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新工科背景下密码人才的计算机系统思维培养模式探索与实践 预览
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作者 张健毅 张克 +2 位作者 孙猛 王志强 傅仕诤 《计算机教育》 2019年第3期23-26,共4页
针对密码人才计算机系统思维以及学科交叉融合的培养存在不足的教学实际,分析当前密码人才培养中存在的问题,着重探讨密码人才系统培养模式,构建具有系统观的软/硬件贯通型密码人才培养体系;提出培养综合型、应用型、创新型密码人才的... 针对密码人才计算机系统思维以及学科交叉融合的培养存在不足的教学实际,分析当前密码人才培养中存在的问题,着重探讨密码人才系统培养模式,构建具有系统观的软/硬件贯通型密码人才培养体系;提出培养综合型、应用型、创新型密码人才的培养模式并阐述教学实践过程中对课程及实验体系特色化改革的实践效果。 展开更多
关键词 密码人才培养 新工科 计算机学科 系统思维
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基于深度学习的文本自动摘要方案 预览
2
作者 张克 李伟男 +2 位作者 钱榕 史泰猛 焦萌 《计算机应用》 CSCD 北大核心 2019年第2期311-315,共5页
针对自然语言处理(NLP)生成式自动摘要领域的语义理解不充分、摘要语句不通顺和摘要准确度不够高的问题,提出了一种新的生成式自动摘要解决方案,包括一种改进的词向量生成技术和一个生成式自动摘要模型。改进的词向量生成技术以Skip-Gra... 针对自然语言处理(NLP)生成式自动摘要领域的语义理解不充分、摘要语句不通顺和摘要准确度不够高的问题,提出了一种新的生成式自动摘要解决方案,包括一种改进的词向量生成技术和一个生成式自动摘要模型。改进的词向量生成技术以Skip-Gram方法生成的词向量为基础,结合摘要的特点,引入词性、词频和逆文本频率三个词特征,有效地提高了词语的理解;而提出的Bi-MulRnn+生成式自动摘要模型以序列映射(seq2seq)与自编码器结构为基础,引入注意力机制、门控循环单元(GRU)结构、双向循环神经网络(BiRnn)、多层循环神经网络(MultiRnn)和集束搜索,提高了生成式摘要准确性与语句流畅度。基于大规模中文短文本摘要(LCSTS)数据集的实验结果表明,该方案能够有效地解决短文本生成式摘要问题,并在Rouge标准评价体系中表现良好,提高了摘要准确性与语句流畅度。 展开更多
关键词 自然语言处理 生成式文本自动摘要 序列映射 自编码器 词向量 循环神经网络
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基于统计语言模型改进的Word2Vec优化策略研究 预览
3
作者 张克 史泰猛 +1 位作者 李伟男 钱榕 《中文信息学报》 CSCD 北大核心 2019年第7期11-19,共9页
该文从训练词向量的语言模型入手,研究了经典skip-gram、CBOW语言模型训练出的词向量的优缺点,引入TFIDF文本关键词计算法,提出了一种基于关键词改进的语言模型。研究发现,经典skip-gram、CBOW语言模型只考虑到词本身与其上下文的联系,... 该文从训练词向量的语言模型入手,研究了经典skip-gram、CBOW语言模型训练出的词向量的优缺点,引入TFIDF文本关键词计算法,提出了一种基于关键词改进的语言模型。研究发现,经典skip-gram、CBOW语言模型只考虑到词本身与其上下文的联系,而改进的语言模型通过文本关键词建立了词本身与整个文本之间的联系,在词向量训练结果的查准率和相似度方面,改进模型训练出的词向量较skip-gram、CBOW语言模型有一个小幅度的提升。通过基于维基百科1.5GB中文语料的词向量训练实验对比后发现,使用CBOW-TFIDF模型训练出的词向量在相似词测试任务中结果最佳;把改进的词向量应用到情感倾向性分析任务中,正向评价的精确率和F1值分别提高了4.79%、4.92%,因此基于统计语言模型改进的词向量,对于情感倾向性分析等以词向量为基础的应用研究工作有较为重要的实践意义。 展开更多
关键词 词向量 统计语言模型 TFIDF 文本关键词 CBOW-TFIDF
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基于DBN和TSVM的混合入侵检测模型研究 预览
4
作者 张克 鲜敏 《计算机应用与软件》 北大核心 2018年第5期313-317,333共6页
针对传统机器学习方法在处理大规模入侵数据的检测精度低和检测速度慢等问题,提出一种基于深度学习的混合入侵检测模型DBN-PBT-TSVM。该模型利用深度信念网络DBN(Deep Belief Network)减少特征集的维度,获得原始数据集的最优的低维表... 针对传统机器学习方法在处理大规模入侵数据的检测精度低和检测速度慢等问题,提出一种基于深度学习的混合入侵检测模型DBN-PBT-TSVM。该模型利用深度信念网络DBN(Deep Belief Network)减少特征集的维度,获得原始数据集的最优的低维表示;综合对支持向量机TSVM(Twin Support Vector Machine)和偏二叉树的优势,构造了一种基于偏二叉树的对支持向量机多类分类器,对网络入侵数据进行识别。基于KDDCUP'99数据集实验比较的结果表明,DBN-PBT-TSVM模型实现了在保证分类性能的同时,还显著地降低了检测时间,尤其是在处理大规模数据时效果更明显,为入侵检测在处理大规模数据时提供了一种全新的思路。 展开更多
关键词 深度学习 入侵检测 深度信念网络 偏二叉树 对支持向量机
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云环境下基于可搜索加密技术的密文全文检索研究 预览 被引量:2
5
作者 张克 张国亮 +1 位作者 姜琛 杨云松 《计算机应用与软件》 2017年第4期35-41,共7页
为了解决云存储技术带来的数据安全和高效检索问题,在深入研究可搜索加密技术基础上,提出一种基于云存储的密文全文检索模型,给出基于可搜索加密技术的密文全文索引构建和检索策略,并对方案的安全性进行分析。实验表明,云存储环境... 为了解决云存储技术带来的数据安全和高效检索问题,在深入研究可搜索加密技术基础上,提出一种基于云存储的密文全文检索模型,给出基于可搜索加密技术的密文全文索引构建和检索策略,并对方案的安全性进行分析。实验表明,云存储环境下基于可搜索加密技术的密文全文检索方案既保证了数据的安全性,又具有很好的检索效率,可适用于海量数据的加密存储与高效安全检索。 展开更多
关键词 云存储 可搜索加密 全文检索 密文全文索引
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siRNA干扰slug基因表达对IEC-6细胞放射线敏感性影响 预览
6
作者 高清华 张克 +3 位作者 赵彬彬 陈栋 姜忠 张林 《青岛大学医学院学报》 CAS 2017年第1期35-38,42共5页
目的探讨siRNA干扰slug基因表达对体外肠隐窝上皮细胞IEC-6接受X线照射的敏感性影响及其机制。方法以体外培养大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,将转染siRNA-slug(实验组)、转染siRNA(阴性对照组)和未转染siRNA(空白对照组)... 目的探讨siRNA干扰slug基因表达对体外肠隐窝上皮细胞IEC-6接受X线照射的敏感性影响及其机制。方法以体外培养大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,将转染siRNA-slug(实验组)、转染siRNA(阴性对照组)和未转染siRNA(空白对照组)的细胞进行X射线照射处理,24h后,用Western blot法检测各组细胞的Slug和细胞P53正向凋亡上调因子(PUMA)蛋白的表达,CCK8法检测细胞在不同剂量X射线照射下的生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果实验组Slug蛋白表达与阴性对照组和空白对照组比较明显降低,PUMA蛋白表达明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有显著性(F=1 760、421,P〈0.01)。与阴性对照组和空白对照组比较,实验组细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(F=33.02,P〈0.01)。在0~6Gy剂量范围内,随着X线照射剂量的增加,各组细胞的增殖活性均降低(F=6.595~31.470,P〈0.05);在6Gy剂量X线照射下,实验组细胞生长抑制率、早期+晚期凋亡率较阴性对照组和空白对照组明显增高,差异有统计学意义(F=47.700、33.020,P〈0.01)。结论 siRNA干扰slug基因的表达能够使促凋亡的PUMA蛋白表达增加,从而增强IEC-6细胞对X射线的敏感性。 展开更多
关键词 SLUG基因 RNA干扰 P53正向凋亡上调因子 辐射耐受性
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计算机学科专业学位硕士研究生特色课程体系建设 预览 被引量:4
7
作者 张岩 姜建锦 +3 位作者 张克 张晓昆 周长春 封化民 《计算机教育》 2016年第12期91-94,共4页
全日制专业学位硕士研究生课程体系的建设关系研究生的培养质量。文章分析国内专业学位硕士研究生课程体系现存的问题,提出以突出服务特殊行业人才需求的办学特色为原则,建立计算机技术领域专业硕士研究生课程体系,并从课程分类、课程... 全日制专业学位硕士研究生课程体系的建设关系研究生的培养质量。文章分析国内专业学位硕士研究生课程体系现存的问题,提出以突出服务特殊行业人才需求的办学特色为原则,建立计算机技术领域专业硕士研究生课程体系,并从课程分类、课程设置和实践课程3方面阐述该课程体系的特色之处。 展开更多
关键词 专业学位 课程体系 计算机学科 研究生
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思政课“概论”课程教学改革的调查与思考
8
作者 冯萱 张克 +1 位作者 陈志宏 胡正娟 《北京教育:高教版》 2016年第10期69-71,共3页
思政课教学内容要结合学习"毛泽东思想和中国特色社会主义理论体系概论"(以下简称"概论")课程学生的专业背景,通过社会热点问题导入对理论的解读,社会实践可以采取更加灵活多样的方式进行。其中,专题教学是更为有效的教学方法,应... 思政课教学内容要结合学习"毛泽东思想和中国特色社会主义理论体系概论"(以下简称"概论")课程学生的专业背景,通过社会热点问题导入对理论的解读,社会实践可以采取更加灵活多样的方式进行。其中,专题教学是更为有效的教学方法,应不断加以凝练和完善。尤其要特别注意使学生了解"概论"是"中国近现代史纲要"课程(以下简称"纲要")的必要延伸。 展开更多
关键词 医学专业生 思政课 概论 调查与思考
网络对医学生思政课教学影响的调查与思考 预览
9
作者 冯萱 陈志宏 张克 《继续医学教育》 2016年第6期8-9,共2页
以朋友圈为代表的网络社区群落,已经成为学生交流思想的主要平台。各大商业门户网站在影响学生思想中的作用不可忽视。利用网络开展思政课社会实践得到学生的认同,是一个可以考虑的方法。直面网络社会、着眼于网络的优势而积极介入微媒... 以朋友圈为代表的网络社区群落,已经成为学生交流思想的主要平台。各大商业门户网站在影响学生思想中的作用不可忽视。利用网络开展思政课社会实践得到学生的认同,是一个可以考虑的方法。直面网络社会、着眼于网络的优势而积极介入微媒体群落,只有在这样的行动中才能够消解网络带来的消极影响,并使其成为思想政治教育的有力工具。 展开更多
关键词 医学生 思政课 网络 微媒体 调查
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一种基于聚类技术的全文检索与推介系统的构建 预览
10
作者 张克 任鹏 +3 位作者 钱榕 居荣斌 姜琛 张国亮 《计算机科学》 CSCD 北大核心 2015年第S1期489-490 512,共3页
近年来,搜索引擎的发展可谓突飞猛进,排序算法也日新月异,但相关搜索推介这项功能却进展缓慢,无法为用户提供令人满意的有价值的关键词。本项目是专门为了解决这个问题而进行研究的,采用单词到文档,文档到聚类,聚类再回归单词的语义检... 近年来,搜索引擎的发展可谓突飞猛进,排序算法也日新月异,但相关搜索推介这项功能却进展缓慢,无法为用户提供令人满意的有价值的关键词。本项目是专门为了解决这个问题而进行研究的,采用单词到文档,文档到聚类,聚类再回归单词的语义检索流程,完成了K-means聚类算法以及TFIDF权重算法的Java实现。通过此系统,用户不仅可以找到包含指定关键词的网页,还会收到与该关键词关联最紧密的其他关键词推介,协助用户进一步发掘信息。 展开更多
关键词 搜索引擎 聚类 关键词 推介
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全日制专业硕士研究生行业实习教学模式 预览 被引量:5
11
作者 章小莉 张克 +1 位作者 刘歆 孙新华 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2014年第1期225-228,共4页
为了做好全日制专业硕士研究生教育,让学生充分了解行业特点,分析了全日制专业硕士新生的情况,阐明了设置在学业教育前期的行业实习课程主要教学任务——了解用人单位对人才的知识、技术、技能的需求以及理解从业素质,介绍了基于帮助学... 为了做好全日制专业硕士研究生教育,让学生充分了解行业特点,分析了全日制专业硕士新生的情况,阐明了设置在学业教育前期的行业实习课程主要教学任务——了解用人单位对人才的知识、技术、技能的需求以及理解从业素质,介绍了基于帮助学生快速明确专业学习方向,增强专业素质和专业技能的教学目的,并说明了实践中探索的行业实习教学模式、开展步骤,提出了行业实习中技术与行业素质教育、实习教师遴选以及成绩考核的方法. 展开更多
关键词 全日制专业硕士 行业实习 教学模式
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浅谈医学院校思政课实现协同创新的主体和因素 预览 被引量:3
12
作者 冯萱 陈志宏 +3 位作者 储成仿 张克 陈莹 吴丹丹 《继续医学教育》 2014年第2期99-100,共2页
从协同创新的观点出发,医学院校思政课教学应该将网络信息资源、医院、社区等等资源利用起来,全面整合医疗卫生领域的信息资源,极大地拓展参与教学活动的主体和因素。高校、卫生管理机构、医院、社区等机构及其人员建立起共同的愿景... 从协同创新的观点出发,医学院校思政课教学应该将网络信息资源、医院、社区等等资源利用起来,全面整合医疗卫生领域的信息资源,极大地拓展参与教学活动的主体和因素。高校、卫生管理机构、医院、社区等机构及其人员建立起共同的愿景、打造共同目标,在政策、观念等等方面做出相应调整,通过实践协同创新教学模式,实现医学院校思政课教学目标的协同效应。 展开更多
关键词 医学生 思政课 协同创新 主体和因素
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医学生突发事件救援急救能力及培训需求的调查研究 预览 被引量:9
13
作者 李淑兰 吴瑛 张克 《中华护理教育》 2014年第1期36-38,共3页
目的了解医学生的突发事件救援急救能力及培训需求。方法采用自设问卷对我校245名医学生进行问卷调查。结果86.94%的医学生之前学习过突发事件救援急救知识和急救技能,能够完全掌握熟练操作每项急救技术的学生仅为8.57%-18.78%... 目的了解医学生的突发事件救援急救能力及培训需求。方法采用自设问卷对我校245名医学生进行问卷调查。结果86.94%的医学生之前学习过突发事件救援急救知识和急救技能,能够完全掌握熟练操作每项急救技术的学生仅为8.57%-18.78%。34.69%学生将突发公共事件的现场急救作为首选学习项目;67.76%的学生将生动现场演示作为首选学习途径。结论医学生是应对社会突发事件救援的后续有生力量.要推进医学生面对突发事件时紧急救援的知识普及和能力提高。 展开更多
关键词 学生 卫生专业 急救 问卷调查
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胰腺癌患者血清ⅡA分泌型磷脂酶A2水平及其与预后的关系 被引量:2
14
作者 张勇 蒋堃 +3 位作者 王春阳 崔元琴 刘冬声 张克 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期340-341,共2页
ⅡA分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2 groupⅡA,sPLA2-1IA)是花生四烯酸代谢的关键酶,参与体内多种生理和病理过程。近年研究发现,sPLA211A与胰腺癌、胃癌、肠癌等消化系统肿瘤的发生、侵袭、转移及预后密切相关。本研... ⅡA分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2 groupⅡA,sPLA2-1IA)是花生四烯酸代谢的关键酶,参与体内多种生理和病理过程。近年研究发现,sPLA211A与胰腺癌、胃癌、肠癌等消化系统肿瘤的发生、侵袭、转移及预后密切相关。本研究测定sPLA2-1IA在胰腺癌患者血清中的水平,拟探讨sPLA2一IIA与胰腺癌临床病理和预后的关系。 展开更多
关键词 分泌型磷脂酶A2 胰腺癌患者 预后 血清 花生四烯酸代谢 消化系统肿瘤 SPLA2
rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6对人胰腺癌血管生成的影响及其机制探讨 预览
15
作者 崔海宁 陈俭云 +7 位作者 王正文 张克 余壮明 王齐全 王明华 朱东明 宋彩霞 张泽米 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1161-1164,共4页
目的:构建并制备携带目的基因的rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6(Slug-siRNA)腺相关病毒载体,探讨Slug干扰对人胰腺癌细胞株AsPC-1血管生成的影响及其机制。方法:利用以前试验的方法构建重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA-U6。鸡胚绒毛尿... 目的:构建并制备携带目的基因的rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6(Slug-siRNA)腺相关病毒载体,探讨Slug干扰对人胰腺癌细胞株AsPC-1血管生成的影响及其机制。方法:利用以前试验的方法构建重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA-U6。鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6对细胞血管生成的影响。Western blot及RT-PCR方法鉴定转染前后AsPC-1细胞Slug与VEGF蛋白及mRNA表达。结果:携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6成功构建。rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6抑制细胞血管生成。Slug-siRNA有效抑制AsPC-1细胞Slug与VEGF蛋白及mRNA的表达。结论:rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6抑制细胞血管生成,其机制可能与干扰Slug及VEGF的表达有关。 展开更多
关键词 SLUG 小干扰RNA 腺相关病毒 胰腺癌 血管生成
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传统医德对当代医德教育的启示 预览 被引量:2
16
作者 张克 张艳清 《继续医学教育》 2013年第9期71-72,共2页
中国传统医德植根于中国传统伦理思想中,其主要思想内涵可以概括为医乃仁术、义为利本、精勤不倦等方面。传统医德的这些优秀成果对于当代医德教育有着多方面的启示,如加强德性教育、加强医德情感的培养、加强社会主义核心价值观的引... 中国传统医德植根于中国传统伦理思想中,其主要思想内涵可以概括为医乃仁术、义为利本、精勤不倦等方面。传统医德的这些优秀成果对于当代医德教育有着多方面的启示,如加强德性教育、加强医德情感的培养、加强社会主义核心价值观的引领作用等。 展开更多
关键词 传统医德 医德教育 启示
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湿性愈合理论在慢性伤口运用中的体会 预览 被引量:5
17
作者 张克 《成都医学院学报》 CAS 2012年第03Z期280-281,共2页
目的:探讨湿性愈合理论在慢性伤口中运用。方法:将40例慢性伤口患者随机分成湿性愈合治疗组和常规治疗组,各组分别为20例患者。在全身治疗的基础上,湿性愈合治疗组用透明的无定形水凝胶伤口敷料德湿洁治疗,常规治疗组用碘伏纱条换... 目的:探讨湿性愈合理论在慢性伤口中运用。方法:将40例慢性伤口患者随机分成湿性愈合治疗组和常规治疗组,各组分别为20例患者。在全身治疗的基础上,湿性愈合治疗组用透明的无定形水凝胶伤口敷料德湿洁治疗,常规治疗组用碘伏纱条换药处理,对比分析两组患者的临床疗效。结果:湿性愈合治疗组和常规治疗组相比较,在创面换药次数、愈合时间、疼痛域、患者满意度等方面有显著差异。结论:湿性愈合理论治疗慢性伤口效果确切,使患者疼痛缓解,减少更换次数,缩短愈合时间,提高满意度,值得临床推广。 展开更多
关键词 湿性愈合 慢性伤口 德湿洁敷料
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医学生思政课教学可以引入公共卫生事件 预览 被引量:1
18
作者 冯萱 陈志宏 +3 位作者 储成仿 张克 赵丽莉 王坤 《西北医学教育》 2012年第2期 272-273,294,共3页
医学院校思政课教学要紧贴社会生活的实际,应该考虑学生的专业特点,将重大突发公共卫生事件做为案例纳入到医学生的思政课教学内容中,会起到事半功倍的效果。以《毛中特概论》课程的教学为例,将公共卫生事件所涉及的方方面面引入到《概... 医学院校思政课教学要紧贴社会生活的实际,应该考虑学生的专业特点,将重大突发公共卫生事件做为案例纳入到医学生的思政课教学内容中,会起到事半功倍的效果。以《毛中特概论》课程的教学为例,将公共卫生事件所涉及的方方面面引入到《概论》课程的教学中,通过引导学生课外的网上学习、课堂上的讨论、课后总结网上学习资料及撰写学习心得,将有效提高医学院校思政课教学水平,有助于实现教学目的。 展开更多
关键词 医学生 思政课 公共卫生事件
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rAAV2-slug-siRNA对原位胰腺癌移植瘤转移和血管生成影响的实验研究 预览 被引量:2
19
作者 陈俭云 崔海宁 +1 位作者 王正文 张克 《海南医学院学报》 CAS 2012年第1期 5-8,11,共5页
目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性... 目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组(腹腔注射rAAV2-GFP)、实验组(腹腔注射rAAV2-slug-siRNA)。10周后利用CO2麻醉法处死裸鼠,观察原位胰腺癌移植瘤的重量,抑瘤率,肝、胃肠、腹腔转移,腹水等情况,及肿瘤细胞微血管密度(MVD)。RT-PCR检测移植瘤的slug mR-NA表达,Western blot检测slug蛋白的表达。结果:胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型建立成功,成瘤率100%。实验组原位胰腺癌移植瘤瘤重明显低于阴性对照组(P〈0.05),抑瘤率为70.83%。阴性对照组诱发的裸鼠胰腺癌质地硬,肿块向四周浸润并形成癌性粘连,与阴性对照组相比,实验组腹膜、肝、毗邻脏器转移率和形成腹水率均明显下降(P〈0.05)。实验组MVD明显少于阴性对照组(P〈0.05),slug mRNA相对表达量(RT-PCR)和slug蛋白相对表达量(Western blot)明显低于阴性对照组(P〈0.05)。结论:rAAV2-slug-siRNA可能通过抑制肿瘤血管生成而抑制原位胰腺癌移植瘤转移。 展开更多
关键词 胰腺癌 slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体 移植瘤转移 血管生成
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靶向Slug基因的腺相关腺病毒载体的构建与鉴定 预览
20
作者 严明总 张克 +1 位作者 王齐全 欧树安 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第11期1179-1183,共5页
目的:构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体.方法:首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收的PCR产物;酶切pSNAV2.0-... 目的:构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体.方法:首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收的PCR产物;酶切pSNAV2.0-lacz-α载体质粒,并与上述产物进行连接;转化感受态大肠杆菌DH5α,得到重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定.建立载体细胞株BHK/Slug-siRNA,大规模制备rAAV2-EGFP-Slug-siRAN并对其纯化、鉴定和滴度测定.结果:携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确.将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/?UL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒rAAV2-EGFP-Slug-siRNA,经检测目的片段插入成功,滴度为9.23×10^10puf.结论:成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体. 展开更多
关键词 SLUG基因 小干扰RNA 重组腺相关腺病毒
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