ADAM10抑制剂GI254023X对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:选择不同浓度的GI254023X处理Jurkat细胞,采用CCK-8法检测并绘制增殖抑制曲线,Annexin V/7-AAD双染检测细胞存活与凋亡,Western blot检测Notch1蛋白的切割,定量PCR检测抑凋亡基因BCL-2、MCL-1、BCL-xl及Notch1靶基因Hes-1的转录变化。结果:GI254023X能明显抑制Jurkat细胞增殖,且呈量-效关系,但无明确的时-效关系。GI254023X能够诱导Jurkat细胞凋亡。Western blot检测结果显示,Cleaved Notch1在GI254023X作用后水平下降,而Notch1水平升高;GI254023X能够使抑凋亡基因MCL-1和Hes-1表达下调,对BCL-2和BCL-xl转录无明显影响。结论:GI254023X能抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡,其机制主要与抑制Notch1活化和下调MCL-1转录有关。 展开更多
关键词 GI254023X 急性T淋巴细胞白血病 JURKAT细胞 Notch1 解聚素金属基质蛋白酶10
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混合谱系白血病基因部分串联重复在急性髓细胞白血病中的研究进展 被引量:1
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作者 卞梅茹 陈伟 +1 位作者 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2015年第3期236-239,共4页
混合谱系白血病(MLL)基因位于第11号染色体长臂2区3带(11q23),其编码产物为具有3 969个氨基酸残基的核蛋白.MLL蛋白最具特征性的功能为通过调节Hox基因表达水平决定细胞存活.急性白血病可发生MLL基因重排,其中MLL基因部分串联重复(... 混合谱系白血病(MLL)基因位于第11号染色体长臂2区3带(11q23),其编码产物为具有3 969个氨基酸残基的核蛋白.MLL蛋白最具特征性的功能为通过调节Hox基因表达水平决定细胞存活.急性白血病可发生MLL基因重排,其中MLL基因部分串联重复(MLL-PTD)为MLL基因重排中最为常见的形式之一,主要存在于核型正常及具有第11号染色体三体的急性髓细胞白血病(AML)中.作者拟就MLL基因结构、功能、MLL-PTD在AML发生、发展中的作用机制,及其可作为AML潜在治疗靶点等方面进行综述. 展开更多
关键词 混合谱系白血病蛋白质 串联重复序列 白血病 髓样 急性
CUE结构域包含蛋白2在白血病及实体肿瘤发生、发展中作用机制的研究进展
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作者 刘洋 齐昆明 +1 位作者 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2015年第3期240-243,共4页
CUE结构域包含蛋白2(CUEDC2)是新近发现的含CUE结构域的泛素结合蛋白,在细胞周期调控、肿瘤形成、炎症及应激反应中均起着重要作用.研究表明,CUEDC2可介导蛋白质泛素化降解,与白血病及实体肿瘤的发生、发展和耐药密切相关.CUEDC2可促... CUE结构域包含蛋白2(CUEDC2)是新近发现的含CUE结构域的泛素结合蛋白,在细胞周期调控、肿瘤形成、炎症及应激反应中均起着重要作用.研究表明,CUEDC2可介导蛋白质泛素化降解,与白血病及实体肿瘤的发生、发展和耐药密切相关.CUEDC2可促进纺锤体检查点(SAC)失活,导致有丝分裂过程中染色体不稳定,进而参与白血病和实体肿瘤发病进程.然而,CUEDC2在白血病及实体肿瘤发生、发展中,是具有抑制作用还是促进作用,尚存在争议.笔者拟就近年来CUEDC2在白血病与实体肿瘤发生、发展中作用机制的研究进展进行综述. 展开更多
关键词 CUE结构域包含蛋白2 白血病 核转录因子-ΚB JANUS激酶 细胞因子信号转导蛋白抑制因子
GSK525762A对KU812细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制 预览 被引量:1
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作者 徐杰 王力 +6 位作者 宋旭光 赵恺 曾令宇 韩正祥 陈翀 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1239-1244,共6页
本研究旨在观察4型含Bromo结构域蛋白(bromodomain-containing protein 4,BRD4)抑制剂GSK525762A对KU812细胞增殖及凋亡的影响及其机制.用GSK525762A 100、250、500、1000、2500和5000 nmol/L处理KU812细胞48和72 h,CCK-8法检测其对... 本研究旨在观察4型含Bromo结构域蛋白(bromodomain-containing protein 4,BRD4)抑制剂GSK525762A对KU812细胞增殖及凋亡的影响及其机制.用GSK525762A 100、250、500、1000、2500和5000 nmol/L处理KU812细胞48和72 h,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;GSK525762A 1.0、2.5和5.0 μmol/L处理72 h,利用流式细胞术检测其对KU812细胞的凋亡诱导作用.将KU812细胞经DMSO和2.5 μmol/L的GSK525762A处理后,利用实时荧光定量PCR观察c-Myc、BCL-2、CDK6、BCL-xL、BAK和BAX基因的mRNA表达水平.结果表明,GSK525762A能显著抑制KU812细胞的增殖,且抑制作用存在量-效关系(r =0.970)和时-效关系(r=0.956);GSK525762A能促进KU812细胞的凋亡;GSK525762A处理后促增殖基因c-Myc、CDK6和抗凋亡基因BCL-2和BCL-xL的mRNA较对照组降低,而促凋亡基因BAK和BAX的转录水平较对照组升高.结论:GSK525762A显著抑制KU812细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与下调c-Myc、BCL-2、CDK6、BCL-xL的表达和上调BAK、BAX的表达有关. 展开更多
关键词 4型含Bromo结构域蛋白 GSK525762A KU812细胞 慢性粒细胞白血病急变
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过表达CXCR4基因的小鼠骨髓间充质干细胞建立及其功能评价 预览 被引量:1
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作者 陈伟 李淼 +6 位作者 苏贵珍 曹江 桑威 赵恺 朱峰 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1391-1395,共5页
本研究旨在建立稳定表达小鼠CXC型趋化因子受体4(CXC chemokine receptor type 4,CXCR4)基因的小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)并研究其功能.采用脂质体转染法将重组慢病毒表达载体LV-CXCR4-IRES-EGFP与包装质粒p... 本研究旨在建立稳定表达小鼠CXC型趋化因子受体4(CXC chemokine receptor type 4,CXCR4)基因的小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)并研究其功能.采用脂质体转染法将重组慢病毒表达载体LV-CXCR4-IRES-EGFP与包装质粒pMD2.G及包膜蛋白质粒pSPAX2共转染293FT包装细胞,应用超速离心法浓缩病毒颗粒;通过调整感染复数(MOI)、感染时间、促进病毒吸附等方法优化慢病毒感染小鼠MSC的条件,建立过表达CXCR4的MSC,采用荧光显微镜观察EGFP表达,流式细胞术检测细胞表面CXCR4表达,绘制细胞生长曲线检测增殖能力,Annexin-V和7-AAD双染后应用流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测迁移能力.结果发现,通过优化感染条件,重组慢病毒载体对MSC可获得较高感染效率,感染后72 h在荧光显微镜下可观察到较强EGFP表达,流式细胞术检测到MSC表面CXCR4的表达明显增加.细胞生长曲线和凋亡实验显示,过表达CXCR4不会显著影响MSC增殖和凋亡.Transwell实验显示过表达CXCR4可增强MSC迁移能力.结论:慢病毒载体可介导外源性基因CXCR4在小鼠MSC高效表达. 展开更多
关键词 慢病毒载体 间充质干细胞 CXCR4
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神经型钙黏蛋白分子在多发性骨髓瘤患者中的表达 被引量:2
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作者 王瑞 李振宇 +7 位作者 李德鹏 闫志凌 张之尧 陈丽丽 陈翀 潘秀英 徐开林 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2014年第8期456-459,464共5页
目的 探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)分子在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达及其临床意义.方法 收集54例初治MM患者及20名健康人骨髓单个核细胞,应用实时荧光定量PCR法检测N-cadherin mRNA表达,Western blot法测定其蛋白表达.结果 M... 目的 探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)分子在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达及其临床意义.方法 收集54例初治MM患者及20名健康人骨髓单个核细胞,应用实时荧光定量PCR法检测N-cadherin mRNA表达,Western blot法测定其蛋白表达.结果 MM患者N-cadherin mRNA表达水平为6.056±3.033,健康对照组为1.788±0.778,二组相比差异有统计学意义(P<0.0001).按照ISS分期,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期MM患者N-cadherin mRNA表达水平分别为3.681±3.185、5.757±3.292、7.460±3.647,其中Ⅱ期、Ⅲ期与健康对照组相比差异均具有统计学意义(均P<0.05);Ⅰ期与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).有髓外浸润及无髓外浸润患者N-cadherin mRNA表达量分别为9.159±3.178、5.083±3.288,差异有统计学意义(P< 0.001).有骨质破坏和无骨质破坏患者N-cadherin mRNA表达量分别为6.544±3.729、4.240±2.896,差异有统计学意义(P=0.047).初治MM患者N-cadherin mRNA表达水平为6.056±3.033,治疗后有效患者N-cadherin mRNA表达水平下降(3.768±2.216)(P=0.015),治疗无效患者N-cadherin mRNA水平与治疗前相比差异无统计学意义(P>0.05).初治MM患者N-cadherin蛋白表达量明显高于缓解期患者及健康对照组,而在治疗后复发的患者中,N-cadherin蛋白表达量明显高于初治患者.结论 N-cadherin分子在MM患者中高表达,其可能参与MM的发生及发展. 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 神经型钙黏蛋白
携带人OCT4A基因的慢病毒载体的构建及其稳定转染K562白血病细胞株的建立 预览 被引量:1
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作者 孟凡静 曹江 +3 位作者 周俊 陈翀 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1514-1520,共7页
本研究旨在构建共表达人OCT4A与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体pLVX-OCT4A-ZsGreen1,并通过感染获得稳定表达重组质粒的白血病K562细胞系,观察OCT4A在其中的表达。根据Gen Bank数据库提供的OCT4A mRNA序列,合成编码mRNA基因的特异性引... 本研究旨在构建共表达人OCT4A与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体pLVX-OCT4A-ZsGreen1,并通过感染获得稳定表达重组质粒的白血病K562细胞系,观察OCT4A在其中的表达。根据Gen Bank数据库提供的OCT4A mRNA序列,合成编码mRNA基因的特异性引物序列,通过RT-PCR技术扩增出OCT4A全长片段,克隆至pCR-Blunt载体。将OCT4A DNA片段酶切回收后克隆至经EcoR1酶切线性化的慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-OCT4A-ZsGreen1慢病毒重组质粒,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确。经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒并感染人白血病细胞系K562,通过流式细胞仪分选获得稳定表达的白血病细胞系,应用Real-time PCR和Western blot方法分别检测稳定转染细胞系的OCT4A mRNA和OCT4A蛋白表达。应用CCK-8法和平板细胞克隆形成试验测定OCT4A对K562细胞增殖能力的影响。结果表明,经限制性内切酶检测及基因测序证实成功构建了携带OCT4A基因的重组慢病毒;包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.43±0.25)×10^8U/ml;病毒感染K562细胞后经流式细胞仪分选获得GFP+细胞,实时定量PCR及Western blot证实病毒感染后OCT4A基因及蛋白的表达可有效上调;CCK-8法及平板集落形成试验显示病毒感染的K562细胞体外增殖活性明显升高,与对照组相比均有统计学差异(P〈0.05)。结论:成功构建了表达OCT4A基因的慢病毒载体,并且获得可稳定上调OCT4A表达的K562细胞株。 展开更多
关键词 OCT4A基因 慢病毒载体 白血病 载体构建 K562细胞
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AATF-Che1超家族基因原核表达及其融合蛋白纯化
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作者 周俊 曹江 +6 位作者 孟凡静 冯浩 潘秀英 陈翀 牛铭山 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2014年第4期337-342,共6页
目的 体外构建抗凋亡转录因子(AATF)-Che1重组蛋白原核表达载体pGEx-4T-1-AATF-Che1,优化pGEX-4T-1-AATF-Che1重组载体原核诱导表达条件,并获得可溶性的纯化谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pGEX-... 目的 体外构建抗凋亡转录因子(AATF)-Che1重组蛋白原核表达载体pGEx-4T-1-AATF-Che1,优化pGEX-4T-1-AATF-Che1重组载体原核诱导表达条件,并获得可溶性的纯化谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pGEX-4T-1-AATF重组质粒扩增出AATF-Che1基因,将其与原核表达载体pGEX-4T-1双酶切后,回收目的基因片段.通过T4连接酶定向连接AATF-Che1基因和线性化原核表达载体pGEX-4T-1,获得重组蛋白AATF-Che1原核表达质粒pGEX-4T-1-AATF-Che1.将构建正确的表达质粒转化入大肠埃希菌感受态细胞BL21,并采用诱导剂异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白AATF-Che1的表达.考察不同诱导剂IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对重组蛋白表达量及表达方式的影响,从而对诱导条件进行优化.采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠对可溶形式的GST融合蛋白进行纯化,并采用Western蛋白免疫印记(WB)法鉴定获得的纯化蛋白.结果 原核表达质粒pGEX-4T-1-AATF-Che1的酶切、PCR鉴定结果及测序结果均正确;IPTG诱导蛋白在约65 kD处出现了1条新的蛋白条带,即AATF-Che1与GST的融合蛋白.不同的诱导时间及不同的IPTG浓度条件下,诱导融合蛋白的量均未见明显变化;37℃诱导时,重组蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中,而16℃诱导时,融合蛋白可溶性地存在于上清液中.最终成功获得AATF-Che1可溶性纯化的融合蛋白,且WB法鉴定其抗原性良好.结论 体外成功构建AATF-Che1基因重组蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-AATF-Che1,寻找到优化的重组载体原核诱导表达条件,并获得了大量可溶形式纯化的GST融合蛋白,为进一步研究AATF-Che1超家族基因在肿瘤中的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 AATF-Che1超家族结构域 原核表达 融合蛋白纯化
人NANOGP8基因原核表达及融合蛋白纯化
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作者 周俊 曹江 +5 位作者 孟凡静 冯浩 陈翀 牛铭山 徐开林 《江苏医药》 CAS 北大核心 2014年第22期2676-2679,共4页
目的构建人NANOGP8基因原核表达载体,并纯化其融合蛋白。方法从plvxNANOGP8重组质粒中扩增出NANOGP8基因,插入pGEX-4T-1载体中构建pGEX-4T-1-NANOGP8重组载体,并转化大肠杆菌BL21,优化其表达条件,分别以可溶及包涵体形式得到了融合蛋白... 目的构建人NANOGP8基因原核表达载体,并纯化其融合蛋白。方法从plvxNANOGP8重组质粒中扩增出NANOGP8基因,插入pGEX-4T-1载体中构建pGEX-4T-1-NANOGP8重组载体,并转化大肠杆菌BL21,优化其表达条件,分别以可溶及包涵体形式得到了融合蛋白并进行纯化,采用Western blot检测其抗原性。结果成功构建了重组表达载体pGEX-4T-1-NANOGP8,经37℃诱导6h获得主要以包涵体形式存在的融合蛋白;而经16℃过夜诱导可获得可溶性融合蛋白,并分别成功对两种形式融合蛋白进行纯化且经Western blot检测显示其抗原性良好。结论成功获得NANOGP8纯化蛋白,可用于进一步研究NANOGP8基因在肿瘤中的作用。 展开更多
关键词 NANOG假基因8 原核表达 融合蛋白
改革分子生物学教学方法,提高研究生的创新能力 预览
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作者 《时代教育》 2013年第19期4-4,13共2页
培养具有创新思维、创新意识及创新能力的高素质医学人才,是2l世纪医学发展的需要。医学高等院校肩负着培养大批具有创新精神和创新能力的高级人才的重任,如何通过教学改革培养创新人才--是我们在教学实践中,不断努力探索的问题。
关键词 创新能力 分子生物学 高等教育 综合素质
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