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重组柯萨奇病毒构建及其感染性研究
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作者 周冬 高孟 +8 位作者 高丽美 吴洁 杨宏宏 陈刚 高磊 姜云水 李剑波 李永学 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2019年第2期93-98,共6页
目的纯化柯萨奇病毒(CV)-A6、CV-A16 cDNA,在此基础上将CV-A6-VP(结构蛋白)替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM 16A-Re(CV-A16-CV-A6-VP),并研究其感染性,为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据.方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA,经RT-PCR... 目的纯化柯萨奇病毒(CV)-A6、CV-A16 cDNA,在此基础上将CV-A6-VP(结构蛋白)替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM 16A-Re(CV-A16-CV-A6-VP),并研究其感染性,为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据.方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长cDNA,PCR后纯化插入至pBM16A-TOPO载体,利用T7聚合酶系统将线性基因组cDNA体外转录得到病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得重组病毒Re,并对Re进行显微镜观察、基因测序、免疫荧光等方法检测鉴定其感染性.结果构建的CV-A6、CV-A16、Re经电泳鉴定可见约7 500 bp的条带.得到的pBM16A-CV-A6、pBM16A-CV-A16、pBM16A-Re经限制性内切酶双酶切鉴定,可见约7 500 bp的目的条带和约1 800 bp的载体条带.构建的克隆经全基因测序验证与理论序列完全一致.细胞形态学鉴定显示,CV-A16组可见典型肠道病毒所致的细胞病变,CV-A6及Re组则没有明显病变;RT-PCR鉴定也得出相同结果.结论成功构建重组CV-A6、CV-A16和重组病毒Re,重组CV-A16与母本野生型病毒增殖特性基本一致,重组病毒pBM16A-Re丧失细胞感染性. 展开更多
关键词 柯萨奇病毒感染 反向遗传技术 重组病毒 感染性
治疗性人乳头瘤病毒16型疫苗的人参皂苷单体佐剂筛选研究
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作者 高孟 高丽美 +5 位作者 吴洁 陈刚 李剑波 周冬 罗永能 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期406-410,共5页
目的研究不同人参皂苷单体佐剂对治疗性人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV16)重组疫苗免疫效果的影响,筛选合适的人参皂苷单体作为候选佐剂。方法选择5种人参皂苷单体Rb1、Rh1-1、Rh1-2、Rg1、Rg3,分别与治疗性HPV16... 目的研究不同人参皂苷单体佐剂对治疗性人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV16)重组疫苗免疫效果的影响,筛选合适的人参皂苷单体作为候选佐剂。方法选择5种人参皂苷单体Rb1、Rh1-1、Rh1-2、Rg1、Rg3,分别与治疗性HPV16重组疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验比较各组小鼠的特异性细胞免疫应答水平,同时比较这5种人参皂苷单体对治疗性HPV16重组疫苗抑制小鼠肿瘤生长的影响。结果人参皂苷单体Rg1、Rb1可以显著提高治疗性HPV16重组疫苗特异性细胞免疫应答(HPV+Rg1组vs HPV组:t=3.729,P=0.006;HPV+Rb1组vs HPV组:t=3.204,P=0.013),同时可以在小鼠特异性肿瘤模型建立4周时,有效抑制肿瘤的生长水平(HPV+Rg1组vs HPV组:t=2.318,P=0.032;HPV+Rb1组vs HPV组:t=2.258,P=0.037)。结论人参皂苷单体Rg1、Rb1能在C57BL/6小鼠中提高治疗性HPV16重组疫苗的特异性免疫效果,有望成为候选佐剂。 展开更多
关键词 人参皂苷 T细胞免疫 人乳头瘤病毒16 治疗性疫苗
降服甲肝瘟神 预览
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作者 《科学24小时》 2018年第7期32-33,共2页
甲型病毒性肝炎简称甲型肝炎,是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的一种肠道传染病。甲型肝炎传染性强、发病率高,常呈周期性暴发。传染源是急性期病人和亚临床感染者,常有明显的季节性,多为生活接触传播,主要通过粪口途径感染。甲型肝炎病人自... 甲型病毒性肝炎简称甲型肝炎,是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的一种肠道传染病。甲型肝炎传染性强、发病率高,常呈周期性暴发。传染源是急性期病人和亚临床感染者,常有明显的季节性,多为生活接触传播,主要通过粪口途径感染。甲型肝炎病人自潜伏末期至发病后10天传染性最大。我国是甲型肝炎病毒的高发区,甲肝位列我国各型肝炎发病之首。 展开更多
关键词 病毒性肝炎 甲型肝炎病毒 亚临床感染 肠道传染病 发病率 肝炎病人 传染性 周期性
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HMGB1对HPV16型重组腺病毒载体疫苗免疫效果的影响及机制研究 被引量:2
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作者 陈刚 李剑波 +4 位作者 高孟 高丽美 吴洁 姜云水 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2017年第6期827-831,共5页
目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分子与人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7重组腺病毒载体疫苗免疫效果的关系及机制。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPV重组腺病毒载体疫苗的同时,给予注射HMGB1特异性拮抗剂HMGB1 A box... 目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分子与人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7重组腺病毒载体疫苗免疫效果的关系及机制。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPV重组腺病毒载体疫苗的同时,给予注射HMGB1特异性拮抗剂HMGB1 A box,开展肿瘤抑制试验、小鼠免疫状态观察、肿瘤相关信号检测等研究。结果 A box蛋白与疫苗联用,可显著降低模型小鼠HMGB1血清水平,抑制肿瘤组织中NF-?B的m RNA高表达,提高疫苗的抗肿瘤活性。同时,它还可减少IL-4、促进IFN-?产生,使体内免疫平衡由Th2向Th1偏移。和肿瘤模型对照组相比,在接种疫苗并注射A box蛋白后,由肿瘤引起的NF-?B、Bcl-2、c-IAP2、VEGF、MMP-9的表达提高、Bax表达降低均得到显著扭转。结论 HMGB1分子可以削弱HPV重组腺病毒载体疫苗的免疫效果,其机制可能是HMGB1在调节免疫平衡状态及控制肿瘤细胞的凋亡、浸润、转移等多层面均能参与并发挥重要作用。 展开更多
关键词 HMGB1蛋白质 乳头状瘤病毒疫苗 接种 影响 机制
重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用
5
作者 高孟 高丽美 +5 位作者 朱赟 陈刚 吴洁 许玲敏 罗永能 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第2期68-74,共7页
目的研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4—1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPVl6)蛋白疫苗(HPVl6蛋白疫苗)免疫效果的影响。方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeI... 目的研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4—1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPVl6)蛋白疫苗(HPVl6蛋白疫苗)免疫效果的影响。方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeI和XhoI酶切位点定向插入pET28a表达载体。将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21(DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达。用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构。用CCK-8试剂盒检测纯化r4-IBBL对小鼠T细胞体外增殖的影响。同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响。结果密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在。可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构。纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖。与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4—1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021)。结论r4-1BBLL在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力。 展开更多
关键词 重组蛋白类 佐剂 免疫 人乳头瘤病毒16 乳头状瘤病毒疫苗
逆转录-荧光实时定量PCR法快速测定肠道病毒71型病毒滴度
6
作者 李剑波 吴洁 +4 位作者 高丽美 周康凤 毛卓玥 高孟 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2017年第5期312-316,共5页
目的 建立一种肠道病毒71型(EV71)病毒滴度快速测定法.方法 以TCID50法测定的EV71病毒样品作为滴度检测参考品,建立EV71病毒滴度的逆转录-荧光实时定量PCR测定方法.通过滴度参考品和待测病毒样品的Ct值计算待测样品中的病毒滴度,并对... 目的 建立一种肠道病毒71型(EV71)病毒滴度快速测定法.方法 以TCID50法测定的EV71病毒样品作为滴度检测参考品,建立EV71病毒滴度的逆转录-荧光实时定量PCR测定方法.通过滴度参考品和待测病毒样品的Ct值计算待测样品中的病毒滴度,并对该检测法进行特异性、重复性验证.结果 所得检测方法可以用于EV71病毒滴度的快速检测.本测定法具有较好的线性,线性范围为lgTCID50 2.61-8.61,相关系数R2为0.9881;特异性和重复性较好,与TCID50法检测之间具有较好的一致性,变异系数(CV)<5%.结论 所建立的逆转录-荧光实时定量PCR法线性范围广,具有较好的重复性和特异性,可用于EV71样品病毒滴度的快速测定. 展开更多
关键词 逆转录聚合酶链反应 肠道病毒71型 病毒滴度
高迁移率族蛋白B1及其在宫颈癌中的作用
7
作者 陈刚 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2017年第3期235-238,共4页
胞外的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与晚期糖基化终末产物受体、Toll样受体、趋化因子CXCL12等相关受体及肿瘤信号调控通路作用引起持续的炎症反应,并最终促进肿瘤发生。在宫颈癌患者中,HMGB1的表达水平随宫颈癌变级别的升高而增加,HM... 胞外的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与晚期糖基化终末产物受体、Toll样受体、趋化因子CXCL12等相关受体及肿瘤信号调控通路作用引起持续的炎症反应,并最终促进肿瘤发生。在宫颈癌患者中,HMGB1的表达水平随宫颈癌变级别的升高而增加,HMGB1通过多种途径参与宫颈癌的发生发展、浸润和转移过程。应用RNA干扰技术可以抑制HMGB1基因表达,从而影响宫颈癌细胞的增殖、侵袭和分化,这为抗肿瘤药物的研发提供了新的思路。 展开更多
关键词 HMGB1蛋白质 宫颈肿瘤 炎症 抗肿瘤药
高迁移率族蛋白B1对人乳头瘤病毒重组腺病毒载体疫苗免疫效果的影响
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作者 陈刚 高孟 +4 位作者 吴洁 姜云水 高丽美 李剑波 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2016年第6期377-381,共5页
目的评价高迁移率族蛋白B1(HMGBl)分子对接种HPVl6型重组腺病毒载体疫苗实验小鼠免疫应答和抗肿瘤生物学效应的影响。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPVl6型重组腺病毒载体疫苗的同时,给予外源性HMGBl及其特异性... 目的评价高迁移率族蛋白B1(HMGBl)分子对接种HPVl6型重组腺病毒载体疫苗实验小鼠免疫应答和抗肿瘤生物学效应的影响。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPVl6型重组腺病毒载体疫苗的同时,给予外源性HMGBl及其特异性拮抗剂HMGBlAbox注射,进行肿瘤抑制试验、肿瘤细胞挑战实验、特异性IFN1的诱导检测。结果肿瘤抑制试验表明,与单独接种不同剂量疫苗组相比,注射HMGBl后小鼠成瘤率显著提高(2/10VS9/10,P〈0.05);而注射了A—box则减低了小鼠成瘤率(7/10VS1/10,P〈O.05)。TC-1肿瘤细胞挑战试验显示,10只先接种疫苗的小鼠中有8只免受TC-1肿瘤细胞的攻击,而HMGB1仅能保护2只,且小鼠成瘤时间提前,肿瘤更大,同时HMGB1还使疫苗诱导特异性IFNγ的能力显著降低。结论HMGBl分子可以削弱HPV16型重组腺病毒载体疫苗在小鼠模型上的免疫效果,而其拮抗剂Abox蛋白具有一定程度增强作用。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒疫苗 HMGB1蛋白质 免疫效果
人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用 被引量:1
9
作者 李剑波 潘海桦 +8 位作者 姜云水 吴洁 陈刚 高孟 金素凤 吴小红 包佳源 陈科达 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2015年第1期10-14,共5页
目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗(HPV16 L2E6E7)酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方... 目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗(HPV16 L2E6E7)酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性(R2〉0.99)和回收率(90%~110%);特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 酶联免疫吸附检测 重组蛋白 抗体
HEK293细胞的传代、建库与高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒的研究 被引量:1
10
作者 吴洁 李剑波 +5 位作者 高孟 金素凤 潘海桦 陈刚 姜云水 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2015年第4期399-403,共5页
目的 对HEK293细胞进行三级细胞库的建立,并高效表达重组的HPV16-E6E7腺病毒。方法 进行HEK293细胞传代培养,并建立三级细胞库,按中国药典2010年版III部要求进行常规检验;培养重组HPV16-E6E7腺病毒,测定滴度,插入目的基因以及基因组酶... 目的 对HEK293细胞进行三级细胞库的建立,并高效表达重组的HPV16-E6E7腺病毒。方法 进行HEK293细胞传代培养,并建立三级细胞库,按中国药典2010年版III部要求进行常规检验;培养重组HPV16-E6E7腺病毒,测定滴度,插入目的基因以及基因组酶切图谱鉴定。结果 HEK293细胞传代符合其生长形态,建立的三级细胞库和不同细胞库之间的传代数,细胞浓度和装量均符合疫苗基质制备的要求;能高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒,种子滴度〉3.0×109IU.mL 1;表达的目的基因和目的蛋白稳定。结论 建立的HEK293三级细胞库符合疫苗用细胞基质的要求。 展开更多
关键词 HEK293 细胞库 HPV16 重组腺病毒 高效表达
人乳头瘤病毒16型L2E7融合蛋白的优化表达、制备及其对肿瘤生长的抑制作用 被引量:1
11
作者 姜云水 李剑波 +6 位作者 高孟 任皎 金素凤 陈刚 吴洁 田厚文 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期566-576,共11页
为提高人乳头瘤病毒(HPV)16型治疗性融合蛋白疫苗HPV16 L2E7在大肠杆菌中的表达量,根据大肠杆菌偏爱密码子,对HPV16 l2e7基因进行密码子优化,优化后的基因分别插入到p GEX-5X-1、pQE30和pET41a表达载体中,转化JM109、JM109(DE3)和B... 为提高人乳头瘤病毒(HPV)16型治疗性融合蛋白疫苗HPV16 L2E7在大肠杆菌中的表达量,根据大肠杆菌偏爱密码子,对HPV16 l2e7基因进行密码子优化,优化后的基因分别插入到p GEX-5X-1、pQE30和pET41a表达载体中,转化JM109、JM109(DE3)和BL21(DE3)表达菌,筛选出高表达菌株pET41a-HPV16sl2e7/BL21(DE3),目的蛋白从占全菌蛋白的10%以下提高到约28%,优化接种量、IPTG浓度、诱导温度和诱导时间,获得最佳表达条件;通过15 L发酵罐发酵,SP Sepharose Fast Flow、Q Sepharose Fast Flow和Superdex 200 pg纯化及复性HPV16 L2E7融合蛋白,制备的融合蛋白纯度可达95%以上,经SDS-PAGE、Western blotting鉴定证实,制备的HPV16 L2E7蛋白加Cp G佐剂对小鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,有75%(6/8)的小鼠不成瘤,为后续的疫苗产业化奠定基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 优化表达 发酵 纯化 宫颈癌 疫苗
微载体技术高密度培养MRC-5细胞初探 被引量:2
12
作者 姜云水 李剑波 +7 位作者 顾春燕 陈科达 唐彩华 包佳源 毛岱敏 张峰 王平 《国际流行病学传染病学杂志》 2014年第1期6-10,共5页
目的 通过探索MRC-5细胞的微载体培养条件,以期建立MRC-5细胞的高密度培养方法.方法 用3种不同培养基(MEM、M199、DMEM)分别培养3.0×104/mL的MRC-5细胞,观察它们的细胞增殖及传代能力;在Spinner培养系统中,用1.0 g/L Cytopore 2... 目的 通过探索MRC-5细胞的微载体培养条件,以期建立MRC-5细胞的高密度培养方法.方法 用3种不同培养基(MEM、M199、DMEM)分别培养3.0×104/mL的MRC-5细胞,观察它们的细胞增殖及传代能力;在Spinner培养系统中,用1.0 g/L Cytopore 2和3.0 g/L Cytodex 3分别培养密度为3.70× 105/mL和2.98×105/mL的MRC-5细胞,观察两种载体对细胞生长代谢和细胞密度的影响,筛选出最适宜的培养基及微载体.使用5 L CelliGen310生物反应器对筛选获得的培养基及微载体进行MRC-5细胞的灌流培养初步摸索.结果 MRC-5细胞在MEM、M199、DMEM培养基中培养96 h细胞分别增殖了7.0、4.4和3.0倍;在MEM培养基中连续传代至5次以上,细胞增殖稳定,1:3传代72 h形成致密单层,而在M199和DMEM培养基中连续传代均未能获得理想的细胞形态.经96~120 h的培养后,使用1.0 g/L Cytopore 2培养的MRC-5细胞密度达到2.20× 106/mL高于使用3.0 g/L Cytodex 3的1.12×106/mL,且前者葡萄糖和乳酸代谢较后者更为活跃.首选MEM和Cytopore 2作为MRC-5细胞的灌流培养体系.在5L生物反应器中以1.0 g/L Cytopore 2和2.5LMEM培养基培养MRC-5细胞至144h,细胞密度达到1.54×106/mL.结论 初步建立的MEM Cytopore 2微载体细胞培养方法能够获得高密度、活性良好的MRC-5传代细胞. 展开更多
关键词 细胞培养技术 微载体 高密度培养 MRC-5细胞
表达人乳头瘤病毒16型E6E7重组腺病毒疫苗对小鼠的免疫和抗肿瘤效应 被引量:2
13
作者 吴洁 陈刚 +5 位作者 金素凤 高孟 李剑波 姜云水 毛子安 《国际流行病学传染病学杂志》 2014年第6期368-373,共6页
目的评价HPVl6E6E7的复制缺陷型重组5型腺病毒(PK—HPV—ad5)治疗性疫苗对实验小鼠免疫应答和抗肿瘤的生物学效应。方法使用基因重组技术构建PK—HPV—ad,疫苗,并通过小鼠免疫试验,检测小鼠总抗体和特异性IFNl,同时将造模小鼠分... 目的评价HPVl6E6E7的复制缺陷型重组5型腺病毒(PK—HPV—ad5)治疗性疫苗对实验小鼠免疫应答和抗肿瘤的生物学效应。方法使用基因重组技术构建PK—HPV—ad,疫苗,并通过小鼠免疫试验,检测小鼠总抗体和特异性IFNl,同时将造模小鼠分成疫苗组和对照组,分别对其进行抑瘤试验、TC-1肿瘤细胞挑战试验和肿瘤切除后防复发试验。结果HPV16E6E7诱导的总抗体第12天的水平相对较高(1:400~1:600);3批次疫苗特异性IFNl在第14天与对照组比较分别升高8.6、5.9和8.9倍,差异有统计学意义(t=15.721、6.967和14.342,P均〈0.01)。抑瘤试验表明疫苗剂量为10^7IU/只时小鼠肿瘤生长率为0,与对照组比较差异有统计学意义(确切概率法,P〈0.01),3批次疫苗验证有效剂量为10^7IU/只时肿瘤抑制率可达80%(8/10)以上。TC-1肿瘤细胞挑战试验结果显示:小鼠先接种疫苗能引起特异性的免疫应答,并能保护90%(9/10)的小鼠免受TC-1肿瘤细胞的攻击;肿瘤切除后防止复发试验提示在注射相同剂量疫苗时,对10^4个,只和10^5个/只肿瘤细胞造模小鼠,第0、5天免疫组肿瘤复发数少于第5,8天免疫组(1/10,4/10VS8/10,7/10)。结论PK—HPV—ads疫苗能诱导小鼠产生特异性的免疫应答,对抗肿瘤复发有治疗潜力。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒疫苗 腺病毒疫苗 免疫应答 抗肿瘤作用
人乳头瘤病毒16型治疗性疫苗联合免疫效果研究 预览 被引量:1
14
作者 任皎 姜云水 +6 位作者 高孟 赵莉 谭文杰 阮力 毛子安 田厚文 《生物技术通讯》 CAS 2013年第2期200-204,共5页
目的:探索联合免疫策略对人乳头瘤病毒16型(HPV16)治疗疫苗L2E7E6和rAdE7E6的免疫效果的影响。方法:用L2E7E6融合蛋白和重组腺病毒rAd5E7E6以不同的联合免疫程序分别免疫C57BL/6小鼠,通过检测其诱发的体液免疫和细胞免疫反应,以... 目的:探索联合免疫策略对人乳头瘤病毒16型(HPV16)治疗疫苗L2E7E6和rAdE7E6的免疫效果的影响。方法:用L2E7E6融合蛋白和重组腺病毒rAd5E7E6以不同的联合免疫程序分别免疫C57BL/6小鼠,通过检测其诱发的体液免疫和细胞免疫反应,以及观察其在HPV16小鼠治疗模型中的抑瘤效果,比较分析联合免疫对小鼠免疫反应及治疗肿瘤效果的影响。结果:异源性联合免疫组均可检测到较高水平的体液免疫,该2组针对E6、E7特异性的T细胞免疫反应与同源性联合免疫2组相比明显提高,并在小鼠肿瘤治疗模型中能抑制肿瘤生长.结论:异源性联合免疫策略可明显提高HPVl6L2E7E6及rAd5E7E6疫苗的T细胞免疫反应,且有效治疗HPV16相关肿瘤.为HPVl6L2E7E6及rAd5E7E6疫苗的应用提供了实验基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 宫颈癌 免疫治疗 联合免疫
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非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸对人乳头瘤病毒治疗性蛋白疫苗的免疫佐剂作用 被引量:1
15
作者 吴小红 吴洁 +7 位作者 陈刚 金素凤 高孟 陈科达 姜云水 李剑波 罗永能 《国际流行病学传染病学杂志》 2013年第2期94-98,共5页
目的研究非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合宫颈癌治疗性融合蛋白疫苗HPV16L2ESET(以下简称蛋白疫苗)诱导小鼠产生的免疫应答及其在肿瘤免疫治疗中的免疫佐剂作用。方法免疫学试验:108只雌性C57BL/6小鼠随机分成CpG组、蛋... 目的研究非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合宫颈癌治疗性融合蛋白疫苗HPV16L2ESET(以下简称蛋白疫苗)诱导小鼠产生的免疫应答及其在肿瘤免疫治疗中的免疫佐剂作用。方法免疫学试验:108只雌性C57BL/6小鼠随机分成CpG组、蛋白疫苗组、CpG+蛋白疫苗组,每组36只,分别肌肉注射CpG-ODN(10μg/只)、蛋白疫苗(120μg/只)、蛋白疫苗(120μg/只)和CpG-ODN(10μg/只)的混合溶液,免疫程序为0,3、7d;ELISPOT法检测IFN-T,间接ELISA法检测IgG抗体水平,分别评价小鼠产生的细胞及体液免疫效果。肿瘤抑制试验:将40只雌性C57BL/6小鼠皮下接种TC.1肿瘤细胞(1×104/只),24h后随机分成4组接种疫苗,每组10只,CpG组、蛋白疫苗组和CpG+蛋白疫苗组分别肌肉注射CpG-ODN(10μg/只)、蛋白疫苗(120μg/只)、蛋白疫苗(120μg/只)和CpG-ODN(10μg/只)的混合溶液,免疫程序为0、3、7d;对照组不给药。通过成瘤率分析抗肿瘤效果。结果免疫学试验表明,免疫后14、21和28d,CpG+蛋白疫苗组小鼠分泌IFN-y的T细胞高于蛋白疫苗组(Z=-2.36、-3.58、-3.58,P均〈0.05),在21d达到最高水平;免疫后5周,CpG+蛋白疫苗组IgG抗体滴度维持在1:1×105左右,其中在10、14、21、42d与蛋白疫苗组比较差异显著(t=6.15、5.84、4.57、7.91,P均〈0.01);抑瘤试验表明,蛋白疫苗组能延缓肿瘤生长,成瘤率为40%,添加CpG-ODN后,成瘤率降为0(x^2=5.00,P〈0.05)。结论将CpG-ODN与HPV16L2E6E7融合蛋白疫苗联合应用,可以诱导C57BL/6雌性小鼠产生更强的特异性体液和细胞免疫应答,对荷瘤鼠有更好的抗肿瘤效果,有望提高疫苗的免疫治疗效果。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒疫苗 CPGODN 肿瘤免疫治疗
表达人乳头瘤病毒16型E6E7的重组腺病毒载体疫苗种子库遗传稳定性研究
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作者 吴洁 陈科达 +6 位作者 高孟 毛子安 陈刚 金素凤 吴小红 姜云水 《国际流行病学传染病学杂志》 2013年第3期共6页
目的 了解表达人乳头瘤病毒(HPV) 16型E6和E7融合蛋白的重组腺病毒载体(Ad-HPV16E6E7)疫苗的主种子库(MSB)和工作种子库(WSB)的遗传稳定性.方法 通过显微镜检查和病毒感染效价测定实验测定Ad-HPV16E6E7 MSB和WSB的感染性滴度;采用PCR扩... 目的 了解表达人乳头瘤病毒(HPV) 16型E6和E7融合蛋白的重组腺病毒载体(Ad-HPV16E6E7)疫苗的主种子库(MSB)和工作种子库(WSB)的遗传稳定性.方法 通过显微镜检查和病毒感染效价测定实验测定Ad-HPV16E6E7 MSB和WSB的感染性滴度;采用PCR扩增法鉴定HPV16E6E7目的基因稳定性;采用Western印迹法和免疫荧光法鉴定Ad-HPV16E6E7目的蛋白表达;采用C57BL/6小鼠TC-1肿瘤细胞生长抑制试验评价Ad-HPV16E6E7的生物学效应.结果 Ad-HPV16E6E7的MSB和WSB的感染性滴度分别为6.31×109 IU/mL和3.00×109 IU/mL;插入目的基因和表达目的蛋白稳定;小鼠TC-1肿瘤生长抑制试验表明MSB和WSB滴度的数量级在109 IU/mL时,小鼠抑瘤率达100%,与对照组相比差异均有统计学意义(x2=20.00、20.00,P均<0.01).结论 Ad-HPV16E6E7疫苗的种子库遗传稳定,符合将来疫苗研发的要求. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16 腺病毒载体 种子库 遗传稳定性
短串联重复序列图谱分析法鉴定HEK293细胞传代的稳定性
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作者 吴洁 李剑波 +7 位作者 毛子安 吴小红 陈科达 高孟 陈刚 姜云水 金素凤 《国际流行病学传染病学杂志》 2012年第6期365-368,F0003共5页
目的用短串联重复序列(STR)图谱20位点分析法对疫苗研发用HEK293细胞的传代稳定性进行研究。方法对购自美国菌毒种保管中心(ATCC)的HEK293细胞进行传代,按中国药典三部要求建立主种子库(第40代),工作种子库(第43代)和生产终... 目的用短串联重复序列(STR)图谱20位点分析法对疫苗研发用HEK293细胞的传代稳定性进行研究。方法对购自美国菌毒种保管中心(ATCC)的HEK293细胞进行传代,按中国药典三部要求建立主种子库(第40代),工作种子库(第43代)和生产终末细胞(第65代),并进行SIR检测;按检测要求进行细胞扩增,DNA提取,PCR扩增及SIR20位点分析。结果STR图谱20位点分析法已全面覆盖美国ATCC9位点和中检院16位点法,三级传代细胞检测结果与ATCC标准株293EcRShh(Adv5)匹配度100%,与中检院检测结果完全一致,无外源细胞的污染。结论本实验室传代建库的HEK293细胞遗传稳定,无外源细胞污染,符合疫苗研发用要求。 展开更多
关键词 串联重复序列 HEK293 细胞传代稳定性
甲型肝炎减毒活疫苗冷冻干燥保护剂的研究
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作者 陈念良 毛江森 +12 位作者 黄卫新 忻亚娟 陈悦青 毛子安 张锋 钱汶 陈卓 朱莲 沈立军 唐彩华 吴海光 陈军 《国际流行病学传染病学杂志》 2012年第2期 73-75,共3页
目的研制不同成分不含明胶及人血白蛋白的甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗冷冻干燥保护剂。方法通过对不同保护剂组合的系列试验,筛选一组较好的配方,在适宜条件下制备成冻干甲肝疫苗,并与传统配方进行比较。结果使用不含明胶及人血白蛋... 目的研制不同成分不含明胶及人血白蛋白的甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗冷冻干燥保护剂。方法通过对不同保护剂组合的系列试验,筛选一组较好的配方,在适宜条件下制备成冻干甲肝疫苗,并与传统配方进行比较。结果使用不含明胶及人血白蛋白冷冻干燥保护剂的疫苗,冻干后疫苗病毒滴度仅下降0.211gCCID50/mL,37℃放置7d病毒滴度下降0.211g-34lg CCID50ML,冻干保护效果良好;成品的内毒素含量与注射用水相同,均低于0.25EU/mL,明显低于传统配方。制备的3批试验疫苗,各项检测指标均符合冻干甲肝减毒活疫苗的质量标准。结论以海藻糖、甘露醇、氯化镁、甘氨酸等成分为主,不含明胶及人血白蛋白的保护剂是一种安全性较高、冻干保护效果好、适合疫苗生产的有效保护剂。 展开更多
关键词 疫苗 冷冻干燥 保护剂
人乳头瘤病毒治疗性活载体疫苗的研究进展 被引量:1
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作者 吴小红 陈科达 +1 位作者 吴洁 《国际流行病学传染病学杂志》 2011年第3期201-204,共4页
高危型人乳头瘤病毒(HPV)-16和HPV-18在宫颈癌的致病过程中起着重要作用。近年来,HPV预防性疫苗已成功上市,但其费用较高,且不能治疗已感染的患者及相关的损伤。多种靶向E6/E7抗原的HPV治疗性疫苗已进入临床前模型和临床试验,... 高危型人乳头瘤病毒(HPV)-16和HPV-18在宫颈癌的致病过程中起着重要作用。近年来,HPV预防性疫苗已成功上市,但其费用较高,且不能治疗已感染的患者及相关的损伤。多种靶向E6/E7抗原的HPV治疗性疫苗已进入临床前模型和临床试验,包括活载体疫苗,多肽、蛋白疫苗,核酸疫苗及细胞疫苗。此文就HPV治疗性活载体疫苗进行了综述。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒疫苗 载体 宫颈癌
人乳头瘤病毒治疗性多肽及蛋白疫苗的研究进展
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作者 吴小红 陈科达 +1 位作者 姜云水 《国际流行病学传染病学杂志》 2011年第5期 352-355,共4页
开发靶向E6和E7蛋白的HPV治疗性疫苗,用其治疗HPV感染及其所引起的癌变有着十分重要的意义。多种治疗性疫苗已进入临床前和临床研究。此文就HPV治疗性多肽及蛋白疫苗的研究进展作了综述。
关键词 宫颈癌 人乳头瘤病毒 多肽疫苗 蛋白疫苗
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