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家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化
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作者 彭建 刘巍巍 +3 位作者 吴兆颖 杨燕琴 小丽 吴建伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期182-185,共4页
目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克... 目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆。用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX 4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18 h,表达相对分子质量约为26×10~3上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml。结论成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 家蝇 CEC4 克隆 原核表达
抗菌肽Cec4的结构改造及抗菌活性研究
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作者 彭建 赵行行 +3 位作者 吴兆颖 王涛 小丽 国果 《生物技术》 CAS 2019年第4期330-335,共6页
[目的]对抗菌肽Cec4进行结构改造,并评估优化小肽的稳定性及溶血性。[方法]采用序列截短、氨基酸替换的方式来改造Cec4。采用微量稀释法,检测改造后的Cec4对各类鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度(MIC)。绘制时间-杀菌曲线,并... [目的]对抗菌肽Cec4进行结构改造,并评估优化小肽的稳定性及溶血性。[方法]采用序列截短、氨基酸替换的方式来改造Cec4。采用微量稀释法,检测改造后的Cec4对各类鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌的最小抑菌浓度(MIC)。绘制时间-杀菌曲线,并评估不同因素对抗菌肽抑菌活性的影响,最后通过溶血实验检测其安全性。[结果]①截短后的Cec4失去抑菌效果。②Cec4氨基酸替换后的Cec4-1、Cec4-2未能提升抑菌能力。Cec4-4的MIC值为Cec4的50%。③在24h,时间-杀菌曲线显示,Cec4-4的抑菌活性较Cec4高30%。④血清会影响抗菌肽活性,并且高浓度胰蛋白酶(1. 0 mg/m L)会抑制Cec4-4抗菌活性。⑤溶血实验表明Cec4-4在1 mg/m L浓度下无溶血反应。[结论]截短使Cec4失去抑菌活性,氨基酸替换后的Cec4-4对各测试菌的抑菌活性较母肽提升了1倍,且抗菌肽在1mg/m L浓度下对人体无溶血反应。 展开更多
关键词 抗菌肽 结构改造 MIC 鲍曼不动杆菌 体外溶血
不同载体表达的家蝇β-葡萄糖苷酶生物学活性比较 预览
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作者 张姝 胡蓉 +5 位作者 黄健 吴建伟 国果 付萍 修江帆 小丽 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期908-916,共9页
克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因,建立两种原核表达体系和一种真核表达体系,分别检测表达产物的活性,比较不同表达体系对其表达水平及重组蛋白酶学性质的影响,为进一步研究和利用家蝇BG酶奠定基础。本研究根据BG... 克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因,建立两种原核表达体系和一种真核表达体系,分别检测表达产物的活性,比较不同表达体系对其表达水平及重组蛋白酶学性质的影响,为进一步研究和利用家蝇BG酶奠定基础。本研究根据BG酶基因的cDNA序列设计引物扩增BG酶基因成熟肽的基因片段,分别采用表达载体pET-28a(+)和pEGX-4T-1构建原核表达体系并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。在65kDa附近均出现特异性蛋白条带,进行Western Blotting鉴定证实重组质粒在其宿主菌E.coliBL21(DE3)中成功表达,命名为MDBG-1蛋白和MDBG-2蛋白。同时选用真核表达载体pPICZaA构建酵母分泌型表达体系在酵母细胞GS115中获得稳定的表达,将其命名为MDBG-3蛋白。采用七叶苷平板法和DNS法对三种表达体系所重组表达的蛋白进行酶活性鉴定和检测,显示3种表达体系所表达的融合蛋白均具有BG酶活性,其酶活力有所不同,且真核表达体系所表达的蛋白酶活性最高。本研究对家蝇β-葡萄糖苷酶基因表达的重组蛋白特性进行初步研究,为发现新的有效纤维素酶体系提供基础数据。 展开更多
关键词 家蝇 Β-葡萄糖苷酶 异源性表达 酶活性
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紫草油外涂防治婴幼儿腹泻所致肛周皮肤损伤的效果观察
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作者 小丽 《中国肛肠病杂志》 2018年第4期61-62,共2页
为探讨紫草油外涂防治婴幼儿腹泻所致肛周皮肤损伤的效果,将2016年1月至2017年6月我科收治的60例腹泻患儿随机分为观察组和对照组,各30例。2组患者均口服酪酸梭菌活菌散和蒙脱石散治疗,治疗期间,对照组患儿肛周皮肤仅接受基础护理... 为探讨紫草油外涂防治婴幼儿腹泻所致肛周皮肤损伤的效果,将2016年1月至2017年6月我科收治的60例腹泻患儿随机分为观察组和对照组,各30例。2组患者均口服酪酸梭菌活菌散和蒙脱石散治疗,治疗期间,对照组患儿肛周皮肤仅接受基础护理(每次排便后用温水清洗肛周皮肤,然后用湿巾擦拭肛周,自然风干),观察组在基础护理的基础上,肛周涂抹紫草油。对比2组患儿肛周皮肤损伤发生率及损伤发生时间和损伤程度。结果显示,观察组肛周皮肤损伤发生率明显低于对照组(P〈0.05);且观察组皮肤损伤程度轻于对照组(P〈0.05)。2组肛周皮损发生时间比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结果表明,外涂紫草油可以有效防治婴幼儿腹泻所致的肛周皮肤损伤。 展开更多
关键词 腹泻 婴幼儿 紫草油 皮肤损伤 防治
一种航空发动机低压涡轮转子封严衬套的更换方法 预览
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作者 耿旭 张思秋 +1 位作者 李丹 小丽 《中国科技信息》 2018年第20期30-31,共2页
发动机涡轮转子是航空燃气涡轮发动机的重要部件之一.涡轮的功用是把高温、高压燃气的部分热能、压力能转变成旋转的机械功,从而带动压气机与其他附件工作,因其工作环境极为恶劣,承受的动力负荷和热负荷较大,因此易出现故障.通过对现有... 发动机涡轮转子是航空燃气涡轮发动机的重要部件之一.涡轮的功用是把高温、高压燃气的部分热能、压力能转变成旋转的机械功,从而带动压气机与其他附件工作,因其工作环境极为恶劣,承受的动力负荷和热负荷较大,因此易出现故障.通过对现有的航空发动机低压涡轮转子封严衬套的更换技术进行改进,可以实现整台低压涡轮转子上个别零件的更换或修理,大大降低发动机修理成本,对我国航空事业发展起着较为重要的意义. 展开更多
关键词 航空发动机 涡轮转子 更换方法 低压 航空燃气涡轮发动机 衬套 封严 修理成本
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论某型航空发动机导管内壁磨损故障分析及修复方法的研究 预览
6
作者 孔令琪 小丽 曹立斌 《科学与信息化》 2018年第12期86-87,共2页
某型航空发动机在修理时,存在导管内壁磨损故障。本文对故障的形成原因进行分析,提出一种可行的修理方案。
关键词 导管 内壁磨损 焊接
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家蝇β-葡萄糖苷酶基因的克隆及重组表达 预览 被引量:2
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作者 张姝 胡蓉 +5 位作者 黄健 吴建伟 国果 付萍 修江帆 小丽 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期930-939,共10页
克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因并建立原核表达体系,检测其表达产物的活性,了解家蝇内源性BG酶特点,为进一步解释家蝇极强环境适应能力和发现新的种群控制措施提供分子生物学基础。以草地贪夜蛾等结构信息相... 克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因并建立原核表达体系,检测其表达产物的活性,了解家蝇内源性BG酶特点,为进一步解释家蝇极强环境适应能力和发现新的种群控制措施提供分子生物学基础。以草地贪夜蛾等结构信息相对完整且研究较为透彻的6种代表性昆虫的BG酶基因序列为参照对象,利用同源克隆结合RACE-PCR的方法,从家蝇cDNA中克隆得到BG酶基因的全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析。分别采用原核表达载体pET-28a(+)构建原核表达体系并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达BG酶基因的融合蛋白。采用七叶苷平板显色法和DNS法检测表达体系融合蛋白的酶活性,并对其性质进行初步的分析。家蝇体内克隆得到了长度为1933 bp的家蝇BG酶基因全长cDNA序列,推导其为562个氨基酸残基组成的蛋白多肽。重组原核质粒经诱导表达后,在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,证实重组质粒成功表达。重组表达的家蝇BG酶兼具内切β-1,4-葡聚糖酶、外切β-1,4-葡聚糖酶和BG的酶活性。家蝇BG酶是一种新的多功能纤维素酶,是昆虫纤维素酶研究的重要补充。 展开更多
关键词 家蝇 Β-葡萄糖苷酶 克隆 异源性表达 酶活性
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家蝇GNBP3基因克隆及感染白色念珠菌后的表达 预览 被引量:1
8
作者 胡亚 罗嫚 +5 位作者 王宇 王涛 小丽 张迎春 修江帆 吴建伟 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期596-604,共9页
对家蝇GNBP3基因进行克隆及生物信息学分析,并对该基因在感染白色念珠菌Candida albicans后的表达情况进行研究。从构建的家蝇Musca domestica幼虫c DNA质粒文库中筛选到GNBP3基因,克隆并运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预... 对家蝇GNBP3基因进行克隆及生物信息学分析,并对该基因在感染白色念珠菌Candida albicans后的表达情况进行研究。从构建的家蝇Musca domestica幼虫c DNA质粒文库中筛选到GNBP3基因,克隆并运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。白色念珠菌注射感染家蝇幼虫并收集标本,逆转录,通过荧光定量PCR检测感染样本中GNBP3基因的表达情况,结果进行统计学分析。研究结果表明,GNBP3基因ORF全长1473 bp,编码490个氨基酸,理论分子量为55.8 k Da,等电点为6.85;感染后不同时间点,感染组与对照组比较,在3 h、12 h、36 h、48 h GNBP3 mRNA的表达明显增高,两组比较有显著性差异(P〈0.05),而24 h表达差异性最小;感染后不同组织中感染组与对照组比较,3 h和12 h时,在体壁、血淋巴、脂肪体中的表达量升高,具有显著性差异(P〈0.05);24 h时,在血淋巴中的表达量较对照组高,而在唾液腺和脂肪体中的表达量呈下降趋势,均具有显著性差异(P〈0.05);48 h,在血淋巴和脂肪体中表达量较对照组高,在中肠的表达量较对照组低,均具有显著性差异(P〈0.01)。成功克隆GNBP3基因且在家蝇感染白色念珠菌后GNBP3的表达水平随时间的推移呈现先升高后降低再升高的趋势,在各组织中以在免疫组织(血淋巴、脂肪体)中的表达显著增高,推测其在真菌识别过程中发挥潜在作用。 展开更多
关键词 GNBP3 实时荧光定量PCR 感染 MRNA水平 家蝇
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家蝇3种丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)基因的克隆、序列分析及表达模式 预览 被引量:3
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作者 魏川川 修江帆 +3 位作者 胡亚 小丽 张迎春 吴建伟 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1334-1341,共8页
对家蝇3种丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin基因SP2、SP13和SP16进行克隆、序列分析和时空表达模式检测。运用瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Ex PASy)和美国国家生物技术信息中心(NCBI)等有关的生物信息学分析工具,预测和分析3条... 对家蝇3种丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin基因SP2、SP13和SP16进行克隆、序列分析和时空表达模式检测。运用瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Ex PASy)和美国国家生物技术信息中心(NCBI)等有关的生物信息学分析工具,预测和分析3条Serpin基因编码蛋白质的结构与生物学功能。以RPS18(核糖体S18蛋白)为内参基因,采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)技术检测3条Serpin基因在家蝇不同发育时期,以及家蝇3龄幼虫中脂肪体、唾液腺、中肠、马氏管和体壁的表达特征。SP2、SP13、SP16基因序列的开放阅读框ORF全长分别为1191 bp、1137 bp和1212 bp,分别编码含396、378和403个氨基酸残基的蛋白质,其理论分子量分别为45315.3 Da、43701.5 Da和45011.5 Da,等电点分别为9.01、5.98和6.04,蛋白质的N端都含有一段信号肽,并具有Serpin基因的保守结构域,属于Serpin家族。SP2和SP16在蛋白质的C端含反应中心环(Reactive center loop,RCL),而SP13 C端不含RCL。时空表达模式分析结果显示,SP2基因在2龄幼虫中的表达量最高,而雄蝇的表达量与卵期相比有所下调;SP13基因在蛹中的表达量最高,1龄幼虫和雌蝇中的表达量与卵期相近;SP16基因在2龄幼虫和3龄幼虫中的表达量最高,雄蝇与雌蝇的表达量与卵期相比有所下调。在家蝇3龄幼虫的各主要组织中,以体壁为参照,SP2基因在唾液腺表达水平最高,其次是脂肪体,中肠和马氏管均低于体壁;SP13基因在马氏管和脂肪体中的表达水平最高,中肠和唾液腺的表达量低于体壁;SP16基因在唾液腺、中肠、脂肪体和马氏管的表达量均低于体壁。推测Serpin基因在家蝇个体发育和免疫调节中起不同作用。 展开更多
关键词 家蝇 丝氨酸蛋白酶抑制剂 克隆 时空表达 生物信息学
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家蝇溶菌酶MDLZM2基因的克隆、序列分析及原核表达 预览
10
作者 魏川川 彭传林 +4 位作者 胡亚 修江帆 王宇 小丽 吴建伟 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期95-101,共7页
对家蝇溶菌酶(Musca domestica lysozyme,MDLZM2)基因进行克隆、序列分析,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达。从Gen Bank家蝇基因组中筛选获得MDLZM2基因。以该基因的序列设计引物,进行PCR扩增,测序分析获得该基因完整编码序列。... 对家蝇溶菌酶(Musca domestica lysozyme,MDLZM2)基因进行克隆、序列分析,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达。从Gen Bank家蝇基因组中筛选获得MDLZM2基因。以该基因的序列设计引物,进行PCR扩增,测序分析获得该基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、二级结构、三级结构和保守结构域等方面进行预测和分析。构建p EASY-E1-MDLZM2重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S Chemically Competent Cell中进行诱导表达及纯化。结果表明MDLZM2基因ORF全长552 bp,编码183个氨基酸,理论分子量21.2 k Da;等电点为6.13,具有Lysozyme家族的蛋白保守结构域。成功构建重组原核表达p EASY-E1-MDLZM2并诱导表达、纯化重组蛋白,为进一步研究该蛋白的生物学及免疫学活性奠定了基础。 展开更多
关键词 家蝇 LYSOZYME 克隆 原核表达 生物信息学
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家蝇肽聚糖识别蛋白(PGRP-SA)的克隆表达及细菌结合研究 预览 被引量:2
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作者 罗嫚 王宇 +5 位作者 胡亚 修江帆 王涛 彭建 小丽 吴建伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期145-151,共7页
对家蝇PGRP-SA基因进行克隆表达以及研究其重组蛋白与细菌结合能力。从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫cDNA质粒文库中筛选到PGRP-SA基因,以cDNA质粒为模板设计引物,通过PCR扩增,获得PGRP-SA基因完整编码序列。运用生物信息学方法对... 对家蝇PGRP-SA基因进行克隆表达以及研究其重组蛋白与细菌结合能力。从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫cDNA质粒文库中筛选到PGRP-SA基因,以cDNA质粒为模板设计引物,通过PCR扩增,获得PGRP-SA基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建pET-28a(+)-PGRP-SA重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达及蛋白纯化。利用半定量RT-PCR检测PGRP-SA在家蝇3龄幼虫不同组织中的表达量差异。PGRP-SA重组蛋白进行微生物结合实验。结果表明,PGRP-SA基因ORF全长615 bp,编码204个氨基酸,理论分子量22.8 k D,等电点9.11,具有保守的PGRP结构域。成功构建了pET-28a(+)-PGRP-SA重组质粒,蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中获得表达,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,利用Western blot检测证明纯化蛋白与预期大小相符。PGRP-SA在家蝇3龄幼虫血淋巴、脂肪体、前肠、中肠、气管、马氏管都有表达,血淋巴组织中表达量最高,后肠无表达,由此说明PGRP-SA基因的表达具有一定的组织性。PGRP-SA重组蛋白能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合,与白色念珠菌不能结合。成功表达及纯化家蝇PGRP-SA蛋白,证实家蝇PGRP-SA能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合。 展开更多
关键词 家蝇 先天免疫 肽聚糖识别蛋白 原核表达 微生物结合实验
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家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析 被引量:5
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作者 胡红元 任春丽 +4 位作者 小丽 陈明明 王宇 王涛 吴建伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第3期250-256,共7页
目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功... 目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。 展开更多
关键词 家蝇 GAPDH基因 克隆表达 内参基因
浅谈城镇地籍调查数据库建设——以银川市为例 预览
13
作者 小丽 《内江科技》 2016年第1期36-37,共2页
本文从城镇地籍调查及系统建设在国内外研究现状出发,对城镇地籍调查范围、数据库技术支撑及软硬件环境进行设计,最终完成银川市城镇地籍调查数据库建设。
关键词 城镇地籍调查 数据库建设 银川市 软硬件环境 技术支撑 国内外
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家蝇Thymosin(THY)基因的克隆及原核表达 预览 被引量:3
14
作者 王宇 吴高吉 +4 位作者 罗曼 彭传林 修江帆 小丽 吴建伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期143-147,共5页
采用EST测序技术从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫cDNA质粒文库中筛选到胸腺肽(Thymosin,THY)基因,以该基因的cDNA文库质粒为模板,设计引物,通过PCR扩增,测序鉴定,获得THY基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及... 采用EST测序技术从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫cDNA质粒文库中筛选到胸腺肽(Thymosin,THY)基因,以该基因的cDNA文库质粒为模板,设计引物,通过PCR扩增,测序鉴定,获得THY基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽和亚细胞定位等方面进行预测和分析。构建pET-28a(+)-THY重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。研究结果表明,THY基因ORF全长384 bp,编码127个氨基酸,理论分子量14.3 kD,等电点为5.22,具有THY家族的蛋白保守结构域。构建重组原核质粒pET-28a(+)-THY,经IPTG诱导,蛋白在大肠杆菌中获得表达,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,Western blot检测发现纯化的目的蛋白大小正确。 展开更多
关键词 家蝇 胸腺肽 克隆 原核表达
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家蝇抗真菌肽-溶菌酶基因的克隆、表达及序列分析 预览
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作者 彭传林 魏川川 +4 位作者 吴建伟 王宇 修江帆 小丽 赵学军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期200-205,共6页
旨在对家蝇抗真菌肽MAF-1-溶菌酶(LZM)基因进行生物信息学分析,并进行融合基因MAF-1-LMZ的克隆和表达分析。从GenBank获得家蝇抗真菌肽MAF-1和溶菌酶LZM的编码序列,分析和预测这两种蛋白质的结构和功能。PCR扩增融合蛋白质抗真菌肽-... 旨在对家蝇抗真菌肽MAF-1-溶菌酶(LZM)基因进行生物信息学分析,并进行融合基因MAF-1-LMZ的克隆和表达分析。从GenBank获得家蝇抗真菌肽MAF-1和溶菌酶LZM的编码序列,分析和预测这两种蛋白质的结构和功能。PCR扩增融合蛋白质抗真菌肽-溶菌酶的基因MAF-1-LMZ,将其克隆到原核表达载体pET-28a中,重组质粒pET-28a-MAF-1-LMZ在大肠杆菌OrigmiB/DE3中经用IPTG诱导表达,表达产物MAF-1-LMZ通过SDS-PAGE电泳进行鉴定,采用小试管法倍比稀释法进行活性验证。结果显示,融合蛋白质MAF-1-LMZ序列的ORF为969 bp,编码322个氨基酸残基,理论分子量为35 468.6 Da,等电点为8.31,在大肠杆菌OrigmiB/DE3中得到成功表达。其纯化后的目的蛋白具有抗真菌活性。 展开更多
关键词 家蝇 抗真菌肽-溶菌酶 重组表达 序列分析
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贵州虫茶资源及其利用的现状调查 预览 被引量:4
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作者 刘健锋 杨茂发 +4 位作者 胡吉凤 小丽 宋琼章 李斌 桑维钧 《贵州农业科学》 CAS 2015年第2期62-65,共4页
为给贵州虫茶资源的开发利用提供依据,采用走访调查和室内饲养鉴定相结合的方法对贵州产虫茶昆虫种类及分布、生产虫茶的寄主植物、虫茶品种以及虫茶资源利用情况进行研究。结果表明:贵州产虫茶昆虫为鳞翅目螟蛾科米缟螟、紫斑谷螟、... 为给贵州虫茶资源的开发利用提供依据,采用走访调查和室内饲养鉴定相结合的方法对贵州产虫茶昆虫种类及分布、生产虫茶的寄主植物、虫茶品种以及虫茶资源利用情况进行研究。结果表明:贵州产虫茶昆虫为鳞翅目螟蛾科米缟螟、紫斑谷螟、灰直纹螟、黄环纹丛螟和织蛾科米仓织蛾等5种。其中,米仓织蛾为新发现的产虫茶昆虫种类。寄主植物为豹皮樟、红果黄肉楠、化香树和三叶海棠等4种。贵州虫茶品种主要有米缟螟豹皮樟虫茶、米缟螟红果黄肉楠虫茶、紫斑谷螟豹皮樟虫茶、紫斑谷螟红果黄肉楠虫茶、米仓织蛾豹皮樟虫茶、灰直纹螟化香虫茶、灰直纹螟三叶海棠虫茶和黄环纹丛螟化香虫茶等8种。黔北地区工厂化生产虫茶的昆虫主要是米缟螟和紫斑谷螟,寄主植物是豹皮樟和红果黄肉楠;黔东南地区生产虫茶的昆虫主要是灰直纹螟和黄环纹丛螟,寄主植物是化香树和三叶海棠。 展开更多
关键词 虫茶 产虫茶昆虫 寄主植物 资源调查 开发利用 贵州
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CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的临床效果评价 预览
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作者 马龙 闫灵芝 +1 位作者 徐迈 小丽 《中华老年口腔医学杂志》 2014年第4期219-222,共4页
目的:探讨CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的临床效果。方法:收集双颌多数牙缺失、仅余留2-6颗天然牙的患者20例,随访6-24个月,询问患者对义齿的主观感受、咀嚼效率、义齿固位和稳定性,摄X线全景片,了解义齿、基牙和牙周情况。结... 目的:探讨CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的临床效果。方法:收集双颌多数牙缺失、仅余留2-6颗天然牙的患者20例,随访6-24个月,询问患者对义齿的主观感受、咀嚼效率、义齿固位和稳定性,摄X线全景片,了解义齿、基牙和牙周情况。结果:患者普遍认为义齿易适应、美观、固位稳定性好、咀嚼有力。15例曾使用过传统可摘局部义齿的患者对比两种义齿,明显感觉CM球帽附着体义齿更加舒适、美观、稳定。复查X线片示CM球帽附着体义齿修复后各基牙牙周膜正常,牙槽骨无明显吸收。结论:CM球帽附着体义齿修复多数牙缺失的牙列缺损临床效果良好。 展开更多
关键词 牙列缺损 固位稳定性 球帽附着体
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家蝇(Musca domestica)羧肽酶基因克隆及原核表达 预览 被引量:2
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作者 修江帆 魏川川 +3 位作者 小丽 国果 吴沁怡 吴建伟 《广东农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第10期152-154,I0004共4页
从构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到羧肽酶(Carboxypeptidase,CP)基因,以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR扩增,获得CP基因完整编码序列(登录号:KF939629.1).运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽... 从构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到羧肽酶(Carboxypeptidase,CP)基因,以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR扩增,获得CP基因完整编码序列(登录号:KF939629.1).运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽和亚细胞定位等进行预测和分析.构建PEASY-E1-CP重组质粒,转化到大肠杆菌OrigamiB (DE3)中进行诱导表达.研究结果表明,CP基因ORF全长1 284 bp,编码428个氨基酸,理论分子量47.8ku,等电点为6.10,具有CP家族的蛋白保守结构域;重组原核质粒pEASY-E1-CP经IPTG诱导,蛋白在大肠杆菌中获得表达. 展开更多
关键词 家蝇 羧肽酶 克隆 原核表达
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温度对产虫茶昆虫紫斑谷螟生长发育的影响 被引量:14
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作者 小丽 杨茂发 +3 位作者 张昌容 蔡兰 冯友丽 邱婷 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期671-679,共9页
为探明温度对贵州主要产虫茶昆虫紫斑谷螟Pyralis farinalis (Linnaeus)生长发育的影响, 本研究以白茶Litsea coreana为寄主植物, 分别设置5个恒温(19, 22, 25, 28和31℃)条件, 研究温度对紫斑谷螟卵、 幼虫、 蛹和未成熟期... 为探明温度对贵州主要产虫茶昆虫紫斑谷螟Pyralis farinalis (Linnaeus)生长发育的影响, 本研究以白茶Litsea coreana为寄主植物, 分别设置5个恒温(19, 22, 25, 28和31℃)条件, 研究温度对紫斑谷螟卵、 幼虫、 蛹和未成熟期平均发育历期、 发育速率和存活率的影响, 计算各虫态发育起点温度和有效积温。 结果表明: 温度对紫斑谷螟各虫态发育历期、 发育速率和存活率影响显著。 在19 ~ 31℃范围内, 各虫态的平均发育历期均随温度的升高而缩短, 卵期、 幼虫期、 蛹期及未成熟期均在31℃达到最小值, 分别为4.56±0.24, 43.33±1.50, 7.89±0.20和55.78±1.69 d。 紫斑谷螟各虫态发育速率与温度呈二次回归关系, 且极显著相关。 此外, 温度显著影响各虫态存活率, 卵的存活率在28℃时最高, 为93%; 幼虫和蛹的存活率则在25℃最高, 分别为88%和93%; 温度过高或过低均不利于其生长发育。 由直接最优法计算得到紫斑谷螟卵期、 幼虫期、 蛹期及未成熟期的发育起点温度分别为13.30, 15.48, 13.19和14.82℃, 有效积温依次为88.36, 679.51, 159.73和952.04日·度。 这些结果为紫斑谷螟的繁殖提供了基础参考数据, 对指导虫茶生产有实用参考价值。 展开更多
关键词 紫斑谷螟 白茶 生长发育 存活率 发育起点温度 有效积温 虫茶
产虫茶昆虫灰直纹螟及其虫茶形态特征记述 预览 被引量:1
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作者 刘健锋 杨茂发 +2 位作者 王方梅 小丽 胡吉凤 《广东农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第21期171-173,181,F0003共5页
灰直纹螟是一种主要的产虫茶昆虫.对以化香为寄主的灰直纹螟及其虫茶形态学进行了系统研究.详细观察了灰直纹螟各虫态的形态特征,其中幼虫和蛹的形态记述为首次报道.灰直纹螟虫茶颗粒形状为长圆柱状;虫茶颗粒颜色主要有两种,其潘通U卡... 灰直纹螟是一种主要的产虫茶昆虫.对以化香为寄主的灰直纹螟及其虫茶形态学进行了系统研究.详细观察了灰直纹螟各虫态的形态特征,其中幼虫和蛹的形态记述为首次报道.灰直纹螟虫茶颗粒形状为长圆柱状;虫茶颗粒颜色主要有两种,其潘通U卡色号分别为黑7U和465U,黑7U占主导;虫茶颗粒大小分为5种规格,自规格一至规格五,虫茶颗粒长径、短径均逐渐增加;虫茶香气为清香型,汤色为红褐色,明亮,滋味醇和、鲜爽.研究结果为灰直纹螟——化香虫茶品种的准确鉴定提供了科学资料. 展开更多
关键词 虫茶 灰直纹螟 形态学 贵州
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