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小鼠PD-1及其配体PD-L1胞外区基因的原核表达及亲和性 预览 被引量:1
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作者 吕开绩 陈旭东 +5 位作者 程开 王路得 进顺 Kamara Saidu 张丽芳 《温州医科大学学报》 CAS 2018年第6期401-407,412共8页
目的:制备小鼠PD-1胞外区(mPD-1)与其配体PD-L1胞外区(mPD-L1)原核表达蛋白,并制备mPDL1兔多克隆抗体,在体外对mPD-L1和mPD-1的结合亲和性进行验证。方法:通过分子克隆方法分别构建重组质粒pET21a/mPD-L1和p GEX4T-1/mPD-1,并通... 目的:制备小鼠PD-1胞外区(mPD-1)与其配体PD-L1胞外区(mPD-L1)原核表达蛋白,并制备mPDL1兔多克隆抗体,在体外对mPD-L1和mPD-1的结合亲和性进行验证。方法:通过分子克隆方法分别构建重组质粒pET21a/mPD-L1和p GEX4T-1/mPD-1,并通过原核表达系统制备相应的重组蛋白并纯化,通过Western blot进行鉴定;将纯化的mPD-L1蛋白免疫健康日本大耳白兔制备兔多克隆血清抗体,用ELISA、Western blot分析得到的多克隆抗体的效价和特异性,并且将该多克隆抗体作为免疫荧光的阳性对照。最后应用ELISA和免疫荧光验证mPD-1与其配体mPD-L1蛋白的亲和性。结果:SDS-PAGE和Western blot结果显示原核表达的重组蛋白与预期大小一致,mPD-L1和mPD-1分别为25 kDa和40 kDa。经mPD-L1蛋白免疫后的日本大耳白兔能够产生特异性抗体,抗体效价在免疫后第6周达到高峰,Western blot检测结果显示多克隆血清可特异性识别mPD-1。ELISA结果表明,原核表达的mPD-L1蛋白能够和mPD-1蛋白结合,实验组OD450值明显高于对照组。免疫荧光结果显示,在小鼠PD-L1阳性细胞B16(小鼠黑色素瘤细胞株)的胞膜区出现绿色荧光团块。结论:利用原核细胞表达并纯化后获得mPD-L1和mPD-1蛋白,并在体外成功验证了mPD-L1和mPD-1之间的结合特性,为后期利用mPD-1和PD-L1的生物学特性研究提供了基础。 展开更多
关键词 mPD-1 mPD-L1 原核表达 干扰素 ELISA 免疫荧光 小鼠
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程序性死亡受体配体-1 B细胞表位预测与分析 预览 被引量:2
2
作者 陈旭东 程开 +2 位作者 吕开绩 张丽芳 《温州医科大学学报》 CAS 2018年第1期7-12,19共7页
目的:预测和筛选程序性死亡受体配体-1(PD-L1)的B细胞表位,以期用于能够阻断程序性死亡受体(PD-1)和其配体结合的拮抗剂的研究。方法:以人和小鼠的PD-L1的全长氨基酸序列为基础,利用生物信息学方法,采用Hopp&Woods的亲水性方... 目的:预测和筛选程序性死亡受体配体-1(PD-L1)的B细胞表位,以期用于能够阻断程序性死亡受体(PD-1)和其配体结合的拮抗剂的研究。方法:以人和小鼠的PD-L1的全长氨基酸序列为基础,利用生物信息学方法,采用Hopp&Woods的亲水性方案、Zimmerman极性参数、Jameson-Wolf抗原指数方案和Emini表面可及性方案等,结合PD-L1的二级结构与其柔性区域对PD-L1的优势B细胞表位区段进行综合分析,建立3D模型,结合功能定位,进一步运用抗原指数分析预测,将人与小鼠的B细胞表位进行对比分析,并与多种实验动物进行同源性分析。结果:人和小鼠的PD-L1均为一型跨膜蛋白,均由290个氨基酸残基组成,相对分子质量均为33 kDa。人和小鼠PD-L1的胞外段分别位于N端的19~238和19~239。经综合分析,与PD-1、PD-L1结合相关的人和小鼠的B细胞优势表位可能分别位于其氨基酸序列N端的41~46、60~63、71~75和40~48、58~63、72~88区段,即KFPVEK、EDKN、EEDLK和RFPVERELDL、EKEDE、EDLKPQH肽段;同源性分析显示包含本研究所预测的表位的氨基酸序列在多种动物之间高度保守。结论:将生物信息学预测B细胞表位的方法与3D模型建立及功能定位的方法相结合,筛选出人和鼠各3条与PD-L1功能区相近的优势B表位,为阻断PD-1和PD-L1结合的拮抗剂的研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 程序性死亡受体配体-1 B细胞表位 肿瘤 免疫疗法
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PD-L2蛋白B细胞表位预测及其与PD-1结合的三维结构分析 预览
3
作者 程开 陈旭东 +4 位作者 吕开绩 金劲激 叶晓鲜 张丽芳 《温州医科大学学报》 CAS 2018年第5期319-324,329共7页
目的:对人源程序性死亡因子1配体2(PD-L2)的B细胞表位进行预测及其与PD-1结合的三维结构分析。方法:采用生物信息学分析软件及服务器上的在线分析系统预测人类PD-L2蛋白的二级结构,柔性区域,Hopp&Woods亲水性、Zimmerman极性参数和... 目的:对人源程序性死亡因子1配体2(PD-L2)的B细胞表位进行预测及其与PD-1结合的三维结构分析。方法:采用生物信息学分析软件及服务器上的在线分析系统预测人类PD-L2蛋白的二级结构,柔性区域,Hopp&Woods亲水性、Zimmerman极性参数和Jameson-Wolf抗原指数以及Emini表面可及性方案等,预测结果被用以对PD-L2的优势B细胞表位区段进行多方面分析。运用抗原指数分析,预测PD-L2的B细胞表位。使用BLAST分析人源PD-L2与小鼠PD-L2的同源性,将人源PD-L2的B表位与小鼠PD-L2的序列进行匹配。将与人源PD-L2表位匹配的序列在小鼠PD-1与小鼠PD-L2的结合模型上定位,对其立体结构进行模拟,进一步直观地分析B细胞表位与蛋白结合位点的关系。结果:PD-L2的全长氨基酸序列共含有273个氨基酸,相对分子质量为31 k Da的可溶性蛋白;经综合分析,其B细胞优势表位可能为氨基酸序列N端的60~72、93~97、133~139、164~171区段。模拟立体结构分析显示表位60~72区段"QKVENDTSPHRER"位于PD-1与PDL2的结合区域内。结论:利用生物信息学预测发现PD-L2的优势B细胞表位中,60~72、93~97、133~139、164~171区段为PD-L2的B细胞表位,其中表位60~72区段"QKVENDTSPHRER"位于PD-1与PD-L2的结合区域内。可为PD-L2抗体设计和研究提供理论基础。 展开更多
关键词 程序性死亡因子1 程序性死亡因子配体2 B细胞表位 立体结构
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加速康复外科在胃癌手术中的应用及对术后胰岛素抵抗的影响 预览
4
作者 阙海峰 徐宏涛 +2 位作者 潘爱秀 徐锦波 《浙江医学》 CAS 2018年第14期1580-1582,1588共4页
目的比较实施加速康复外科理念与传统外科理念对胃癌手术患者围术期的效果及术后胰岛素抵抗的影响,探讨加速康复外科的临床应用价值。方法选取2016年5至10月收治的拟行外科手术治疗的胃癌患者55例,其中5至7月收治的28例患者行传统外科... 目的比较实施加速康复外科理念与传统外科理念对胃癌手术患者围术期的效果及术后胰岛素抵抗的影响,探讨加速康复外科的临床应用价值。方法选取2016年5至10月收治的拟行外科手术治疗的胃癌患者55例,其中5至7月收治的28例患者行传统外科理念下的胃癌手术,设为传统组;8至10月收治的27例患者行加速康复外科理念下的胃癌手术,设为加速康复组。比较两组患者术后并发症发生情况、住院时间、住院费用及手术前后稳态模式评估法计算的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR指数)。结果加速康复组与传统组患者术后并发症发生率比较无统计学差异(18.5%vs 21.4%,P>0.05)。加速康复组患者住院时间短于传统组(P<0.05),住院费用低于传统组(P<0.05)。两组患者术前HOMA-IR指数比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后1、3d加速康复组HOMA-IR指数均较传统组下降(均P<0.05),术后7d两组HOMA-IR指数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在胃癌手术中实施加速康复外科理念,可以减轻患者术后胰岛素抵抗,缩短住院时间,减少住院费用,且不会提高术后并发症发生率,值得临床推广应用。 展开更多
关键词 加速康复外科 胃癌 胰岛素抵抗 手术
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SIRT4对胃癌细胞增殖及周期的影响 预览
5
作者 黄国裕 林瑶 +3 位作者 林佳浩 陈旭旭 李军建 《温州医科大学学报》 CAS 2018年第12期894-897,共4页
目的:探讨SIRT4对胃癌细胞增殖及细胞周期的作用及其机制。方法:用慢病毒构建过表达SIRT4的胃癌细胞株SGC-7901和MNK45,通过体外细胞增殖活力实验和平板克隆实验研究过表达SIRT4对胃癌细胞体外增殖活力和克隆形成能力的影响;进一步通过... 目的:探讨SIRT4对胃癌细胞增殖及细胞周期的作用及其机制。方法:用慢病毒构建过表达SIRT4的胃癌细胞株SGC-7901和MNK45,通过体外细胞增殖活力实验和平板克隆实验研究过表达SIRT4对胃癌细胞体外增殖活力和克隆形成能力的影响;进一步通过细胞周期实验研究SIRT4对胃癌细胞周期及相关周期蛋白的影响。结果:过表达SIRT4能显著抑制胃癌细胞SGC-7901和MNK45的体外增殖活力和克隆形成能力(P<0.05);过表达SIRT4通过下调p-ERK、cyclin D和cyclin E水平(P<0.05),导致细胞G1周期阻滞。结论:SIRT4在胃癌中可能起到抑癌基因的作用。 展开更多
关键词 SIRT4 胃肿瘤 SGC-7901 MNK45 细胞周期阻滞
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奥美拉唑联合铝碳酸镁治疗胃溃疡伴出血的临床研究 预览
6
作者 陈锐 蒋玭露 《中国高等医学教育》 2018年第12期139-139,143共2页
目的:探究奥美拉唑联合铝碳酸镁治疗胃溃疡伴出血的临床效果。方法:选取我院2016年12月到2017年12月间收治的胃溃疡伴出血患者210例,随机分为观察组(105例)和对照组(105例)。对照组单予以奥美拉唑治疗,在此基础上,观察组施加铝碳酸镁治... 目的:探究奥美拉唑联合铝碳酸镁治疗胃溃疡伴出血的临床效果。方法:选取我院2016年12月到2017年12月间收治的胃溃疡伴出血患者210例,随机分为观察组(105例)和对照组(105例)。对照组单予以奥美拉唑治疗,在此基础上,观察组施加铝碳酸镁治疗。比较两组患者临床疗效,同时比较两组症状缓解时间和住院时间变化情况。结果:观察组治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);治疗后,观察组症状缓解时间、住院时间均明显减少,且观察组低于对照组(P<0.05)。结论:奥美拉唑联合铝碳酸镁治疗胃溃疡伴出血效果明显,能够明显缓解患者临床症状,缩短住院时间,值得临床推广应用。 展开更多
关键词 奥美拉唑 铝碳酸镁 胃溃疡伴出血
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自拟逐瘀复元汤联合中药保留灌肠法治疗急性粘连性肠梗阻的临床观察 预览
7
作者 杨大庆 周晓聪 +2 位作者 周宏 吴春迎 《中国中医急症》 2018年第6期1076-1078,共3页
目的观察自拟逐瘀复元汤联合中药保留灌肠法治疗急性粘连性肠梗阻的临床疗效。方法急性粘连性肠梗阻患者74例按随机数字表法分为两组。基础组给予对症的西医非手术治疗;联合组在除西医治疗外给予自拟逐瘀复元汤联合中药保留灌肠法进行治... 目的观察自拟逐瘀复元汤联合中药保留灌肠法治疗急性粘连性肠梗阻的临床疗效。方法急性粘连性肠梗阻患者74例按随机数字表法分为两组。基础组给予对症的西医非手术治疗;联合组在除西医治疗外给予自拟逐瘀复元汤联合中药保留灌肠法进行治疗;两组治疗均5 d为1个疗程,共治疗2个疗程。结果两组治疗后各疗程ET、TNF-α、IL-6水平均有显著改善;联合组改善程度均优于基础组;两组治疗后VAS评分均显著降低;联合组改善程度均优于基础组;联合组恢复自行排气、排便、恢复饮食、住院时间均短于基础组;联合组总有效率及治愈例数均高于基础组(均P〈0.05或P〈0.01)。结论自拟逐瘀复元汤联合中药保留灌肠法在急性粘连性肠梗阻的临床应用疗效显著。 展开更多
关键词 逐瘀复元汤 中药保留灌肠法 急性粘连性肠梗阻
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晚期胃癌维持治疗中手术干预、化疗及营养治疗的作用 预览 被引量:3
8
作者 刘纳新 蒋亦燕 +5 位作者 李文峰 王鹏飞 杜舟 蒋佩佩 韩少良 《肿瘤代谢与营养电子杂志》 2017年第1期55-59,共5页
目的通过对温州医科大学附属第一医院3例晚期胃癌患者维持治疗全程观察,探讨手术干预(时机及方式选择)、低剂量化疗及营养治疗在晚期胃癌患者维持治疗中的作用。方法对3例确诊为胃癌晚期的患者,在病程不同阶段采取手术干预、低剂量... 目的通过对温州医科大学附属第一医院3例晚期胃癌患者维持治疗全程观察,探讨手术干预(时机及方式选择)、低剂量化疗及营养治疗在晚期胃癌患者维持治疗中的作用。方法对3例确诊为胃癌晚期的患者,在病程不同阶段采取手术干预、低剂量化疗及营养治疗(以肠内免疫营养制剂方案为主)作为维持治疗措施。维持治疗的化疗药物连续应用14天,停药7天,以21天为1个周期,用药剂量为普通剂量的50%~75%。根据患者对上一轮治疗方案的胃肠道反应VAS评分变化、骨髓抑制程度(血常规)及脏器损伤程度调整本轮治疗措施(调整幅度±25%);根据患者对头一天的肠内营养耐受VAS评分调整营养方案(以肠内营养为主,不足的量用肠外营养补充);根据胃肠道梗阻是否影响患者饮食及营养状况,决定是否进行手术。结果3例患者维持时间分别为30个月、15个月、22个月;3例患者对低剂量化疗及营养治疗依从性良好(VAS评分7分以上,总分10分)。在治疗期间均经过手术治疗,手术目的不一,例1因幽门梗阻早期行胃肠短路术,其目的是为了畅通消化道(总存活30个月,术后存活30个月);例2因原发病灶及盆腔转移病灶有所退缩,行“姑息性全胃切除术,Roux-Y吻合”,目的为切除肿瘤(总存活15个月,术后存活12个月);例3因出现癌性肠梗阻行剖腹探查,行“姑息性全胃切除、食道-空肠Roux-Y吻合+全结肠切除、回肠造瘘术”,目的是在减除梗阻的同时,达到减瘤的目的(总存活22个月,术后存活4个月)。结论在晚期胃癌患者中低剂量化疗及营养治疗联合应用并根据病情变化及时调整方案,可以在延长患者生存时间及改善生活质量上发挥一定作用;合适的手术时机及手术方式对延长患者生存时间有一定的作用,但过于复杂的手术不一定能达到预期 展开更多
关键词 手术干预 化疗 营养治疗 晚期胃癌
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荣肝汤对二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化的干预作用研究 预览
9
作者 谢林钦 黄登 《中国中西医结合外科杂志》 CAS 2017年第2期160-164,共5页
目的:观察荣肝汤对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化的干预作用。方法:35只Wista雄性大鼠随机分为对照组和造模组,以0.5%DMN按2 mL/kg体质量腹腔注射4周复制大鼠肝纤维化模型,后将造模组大鼠随机分为模型组,荣肝汤组,灌胃相应药... 目的:观察荣肝汤对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化的干预作用。方法:35只Wista雄性大鼠随机分为对照组和造模组,以0.5%DMN按2 mL/kg体质量腹腔注射4周复制大鼠肝纤维化模型,后将造模组大鼠随机分为模型组,荣肝汤组,灌胃相应药物3周。7周末处死动物,留取标本,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和白蛋白(Alb)、总胆红素(TBIL)含量;测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量。HE染色和天狼猩红染色观察肝组织病理学改变。蛋白印迹法检测大鼠肝组织I型胶原和alpha平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TBIL、ALT、AST水平明显升高(P〈0.05),Alb含量显著下降(P〈0.05),经荣肝汤干预后,血清学肝功能指标显著改善。HE染色显示模型组肝脏内有大量炎性细胞浸润,肿胀、变性坏死,有明显出血现象;天狼猩红染色显示模型组大鼠肝脏胶原增生明显,形成假小叶,胶原面积明显增加。模型组肝组织Hyp含量较正常组明显升高[(1412.42±367.68)μg/g VS(530.20±62.37)μg/g,P〈0.01],肝组织Ⅰ型胶原抗体、α-SMA蛋白表达水平显著升高;药物干预后肝组织炎症和纤维化程度较模型组均有所改善,肝组织Hyp含量明显降低[(1092.83±146.19)μg/g]。统计分析显示荣肝汤组与模型组比较肝组织胶原面积明显减轻[(358 810±235 058)×10^4μm^2VS(358 810±235 058)×10^4μm^2,P〈0.05],肝组织Ⅰ型胶原抗体、α-SMA表达水平明显降低。结论:荣肝汤对DMN诱导的大鼠肝纤维化有较好的逆转作用。 展开更多
关键词 荣肝汤 肝纤维化 二甲基亚硝胺 生化指标 病理学变化
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piRNA在胃癌与正常胃黏膜组织中表达的比较 预览
10
作者 蒋佩佩 蔡一奇 +7 位作者 王鹏飞 陈孝冬 金劲激 胡畅远 陈文静 薛向阳 张丽芳 《温州医科大学学报》 CAS 2017年第10期708-712,共5页
目的:分析piRNA在胃癌组织与正常胃黏膜组织中表达的差异性。方法:通过新一代高通量测序技术Solexa对胃癌组织和正常胃黏膜组织进行小分子RNA(s RNA)深度测序,并通过生物信息学分析胃癌组织与正常胃黏膜组织中piRNA的表达差异。根... 目的:分析piRNA在胃癌组织与正常胃黏膜组织中表达的差异性。方法:通过新一代高通量测序技术Solexa对胃癌组织和正常胃黏膜组织进行小分子RNA(s RNA)深度测序,并通过生物信息学分析胃癌组织与正常胃黏膜组织中piRNA的表达差异。根据分析结果选取4种piRNA(登录号分别为DQ570956、DQ575659、DQ594126和DQ597128),通过茎环反转录实时定量PCR(简称茎环RT-q PCR)技术验证其存在及其在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达差异。结果:Solexa深度测序结果显示,正常胃黏膜与胃癌组织中测得的piRNA种类在各标本所测得所有s RNA种类中所占的比例差异无统计学意义(Z=0.835,P=0.678);正常胃黏膜组织中测得的piRNA数量在各标本所测得s RNA总量中所占的比例高于胃癌组织,差异有统计学意义(Z=2.167,P=0.042);根据分析结果选取4种piRNA,经茎环RT-q PCR法检测显示,这4种piRNA在胃癌组织中的表达量显著低于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:胃癌组织存在多种差异表达的piRNA,且在表达量上与正常胃黏膜组织存在显著性差异,本研究选取的4种piRNA可能参与胃癌的发生发展进程。 展开更多
关键词 胃肿瘤 PIRNA 小分子RNA 聚合酶链反应
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MAGE-A3多克隆抗体的制备及在胃癌细胞检测中的应用 预览 被引量:1
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作者 蔡一奇 程开 +8 位作者 陈旭东 陈孝冬 岑丹维 张婵琼 宋易玲 毛姗姗 叶晓鲜 张丽芳 《温州医科大学学报》 CAS 2017年第5期318-324,共7页
目的:通过原核表达系统制备人黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)蛋白,制备其多克隆抗体,经鉴定后用于胃癌细胞检测.方法:将MAGE-A3全长核酸序列经原核密码子优化后全基因序列合成,克隆至原核表达载体pET21a(+),构建pET21a(+)/MAGE-A3... 目的:通过原核表达系统制备人黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)蛋白,制备其多克隆抗体,经鉴定后用于胃癌细胞检测.方法:将MAGE-A3全长核酸序列经原核密码子优化后全基因序列合成,克隆至原核表达载体pET21a(+),构建pET21a(+)/MAGE-A3重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达MAGE-A3蛋白,并经SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定;纯化后的MAGE-A3蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆血清抗体,用ELISA、Westernblot、免疫荧光技术分析该多克隆抗体的特异性,并用免疫组织化学技术鉴定MAGE-A3兔多克隆抗体在人胃癌细胞免疫检测应用中的可行性.结果:成功构建重组质粒pET21a(+)/MAGE-A3,并经原核表达系统表达MAGE-A3蛋白.SDS-PAGE显示目的蛋白分子质量大小约为48kDa,与预期蛋白大小-致,并以His单抗进行Westernblot鉴定,出现了特异性的单-条带.MAGE-A3蛋白免疫日本大耳白兔,可诱导兔产生特异性抗体,免疫后第8周达到高峰,经Westernblot检测显示多克隆血清可特异性识别靶蛋白,出现阳性单-条带;经免疫荧光检测显示,在MAGE-A3阳性细胞A-375(黑色素瘤细胞株)和SGC-7901细胞(胃癌细胞株)的胞浆内出现荧光团块.表明兔多克隆抗体可特异性识别天然的MAGE-A3蛋白.结合免疫荧光结果后经ELISA检测,可认为该多克隆IgG抗体效价可达1:40000;免疫组织化学检测显示在A-375和SGC-7901肿瘤组织的胞浆内出现团块状棕黄色颗粒样沉淀,而在BGC-823肿瘤组织中呈阴性,表明制备的MAGE-A3兔多克隆抗体能够特异性地识别肿瘤组织中MAGE-A3蛋白.结论:通过原核表达系统制备了MAGE-A3蛋白,并免疫兔制备了MAGE-A3蛋白特异性兔多克隆抗体,同时可以特异性地识别人胃癌细胞中的MAGE-A3蛋白,可作为免疫诊断用抗原. 展开更多
关键词 人黑色素瘤抗原A3 原核表达系统 多克隆抗体 胃肿瘤
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中医辨证施治联合西药治疗结肠慢传输型便秘的临床观察 被引量:5
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作者 蔡丽群 黄河 +2 位作者 池伟 陈玉燕 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第11期2761-2763,共3页
目的:观察中医辨证施治联合西药治疗结肠慢传输型便秘的临床疗效。方法:随机单盲法将120例结肠慢传输型便秘患者分为两组各60例,对照组采取常规西药治疗,观察组在对照组基础上加以中医辨证治疗,比较两组临床疗效、治疗前后主要症... 目的:观察中医辨证施治联合西药治疗结肠慢传输型便秘的临床疗效。方法:随机单盲法将120例结肠慢传输型便秘患者分为两组各60例,对照组采取常规西药治疗,观察组在对照组基础上加以中医辨证治疗,比较两组临床疗效、治疗前后主要症候积分、症候总积分及结肠传输功能。结果:观察组总有效率、治疗后症候总积分分别为90.0%、(4.62±3.12)分,较对照组的75.0%、(8.32±4.81)分差异有统计学意义(P〈0.05)。观察组治疗后右半结肠、直肠及全结肠通过时间明显短于对照组(P〈0.05)。结论:中医辨证施治联合西药治疗结肠慢传输型便秘疗效明确,能明显改善患者结肠传输功能。 展开更多
关键词 中医辨证 结肠慢传输型便秘 结肠传输功能 中西医结合
microRNA-212对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响 预览
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作者 应江辉 蒋佩佩 +3 位作者 金灿灿 庞文洋 蔡一奇 《温州医科大学学报》 CAS 2016年第9期644-648,共5页
目的:研究人microRNA-212(miR-212)对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响。方法:通过化学方法合成人成熟型miR-212抑制基因i-miR-212,分别以25、50、75、100 nmol/L浓度通过脂质体转染方法转染SGC7901细胞,同时设空白组和无序... 目的:研究人microRNA-212(miR-212)对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响。方法:通过化学方法合成人成熟型miR-212抑制基因i-miR-212,分别以25、50、75、100 nmol/L浓度通过脂质体转染方法转染SGC7901细胞,同时设空白组和无序列对照组。采用Real-time PCR、细胞计数和Transwell小室等实验方法,分别检测各组细胞miR-212的表达、miR-212对细胞增殖的影响及miR-212对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:各浓度i-miR-212转染SGC7901细胞后,miR-212表达均降低,以50 nmol/L i-miR-212转染组最佳,较无序列对照组降低约94.60%;50 nmol/L i-miR-212转染组与无序列对照组在细胞计数上差异有统计学意义(P〈0.01)。在细胞侵袭实验中50 nmol/L i-miR-212转染组透膜细胞明显多于无序列对照组(P〈0.01),在迁移实验中i-miR-212转染组(50 nmol/L)的透膜细胞明显多于无序列对照组(P〈0.01)。结论:转染成熟型人i-miR-212能使胃癌细胞系SGC7901细胞中miR-212的表达明显下降,并能显著促进胃癌细胞系SGC7901的增殖、迁移及侵袭能力,表明miR-212与胃癌肿瘤细胞的转移具有相关性。 展开更多
关键词 胃癌 microRNA-212 迁移 侵袭 增殖
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查尔酮类似物A59促人结肠癌细胞凋亡及其机制 预览 被引量:1
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作者 孙余省 +3 位作者 金劲激 陶礼钧 维星 方军 《温州医学院学报》 CAS 2015年第6期421-425,429共6页
目的:通过对经初步筛选证明具有生物活性的查尔酮类似物A59可能涉及的信号通道进行检测,进一步明确其抗肿瘤活性及作用机制。方法:对于以查尔酮为先导物设计合成类似物,以MTT法检测其对于人结肠癌细胞(HCT-116)的杀伤作用,筛选出具... 目的:通过对经初步筛选证明具有生物活性的查尔酮类似物A59可能涉及的信号通道进行检测,进一步明确其抗肿瘤活性及作用机制。方法:对于以查尔酮为先导物设计合成类似物,以MTT法检测其对于人结肠癌细胞(HCT-116)的杀伤作用,筛选出具有较好生物活性的化合物A59。通过FCM法检测A59诱导HCT-116细胞凋亡和抑制细胞周期的情况。Western blot法检测HCT-116细胞中A59对ATF4及CHOP表达的影响。利用si RNA技术敲除CHOP后,用免疫荧光和FCM法检测在A59对于细胞凋亡的影响。结果:通过对自行设计合成查尔酮类似物进行筛选,发现A59对于HCT-116具有较强的增殖抑制作用(IC50=7.6μmol/L)。通过FCM法检测发现A59是通过诱导HCT-116细胞发生凋亡并抑制细胞周期发挥其生物活性。通过Western blot法检测发现A59剂量依赖性激活内质网应激信号通路中的关键蛋白CHOP,并通过si RNA基因沉默技术进一步确证A59是通过刺激CHOP的过表达发挥促进细胞凋亡的作用。结论:查尔酮类似物A59通过激活内质网应激信号通道中的关键蛋白CHOP来发挥对CHT116的增殖抑制作用。 展开更多
关键词 查尔酮类似物 肿瘤药 细胞凋亡 CHOP
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查尔酮衍生物H175促结肠癌细胞凋亡及其机制研究
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作者 孙余省 方军 +3 位作者 金劲激 陶礼钧 周珠哈 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2015年第6期466-470,共5页
目的 通过对经初步筛选证明具有生物活性的查尔酮类似物H175可能涉及的信号通道进行检测,进一步明确其抗肿瘤活性及作用机制.方法 对于以查尔酮为先导物设计合成类似物,用MTT法检测其对小鼠结肠癌细胞(CT26)的杀伤作用,筛选出具有较... 目的 通过对经初步筛选证明具有生物活性的查尔酮类似物H175可能涉及的信号通道进行检测,进一步明确其抗肿瘤活性及作用机制.方法 对于以查尔酮为先导物设计合成类似物,用MTT法检测其对小鼠结肠癌细胞(CT26)的杀伤作用,筛选出具有较好生物活性的化合物H175.通过流式细胞技术检测H175诱导CT26细胞凋亡和抑制细胞周期的情况.Western blot法检测CT26细胞中H175对于活性转录因子4(activating transcriptional factor 4,ATF-4)及DNA损伤诱导基因(DNA damage-inducible gene 153,CHOP)表达的影响.利用siRNA技术敲除CHOP后,用免疫荧光和流式细胞技术检测H175对于细胞凋亡的影响.结果 通过对113个自行设计合成查尔酮类似物进行筛选,发现H175对CT26细胞具有较强的增殖抑制作用(IC50=1.9 μmol/L).流式细胞技术检测发现H175通过诱导CT26细胞发生凋亡并抑制细胞周期发挥其生物活性.Western blot检测发现H175剂量依赖性激活内质网应激信号通路中的关键蛋白CHOP,并通过siRNA基因沉默技术进一步确证H175是通过刺激CHOP的过表达发挥促进细胞凋亡的作用.结论 查尔酮类似物H175通过激活内质网应激信号通道中的关键蛋白CHOP发挥对结肠癌CT26细胞的增殖抑制作用. 展开更多
关键词 结肠肿瘤 查尔酮类 细胞凋亡
微波静脉腔内凝固联合小切口高位结扎治疗大隐静脉曲张220例临床分析 预览
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作者 王毅 徐建敏 +1 位作者 潘忠良 《数理医药学杂志》 2015年第9期1289-1291,共3页
目的:探讨微波静脉腔内凝固联合小切口高位结扎对大隐静脉曲张治疗的疗效.方法:回顾性分析2008年4月-2011年3月间对220例(302条患肢)曲张的大隐静脉施行微波静脉腔内凝固联合小切口高位结扎术治疗的临床资料,所有患者术前均行多普... 目的:探讨微波静脉腔内凝固联合小切口高位结扎对大隐静脉曲张治疗的疗效.方法:回顾性分析2008年4月-2011年3月间对220例(302条患肢)曲张的大隐静脉施行微波静脉腔内凝固联合小切口高位结扎术治疗的临床资料,所有患者术前均行多普勒超声证实深静脉通畅.连续硬膜外麻醉下,作小切口行高位结扎大隐静脉主干,对大隐静脉主干及其曲张的分支行微波静脉腔内凝固.结果:单侧手术时间30-65min,平均45min.住院4-9d,平均7.5d.198例(280条患肢)在术后随访6-24个月,平均11.2个月,下肢迂曲曲张静脉消失,色素沉着减轻,溃疡愈合,无复发.结论:微波静脉腔内凝固联合小切口高位结扎是治疗大隐静脉曲张的理想术式. 展开更多
关键词 大隐静脉曲张 微波静脉腔内 凝固
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(1,3)-β-D-葡聚糖对普外科患者深部真菌感染的诊断分析 被引量:2
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作者 王毅 +3 位作者 饶尚锐 王中林 何杰 黄节 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期3130-3132,共3页
目的评估血浆(1,3)-β-D-葡聚糖对普外科患者深部真菌感染的诊断价值,为普外科患者深部感染的早发现、早诊断、早治疗提供科学依据。方法选取2010年2月-2015年2月普外科疑似深部真菌感染患者184例及40名健康人员为研究对象,采用真菌... 目的评估血浆(1,3)-β-D-葡聚糖对普外科患者深部真菌感染的诊断价值,为普外科患者深部感染的早发现、早诊断、早治疗提供科学依据。方法选取2010年2月-2015年2月普外科疑似深部真菌感染患者184例及40名健康人员为研究对象,采用真菌感染快速检测试剂盒检测并比较两组血浆(1,3)-β-D-葡聚糖水平,与传统真菌培养结果比较;采用ROC曲线分析两种诊断方法的临床价值。结果 (1,3)-β-D-葡聚糖法检测深部真菌感染患者阳性43例,阳性率为23.37%,传统真菌培养法检测阳性32例,阳性率为17.40%,(P=0.035),两种方法的检测结果具有高度的一致性,Kappa系数K=0.617(P〈0.001);(1,3)-β-D-葡聚糖诊断深部真菌感染的灵敏度为81.25%、特异度为88.82%;当以(1,3)-β-D-葡聚糖=16.59pd/ml为临界值时,诊断深部真菌感染的灵敏度与特异度均达到最大,灵敏度为92.03%、特异度为83.17%。结论 (1,3)-β-D-葡聚糖可作为普外科深部真菌感染特异性生物标志物,具有较高的早期诊断效率,可为其诊治赢得宝贵时间。 展开更多
关键词 (1 3)-β-D-葡聚糖 深部真菌感染 诊断价值
CEA多表位融合蛋白在胃肠道肿瘤血清学诊断中的研究价值 预览
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作者 王鹏飞 +1 位作者 张丽芳 《医学研究杂志》 2014年第11期54-56,共3页
目的 以CEA多表位融合蛋白为抗原,即ozlf-86/87融合蛋白,检测胃肠道肿瘤患者血清中抗CEA抗体,鉴定融合蛋白的抗原性,为融合蛋白作为诊断抗原提供依据,为下一步动物免疫反应实验奠定基础.方法 以CEA多表位融合蛋白作为诊断抗原,采用间接E... 目的 以CEA多表位融合蛋白为抗原,即ozlf-86/87融合蛋白,检测胃肠道肿瘤患者血清中抗CEA抗体,鉴定融合蛋白的抗原性,为融合蛋白作为诊断抗原提供依据,为下一步动物免疫反应实验奠定基础.方法 以CEA多表位融合蛋白作为诊断抗原,采用间接ELISA法,分别对收集的39例胃癌患者血清、25例结肠癌患者血清、30例慢性胃炎患者血清和30例健康对照者的血清中的抗CEA抗体进行检测,用方差检验分析胃结肠癌患者实验组和慢性胃炎、健康患者对照组血清抗体效价之间差异性.结果 胃癌和结肠癌实验组与对照组血清抗体效价之间差异均有统计学意义(P<0.01).对胃癌患者和结肠癌患者血清抗体的诊断敏感度分别为35.9%和44.0%,结论 本实验通过工程菌表达纯化的CEA多表位融合蛋白具有很好的抗原性,对用于血清学诊断的研究有一定的可行性,对制备ELISA血清检测试剂盒提供了理论基础,为下一步免疫反应及抗CEA抗体的制备奠定基础. 展开更多
关键词 CEA 融合蛋白 抗CEA抗体 胃肠道肿瘤
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双向电泳蛋白质组技术在残胃癌组织研究中的应用 预览
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作者 孙余省 +3 位作者 陶礼钧 方军 徐洪波 林才 《中国医药导报》 2014年第24期20-24,共5页
目的:探讨双向电泳蛋白质组技术在残胃癌组织研究中的应用效果。方法选取3对残胃癌及癌旁正常胃黏膜组织,利用双向电泳蛋白质组技术对其进行研究。结果获得了质量良好的胃癌组织蛋白质组双向电泳图谱。分析之后可得,癌旁组织平均984... 目的:探讨双向电泳蛋白质组技术在残胃癌组织研究中的应用效果。方法选取3对残胃癌及癌旁正常胃黏膜组织,利用双向电泳蛋白质组技术对其进行研究。结果获得了质量良好的胃癌组织蛋白质组双向电泳图谱。分析之后可得,癌旁组织平均984个蛋白点,残胃癌组织凝胶平均1068个蛋白点。一共有112个差异表达的蛋白点,其中,显著差异(表达差异2倍以上)的蛋白点42个。在这42个蛋白点之中,在残胃癌组织里表达上调的一共有17个点;在残胃癌组织里表达下调的一共有14个点;在残胃癌组织中失表达的一共有8个点;仅在残胃癌组织中表达的一共有3个点。结论利用双向电泳蛋白质组技术对残胃癌组织进行研究可以获得良好的应用效果。 展开更多
关键词 残胃癌 蛋白质 双向电泳蛋白质组技术
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胃癌伴继发性血小板增多症患者的临床病理特征和生存分析 被引量:1
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作者 沈淑蓉 郑文球 +1 位作者 黄颖鹏 《肿瘤学杂志》 CAS 2014年第10期823-828,共6页
[目的]探讨胃癌继发血小板增多患者的临床病理特征和预后情况。[方法]对血小板增多的胃癌患者与胃良性病变患者,以及血小板正常的胃癌患者的临床病理特征和生存情况进行分析。[结果]血小板计数〉400×109/L的胃癌患者86例,占6.92%(... [目的]探讨胃癌继发血小板增多患者的临床病理特征和预后情况。[方法]对血小板增多的胃癌患者与胃良性病变患者,以及血小板正常的胃癌患者的临床病理特征和生存情况进行分析。[结果]血小板计数〉400×109/L的胃癌患者86例,占6.92%(86/1243)。胃癌组和胃良性病变组中继发血小板增多的发生率差异明显(P=0.021);血小板增多的发生率与胃癌患者肿瘤直径(P=0.007,OR=2.755,95%CI:1.657-3.424)、TNM分期(P〈0.001,OR=1.899,95%CI:1.582-2.655)、浸润深度(P=0.011,OR=2.654,95%CI:1.943-3.673)有关;对患者血液凝固状态的影响上,血小板增多的患者更容易发生凝血酶原时间下降(χ2=4.092,P=0.043)、纤维蛋白原增高(χ2=5.358,P=0.021)和D-二聚体增高(χ2=7.019,P=0.008)的可能。胃癌血小板增多患者的中位生存时间(17个月)明显短于胃癌血小板正常患者(26个月),且生存率差异有统计学意义(P=0.012)。术前高血小板(RR=1.545,95%CI:1.064-2.242,P=0.022)是一个影响胃癌预后的独立因素。[结论]胃癌患者继发性血小板增多与肿瘤直径、浸润深度、分期有关。胃癌术前继发血小板增多可以作为一个预后不良的参考指标。 展开更多
关键词 胃肿瘤 血小板增多 临床病理学 生存期
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