期刊文献+
共找到160篇文章
< 1 2 8 >
每页显示 20 50 100
多杀性巴氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用 预览
1
作者 许腾林 邢桂玲 +7 位作者 刘家森 刘大飞 李志杰 姜骞 康洪涛 田进 郭东春 连东 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期706-710,共5页
为建立一种多杀性巴氏杆菌(Pm)快速敏感的检测方法,本实验根据Pm70株kmt1基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了该菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并优化了检测反应条件。本实验建立的荧光定量PCR方法可以特异性检测Pm,而对鸭... 为建立一种多杀性巴氏杆菌(Pm)快速敏感的检测方法,本实验根据Pm70株kmt1基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了该菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并优化了检测反应条件。本实验建立的荧光定量PCR方法可以特异性检测Pm,而对鸭疫里默氏杆菌、支气管败血波氏杆菌等菌株检测结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。该方法对C48-1株标准品的检测灵敏度为1.75×10^1拷贝/μL,优于常规PCR检测方法(1.75×10^3拷贝/μL) 100倍;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性。对20份疑似感染的临床病料样品(鸡肝脏、牛肺脏)进行增菌培养和分离鉴定,结果分离到8株多杀性巴氏杆菌;以建立的荧光定量PCR方法与常规PCR方法对增菌培养液进行检测,阳性率分别为40%(8/20)和25%(5/20),且荧光定量PCR方法与常规细菌分离鉴定的符合率为100%。对C48-1株感染致死的20份小鼠肝脏和脾脏组织研磨液进行检测,阳性率均为100%。本研究建立的方法能够快速、敏感的检测Pm,对于其临床和实验室的快速诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 TAQMAN探针 荧光定量PCR
在线阅读 下载PDF
猪、鸡与貂源肠外致病性大肠杆菌群型、耐药性与致病性分析 预览
2
作者 许腾林 邢桂玲 +7 位作者 姜成刚 刘家森 刘大飞 姜骞 李志杰 康洪涛 郭东春 连东 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期386-391,共6页
为检测不同动物源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的耐药及致病性差异,本研究从132份鸡、猪和水貂等动物肠道外组织中分离鉴定大肠杆菌,并对分离菌株进行了16S rRNA基因测序、毒力基因检测、药敏试验、O抗原鉴定、系统进化群分析及动物致... 为检测不同动物源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的耐药及致病性差异,本研究从132份鸡、猪和水貂等动物肠道外组织中分离鉴定大肠杆菌,并对分离菌株进行了16S rRNA基因测序、毒力基因检测、药敏试验、O抗原鉴定、系统进化群分析及动物致病性试验。实验结果显示:分离出53株ExPEC,且至少携带特异性毒力基因pap、sfa/foc、afa/dra、iutA、kpsMTII中的两种基因,并携带fimH、ibeA、hlyA、malX、iss、iroN等其它相关毒力基因。53株ExPEC分离株对氯霉素、卡那霉素、头孢噻吩、四环素、多粘菌素B、氨苄青霉素等呈现不同程度的多重耐药性;O抗原主要分布于O1、O2、O8、O11、O38、O78、O120血清型;系统进化群分析结果显示:28株属于A群,19株属于B1群,1株为B2群,5株属于D群。选取20株ExPEC分离菌株按照6×10^6cfu/只对小鼠进行腹腔注射,验证其致病性;并测定ExPEC6、ExPEC42、ExPEC52、ExPEC53菌株对BALB/c小鼠的LD50,其结果分别为3.49×10^6cfu/mL、9.49×10^5cfu/mL、9.48×10^6cfu/mL、2.38×10^7cfu/mL。本研究为动物源性ExPEC的预防诊断提供依据,并为下一步研究其致病机理等奠定基础。 展开更多
关键词 肠外致病性大肠杆菌 分离鉴定 耐药性 致病性
在线阅读 下载PDF
黑龙江省一起牛曼氏杆菌病疫情的暴发调查 预览 被引量:1
3
作者 刘春国 郭东春 +4 位作者 刘大飞 曹伟伟 王靖飞 韦欣捷 连东 《中国动物检疫》 CAS 2017年第2期1-4,共4页
2015年11月14日至12月14日,黑龙江省某县多个村从外县购入的牛发生不明原因的急性死亡。发病牛主要表现呼吸道症状,从发病到死亡的时间为几小时到数天不等,病死牛剖检可见严重肺炎病变。为揭示疫病暴发的主要病因,提供防控建议,结合现... 2015年11月14日至12月14日,黑龙江省某县多个村从外县购入的牛发生不明原因的急性死亡。发病牛主要表现呼吸道症状,从发病到死亡的时间为几小时到数天不等,病死牛剖检可见严重肺炎病变。为揭示疫病暴发的主要病因,提供防控建议,结合现场流行病学调查和实验室诊断,对该次疫情开展了调查。调查结果显示:此次疫情波及6个村,发病牛多为1岁左右;时值气候寒冷;疫情发生前1周左右,有牛调运史。实验室诊断结果显示,采集的样本中均含有未分类的曼氏杆菌,其对氨苄西林和环丙沙星耐药,而对头孢曲松敏感。最终确认本次疫情是由牛群调运、寒冷气候和年龄等风险因素相互作用,诱发曼氏杆菌的内源性感染所致。 展开更多
关键词 曼氏杆菌 流行病学 暴发调查 耐药性
在线阅读 下载PDF
SPF巴马小型猪的培育及应用 预览 被引量:1
4
作者 姜骞 韩凌霞 +6 位作者 司昌德 林欢 高彩霞 郭东春 张伟 刘家森 连东 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第5期1-3,共3页
利用我国自有资源巴马小型猪群,完成了疫病净化,建立了无特定病原体巴马小型猪实验猪群。制定了饲育标准、实验猪遗传学检测标准和微生物质量控制技术标准,制订了黑龙江省地方标准《无特定病原体猪微生物学监测技术规范》,对建立的猪群... 利用我国自有资源巴马小型猪群,完成了疫病净化,建立了无特定病原体巴马小型猪实验猪群。制定了饲育标准、实验猪遗传学检测标准和微生物质量控制技术标准,制订了黑龙江省地方标准《无特定病原体猪微生物学监测技术规范》,对建立的猪群进行了遗传学和微生物质量控制。建立了猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染巴马小型猪感染模型。扩增了巴马小型猪重要细胞因子及固有免疫相关的重要分子,从分子水平进一步证明巴马小型猪可以代替家猪进行猪病感染实验。目前建立的猪群已广泛应用在猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒等猪重要疫病防控及致病机理的研究,实现了共享利用。本项目的完成解决了实验用猪瓶颈问题,提升了动物疫病研究水平,提供了新型实验动物,实现了优质种质资源共享利用,加速了生命科学研究和生物制品产业发展,推动了农业实验动物的行业进步。 展开更多
关键词 巴马小型猪 无特定病原体 培育 感染模型
在线阅读 下载PDF
猫杯状病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定 预览
5
作者 程晨曦 刘家森 +4 位作者 胡晓亮 刘永相 蒋艳妹 刘晓晓 连东 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期1017-1021,共5页
为制备抗猫杯状病毒(FCV)衣壳蛋白VP1的单克隆抗体(MAb)及鉴定其表位,本研究以原核表达的重组VP1-E蛋白(aa427~aa524)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合制备杂交瘤细胞;以纯化的FCV-2280病毒粒子作为检测... 为制备抗猫杯状病毒(FCV)衣壳蛋白VP1的单克隆抗体(MAb)及鉴定其表位,本研究以原核表达的重组VP1-E蛋白(aa427~aa524)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合制备杂交瘤细胞;以纯化的FCV-2280病毒粒子作为检测抗原,采用间接ELISA检测方法筛选杂交瘤细胞株,分析杂交瘤细胞所分泌的抗体亚型、中和活性及所识别的抗原表位等。结果表明,获得两株稳定分泌抗FCVVPl-EMAbs的杂交瘤细胞E2F1和E2F6,抗体均为IgGl亚型,轻链为K链。杂交瘤细胞分泌的抗体无中和活性。Westernblot结果显示,两种抗体可以特异性识别FCV-2280,表明其针对的抗原表位为线性表位。两株MAb识别VP1-E序列均为~(467)YICGSLQRAWG~(477)。生物信息学分析显示该抗原表位在FCV VP1蛋白中相对保守。该MAb为建立特异性强、灵敏度高的FCV的检测方法奠定基础。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 VP1-E蛋白 原核表达 单克隆抗体
在线阅读 下载PDF
猫疱疹病毒Ⅰ型US3基因剪接异构体的鉴定 预览
6
作者 孙雪 田进 +3 位作者 刘大飞 吴红霞 祖少坡 连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期103-106,共4页
为鉴定猫疱疹病毒I型(FHV-1)US3基因的编码产物,本研究以提取FHV-1感染细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增US3基因转录产物,测序结果显示除了全长US3基因(1 056 bp)外,还出现了一个825 bp的片段(US3-X1)。该片段是由全长US3基... 为鉴定猫疱疹病毒I型(FHV-1)US3基因的编码产物,本研究以提取FHV-1感染细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增US3基因转录产物,测序结果显示除了全长US3基因(1 056 bp)外,还出现了一个825 bp的片段(US3-X1)。该片段是由全长US3基因在226 bp-458 bp位置发生了自我剪接,导致234 bp DNA缺失而产生,但ORF并没有改变。此外,通过重叠延伸PCR将US3基因226 bp处碱基“A”突变为“G”(m US3),改变自我剪接位点。将全长US3基因、m US3和US3-X1基因分别克隆至p3×Flag-CMV-10中,转染F81细胞,经western blot检测表明FHV-1 US3可以表达两种不同分子量的异构蛋白,大小约为45 ku和50 ku。这种US3基因的剪接异构体现象在猪伪狂犬病毒和人单纯疱疹病毒中已有报道,而FHV-1 US3基因的剪接异构体的鉴定尚属首次。该研究结果为进一步研究FHV-1 US3异构体蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒I型 US3基因 剪接异构体
在线阅读 下载PDF
狐狸源伪狂犬病毒HB1变异株的分离鉴定及遗传演化分析 预览
7
作者 贾文亮 刘大飞 +2 位作者 刘春国 刘鑫 连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期107-110,共4页
本实验室于2012年在河北地区某狐狸场的疑似感染伪狂犬病死亡狐狸中分离到一株伪狂犬病毒(PRV),命名为HB1株,并对其进行了PCR鉴定和特异性血清的间接免疫荧光鉴定。扩增及测序得到的PRV的g C和g E基因序列。与欧美参考株相比,该分离株... 本实验室于2012年在河北地区某狐狸场的疑似感染伪狂犬病死亡狐狸中分离到一株伪狂犬病毒(PRV),命名为HB1株,并对其进行了PCR鉴定和特异性血清的间接免疫荧光鉴定。扩增及测序得到的PRV的g C和g E基因序列。与欧美参考株相比,该分离株g E基因编码的氨基酸序列共存在19个替换和2个插入;其g C基因编码的氨基酸序列共存在27个替换,及在第63-69位存在一个GAAASTPA的连续8个氨基酸插入,这与国内近5年来猪群流行的变异株一致。本研究表明PRV变异株也在狐狸群内流行。 展开更多
关键词 狐狸 伪狂犬病毒 遗传演化分析
在线阅读 下载PDF
表达兔瘟病毒VP60基因的重组病毒BHV-1的构建与鉴定 预览
8
作者 原冬伟 鲁文赓 +3 位作者 黄艳秋 郭东华 薛飞 连东 《免疫学研究》 2017年第2期11-18,共8页
为了构建表达兔瘟病毒VP60基因的牛疱疹病毒I型,首先构建含有兔瘟病毒VP60基因和CMV启动子的转移载体,然后将构建移载体与gE基因缺失的牛疱疹病毒I型基因组共转染牛肺细胞后收获增殖的病毒。通过蓝白斑筛选不含有LacZ基因的白色病毒蚀斑... 为了构建表达兔瘟病毒VP60基因的牛疱疹病毒I型,首先构建含有兔瘟病毒VP60基因和CMV启动子的转移载体,然后将构建移载体与gE基因缺失的牛疱疹病毒I型基因组共转染牛肺细胞后收获增殖的病毒。通过蓝白斑筛选不含有LacZ基因的白色病毒蚀斑,反复纯化获得重组病毒BHV-1-VP60。PCR方法验证VP60基因的成功插入,间接免疫荧光试验和Western blot,结果证明了BHV-1-VP60中的VP60基因在易感细胞中获得了表达。本研究成功地构建了兔瘟病毒VP60基因的重组病毒BHV-1-VP60,为研制新型兔瘟活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 兔瘟病毒 VP60基因 牛疱疹病毒1型 蓝白斑筛选
在线阅读 下载PDF
猫杯状病毒2280株反向遗传系统的构建 预览 被引量:1
9
作者 祖少坡 田进 +7 位作者 吴红霞 孙雪 刘家森 黄倩倩 刘春国 刘大飞 连东 师东方 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期20-23,共4页
为构建猫杯状病毒(FCV)2280株感染性克隆,本研究在FCV 2280株基因组5'末端和3'末端分别引入T7 RNA聚合酶启动子和丁型肝炎核酶(Hdv Rz)序列;并将FCV基因组中唯一的XbaⅠ限制性酶切位点序列进行同义突变作为遗传标记;将基因组分为... 为构建猫杯状病毒(FCV)2280株感染性克隆,本研究在FCV 2280株基因组5'末端和3'末端分别引入T7 RNA聚合酶启动子和丁型肝炎核酶(Hdv Rz)序列;并将FCV基因组中唯一的XbaⅠ限制性酶切位点序列进行同义突变作为遗传标记;将基因组分为3段分别进行RT-PCR扩增,通过酶切依次克隆于p OK-12载体中,构建FCV基因组全长c DNA重组质粒。以其为模板经体外转录制备其全长基因组RNA,并在5'末端加帽,转染CRFK细胞,24 h后出现典型的细胞病变。提取出现细胞病变的病毒液的总RNA制备c DNA模板,PCR扩增FCV遗传标记片段并进行XbaⅠ酶切鉴定分析,表明拯救的病毒为FCV重组病毒。而且拯救的病毒生长动力学与亲本病毒无明显差异。本实验为进一步研究FCV的生物学特性和致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 反向遗传 RT-PCR
在线阅读 下载PDF
兔出血症病毒特异性核酸适配体的筛选 预览
10
作者 焦美会 刘家森 +4 位作者 姜骞 陆涛峰 胡小亮 蒋艳妹 连东 《中国动物传染病学报》 北大核心 2017年第2期9-13,共5页
为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库。以固定在PVDF膜上的VP60... 为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库。以固定在PVDF膜上的VP60为靶分子,使用消减SELEX技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)进行20轮的筛选,以生物素标记的次级文库作为“一抗”,以辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素作为“二抗”,对文库进行Western blot鉴定,结果表明第20轮文库存在可特异性的识别VP60的核酸序列。随机选取第20轮文库的46条序列克隆、测序,得到20个高度同源序列,同时对46个适配体再次鉴定,最终得到3个特异性识别VP60的适配体。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 适配体 SELEX技术
在线阅读 免费下载
国内部分地区多杀性巴氏杆菌荚膜血清型和基因型的研究 预览 被引量:6
11
作者 王林柏 孙久鹤 +5 位作者 郭东春 曹培丽 刘家森 刘春国 刘大飞 连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期116-119,共4页
为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(P.multicida)流行情况,本研究以36株P.multicida为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36... 为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(P.multicida)流行情况,本研究以36株P.multicida为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36株细菌的荚膜血清型分为A、B和D 3种,其中禽源P.multicida主要以A为主;以LPS-m PCR方法将P.multicida分为L1、L2、L3和L6 4种LPS基因型,禽源P.multicida主要为L1型;通过MLST技术将P.multicida分为ST-129、ST-8、ST-58、ST-5、ST-13、ST-50和ST-122 7种ST型,禽源P.multicida主要为ST-129型。本研究为P.multicida的流行病学监测和基因多样性提供了技术支撑。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 多位点序列分型 脂多糖多重PCR LPS基因型
在线阅读 下载PDF
空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立 被引量:3
12
作者 孙久鹤 郭东春 +5 位作者 李安 刘家森 刘春国 刘大飞 侯振中 连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期64-68,共5页
为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆... 为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆菌hipO基因和结肠弯曲杆菌cdtC基因的扩增产物的大小分别为653bp和313bp。PCR扩增条件最终确定为退火温度为52℃,dNTP终浓度为0.4mmol/L,hipO和cdtC基因引物的终浓度均为2 5μmol/L。该双重PCR的灵敏度可达到6.6 8×1 0-2μg/mL,对多杀性巴氏杆菌、产单核细胞李氏杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌扩增均无目的条带,说明该PCR方法具有良好的灵敏性和特异性。符合试验结果与单一PCR方法结果相同。用所建立的方法对本实验室采集的鸡肛拭子划线培养后的可疑菌落进行PCR鉴定,结果显示2株为空肠弯曲杆菌,2株为结肠弯曲杆菌。结果表明,本研究建立的双重PCR可以用于同时检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。 展开更多
关键词 空肠弯曲杆菌 结肠弯曲杆菌 双重PCR hipO基因 cdtC基因
猫杯状病毒VP1衣壳蛋白的截短表达及其抗原性分析 被引量:1
13
作者 蒋艳妹 刘家森 +2 位作者 刘永相 倪宏波 连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期74-78,共5页
为筛选猫杯状病毒(FCV)VP1衣壳蛋白特异性优势抗原片段,利用生物信息学软件DNAStar对毒株2280的VP1衣壳蛋白各分区的抗原性进行了预测。在此基础上,以FCV 2280株cDNA为模板,RTPCR扩增VP1基因的A、B、CD、E和F共5个区段,构建重组表达质... 为筛选猫杯状病毒(FCV)VP1衣壳蛋白特异性优势抗原片段,利用生物信息学软件DNAStar对毒株2280的VP1衣壳蛋白各分区的抗原性进行了预测。在此基础上,以FCV 2280株cDNA为模板,RTPCR扩增VP1基因的A、B、CD、E和F共5个区段,构建重组表达质粒,5个基因片段在大肠杆菌中均获得高效可溶性表达。Western-blot试验证明,截短蛋白B、E、F均可与FCV阳性质控血清发生特异性反应,截短蛋白A和CD的信号弱。截短蛋白A、B、CD、E、F等量包被ELISA板,其中截短蛋白F与FCV阳性质控血清反应的D450,S/D450,N值最高,与其他蛋白之间差异显著(P〈0.05)。结果表明,截短蛋白F为FCV VP1优势抗原片段,具备开发成FCV的血清学诊断试剂和新型疫苗的潜力。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 VP1蛋白 原核表达 抗原性
猪传染性胃肠炎病毒感染PK15细胞抗病毒相关因子转录变化分析 预览 被引量:1
14
作者 胡晓亮 刘家森 +4 位作者 田进 姜骞 郭东春 娟娟 连东 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期22-27,共6页
为研究猪传染性胃肠炎病毒感染与固有免疫之间关系,研究构建含有巴马猪IFN-α1,IFN-β和NF-κB启动子的报告基因载体,将转染上述报告基因的PK15细胞接种TGEV和灭活TGEV后发现,与灭活TGEV相比,TGEV能够诱导IFN-α1、IFN-β和NF-κB报告... 为研究猪传染性胃肠炎病毒感染与固有免疫之间关系,研究构建含有巴马猪IFN-α1,IFN-β和NF-κB启动子的报告基因载体,将转染上述报告基因的PK15细胞接种TGEV和灭活TGEV后发现,与灭活TGEV相比,TGEV能够诱导IFN-α1、IFN-β和NF-κB报告基因低水平表达;其次,利用荧光定量RT-PCR方法检测接种病毒0、2、6和10 h后PK15细胞中IFN-α1、IFN-β、IL6、TNF-α、ISG56和IRF7转录量,结果表明,TGEV对IL6转录没有影响,而诱导IFN-α1、IFN-β、TNF-α、ISG56和IRF7低水平转录,分别为对照组1.49、1.5、2.2、2.5和1.8倍。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎 细胞因子 PK15细胞 转录时相
在线阅读 下载PDF
支气管败血波氏杆菌Δhfq突变株构建及生物学特性分析 预览
15
作者 翟莹 郭东春 +6 位作者 王林柏 刘家森 田进 刘春国 刘大飞 姜骞 连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期101-105,共5页
为研究Hfq蛋白在支气管败血波氏杆菌(Bb)的致病作用,本研究采用同源重组技术,将卡那霉素抗性基因替换Bb122株的hfq基因,构建BbΔhfq突变株。将其连续传20代,Δhfq突变株具有良好的遗传稳定性。生化检测试验表明,突变株与亲本株未发生... 为研究Hfq蛋白在支气管败血波氏杆菌(Bb)的致病作用,本研究采用同源重组技术,将卡那霉素抗性基因替换Bb122株的hfq基因,构建BbΔhfq突变株。将其连续传20代,Δhfq突变株具有良好的遗传稳定性。生化检测试验表明,突变株与亲本株未发生明显改变。此外,在37℃培养时,突变株与亲本株生长曲线无明显差异,但在42℃培养时,突变株的生长曲线略低于亲本株。抗逆性试验表明,突变株与亲本株在紫外线照射和50℃条件下,亲本株的耐受能力均显著高于突变株(p〈0.05)。然而,将亲本株与突变株分别以2×10^9cfu/只腹腔接种小鼠时,亲本株接种小鼠全部死亡,而突变株接种小鼠则全部存活,表明Hfq蛋白与该菌的致病性有关。本研究为进一步研究Hfq蛋白的功能及其在Bb致病机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 支气管败血波氏杆菌 hfq基因 突变株 致病性
在线阅读 下载PDF
犬副流感病毒HN基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立 预览 被引量:2
16
作者 宋彩玲 齐宾宾 +3 位作者 吕让 陈小微 连东 刘明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期615-618,共4页
为建立检测犬副流感病毒(CPIV)抗体的方法,本研究利用杆状病毒表达系统表达CPIV的HN蛋白,以其为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和血清最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了CPIV血清抗体的间接ELISA检测方法。该方法仅与... 为建立检测犬副流感病毒(CPIV)抗体的方法,本研究利用杆状病毒表达系统表达CPIV的HN蛋白,以其为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和血清最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了CPIV血清抗体的间接ELISA检测方法。该方法仅与CPIV阳性血清发生特异性反应,与犬细小病毒(CPV)和犬腺病毒(CAr)的阳性血清无交叉反应;批内和批间变异系数小于10%。利用建立的ELISA方法与血凝抑制试验分别对48份送检犬血清样品进行检测,符合率为92%。本研究为建立快速、准确、简便的犬副流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 犬副流感病毒 HN蛋白 间接ELISA
在线阅读 下载PDF
加系SPF大白猪和长白猪群体遗传学分析 预览 被引量:3
17
作者 贺希文 高彩霞 +3 位作者 姜骞 权金强 蔡原 连东 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期551-556,共6页
目的研究中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进的SPF大白猪和长白猪的遗传学背景。方法实验采用19对微卫星引物对该群体进行群体遗传学分析。结果 19个位点在大白猪群中检测到84个等位基因,长白猪群中检测到89个等位基因。大白... 目的研究中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进的SPF大白猪和长白猪的遗传学背景。方法实验采用19对微卫星引物对该群体进行群体遗传学分析。结果 19个位点在大白猪群中检测到84个等位基因,长白猪群中检测到89个等位基因。大白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5271和0.5877;长白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5652和0.6066。由于S0155、S0143、S0178、Sw857和Sw936位点内等位基因大小和含量差异显著(P〈0.01)可作为大白猪和长白猪品种鉴定的候选位点。F-统计和迁移率分析结果表明,群体内的分化较小,遗传结构稳定。结论引进加系SPF纯种大白猪和长白猪的遗传结构与国内部分纯种大白猪和长白猪相比更为稳定,可作为实验动物模型应用于动物医学和科学研究。 展开更多
关键词 SPF猪 微卫星标记 实验动物 遗传多样性
在线阅读 下载PDF
猫杯状病毒的分离鉴定及其对理化因素抵抗力的研究 被引量:3
18
作者 黄倩倩 刘家森 +2 位作者 田进 孔德生 连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期385-389,共5页
采集南京某宠物医院处置的疑似患猫杯状病毒病的家猫的鼻咽拭子,将其处理液接种于CRFK细胞,进行连续传代培养,出现特征性细胞病变。通过对该分离株进行形态学观察、PCR鉴定、间接免疫荧光试验,证明该分离株为猫杯状病毒(FCV),遂将其命... 采集南京某宠物医院处置的疑似患猫杯状病毒病的家猫的鼻咽拭子,将其处理液接种于CRFK细胞,进行连续传代培养,出现特征性细胞病变。通过对该分离株进行形态学观察、PCR鉴定、间接免疫荧光试验,证明该分离株为猫杯状病毒(FCV),遂将其命名为FB-NJ-13。用RT-PCR分段扩增病毒基因组并将序列提交至GenBank(登录号:KM111557)。序列分析显示,该毒株与国内外参考毒株核苷酸序列的同源性在76.2%~79.6%之间。同时研究了该病毒对温度、酸碱、有机溶剂、干燥和紫外线照射等理化因素的抵抗力。结果显示,50℃30min或70℃5min即可灭活该病毒;该病毒在pH值为3的酸性环境中和pH值为10的碱性环境中不稳定;它对乙醚和氯仿不敏感;紫外线照射2.0h以上,可将该病毒有效灭活。上述研究结果为揭示我国FCV的分子生物学特征和遗传进化规律提供了重要的科学依据。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 分离鉴定 理化因素 全基因组
猫杯状病毒的分离鉴定及超变区基因序列分析 预览
19
作者 刘春国 刘永相 +10 位作者 刘大飞 郭东春 田进 仇铮 刘鑫 蒋艳妹 刘家森 彭永刚 李岩 刘明 连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期885-887,共3页
为了解猫杯状病毒(FCV)的生物学特性,本研究对猫体内分离到的一株FCVHRB-SS株进行了病毒学、分子生物学鉴定和遗传学分析。结果显示该分离株能够在猫肾细胞系(CRFK)中产生明显的细胞病变,形成蚀斑。FCV的VP1基因超变区核苷酸序列... 为了解猫杯状病毒(FCV)的生物学特性,本研究对猫体内分离到的一株FCVHRB-SS株进行了病毒学、分子生物学鉴定和遗传学分析。结果显示该分离株能够在猫肾细胞系(CRFK)中产生明显的细胞病变,形成蚀斑。FCV的VP1基因超变区核苷酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与疫苗株CVXPOLYCAP同源性最高,为78.2%,而与中国分离株CH-JL和GD的同源性最低,仅为67.9%和68.8%;推导氨基酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与12Q087-5、UTCVM—NH12和FCLF4的同源性最高,为86.7%,而与中国分离株的同源性仅为73.9%。系统发育树分析结果显示,HRB-SS分离株与中国分离株亲缘关系较远。本研究结果表明,FCVHRB-SS与我国FCV具有不同的遗传起源。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 分离鉴定 超变区 序列分析
在线阅读 下载PDF
兔出血症病毒肝脏表面蛋白受体的初步筛选
20
作者 陈淑慧 刘家森 +6 位作者 黄艳秋 单丽玲 郭东春 姜骞 李志杰 崔玉东 连东 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1893-1897,共5页
为了筛选鉴定兔出血症病毒(RHDV)感染的肝脏细胞表面受体,取成年兔肝脏组织以胰酶消化,经300目铜网过滤,得到完整的兔肝脏细胞。用生物素对细胞表面蛋白进行标记和分离;采用病毒铺覆蛋白技术分析兔肝脏细胞表面蛋白。结果表明,在... 为了筛选鉴定兔出血症病毒(RHDV)感染的肝脏细胞表面受体,取成年兔肝脏组织以胰酶消化,经300目铜网过滤,得到完整的兔肝脏细胞。用生物素对细胞表面蛋白进行标记和分离;采用病毒铺覆蛋白技术分析兔肝脏细胞表面蛋白。结果表明,在130000-170000的位置上存在与RHDV相互作用的特异性蛋白条带;利用液相色谱联合质谱技术(LCMS/MS)对特异蛋白条带进行shotgun分析,鉴定得到38个候选蛋白,其中3种蛋白在已知病毒感染过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 病毒铺覆蛋白技术 液相色谱联合质谱 肝脏细胞 表面蛋白
上一页 1 2 8 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈