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非洲猪瘟病毒无标签重组K205R抗原制备与应用 预览
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作者 肖景景 卢会鹏 +10 位作者 李洋洋 周晓慧 刘晓明 胡威 张晓凯 崔晓霞 张鑫宇 张泉 夏晓莉 孙怀昌 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期90-94,100共6页
为建立敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测方法,将ASFV K205R基因与类弹性蛋白多肽(ELP)进行融合表达,用相变循环纯化ELP-K205R融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,用相变循环回收K205R蛋白,用抗体阳性血清... 为建立敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测方法,将ASFV K205R基因与类弹性蛋白多肽(ELP)进行融合表达,用相变循环纯化ELP-K205R融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,用相变循环回收K205R蛋白,用抗体阳性血清对重组K205R蛋白进行ELISA鉴定。结果表明:重组大肠埃希菌能正确表达ELP-K205R融合蛋白,相变循环纯化的融合蛋白纯度大于80%;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,回收的重组K205R蛋白纯度大于95%,能被特异抗体阳性血清识别;重组K205R抗原与抗体阴性猪血清反应阴性,与抗体阳性猪血清反应阳性,D450nm值与血清稀释倍数具有线性相关性。用重组K205R抗原对已知猪血清进行ELISA检测,结果显示24份ASFV抗体阳性血清为检测阳性,24份ASFV抗体阴性血清为检测阴性,检测符合率为100%。这一研究提示制备的无标签重组K205R抗原可用于ASFV抗体检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 无标签K205R抗原 制备 抗体检测
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猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化及鉴定 预览 被引量:1
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作者 王席 李国攀 +2 位作者 陈清清 荣俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期1792-1800,共9页
为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap(PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacry... 为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap(PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-300 HR凝胶过滤层析、Capto Q离子交换层析、CsCl密度梯度离心等方法对其进行了纯化。通过Western blotting对纯化所得蛋白进行免疫反应性鉴定,透射电镜(TEM)观察纯化蛋白的粒径及形态,高效液相尺寸排阻色谱(HPSEC)检测其组分分布。结果显示,纯化后PCV2 rCap蛋白经SDS-PAGE检测,可见28 ku的目的蛋白带,灰度扫描法检测其纯度为97.53%。Western blotting结果显示,该处的特异性蛋白条带有明显的免疫反应性;TEM检测其为粒径17.35~19.24 nm的规则球形颗粒,表明所获得的PCV2 rCap蛋白在表达时能在菌体内自我装配成VLPs,且在纯化过程中没有被破坏而解聚,仍保持天然状态;HPSEC检测纯化样品中VLPs含量为92.67%。本试验结果为进一步研究PCV2 VLPs的空间结构及其免疫保护机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 病毒样颗粒(VLPs) 纯化 鉴定 凝胶过滤层析 离子交换层析
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猪圆环病毒2型疫苗豚鼠免疫效检模型的建立 预览
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作者 荣俊 +1 位作者 郭伟伟 匡红艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期479-483,共5页
为建立以豚鼠为模型动物检测猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗效果的方法,本研究以Hartley豚鼠为模型动物,采用原核细胞表达的PCV2 Cap蛋白作为包被抗原,建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法,进行PCV2疫苗免疫效果的评价。结果表明,该方法检测... 为建立以豚鼠为模型动物检测猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗效果的方法,本研究以Hartley豚鼠为模型动物,采用原核细胞表达的PCV2 Cap蛋白作为包被抗原,建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法,进行PCV2疫苗免疫效果的评价。结果表明,该方法检测未免疫豚鼠血清的OD_(450nm)本底值较低,平均值为0.0673。依据138只未免疫豚鼠的OD_(450nm)平均值确定ELISA临界值:S/P值≥0.2为阳性;S/P〈0.1为阴性;0.2〉S/P≥0.1为可疑。该检测方法具有很高的特异性和较好的可重复性。采用国内和国外两种PCV2疫苗免疫后,豚鼠血清抗体滴度在4周内达到峰值,两组之间变化趋势高度相关,Pearson相关系数为0.805。该检测方法能够敏感的显示被免疫豚鼠血清抗体从阴性变为阳性的过程。5种不同生产商的PCV2疫苗免疫后测定的S/P比值能够较好的反映血清抗体的变化,各组豚鼠的S/P平均值分别为:0.1645、1.1875、0.5166、1.3559及3.0907。各组的抗体阳性率分别为:40%、40%、20%、100%及100%。以豚鼠为模型动物的间接ELISA方法是一种理想的PCV2疫苗免疫效果评价方法,为疫苗生产厂商PCV2疫苗的开发和养殖企业的疫苗筛选提供了可靠而实用的技术。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ELISA 疫苗 豚鼠
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2012年—2015年我国部分地区禽偏肺病毒的分子流行病学分析 预览 被引量:2
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作者 朱艳梅 宫晓 +6 位作者 郭伟伟 李陆梅 郎枫 刘红祥 刘东 范根成 《动物医学进展》 北大核心 2016年第10期30-34,共5页
为了调查鸡群中禽偏肺病毒(aMPV)的流行情况,本研究从江苏、辽宁、河南、山东、河北等地有肿头症状的鸡群中取其鼻甲骨和鼻黏液进行RT-PCR检测,随机选取9株PCR阳性产物对其F基因进行序列测定与遗传进化分析。结果表明,280份病料中检... 为了调查鸡群中禽偏肺病毒(aMPV)的流行情况,本研究从江苏、辽宁、河南、山东、河北等地有肿头症状的鸡群中取其鼻甲骨和鼻黏液进行RT-PCR检测,随机选取9株PCR阳性产物对其F基因进行序列测定与遗传进化分析。结果表明,280份病料中检出阳性样品142份,阳性检出率达50.7%;9个试验毒株之间F基因同源性为99.4%~100%,与B型aMPV代表株的同源性为97.7%~99.9%,而与A型、C型和D型aMPV代表株的同源性为71.9%~79.4%;由遗传进化树可见,这9株aMPV均属于B型分支。说明我国鸡群中目前存在aMPV感染,B型毒株是优势流行基因型,从而为禽偏肺病毒疫苗的开发提供了流行病学资料。 展开更多
关键词 禽偏肺病毒 流行病学 F基因 同源性
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鸭肝炎病毒的分离与鉴定 预览
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作者 郭伟伟 +3 位作者 宫晓 李陆梅 宋新宇 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2014年第9期64-68,共5页
1999-2008年从山东、河南、浙江、江苏、广西、山西、江西、广东、福建和辽宁等地有典型鸭病毒性肝炎症状的病死雏鸭中共分离得到22株病毒。用鸭肝炎病毒(DHV)Ⅰ型(DHV-1)抗血清和新型DHV (N-DHV)抗血清对分离的22株病毒进行血清... 1999-2008年从山东、河南、浙江、江苏、广西、山西、江西、广东、福建和辽宁等地有典型鸭病毒性肝炎症状的病死雏鸭中共分离得到22株病毒。用鸭肝炎病毒(DHV)Ⅰ型(DHV-1)抗血清和新型DHV (N-DHV)抗血清对分离的22株病毒进行血清中和试验;对22株病毒的抗原相关VP1基因进行RT-PCR扩增和测序,然后对VP1基因的核苷酸与推导的氨基酸序列进行分析。结果表明,目前我国存在DHV-1和N-DHV两种血清型。其中分离到的12株为DHV-1,10株为N-DHV。依据VP1基因序列同源性进行的血清型分型结果与根据抗原性鉴定进行的血清型分型结果一致。12株DHV-1的氨基酸序列同源性为95%左右,10株N-DHV的氨基酸同源性为98%左右;DHV-1分离株与N-DHV分离株间氨基酸同源性为72%-77%。同血清型病毒株间的VP1基因变异很小,表明DHV的抗原性稳定。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 VP1基因 序列分析 血清型 分离 鉴定
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鸡新城疫疫苗研究及应用概况 预览 被引量:1
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作者 宫晓 程增青 +4 位作者 李陆梅 朱艳梅 郭伟伟 范根成 《湖北畜牧兽医》 2013年第9期65-67,共3页
介绍了鸡新城疫病的流行情况及疫苗的应用现状,概述了灭活疫苗、活疫苗及基因工程苗等主要的鸡新城疫疫苗研究及应用现状,旨为鸡新城疫疫苗的研制和应用提供一定的参考依据。
关键词 新城疫 疫苗 研制 应用
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猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法的建立 预览
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作者 王丽萍 +6 位作者 崔晓霞 宫晓 孙厚民 郭伟伟 李陆梅 范根成 荣俊 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期25-34,共10页
为了更加快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)抗体的水平,我们通过优化反应条件建立了快速检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果显示,本研究研制的试剂盒检测3份PCV2抗体阳性血清的阳性滴度为1∶1... 为了更加快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)抗体的水平,我们通过优化反应条件建立了快速检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果显示,本研究研制的试剂盒检测3份PCV2抗体阳性血清的阳性滴度为1∶12800~1∶25600,而韩国JBTPCV2试剂盒检测的阳性滴度为1∶3200~1∶6400;对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪口蹄疫病毒等10种其他病原体的20份阳性血清的检测结果均为阴性,表明本研究研制的试剂盒具有良好的特异性;批内重复性试验变异系数(C.V%)为2.26%~7.60%,批间重复试验的变异系数(C.V%)为1.67%~6.41%,变异系数均小于10%,呈现良好的可重复性。因此,我们成功建立了敏感性高、特异性强及重复性好的猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 间接ELISA 阴性血清 阳性血清
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