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沉默Herg1的表达对骨肉瘤增殖和侵袭的影响
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作者 陈志达 +4 位作者 宋超 宋伟 张英梅 吴进 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期338-345,共8页
目的观察沉默Herg1的表达对骨肉瘤增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的调控机制。方法构建重组腺病毒载体Ad5-Herg1-shRNA并检测其转染效能。分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、划痕实验、Transwell实验、肿瘤生长曲线和活体成像检测Ad5-H... 目的观察沉默Herg1的表达对骨肉瘤增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的调控机制。方法构建重组腺病毒载体Ad5-Herg1-shRNA并检测其转染效能。分别采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、划痕实验、Transwell实验、肿瘤生长曲线和活体成像检测Ad5-Herg1-shRNA转染后人骨肉瘤细胞株143B、U2OS的增殖、迁移和侵袭能力变化,采用串联亲和纯化/质谱法寻找可能与Herg1相互作用的蛋白并进行鉴定,采用Western blot法检测转染前后骨肉瘤细胞中大肿瘤抑制因子1(LATS1)、Yes激酶相关蛋白(YAP)及其磷酸化后的表达变化。结果 Ad5-Herg1-shRNA转染能有效抑制骨肉瘤细胞中Herg1的表达。CCK-8法检测结果显示,Ad5-Herg1-shRNA1组和Ad5-Herg1-shRNA2组143B细胞的存活率分别为(65.47±3.90)%和(79.90±1.52)%,U2OS细胞的存活率分别为(69.69±1.36)%和(76.72±2.75)%,均明显低于Ad5-control-shRNA组(均P<0.001)。划痕实验显示,Ad5-Herg1-shRNA1组和Ad5-Herg1-shRNA2组143B细胞的迁移率分别为(33.03±2.88)%和(36.47±4.16)%,U2OS细胞的迁移率分别为(68.07±0.90)%和(73.97±1.25)%,均明显低于Ad5-control-shRNA组(均P<0.001)。Transwell侵袭实验显示,Ad5-Herg1-shRNA1组和Ad5-Herg1-shRNA2组143B细胞的侵袭细胞数分别为(36.50±12.15)个和(44.83±7.62)个,U2OS细胞的侵袭细胞数分别为(21.83±7.99)个和(22.85±7.08)个,均明显低于Ad5-control-shRNA组(均P<0.001)。体内实验结果显示,从第14天起,Ad5-Herg1-shRNA1组裸鼠骨肉瘤体积小于Ad5-control-shRNA组(P<0.001)。接种5周后,Ad5-Herg1-shRNA1组瘤重为(0.36±0.10)g,低于Ad5-control-shRNA组(P<0.001)。裸鼠活体成像显示,Ad5-control-shRNA组明显可见其他部位肿瘤转移且荧光信号值高,而Ad5-Herg1-shRNA1未见其他部位的肿瘤转移。Herg1蛋白与2型神经纤维瘤(NF2)蛋白相互作用,沉默Herg1可明显下调骨肉瘤中LATS1和YAP蛋白的表达,并促进LATS1和YAP的磷酸化。结论 Herg1可能通过调控Hippo信号通路参与骨肉� 展开更多
关键词 骨肉瘤 Herg1 Hippo信号通路 增殖 侵袭
补阳还五汤冲洗联合负压封闭引流技术治疗四肢软组织缺损创面的临床研究
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作者 陈志达 吴杨鹏 +2 位作者 姚猛飞 吴松松 《中医药导报》 2019年第11期106-109,共4页
目的:探讨补阳还五汤冲洗联合负压封闭引流技术(VSD)治疗四肢软组织缺损创面的临床疗效。方法:将57例慢性四肢软组织缺损创面患者行VSD治疗后随机分为补阳还五汤冲洗组(A组,n=29)和生理盐水冲洗组(B组,n=28),术后观察并比较两组患者的... 目的:探讨补阳还五汤冲洗联合负压封闭引流技术(VSD)治疗四肢软组织缺损创面的临床疗效。方法:将57例慢性四肢软组织缺损创面患者行VSD治疗后随机分为补阳还五汤冲洗组(A组,n=29)和生理盐水冲洗组(B组,n=28),术后观察并比较两组患者的炎症指标变化、细菌培养结果、1周后肉芽组织覆盖率和首次植皮成活率情况。结果:两组患者术后及术后3d的CRP比较,差异无统计学意义(P>0.05),而术后7d及14d,A组患者CRP低于B组(P<0.05)。两组患者术后即刻、术后3d、7d的ESR及白细胞计数比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组患者术后14d的ESR及白细胞计数明显低于B组(P<0.05)。术后1周A、B组平均肉芽组织覆盖率分别为(81.86±5.74)%和(73.11±4.19)%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。拆除VSD后细菌培养结果显示:A组阴性为20例(70.0%),明显高于B组的11例(39.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。A组有24例(82.8%)首次植皮或皮瓣转移成功闭合创面,B组有16例(57.1%)首次植皮成活,两组首次植皮成活率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补阳还五汤冲洗联合VSD治疗四肢软组织缺损创面能降低炎症反应、促进肉芽组织生长、缩短植皮时间,提高植皮成活率。 展开更多
关键词 四肢软组织缺损创面 补阳还五汤 负压封闭引流 创面 冲洗
跟骨关节内骨折术后疗效及并发症分析
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作者 姚小涛 陈志达 +4 位作者 林斌 黄砖枝 宋超 陈佳滨 《中国骨与关节损伤杂志》 2019年第4期421-423,共3页
目的探讨切开复位内固定治疗跟骨关节内骨折术后疗效及并发症。方法回顾性分析自2012-01—2014-06收治的115例跟骨骨折,均采用切开复位锁定钢板内固定手术。结果所有患者均获得随访,随访时间12~20(16.3±7.7)个月。术后28例(28足)... 目的探讨切开复位内固定治疗跟骨关节内骨折术后疗效及并发症。方法回顾性分析自2012-01—2014-06收治的115例跟骨骨折,均采用切开复位锁定钢板内固定手术。结果所有患者均获得随访,随访时间12~20(16.3±7.7)个月。术后28例(28足)出现并发症,5足出现切口感染,予扩创及加强换药后痊愈;17足出现皮肤切口坏死,坏死皮瓣多发生于L形切口拐角处,后期行皮瓣转移或者植皮手术后切口均得到闭合;6足(均为SanderIV型骨折)术后1年出现距下关节炎,再次行关节融合术后患肢疼痛症状消失。术后Bohler角为(31.6±5.2)°,与术前(12.1±4.3)°相比显著改善,差异有统计学意义(t=5.005,P=0.008);术后Gissane角为(121.7±12.5)°,与术前(82.5±10.4)°相比显著改善,差异有统计学意义(t=4.175,P=0.014)。末次随访时患肢功能根据AOFAS踝-后足评分标准,平均为89.7分,其中优56例,良45例,可9例,差5例,优良率87.8%。结论对跟骨关节内骨折采用手术治疗,术前充分掌握跟骨骨折分型及损伤机制,合理选择手术时机及内固定物、掌握手术技巧等能获得良好的疗效并有效降低跟骨骨折术后并发症发生率。 展开更多
关键词 跟骨 关节内骨折 切开复位 锁定钢板 内固定 并发症
补阳还五汤冲洗联合VSD技术治疗下肢感染性创面的疗效分析
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作者 陈志达 吴杨鹏 +2 位作者 郭长勇 蔡弢艺 《中国骨与关节损伤杂志》 2018年第10期1113-1115,共3页
目的 探讨补阳还五汤冲洗联合负压封闭引流(VSD)技术治疗下肢感染性创面的临床疗效。方法 纳入自2015-07—2017-11下肢开放性创伤经急诊手术清创治疗后创面未愈合并继发伤口感染者,60例根据入院时间顺序随机分组,每组各30例。观察组... 目的 探讨补阳还五汤冲洗联合负压封闭引流(VSD)技术治疗下肢感染性创面的临床疗效。方法 纳入自2015-07—2017-11下肢开放性创伤经急诊手术清创治疗后创面未愈合并继发伤口感染者,60例根据入院时间顺序随机分组,每组各30例。观察组行补阳还五汤冲洗联合VSD技术治疗,对照组行生理盐水冲洗联合VSD技术治疗。比较2组术后3、7 d疼痛VAS评分、WBC、CRP、ESR,以及术后7 d细菌培养转阴率。结果 观察组术后3、7 d疼痛VAS评分、WBC、CRP均低于对照组,差异有统计学意义(P 〈0.05)。观察组与对照组术后3 d的ESR差异无统计学意义(P〉0.05);但观察组术后7 d的ESR低于对照组,差异有统计学意义(P 〈0.05)。观察组术后7 d细菌培养转阴率高于对照组,差异有统计学意义(P 〈0.05)。结论 补阳还五汤冲洗联合VSD技术治疗下肢感染性创面较常规生理盐水冲洗联合VSD治疗在减轻炎症反应、消除感染及缓解疼痛方面的效果更好。 展开更多
关键词 下肢感染性创面 负压封闭引流 补阳还五汤 生理盐水
接骨板系统治疗同侧股骨干合并股骨近端骨折 预览
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作者 吴进 郭小微 +4 位作者 宋伟 陈鲁毅 陈志达 康两期 《中华骨与关节外科杂志》 2018年第8期617-621,共5页
背景:股骨干合并同侧股骨近端骨折是一种较为少见的损伤,漏诊率高,尚无统一标准的内固定方式。目的:探讨接骨板系统治疗同侧股骨干合并股骨近端骨折的疗效。方法:回顾性分析2012年1月至2015年12月收治的16例同侧股骨干合并股骨近端... 背景:股骨干合并同侧股骨近端骨折是一种较为少见的损伤,漏诊率高,尚无统一标准的内固定方式。目的:探讨接骨板系统治疗同侧股骨干合并股骨近端骨折的疗效。方法:回顾性分析2012年1月至2015年12月收治的16例同侧股骨干合并股骨近端骨折患者,男11例,女5例;年龄17-60岁,平均(36.2±10.7)岁;交通伤12例,高处坠落伤4例;闭合性骨折14例,开放性骨折2例(GustiloⅡ型1例,Ⅲ型1例)。入院后即刻确诊股骨近端骨折13例,延迟诊断3例,延迟时间为5-6 d。全部病例均采用接骨板系统(桥接组合式内固定系统联合重建锁定接骨板或空心钉)固定治疗。结果:手术时间为135-231 min,平均(179.7±26.3)min;术中出血量为430-575 ml,平均(497.8±40.1)ml。除1例失随访外,其余病例均获得随访,随访时间为9-30个月,平均(16.2±6.1)个月。14例股骨近端骨折于术后3-6个月获得骨折愈合,平均(4.2±0.9)个月;1例股骨颈骨折术后9个月仍未愈合,行股骨转子间外翻截骨后5个月愈合。14例股骨干骨折于术后3-7个月获得骨折愈合,平均(5.1±1.1)个月;1例股骨干骨折术后9个月骨折仍未愈合,经再次手术内固定并植骨后4个月愈合。末次随访的Friedman-Wyman功能评分:优9例,良5例,差1例。术后并发症包括伤口感染1例,股骨颈内翻畸形1例,股骨颈骨不连1例,股骨干骨不连1例,股骨头缺血性坏死1例。结论:同侧股骨干合并股骨近端骨折相对较少,漏诊率和延迟诊断率较高,且治疗复杂。应用接骨板系统治疗同侧股骨干合并股骨近端骨折的临床效果良好。 展开更多
关键词 股骨干骨折 股骨近端骨折 桥接组合式内固定 重建锁定接骨板 空心钉
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后路伤椎短节段固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折 被引量:4
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作者 陈志达 吴进 +2 位作者 林斌 吴松松 《中国修复重建外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期59-63,共5页
目的探讨经后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折的临床疗效。方法 2008年5月—2013年7月,采用后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗52例严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折。其中男33例,女19例;年龄21~56岁,平均37.9岁。致伤... 目的探讨经后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折的临床疗效。方法 2008年5月—2013年7月,采用后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗52例严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折。其中男33例,女19例;年龄21~56岁,平均37.9岁。致伤原因:高处坠落伤32例,交通事故伤16例,其他伤4例。载荷分享评分(load sharing classification,LSC)为7~9分,平均7.85分。累及节段:T_(11) 4例,T_(12) 19例,L_1 25例,L_2 4例。Frankel分级:A级2例,B级4例,C级8例,D级11例,E级27例。伤椎椎管占位24.2%~76.7%,平均47.1%。伤后至手术时间3~5 d,平均3.6 d。根据患者手术前后的伤椎Cobb角、伤椎前缘高度及Frankel分级变化评价临床疗效。结果手术时间为85~127 min,平均106.5 min;术中出血量为90~155 mL,平均137.6 mL。术后手术切口均Ⅰ期愈合。47例患者获随访,随访时间19~27个月,平均23.2个月。随访期间均未出现切口感染、椎弓根钉松动和内固定物断裂等并发症。患者术后即刻及末次随访时的伤椎Cobb角及伤椎前缘高度均较术前显著改善(P〈0.001);末次随访时较术后即刻有一定程度丢失,但比较差异无统计学意义(P〉0.05)。末次随访时Frankel分级均较术前提高1~2个等级,差异有统计学意义(Z=15.980,P=0.003)。结论经后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折(LSC≥7分),能有效矫正后凸畸形、恢复椎体高度,并可避免前路的重建。 展开更多
关键词 后路 伤椎 短节段固定 载荷分享评分 胸腰椎爆裂性骨折
miRNA-34a调控ether-à-go-go 1基因抑制骨肉瘤细胞增殖的体外研究 被引量:3
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作者 熊远飞 吴进 +3 位作者 刘庆军 陈志达 《肿瘤研究与临床》 CAS 2017年第4期217-222,226共7页
目的检测miRNA-34a(miR-34a)对于骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的调控机制。方法选择人骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和人成骨细胞株hFOB 1.19以及穿刺活组织检查并经病理确诊的10例骨肉瘤和10例正常骨组织标本。采用实时定量聚合酶链反应... 目的检测miRNA-34a(miR-34a)对于骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的调控机制。方法选择人骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和人成骨细胞株hFOB 1.19以及穿刺活组织检查并经病理确诊的10例骨肉瘤和10例正常骨组织标本。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-34a在各细胞株和组织中的表达。构建pcDNA/miR-34a真核表达载体并转染骨肉瘤MG-63、Saos-2细胞,采用CCK-8法、克隆形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测转染pcDNA/miR-34a前后细胞增殖、生长和裸鼠肿瘤体积的变化。采用Western blot法检测转染pcDNA/miR-34a和miR-34a抑制剂miR-34a-2'-O-甲基反义核糖核苷酸(miR-34a-2'-O-Me)前后骨肉瘤细胞株中ether-à-go-go 1(Eag1)蛋白的表达。结果与成骨hFOB 1.19细胞和正常骨组织相比,miR-34a在骨肉瘤细胞株和组织中表达下调。CCK-8法检测结果示,在MG-63细胞中,空白对照组、阴性对照组和miR-34a转染组72 h细胞存活率分别为(40.05±4.82)%、(36.88±4.66)%和(26.24±6.22)%,96 h细胞存活率分别为(83.55±5.95)%、(80.13±4.48)%和(30.21±7.26)%,转染pcDNA/miR-34a后72、96 h分别与空白对照组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P〈0.001)。Saos-2细胞中,空白对照组、阴性对照组和miR-34a转染组72 h细胞存活率分别为(46.45±8.15)%、(43.33±6.89)%和(26.81±3.17)%,96 h细胞存活率分别为(84.79±4.10)%、(80.14±3.11)%和(31.77±5.17)%,转染pcDNA/miR-34a后72、96 h分别与空白对照组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P〈0.001)。克隆形成实验结果示,转染pcDNA/miR-34a后,骨肉瘤MG-63和Saos-2细胞克隆形成数分别为(24.40±2.71)、(30.40±4.94)个,均低于空白对照组[(83.40±3.29)、(85.00±3.32)个]和阴性对照组[(80.00±3.06)、(80.60±3.29)个](均P〈0.001)。裸鼠骨肉瘤生长结果显示,从转染pcDNA/miR 展开更多
关键词 骨肉瘤 微RNAS 细胞增殖 小鼠 基因 ether-à-go-go 1
自行研制的胫骨可调负重支具在AO分型42-B型胫骨干骨折髓内钉固定术后的应用 被引量:2
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作者 林斌 陈志达 +3 位作者 吴进 蔡弢艺 戴立林 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期47-53,共7页
目的探讨自行研制的胫骨可调负重支具辅助治疗AO分型42-B型闭合性胫骨干骨折髓内钉固定术后患者的临床疗效。方法选取2013年4月至2015年3月连续收治的68例闭合B型胫骨干骨折髓内固定术后患者,采用随机数字表法平均分成A、B两组(n=34... 目的探讨自行研制的胫骨可调负重支具辅助治疗AO分型42-B型闭合性胫骨干骨折髓内钉固定术后患者的临床疗效。方法选取2013年4月至2015年3月连续收治的68例闭合B型胫骨干骨折髓内固定术后患者,采用随机数字表法平均分成A、B两组(n=34),其中A组患者按胫骨干骨折术后常规处理,B组患者在此基础上,术后1周加用胫骨可调负重支具治疗。记录并比较两组患者术后3、6个月疼痛视觉模拟评分(VAS)、术后1、3、6个月患肢负重情况、骨折临床愈合时间、胫骨骨折影像学愈合(RUST)评分和及末次随访时Johner—Wruhs评分。结果62例患者术后获12—18个月(平均14.7个月)随访,5例患者失访,1例患者退出试验。术后第3、6个月B组患者VAS评分平均分别为(2.5±0.8)、(0.9±0.6)分,均显著低于A组患者[(3.0±0.9)、(1.4±0.8)分]差异有统计学意义(P〈0.05);术后1、3、6个月A组患者的患肢负重情况平均分别为44.1%±17.5%、72.0%±17.4%、86.4%±12.5%,RUST评分平均分别为(5.4±1.4)、(8.7±1.1)、(10.3±1.1)分;B组患者患肢负重情况平均分别为53.8%±11.0%、84.1%±12.2%和94.4%±10.6%,RUST评分平均分别为(6.5±0.8)、(9.9±0.9)、(11.3±0.8)分,以上项目两组间比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。B组患者的骨折临床愈合时间平均为(3.3±0.7)个月,明显短于A组患者[(3.9±1.0)个月],差异有统计学意义(P〈0.05)。末次随访时Johner—Wruh评分示:A组优19例,良12例;B组优27例,良4例,两组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论B型闭合胫骨干骨折髓内固定术后早期应用自行研制的胫骨可调负重支具较常规术后处理可更明显地减少患肢术后疼痛、加速骨痂生长、缩短骨折临床愈合时间� 展开更多
关键词 胫骨骨折 功能恢复 应力 物理 骨折愈合
Kv1.3钾通道在骨肉瘤中的表达及作用研究 预览
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作者 陈志达 戴立林 +2 位作者 熊远飞 吴进 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2017年第6期487-492,共6页
目的 探讨特异性短发卡RNA(shRNA)抑制Kv1.3钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting和免疫组化检测骨肉瘤MG-63细胞中Kv1.3钾通道的表达,并分别采用CCK-8法、裸鼠骨肉瘤异种... 目的 探讨特异性短发卡RNA(shRNA)抑制Kv1.3钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting和免疫组化检测骨肉瘤MG-63细胞中Kv1.3钾通道的表达,并分别采用CCK-8法、裸鼠骨肉瘤异种移植模型和流式细胞仪检测MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化,采用Western blotting检测MG-63细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和caspase-3的表达水平。结果 Kv1.3钾通道在骨肉瘤细胞中异常高表达。沉默Kv1.3钾通道的Ad5-Kv1.3-shRNA能从体内外有效地抑制MG-63细胞增殖并促进其早期凋亡。沉默Kv1.3钾通道可明显诱导细胞凋亡相关蛋白caspase-3和PARP的裂解。结论 Kv1.3钾通道参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡的过程,有望成为骨肉瘤治疗及诊断的新靶点基因。 展开更多
关键词 骨肉瘤 Kv1.3钾通道 细胞增殖 凋亡
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骨肉瘤Kv1.5钾离子通道表达意义的研究 被引量:1
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作者 陈志达 刘庆军 +3 位作者 钟渊福 林斌 吴进 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2016年第9期573-581,共9页
目的研究表明,Kv1.5钾离子通道参与了多种肿瘤的生物学行为,但其在骨肉瘤中的表达和作用尚未明确。本研究拟检测Kv1.5钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探讨小干扰RNA(small interfering,siRNA)沉默Kv1.5表达后对骨肉瘤细胞增殖... 目的研究表明,Kv1.5钾离子通道参与了多种肿瘤的生物学行为,但其在骨肉瘤中的表达和作用尚未明确。本研究拟检测Kv1.5钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探讨小干扰RNA(small interfering,siRNA)沉默Kv1.5表达后对骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响及可能的调控机制。方法实验分组,Kv1.5-siRNA转染细胞为实验组,control—siRNA转染细胞为对照组,未处理细胞为空白组。采用siRNA抑制Kv1.5的表达,并分别采用CCK-8法、克隆形成率、流式细胞仪和Tunel法检测MG-63细胞增殖、生长、周期和凋亡的变化。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测骨肉瘤细胞中周期和凋亡相关基因的表达水平。结果Kv1.5在骨肉瘤细胞和组织中均异常高表达。CCK-8法检测结果示,Kv1.5-siRNA组细胞增殖水平为(53.87±5.91)%,与control—siRNA组的(99.14±7.87)%相比差异有统计学意义,Z=-3.49,P〈0.001;与空白组(100.00±8.37)%相比差异有统计学意义,Z=-3.57,P〈0.001。克隆形成实验结果示,Kv1.5-siRNA组克隆形成数为164.00±7.66,与control—siRNA组(223.20±11.41)相比,Z=-2.61,P=0.008;与空白组(228.20±12.62)相比,Z=-2.40,P=0.016。流式细胞周期结果示,Kv1.5-siRNA组Go/Gl期所占比例为(68.81±0.55)Vo,与control—siRNA组(41.22±0.61)%相比,Z=-2.15,P=0.031;与空白组(40.79±0.52)%相比,Z=-2.31,P=0.029。流式细胞凋亡结果示,Kv1.5-siRNA组(30.23±1.74)%与control—siRNA组(14.10±1.27)%相比,Z=-2.04,P=0.039;与空白组(12.85±1.02)%相比,Z=-2.09,P=0.035。Tunel法结果示,Kv1.5-siRNA组凋亡指数为(35.20±3.14)%,与control—siRNA组(8.03±1.50)%相比,Z=-2.41,P=0.015;与空白组(8.22±1.32)%相比,Z=-2.25,P=0.019。沉默Kv1.5表达 展开更多
关键词 Kv1.5钾通道 骨肉瘤 细胞增殖 细胞周期 凋亡
过表达TRAIL联合特异性沉默Eag 1的协同抗骨肉瘤作用 被引量:2
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作者 陈志达 +3 位作者 刘庆军 林斌 吴欣宇 吴进 《中国骨与关节杂志》 CAS 2016年第2期123-128,共6页
目的检测过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)联合特异性沉默Etheràgo-go 1(Eag 1)基因对骨肉瘤的影响。方法分别构建名为Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag、CRAd5.TRAIL和CRAd5.TRAIL/s... 目的检测过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)联合特异性沉默Etheràgo-go 1(Eag 1)基因对骨肉瘤的影响。方法分别构建名为Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag、CRAd5.TRAIL和CRAd5.TRAIL/si Eag1的腺病毒载体并检测其抗骨肉瘤的作用。结果Ad5.e GFP对MG-63细胞中的Eag 1和TRAIL表达无明显影响,CRAd5.si Eag仅可抑制Eag 1的表达,CRAd5.TRAIL仅可过表达TRAIL,而CRAd5.TRAIL/si Eag1既能沉默Eag 1又能过表达TRAIL。细胞增殖实验结果显示:CRAd5.TRAIL/si Eag1比Ad5.e GFP、CRAd5.TRAIL或CRAd5.si Eag1能更有效地抑制骨肉瘤细胞增殖。同时,对人成骨细胞h FOB 1.19无明显细胞毒性。CRAd5.TRAIL/si Eag1组Caspase-3/7活性为(39693.33±1922.96)RLU,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组Caspase-3/7活性分别为:(2832.83±375.99)、(3242.50±329.97)和(15583.17±698.54)RLU。统计学分析显示CRAd5.TRAIL/si Eag1组Caspase-3/7活性明显高于其它三组(P〈0.001)。此外,CRAd5.TRAIL/si Eag1还可有效地诱导MG-63细胞中PARP裂解物表达。局部注射第8天,CRAd5.TRAIL/si Eag1组裸鼠肿瘤的体积为(231.19±25.96)mm^3,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积分别为:(504.68±102.32)、(365.85±47.60)和(355.48±35.34)mm^3,CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积与其它三组相比差异均有统计学意义(P〈0.05)。第10、12和14天,CRAd5.TRAIL/si Eag1组裸鼠肿瘤的体积分别为:(367.82±39.52)、(470.18±60.11)和(631.52±61.22)mm^3,Ad5.e GFP、CRAd5.si Eag1和CRAd5.TRAIL组裸鼠肿瘤体积分别为:(826.57±130.60)、(1284.69±243.50)和(1762.06±180.36)mm^3,(552.12±64.39)、(721.82±108.20)和(949.20±124.70)mm^3,(524.03±43.47)、(653.54±56.22)、(896.44±93.64)mm^3。与其它三组相比,CRAd5.TRAIL/si Eag1可更有效地抑制裸鼠骨肉瘤生长。TUNEL实验结果显示:CRAd5.TRAIL/si Eag1的凋亡指数为(27.33±2.07� 展开更多
关键词 骨肉瘤 细胞增殖 细胞凋亡 基因 TNF相关凋亡诱导配体 EAG 1基因
电压门控钾离子通道Kv1.5与肿瘤 被引量:2
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作者 陈志达 +2 位作者 林斌 吴欣宇 吴进 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2016年第2期130-132,共3页
电压门控钾离子通道Kv1.5广泛表达于多种类型肿瘤并参与肿瘤细胞增殖、凋亡、周期等过程.某些抗肿瘤药物可通过影响Kv1.5通道的表达进而影响肿瘤的生物进程.Kv1.5通道是肿瘤治疗的新靶点,研究Kv1.5通道可以进一步了解肿瘤细胞发生、发... 电压门控钾离子通道Kv1.5广泛表达于多种类型肿瘤并参与肿瘤细胞增殖、凋亡、周期等过程.某些抗肿瘤药物可通过影响Kv1.5通道的表达进而影响肿瘤的生物进程.Kv1.5通道是肿瘤治疗的新靶点,研究Kv1.5通道可以进一步了解肿瘤细胞发生、发展的机制,并有助于研制出新的抗肿瘤药物,为肿瘤治疗提供新的更好的方法. 展开更多
关键词 肿瘤 抗肿瘤药 Kv1.5钾通道
HERG 基因调控 NF-κB 通道抑制骨肉瘤恶性表型的研究 被引量:1
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作者 吴进 陈志达 +3 位作者 林斌 吴欣宇 刘庆军 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2016年第7期508-514,共7页
目的:检测HERG(human ether-&#224;-go-go-related gene)钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探索小干扰 RNA(siRNA)沉默 HERG 表达后对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的调控机制。方法采用反转录定量聚合酶链反应(RT-PCR)、West... 目的:检测HERG(human ether-&#224;-go-go-related gene)钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探索小干扰 RNA(siRNA)沉默 HERG 表达后对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的调控机制。方法采用反转录定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting 和免疫组织化学法检测骨肉瘤 MG-63细胞和组织中 HERG 的表达。实验分组为:HERG-siRNA 处理为实验组,control-siRNA 处理为对照组,未行任何处理为空白组。分别采用 CCK-8法、克隆形成、流式细胞仪和 Tunel 法检测 MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化。最后采用 Western blo-tting检测骨肉瘤细胞中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达水平。结果HERG 在骨肉瘤细胞和组织中异常高表达。CCK-8法结果示,实验组[(75.34±4.45)%]与对照组[(100.60±5.31)%]和空白组[(100.00±5.66)%]的细胞增殖水平相比,差异有统计学意义(t =3.64,P =0.007;t =3.43,P =0.009)。克隆形成结果示,实验组(134.30±11.82)与对照组(225.30±11.56)和空白组(232.80±12.21)的克隆形成数相比,差异有统计学意义(t =5.51,P =0.002;t =5.80,P =0.001)。流式细胞凋亡结果示,实验组[(28.10±2.21)%]与对照组[(9.36±2.42)%]和空白组[(10.92±2.51)%]的早期凋亡所占比例相比,差异有统计学意义(t =5.72,P =0.005;t =5.14,P =0.007)。Tunel 法结果示,实验组[(31.57±2.08)%]与对照组[(10.35±1.82)%]和空白组[(7.96±0.88)%]的凋亡指数相比,差异有统计学意义(t =7.69,P =0.002;t =10.48,P =0.001)。抑制 HERG 表达可明显下调 NF-κB 信号通路中细胞凋亡抑制蛋白-1(cIAP-1)、X 染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、Bcl-2和 Survivin 的活性,同时还下调磷酸化 NF-κB 抑制蛋白(IκB)α和 N 展开更多
关键词 钾通道 骨肉瘤 细胞增殖 细胞凋亡
shRNA靶向沉默Eag 1钾通道对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响 预览
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作者 陈志达 戴立林 +3 位作者 吴采荣 熊远飞 吴进 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2016年第10期874-878,共5页
目的 探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默Ethergo-go 1(Eag1)钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响。方法 使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞(抑制组),同时设转染无义序列(Ad5-Control-s... 目的 探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默Ethergo-go 1(Eag1)钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响。方法 使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞(抑制组),同时设转染无义序列(Ad5-Control-shRNA)的空转染组及不进行任何处理的对照组。采用逆转录聚合酶链式反应和Western blotting检测Ad5-Eag1-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后的Eag1 mRNA和蛋白水平,分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组的细胞增殖情况,流式细胞仪和Western blotting分别检测各组的细胞周期变化和细胞周期蛋白(cyclin D1和cyclin E)的蛋白水平。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型并测量各组裸鼠肿瘤体积的变化情况。结果 抑制组的Eag1 mRNA和蛋白水平均低于空转染组和对照组,差异有统计学意义(P〈0.05);与其余两组相比,抑制组的细胞增殖、克隆形成数、S期细胞比例及细胞周期蛋白水平均降低,而G0/G1期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义(P〈0.05)。抑制组裸鼠的瘤体积小于空转染组和对照组(P〈0.05)。结论 通过shRNA抑制Eag1基因表达可抑制MG-63细胞的增殖并诱导G0/G1期阻滞,可能与调控cyclin D1/E通路有关,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。 展开更多
关键词 Eag1钾通道 骨肉瘤 细胞增殖 细胞周期 细胞周期蛋白
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Ether à go-go 1在人骨肉瘤细胞和组织中的表达及其调控骨肉瘤恶性表型的分子机制 被引量:1
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作者 陈志达 刘庆军 +3 位作者 吴欣宇 林斌 吴进 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期818-825,共8页
目的探讨Ether à go-go 1 (Eag1)在人骨肉瘤细胞和组织中的表达及其调控骨肉瘤恶性表型的分子机制。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和免疫组化检测骨肉瘤细胞和组织中Eag1的表达。采用小干扰RNA (siRN... 目的探讨Ether à go-go 1 (Eag1)在人骨肉瘤细胞和组织中的表达及其调控骨肉瘤恶性表型的分子机制。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和免疫组化检测骨肉瘤细胞和组织中Eag1的表达。采用小干扰RNA (siRNA)抑制Eag1的表达,并采用CCK-8法、克隆形成实验、Transwell体外侵袭实验和划痕实验检测Eag1 siRNA转染后骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的变化。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型,绘制肿瘤生长曲线,Western blot检测骨肉瘤细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和信号转导和转录激活因子3 (STAT3)的表达水平。结果Eag1在MG-63、Saos-2细胞及骨肉瘤组织中异常高表达。CCK-8法检测显示,MG-63和Saos-2细胞中,对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的细胞存活率分别为(100.00±4.65)%、(63.57±3.89)%、(54.13±3.70)%和(100.00±5.46)%、(56.70±5.34)%、(40.27±5.28)%,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P〈0.001)。克隆形成实验显示,MG-63和Saos-2细胞中,对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的克隆形成率分别为(92.00±3.46)%、(60.00±3.06)%、(53.67±2.40)%和(92.00±5.57)%、(52.33±5.13)%、(41.67±2.73)%,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P〈0.001)。裸鼠骨肉瘤生长结果显示,从治疗后第10天起,Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组裸鼠的骨肉瘤体积小于对照组,差异有统计学意义(均P〈0.01)。侵袭实验显示,MG-63和Saos-2细胞中,对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的侵袭细胞数分别为(134.00±3.61)个、(105.20±2.52)个、(91.00±3.01)个和(132.30±3.23)个、(114.30±3.48)个、(82.67±6.33)个,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。划痕实验显示,MG-63和Saos-2细胞中,对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的细胞迁移率分别为(62.48±1. 展开更多
关键词 骨肉瘤 ETHER a go-go 1 转录激活因子3 血管内皮生长因子 细胞增殖 侵袭
沉默Ether à go-go 1基因调控VEGF/PI3K/AKT抑制骨肉瘤增殖和血管生成的研究 被引量:4
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作者 吴进 刘庆军 +3 位作者 吴采荣 戴立林 陈志达 《肿瘤预防与治疗》 2016年第4期193-198,共6页
目的:检测沉默Ether à go-go 1(Eag1)基因对骨肉瘤增殖和血管生成的影响及其可能的调控机制。方法:构建抑制Eag1表达的短发卡RNA(short hair RNA,shRNA)重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA并感染骨肉瘤细胞株。采用实时定量聚合... 目的:检测沉默Ether à go-go 1(Eag1)基因对骨肉瘤增殖和血管生成的影响及其可能的调控机制。方法:构建抑制Eag1表达的短发卡RNA(short hair RNA,shRNA)重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA并感染骨肉瘤细胞株。采用实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)和蛋白印迹技术(Western blot analysis,WB)检测Ad5-Eag1-shRNA的感染效能。采用CCK-8法和裸鼠成瘤实验检测感染前后骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤体积的变化。采用免疫组化技术和WB技术分别检测感染前后裸鼠肿瘤组织中微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的变化。采用WB技术检测感染前后骨肉瘤细胞中VEGF、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)的表达变化。结果:构建的重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA具有良好的感染效能。感染Ad5-Eag1-shRNA可沉默骨肉瘤中Eag1的表达并能有效地抑制骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长(均P〈0.001),同时下调裸鼠骨肉瘤组织中MVD密度和VEGF的表达(均P〈0.001)。感染Ad5-Eag1-shRNA可下调骨肉瘤细胞中VEGF的表达(P〈0.05)并抑制PI3K和AKT的磷酸化(均P〈0.001)。结论:沉默Eag1可能通过调控VEGF/PI3K/AKT信号通路抑制骨肉瘤增殖和血管生成。 展开更多
关键词 ETHER à go-go 1基因 血管内皮生长因子 骨肉瘤 细胞增殖 血管生成
经内踝截骨入路微型钢板固定治疗Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折 预览 被引量:1
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作者 陈志达 吴进 +2 位作者 林斌 刘晖 《实用骨科杂志》 2016年第9期799-801,共3页
目的探讨经内踝截骨入路微型钢板固定治疗Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折的手术方法及疗效。方法 2008年1月至2014年3月,我们对14例Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折的患者行经内踝截骨的前内侧入路切开复位微型钢板内固定术治疗,根据患者主诉、后跟及... 目的探讨经内踝截骨入路微型钢板固定治疗Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折的手术方法及疗效。方法 2008年1月至2014年3月,我们对14例Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折的患者行经内踝截骨的前内侧入路切开复位微型钢板内固定术治疗,根据患者主诉、后跟及踝关节外形、功能及X线片征象来评价临床疗效。结果本组14例病例均获得随访18~41个月,平均随访29.6个月。末次随访时患者的平均AOFAS踝与后足评分为(79.8±17.3)分,按其疗效标准进行评价,优6例(42.9%),良3例(21.4%),可4例(28.6%),差1例(7.1%),优良率64.3%。3例患者出现不同程度的距骨缺血坏死,6例患者发生创伤性关节炎,累及胫距关节3例,累及距下关节2例,同时累及胫距及距下关节1例。结论经内踝截骨手术入路微型钢板固定治疗Hawkins Ⅲ型距骨颈骨折具有软组织创伤小、对距骨颈显露充分、并发症发生率低、疗效优良等特点。 展开更多
关键词 Hawkins Ⅲ型 距骨颈骨折 内踝截骨 微型钢板
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OCT在骨关节炎的应用进展 预览
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作者 陈志达 +2 位作者 林瀚洋 余志毅 李炳 《风湿病与关节炎》 2015年第7期61-65,共5页
现阶段诊断骨关节炎的影像学方法虽然很多,但各有其不足。采取有效的方法检测早期关节软骨损伤和退变对保护和修复软骨非常重要。光学相干断层成像是一项新的光扫描断层显像技术,能动态观察并反映关节软骨组织学横断面影像的高分辨率新... 现阶段诊断骨关节炎的影像学方法虽然很多,但各有其不足。采取有效的方法检测早期关节软骨损伤和退变对保护和修复软骨非常重要。光学相干断层成像是一项新的光扫描断层显像技术,能动态观察并反映关节软骨组织学横断面影像的高分辨率新型无损成像技术。文章介绍光学相干断层成像应用于骨关节炎的进展。 展开更多
关键词 骨关节炎 光学相干断层成像 应用进展
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46例老年脊柱结核临床特点及外科治疗体会 预览 被引量:1
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作者 谢克恭 唐毓金 +3 位作者 陆敏安 黄可 林佳杰 《右江医学》 2015年第5期593-596,共4页
目的探讨老年脊柱结核的临床特点及外科治疗策略。方法回顾分析2008年1月~2013年7月46例老年脊柱结核的病症特点以及外科治疗和术后相关的并发症。结果 43例患者获得系统随访,随访时间18~36个月,平均24个月,1例术后早期术口发生混合感... 目的探讨老年脊柱结核的临床特点及外科治疗策略。方法回顾分析2008年1月~2013年7月46例老年脊柱结核的病症特点以及外科治疗和术后相关的并发症。结果 43例患者获得系统随访,随访时间18~36个月,平均24个月,1例术后早期术口发生混合感染,2例分别在术后3个月、7个月出现窦道形成,1例在术后6个月出现内固定钢板螺钉松脱。其余患者经规范化疗后,结核症状无复发,植骨处均融合,内固定无松动及断裂。19例合并不同程度脊髓神经功能损伤的患者术后均得到不同程度恢复。按脊柱结核的治愈标准,治愈率为93.5%(43/46)。结论老年脊柱结核多合并其他系统疾病,区域病灶多为广泛溶骨样破坏。依据其不同的临床特点,合理的围术期准备及恰当的手术方式是治疗成败的关键。 展开更多
关键词 老年 脊柱结核 临床特点 治疗策略
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闭孔神经切断术对激素性股骨头缺血性坏死局部组织血液流变学的干预作用 预览 被引量:2
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作者 唐毓金 +1 位作者 黄可 谢克恭 《右江医学》 2015年第1期6-10,共5页
目的探讨闭孔神经切断术对激素性股骨头坏死(SANFH)的局部组织血液流变学功能改变的影响,以寻求早期股骨头缺血性坏死新的防治方法。方法选用健康成年中国白兔40只,随机分为对照组(9只)、激素组(15只)和治疗组(16只)三组。利用... 目的探讨闭孔神经切断术对激素性股骨头坏死(SANFH)的局部组织血液流变学功能改变的影响,以寻求早期股骨头缺血性坏死新的防治方法。方法选用健康成年中国白兔40只,随机分为对照组(9只)、激素组(15只)和治疗组(16只)三组。利用每周皮下注射醋酸泼尼松龙的方法成功制备兔早期激素性股骨头坏死的动物模型,4周后治疗组行闭孔神经切断术,分别选取实验前、激素注射后4周(术前)、激素注射后8周三个时间点行股骨头局部组织血液流变学检测,并处死进行股骨头大体观察、HE染色、透射电镜观察。结果大体观察、HE染色和透射电镜观察发现早期股骨头坏死动物模型建立成功,且8周后治疗组与激素组相比股骨头坏死表现明显减轻,两组间及治疗组治疗前后血液流变学改变有统计学意义(P〈0.05或0.01)。结论闭孔神经切断术可以降低激素性股骨头坏死股骨头局部组织血黏度,有效延缓或降低股骨头坏死的发生。 展开更多
关键词 激素 股骨头坏死 闭孔神经 血液流变学
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