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新发展理念视阈下的我国畜禽疫病防控
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作者 常帅 刘嘉 +2 位作者 叶静 陈焕春 《中国科学院院刊》 CSSCI CSCD 北大核心 2019年第2期145-151,共7页
畜禽疫病的发生与流行是制约我国养殖产业可持续发展的关键因素之一。同时,畜禽疫病还会对动物性食品的源头安全、人民健康以及生态环境造成严重危害。一些烈性畜禽传染病的暴发甚至还会给社会稳定和国家安全带来重大冲击。因此,新时期... 畜禽疫病的发生与流行是制约我国养殖产业可持续发展的关键因素之一。同时,畜禽疫病还会对动物性食品的源头安全、人民健康以及生态环境造成严重危害。一些烈性畜禽传染病的暴发甚至还会给社会稳定和国家安全带来重大冲击。因此,新时期科学有效地防控畜禽疫病是我国养殖业实现转型升级与可持续发展的国家重大需求。文章从我国畜禽疫病防控的重要意义与历史成就切入,分析了我国畜禽疫病的流行现状及防控困难,并就此提出了未来科技创新的重点方向。 展开更多
关键词 新发展理念 视阈 畜禽疫病 防控
乙型脑炎病毒样颗粒疫苗的制备及其免疫保护效率的初步评价 被引量:2
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作者 张艳芳 杜瑞坤 +6 位作者 黄少梅 张涛 刘金良 朱碧 王华林 邓菲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期150-155,共6页
将乙型脑炎病毒prME及其信号肽基因片段克隆到穿梭载体AcBacmid中,构建重组穿梭载体AcBac-prME。Lipofectine介导其转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-prME。Western-blotting、间接免疫荧光试验及电镜观察,证实Ac-prME介导prME在Sf9细胞... 将乙型脑炎病毒prME及其信号肽基因片段克隆到穿梭载体AcBacmid中,构建重组穿梭载体AcBac-prME。Lipofectine介导其转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-prME。Western-blotting、间接免疫荧光试验及电镜观察,证实Ac-prME介导prME在Sf9细胞中高效表达,且形成了病毒样颗粒。小鼠免疫和攻毒试验表明,该病毒样颗粒免疫可以使小鼠获得有效抵抗乙型脑炎病毒强毒株攻击的能力,保护率高达100%,从而为研制基于乙型脑炎病毒样颗粒的亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 杆状病毒 prME蛋白 病毒样颗粒 亚单位疫苗
中国新疆小反刍兽疫病毒F基因序列分析 预览 被引量:1
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作者 马海璐 刘永宏 +11 位作者 赵丽 刘学锋 王海国 李岳洋 马世强 蒋秀梅 张保军 萨依甫加玛·卡依萨尔 努尔古丽·图尔贡 廖秋萍 焦海宏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期328-334,共7页
为分析中国新疆小反刍兽疫病毒(PPRV)毒株分子演变特点和疫情传播路线,从GenBank数据库下载所有国家全部的PPRVF基因全序列,应用DNAStar软件,结合疫情毒株时空分布进行序列分析。结果显示,中国新疆PPRV株F基因全序列,与2014年小反刍... 为分析中国新疆小反刍兽疫病毒(PPRV)毒株分子演变特点和疫情传播路线,从GenBank数据库下载所有国家全部的PPRVF基因全序列,应用DNAStar软件,结合疫情毒株时空分布进行序列分析。结果显示,中国新疆PPRV株F基因全序列,与2014年小反刍兽疫情中河南和北京毒株核苷酸的同源性最高,为99.8%~99.9%,与中国西藏3个毒株核苷酸的同源性为97.7%,与中国采用的疫苗株核苷酸同源性为92.9%,核苷酸同源性最低的是肯尼亚毒株,与国外毒株核苷酸同源性最高的是印度毒株。F基因系统进化关系分析显示,中国新疆PPRV株属于基因Ⅳ系。F蛋白氨基酸同源性结果显示,除与科特迪瓦1989年毒株ICV89氨基酸同源性最低外,与其他氨基酸同源性比对结果均与核苷酸的比对结果一致。中国新疆PPRV株存在一定程度的变异,可能是由周边国家传入。 展开更多
关键词 中国 新疆 小反刍兽疫 F基因
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协同创新力促我国生猪产业转型升级 预览 被引量:1
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作者 李育林 帅起义 +1 位作者 陈焕春 《养殖与饲料》 2016年第10期1-5,共5页
结合我国生猪产业历史与发展现状,指出生猪产业存在着育种工作滞后、疫病多发风险高、饲料利用效率低、污染问题突出、养猪设施设备落后等主要问题,论述了我国生猪产业必须走创新驱动、转型升级的发展之路;提出了必须以问题为导向推动... 结合我国生猪产业历史与发展现状,指出生猪产业存在着育种工作滞后、疫病多发风险高、饲料利用效率低、污染问题突出、养猪设施设备落后等主要问题,论述了我国生猪产业必须走创新驱动、转型升级的发展之路;提出了必须以问题为导向推动协同创新,以期破解生猪产业创新困局、促进产业转型升级的新思路;同时概述了生猪健康养殖协同创新中心建设的探索与实践。 展开更多
关键词 生猪产业 创新 转型升级 协同创新
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1株猪源基因Ⅰ型乙型脑炎病毒的分离鉴定及遗传进化分析 预览 被引量:1
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作者 侯力丹 王文涛 +1 位作者 黄少梅 《养殖与饲料》 2016年第9期4-9,共6页
乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的急性、自然疫源性蚊媒传播人兽共患传染病。猪是JEV最重要的宿主,监测和预防猪乙脑的发生对于人乙脑的防控具有重要意义。本研究通过RT-PCR、细胞接种、乳鼠脑内接种、电镜观察等方法,从广西某猪场... 乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的急性、自然疫源性蚊媒传播人兽共患传染病。猪是JEV最重要的宿主,监测和预防猪乙脑的发生对于人乙脑的防控具有重要意义。本研究通过RT-PCR、细胞接种、乳鼠脑内接种、电镜观察等方法,从广西某猪场的猪脑组织样品中分离了1株乙型脑炎病毒,命名为GX1209。全基因组测序结果表明,该毒株基因组为10 965 bp。系统进化分析表明该毒株属基因Ⅰ型,与基因Ⅰ型XJ69毒株核苷酸和氨基酸同源性最高,达到99%,而与SA14、SA14-14-2、P3等Ⅲ型毒株的氨基酸同源性分别为98%、97%、98%。 展开更多
关键词 猪乙型脑炎病毒 基因型 分离鉴定 遗传进化
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稳定表达日本脑炎病毒NS2B蛋白的细胞系的建立
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作者 徐秋萍 董倩 +1 位作者 陈焕春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期458-462,共5页
本研究旨在建立能稳定表达日本脑炎病毒NS2B蛋白的细胞系。利用RT-PCR扩增NS2B基因,并将之克隆至带嘌呤霉素抗性基因的慢病毒载体Psin-EF2-MCS-Pur中。然后用慢病毒载体系统包装慢病毒,并将之转导正常293T细胞,通过嘌呤霉素加压筛选纯... 本研究旨在建立能稳定表达日本脑炎病毒NS2B蛋白的细胞系。利用RT-PCR扩增NS2B基因,并将之克隆至带嘌呤霉素抗性基因的慢病毒载体Psin-EF2-MCS-Pur中。然后用慢病毒载体系统包装慢病毒,并将之转导正常293T细胞,通过嘌呤霉素加压筛选纯化细胞系。最后利用Western-blot、间接免疫荧光试验等方法对NS2B蛋白在细胞系中的表达情况进行了鉴定。结果表明,NS2B蛋白可以在所建立的细胞系中被稳定、高效地表达。在此基础上,利用该细胞系,通过串联亲和层析与质谱技术,筛选出了与NS2B可能相互作用的宿主蛋白,从而为深入阐明NS2B的功能及其与宿主细胞相互作用机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 NS2B 细胞系 相互作用
小反刍兽疫在中国的流行趋势及应对措施 预览 被引量:28
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作者 刘永宏 赵丽 +4 位作者 李龙凯 王海国 廖秋萍 焦海宏 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期110-113,共4页
小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒感染小反刍兽的一种严重的急性、烈性、接触性传染病,以高热、口炎、胃炎、腹泻和肺炎为特征。该病呈全球性自西向东流行趋势,我国目前已有9省市发生该疫情,其他省份防控局面也颇为严峻,对我国畜牧业发展... 小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒感染小反刍兽的一种严重的急性、烈性、接触性传染病,以高热、口炎、胃炎、腹泻和肺炎为特征。该病呈全球性自西向东流行趋势,我国目前已有9省市发生该疫情,其他省份防控局面也颇为严峻,对我国畜牧业发展造成了极其严重的影响。论文对小反刍兽疫在中国流行趋势进行分析,并提出相应的防控措施。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 流行 防控
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非洲猪瘟病毒抗体检测间接ELISA方法的建立 被引量:8
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作者 靳雯雯 杨俊兴 +7 位作者 花群俊 刘建利 琛福 曾少灵 陶虹 阮周曦 吕建强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1043-1046,共4页
以基因工程表达的非洲猪瘟病毒VP73蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,用以检测猪血清中抗非洲猪瘟VP73蛋白的抗体。该方法对非洲猪瘟标准阳性血清的检测灵敏度可以达到1∶2 560,与同类进口ELISA试剂盒相当。此方法只特异性检出非... 以基因工程表达的非洲猪瘟病毒VP73蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,用以检测猪血清中抗非洲猪瘟VP73蛋白的抗体。该方法对非洲猪瘟标准阳性血清的检测灵敏度可以达到1∶2 560,与同类进口ELISA试剂盒相当。此方法只特异性检出非洲猪瘟阳性血清,而对猪传染性胸膜肺炎等5种猪传染病阳性血清的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。批内和批间重复性试验结果发现,检测同一份血清的变异系数小于10%,表明其重复性较好。包被好的酶标板37℃放置5d后,对同一份血清的检测敏感性无明显变化,初步表明其稳定性较好。利用建立的间接ELISA方法和进口ELISA试剂盒分别对150份血清样品进行非洲猪瘟血清抗体检测,结果表明本方法的特异性和敏感性分别为99.1%和94.3%,2种方法检测结果的符合率为98%。以上试验表明,本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性、较好的重复性和稳定性,可以满足临床检测的需求。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 VP73蛋白 间接ELISA
中国小反刍兽疫疫情分析 预览 被引量:13
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作者 刘永宏 +5 位作者 赵丽 李龙凯 杨龙峰 王海国 廖秋萍 焦海宏 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第9期19-26,共8页
为分析中国PPRV毒株分子演变特点和疫情传播路线,从NCBI下载中国和世界其他国家全部PPRV毒株N和F基因全序列,应用分子生物学软件,并结合疫情发生的地理位置进行系统分析。结果显示,中国西藏阿里地区PPRV毒株之间核苷酸同源性为100%,其... 为分析中国PPRV毒株分子演变特点和疫情传播路线,从NCBI下载中国和世界其他国家全部PPRV毒株N和F基因全序列,应用分子生物学软件,并结合疫情发生的地理位置进行系统分析。结果显示,中国西藏阿里地区PPRV毒株之间核苷酸同源性为100%,其与西藏那曲地区毒株核苷酸同源性为99.9%;中国毒株与其他国家毒株F基因核苷酸序列分析显示,同源性为89.7%~98.8%,同源性最低的为科特迪瓦1989年毒株,同源性最高的为孟加拉国2010年毒株;N基因核苷酸序列分析显示,同源性为69.5%~98.5%,同源性最低的为朝鲜2002年毒株,同源性最高的为印度1995年毒株;F和N基因系统进化关系分析均显示,中国西藏3株PPRV均属于基因Ⅳ系;截止2014年3月30日,中国由西至东9省份发生该疫情。更加全面的分析结果,有待于更多PPRV流行毒株N或F基因全序列在GenBank的公布。 展开更多
关键词 中国 小反刍兽疫 疫情
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非洲猪瘟病毒VP73基因在哺乳动物细胞中的表达 预览
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作者 靳雯雯 杨晓红 +2 位作者 朱碧 吕建强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期574-576,共3页
为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)主要结构蛋白VP73在哺乳动物细胞中真核表达,本研究根据已发表的ASFV序列,设计合成VP73基因全序列,以巨细胞病毒极早期启动子(CMV-IE)和经水泡性口炎病毒G蛋白(VSV/G)修饰过的pFastBac杆状病毒为载... 为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)主要结构蛋白VP73在哺乳动物细胞中真核表达,本研究根据已发表的ASFV序列,设计合成VP73基因全序列,以巨细胞病毒极早期启动子(CMV-IE)和经水泡性口炎病毒G蛋白(VSV/G)修饰过的pFastBac杆状病毒为载体构建了重组杆状病毒AcNPV-G-VP73。Westem blot结果表明,该病毒感染BHK-21哺乳动物细胞后,VP73基因在细胞中获得表达。本研究构建的重组杆状病毒能够介导ASFV VP73蛋白在哺乳动物细胞中表达,为ASF新型疫苗与诊断方法的探索研究奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 VP73基因 重组杆状病毒 哺乳动物细胞
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西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ基因的原核表达 预览 被引量:1
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作者 魏艳鸣 朱碧 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第12期2593-2595,共3页
根据已发表的西尼罗河病毒(WNV)的DNA序列设计合成一对特异性引物,用聚合酶链式反应(PCR)扩增E蛋白结构域Ⅲ(E-DⅢ)的基因。将PCR产物克隆至pET28a原核表达载体上,获得重组表达质粒pET28a-E-DⅢ。将该质粒转化BL21(DE3),经IPTG... 根据已发表的西尼罗河病毒(WNV)的DNA序列设计合成一对特异性引物,用聚合酶链式反应(PCR)扩增E蛋白结构域Ⅲ(E-DⅢ)的基因。将PCR产物克隆至pET28a原核表达载体上,获得重组表达质粒pET28a-E-DⅢ。将该质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导后提取包涵体,纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE和Western blot方法证实E-DⅢ的基因可以在大肠杆菌中高效表达。 展开更多
关键词 西尼罗河病毒 E蛋白结构域Ⅲ 原核表达
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斑点叉尾鮰病毒多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定 预览 被引量:1
12
作者 吴兵 罗宇良 +5 位作者 王敏 王卫民 陈龙 黄锋涛 刘学芹 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 631-634,共4页
利用斑点叉尾鮰卵巢细胞增殖斑点叉尾鮰病毒,然后将经过超速离心纯化的病毒免疫4周龄BABL/C雌鼠。每2周免疫1次,第4次免疫2周后,经眼眶采血,分离血清,通过酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,并利用间接免疫荧光试验和与病毒孵育试验检测... 利用斑点叉尾鮰卵巢细胞增殖斑点叉尾鮰病毒,然后将经过超速离心纯化的病毒免疫4周龄BABL/C雌鼠。每2周免疫1次,第4次免疫2周后,经眼眶采血,分离血清,通过酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,并利用间接免疫荧光试验和与病毒孵育试验检测所制备多克隆抗体的生物活性。结果表明,制备的多克隆抗体ELISA效价为1∶25 600,间接免疫荧光试验证明该多克隆抗体特异性良好,同时与病毒的孵育试验证明该多克隆抗体具备中和活性,能够有效阻断斑点叉尾鮰病毒对细胞的感染。 展开更多
关键词 斑点叉尾鮰病毒 多克隆抗体 制备 效价 生物活性
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表达乙型脑炎病毒PrM-E基因慢病毒载体的构建 被引量:2
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作者 陈龙 杨晓红 +3 位作者 徐敏 朱碧 陈焕春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期342-346,共5页
利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导29... 利用RT-PCR方法扩增获得了乙型脑炎病毒PrM-E基因,并将之克隆至慢病毒载体系统中的转移质粒pHR-IRES-EGFP中,得到重组质粒pHR-PrM-E。将该质粒与包装质粒pCMV△8.2、囊膜质粒pVSV/G共转染293FT细胞,培养48h后收集细胞上清,并将之转导293FT细胞。通过报告基因EGFP表达、间接免疫荧光和Western-blot检测,结果表明,上述三质粒共转染293FT细胞后,获得了假病毒,并且该假病毒可以高效转导正常293FT细胞。同时,PrM-E基因可以在被转导细胞中正确表达,从而为研制基于慢病毒载体的乙型脑炎病毒新型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 慢病毒载体 PrM-E基因
乙型脑炎疫苗研究概况 被引量:2
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作者 栗永茂 +3 位作者 王明蛟 霍雨艳 熊涛 吴光旭 《长江大学学报:自然科学版》 2011年第2期 247-250,共4页
乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE,简称乙脑)是一种人与动物共患的蚊媒病毒性疾病,主要流行于东南亚各国,其病死率高、后遗症严重。对于乙脑尚无特效治疗手段,主要靠预防接种。目前世界上主要使用的乙脑疫苗有原代地鼠肾细胞灭活疫... 乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE,简称乙脑)是一种人与动物共患的蚊媒病毒性疾病,主要流行于东南亚各国,其病死率高、后遗症严重。对于乙脑尚无特效治疗手段,主要靠预防接种。目前世界上主要使用的乙脑疫苗有原代地鼠肾细胞灭活疫苗、原代地鼠肾细胞减毒疫苗、鼠脑灭活疫苗和Vero细胞灭活疫苗,前2种疫苗主要在我国使用,后2种在美国批准使用。主要综述了乙型脑炎疫苗研究的最新进展。 展开更多
关键词 乙型脑炎疫苗 乙型脑炎病毒 进展
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乙型脑炎病毒NS5蛋白原核表达与亚细胞定位研究 预览
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作者 栗永茂 +3 位作者 陈龙 霍雨艳 熊涛 吴光旭 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期 778-782,共5页
目的对乙型脑炎病毒NS5蛋白进行原核表达和亚细胞定位研究。方法通过PCR扩增乙型脑炎病毒NS5基因,并将之克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建的重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞,经IPTG诱导表达目的蛋白。将表达产物纯化后,免疫B... 目的对乙型脑炎病毒NS5蛋白进行原核表达和亚细胞定位研究。方法通过PCR扩增乙型脑炎病毒NS5基因,并将之克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建的重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞,经IPTG诱导表达目的蛋白。将表达产物纯化后,免疫BALB/c小鼠,制备NS5蛋白特异性的多克隆抗体。同时,构建NS5基因与绿色荧光蛋白(EG-FP)融合表达的真核表达质粒pcDNA-NS5-EGFP,将之转染BHK-21细胞,利用激光共聚焦荧光显微镜观察NS5蛋白在BHK-21细胞中的亚细胞定位。结果 NS5蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,表达蛋白分子量大小约为103kD,该蛋白在真核细胞中的表达呈颗粒状不均匀分布于整个细胞,且颗粒状主要分布在细胞质中。结论成功表达乙型脑炎病毒NS5蛋白,并对NS5蛋白的亚细胞定位进行了分析,为进一步研究NS5蛋白提供依据。 展开更多
关键词 NS5 原核表达 亚细胞定位 乙型脑炎病毒
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论我国动物传染病学课程教学存在的问题及其对策 预览 被引量:5
16
作者 陈焕春 +5 位作者 金梅林 吴斌 蔡旭旺 徐晓娟 周红 张安定 《高等农业教育》 2010年第11期 59-61,65,共4页
动物传染病学是动物医学专业本科专业教学中的一门核心课程。保障动物传染病学课程的教学质量,提高动物医学专业学生在以后动物传染病防控中的综合能力,直接关系到我国兽医人才队伍建设和未来动物传染病防控的水平。在对我国当前动物传... 动物传染病学是动物医学专业本科专业教学中的一门核心课程。保障动物传染病学课程的教学质量,提高动物医学专业学生在以后动物传染病防控中的综合能力,直接关系到我国兽医人才队伍建设和未来动物传染病防控的水平。在对我国当前动物传染病学课程教学中面临的形势与存在问题分析的基础上,提出了应对这些问题的主要对策。 展开更多
关键词 动物传染病 教学 问题 对策
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慢病毒载体介导的西尼罗河病毒prME蛋白的表达 被引量:1
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作者 徐敏 杨晓红 +5 位作者 陈龙 李么明 叶静 陈焕春 毕丁仁 《中国兽医科学》 CAS 北大核心 2010年第8期778-782,共5页
将西尼罗河病毒(WNV)的主要免疫原性基因prME插入HIV-1慢病毒载体pHR中,构建了转移质粒pHR-WNV/prME。在脂质体介导下,将该质粒与p△8.2、pVSV/G共转染293T细胞,48h后收获细胞上清。将上清转导正常的293T细胞,通过报告基因荧光观察、... 将西尼罗河病毒(WNV)的主要免疫原性基因prME插入HIV-1慢病毒载体pHR中,构建了转移质粒pHR-WNV/prME。在脂质体介导下,将该质粒与p△8.2、pVSV/G共转染293T细胞,48h后收获细胞上清。将上清转导正常的293T细胞,通过报告基因荧光观察、间接免疫荧光检测。结果表明,利用HIV-1慢病毒载体系统包装得到了假型病毒,可以高效转导293T细胞,并实现了WNVprME基因在被转导细胞中的表达,从而为基于慢病毒载体的WNV新型疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 西尼罗河病毒 prME蛋白 慢病毒载体 表达
斑点叉尾鮰病毒囊膜蛋白ORF6在昆虫细胞中的表达 预览 被引量:3
18
作者 黄锋涛 熊海林 +6 位作者 熊传喜 王敏 王卫民 吴兵 刘玉林 刘学芹 《水产学报》 CAS 北大核心 2010年第7期1034-1039,共6页
为构建基于杆状病毒表达系统的CCV新型亚单位疫苗,将CCV的囊膜蛋白基因ORF6克隆至杆状病毒转座载体pFastBac^TM 1质粒中,并将阳性重组转座质粒转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得重组子rBacmid-ORF6。在脂质体介导下将... 为构建基于杆状病毒表达系统的CCV新型亚单位疫苗,将CCV的囊膜蛋白基因ORF6克隆至杆状病毒转座载体pFastBac^TM 1质粒中,并将阳性重组转座质粒转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得重组子rBacmid-ORF6。在脂质体介导下将该重组子转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒AC-ORF6。AC-ORF6感染的sf9昆虫细胞,经超薄切片电镜观察,可见重组杆状病毒呈多粒包埋,经间接免疫荧光、Western-blotting检测,CCV的ORF6蛋白可以在感染了AC-ORF6的sf9细胞中表达。研究表明,获得了插入ORF6基因的重组杆状病毒,并且该基因可以在重组杆状病毒介导下在昆虫细胞中表达,从而为基于CCV ORF6的杆状病毒亚单位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 斑点叉尾鮰病毒 ORF6蛋白 杆状病毒 昆虫细胞 表达
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乙型脑炎病毒E基因自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答 预览 被引量:3
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作者 刘学芹 李么明 +4 位作者 叶静 孙敏轩 肖少 陈焕春 《中国兽医科学》 CAS 北大核心 2009年第2期 130-134,共5页
为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因... 为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pCDE)分别免疫试验小鼠,进行体液免疫和细胞免疫检测。结果表明,在诱导体液免疫方面,pCDE要优于pSE,但pSE却可以诱导更强的细胞免疫反应,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 自杀性DNA疫苗 免疫
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siRNA对乙型脑炎病毒复制的抑制效果 预览 被引量:1
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作者 刘学芹 +6 位作者 李么明 孙敏轩 叶静 周锐 杨影 徐高原 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第2期 188-192,共5页
以JEV的NS1基因mRNA为靶序列,设计合成了4个siRNA序列,构建了各自的表达质粒pS-NSIA、pS-NS1B、pS-NS1C和pS-NS1D。通过间接免疫荧光、Western blot检测、RT-PCR和病毒空斑检测等方法对这些siRNAs抑制JEV复制的效果进行了评价。结果表... 以JEV的NS1基因mRNA为靶序列,设计合成了4个siRNA序列,构建了各自的表达质粒pS-NSIA、pS-NS1B、pS-NS1C和pS-NS1D。通过间接免疫荧光、Western blot检测、RT-PCR和病毒空斑检测等方法对这些siRNAs抑制JEV复制的效果进行了评价。结果表明4个siRNA表达质粒均对JEV在细胞中的复制具有不同程度的抑制作用,其中pS-NS1C、pS-NS1D有显著的抑制作用。说明针对NS1基因的siRNAs可以有效抑制JEV的复制,并有望成为应对JEV感染的治疗方法。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 NS1 siRNA复制 抑制
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