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乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗对猪体的免疫效果
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作者 肖朋朋 刘昊 +7 位作者 靖杰 韩继成 曹亮 李成辉 张金勇 李一 鲁会军 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期244-249,共6页
重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE投入使用之前需要进行本体动物免疫和攻毒保护试验,本研究将重组痘苗病毒rVTT-JEVE进行仔猪免疫接种,分别在体液免疫及细胞免疫水平上评价其免疫效果,并检测攻毒后仔猪体内乙型脑炎病毒载量,分析讨论乙型... 重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE投入使用之前需要进行本体动物免疫和攻毒保护试验,本研究将重组痘苗病毒rVTT-JEVE进行仔猪免疫接种,分别在体液免疫及细胞免疫水平上评价其免疫效果,并检测攻毒后仔猪体内乙型脑炎病毒载量,分析讨论乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE对猪体的免疫效果。经2次仔猪免疫接种后,重组痘苗病毒rVTT-JEVE组的IgG抗体水平是商品疫苗SA-14-14-2组的1.5倍,显著高于SA-14-14-2组(P<0.05),而且rVTT-JEVE组的中和抗体效价达到SA-14-14-2组的1.7倍,显著高于SA-14-14-2组(P<0.05)。rVTT-JEVE组的T淋巴细胞刺激指数为SA-14-14-2组的1.6倍,显著高于SA-14-14-2组(P<0.05)。本研究结果显示,rVTT-JEVE候选疫苗组和SA-14-14-2商品疫苗组JEV病毒载量均显著低于PBS对照组(P<0.05),均可有效保护仔猪感染JEV。 展开更多
关键词 重组痘苗病毒rVTT-JEVE 仔猪 乙型脑炎病毒 免疫评价
重组溶瘤腺病毒对荧光素酶标记和非标记人肺癌A549细胞抑制作用比较
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作者 马艺珍 范园园 +10 位作者 聂鑫 孙丽丽 朱羿龙 李一 李文杰 尹逊哲 李善智 赵津 李霄 郭焱 金宁一 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2018年第12期1264-1269,共6页
目的:探讨重组溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A(ATV)对荧光素酶标记人肺癌细胞(A549-luc)和人肺癌细胞(A549)的体外抑制作用差异。方法:利用ATV分别感染A549细胞和A549-luc细胞,通过WST-1和结晶紫染色法确定ATV的抑制作用的差异性,通过... 目的:探讨重组溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A(ATV)对荧光素酶标记人肺癌细胞(A549-luc)和人肺癌细胞(A549)的体外抑制作用差异。方法:利用ATV分别感染A549细胞和A549-luc细胞,通过WST-1和结晶紫染色法确定ATV的抑制作用的差异性,通过Hoechst和AnnexinV-FITC/PI染色验证ATV的抑制方式。结果:ATV对A549和A549-luc细胞均具有明显抑制作用(P<0.05)。ATV在24、48、72h对两种细胞均有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01),且72h抑制率最强;剂量分别为1、10和100MOI的ATV对两种细胞均有抑制作用,且100MOI抑制率最高。A549细胞和A549-luc细胞感染ATV后,均呈现核碎裂典型浓染和边集的凋亡现象,且凋亡率随时间的增加而增大,具有显著的时间效应(P<0.05或P<0.01),且凋亡率均在72h达到峰值。结论:荧光素酶的插入没有明显改变ATV对A549-luc细胞的抑制作用和抑制方式,ATV是通过诱导A549-luc细胞和A549细胞凋亡从而达到对其显著性体外抑制作用。 展开更多
关键词 溶瘤腺病毒 荧光素酶 A549-luc细胞 抑制作用
双特异性溶瘤腺病毒和多柔比星对乳腺癌细胞增殖抑制作用的对比分析
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作者 李善智 陈爽 +9 位作者 赵津 李一 朱羿龙 李文杰 尹逊哲 崔英丽 王京 刘行 李霄 金宁一 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2018年第11期1159-1165,共7页
目的:探讨多柔比星和双特异性溶瘤腺病毒(Ad-VT、Ad-T、Ad-VP3、Ad-Mock)对乳腺癌细胞和正常乳腺细胞增殖抑制作用的差异。方法:通过WST-1实验比较多柔比星和Ad-VT、Ad-T、Ad-VP3、Ad-Mock对乳腺癌细胞增殖的抑制率,并比较两种药物对正... 目的:探讨多柔比星和双特异性溶瘤腺病毒(Ad-VT、Ad-T、Ad-VP3、Ad-Mock)对乳腺癌细胞和正常乳腺细胞增殖抑制作用的差异。方法:通过WST-1实验比较多柔比星和Ad-VT、Ad-T、Ad-VP3、Ad-Mock对乳腺癌细胞增殖的抑制率,并比较两种药物对正常乳腺上皮细胞的存活率的影响。通过Annexin V流式术、Hoechst法、JC-1法检测研究溶瘤腺病毒和多柔比星对乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞杀伤作用的影响,并比较其凋亡率差异。结果:4种双特异性溶瘤腺病毒均能有效地抑制乳腺癌细胞的增殖(P=0.05或P<0.01),且抑制效果为Ad-VT>Ad-T>Ad-VP3>Ad-MOCK,抑制作用与时间成正相关。多柔比星也能有效地抑制乳腺癌细胞的增殖(P=0.05或P<0.01),且随着浓度和时间的增加,抑制效果明显增强;但多柔比星对正常的乳腺上皮细胞也有较强的抑制作用,在72h、5μg/ml条件下抑制率达到80%,而溶瘤腺病毒Ad-VT在72h对MCF-10A的抑制率为20%。双特异性溶瘤腺病毒诱导乳腺癌凋亡能力随时间的增加逐渐增强(P<0.05或P<0.01),且致凋亡效率为Ad-VT>Ad-T>Ad-VP3>Ad-MOCK,而诱导正常乳腺细胞凋亡能力较弱。多柔比星诱导乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞凋亡的能力基本相同(P<0.05或P<0.01),且都为0.05<0.5<5μg/ml。结论:双特异性溶瘤腺病毒能有效地抑制乳腺癌细胞的增殖,但对正常的乳腺细胞抑制作用较小,双特异性溶瘤腺病毒具有更好的安全性,为肿瘤的生物治疗提供了新的药物。 展开更多
关键词 乳腺癌细胞 溶瘤腺病毒 多柔比星 凋亡
用于活体成像裸鼠肺癌肿瘤模型的建立 被引量:2
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作者 范园园 李铁 +10 位作者 陈爽 李一 荣凤君 李文杰 尹逊哲 韩继成 李善智 李敏 崔传信 李霄 金宁一 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1177-1184,共8页
本研究构建1株能够稳定表达荧光素酶的人肺癌细胞,并进行生物学特性鉴定及体内成瘤情况验证。将携带有萤火虫荧光素酶基因的pGL4.50质粒转入A549细胞中,利用G418一直加压筛选出能够表达荧光素酶的阳性细胞克隆,并对阳性细胞克隆进... 本研究构建1株能够稳定表达荧光素酶的人肺癌细胞,并进行生物学特性鉴定及体内成瘤情况验证。将携带有萤火虫荧光素酶基因的pGL4.50质粒转入A549细胞中,利用G418一直加压筛选出能够表达荧光素酶的阳性细胞克隆,并对阳性细胞克隆进行稳定性和体外活体成像检测。测定A549-luc细胞和A549细胞的生长曲线、迁移、侵袭及细胞周期,确定转染前后细胞生物学特性变化。为检测A549-luc细胞在体内成瘤和发光情况,建立裸鼠皮下荷瘤模型并应用小动物活体成像系统观察。结果表明,通过G418一直加压筛选和荧光素酶活性检测,筛选出2株荧光素酶活性高的克隆Clone20和Clone28,并连续传至40代,每5代检测1次荧光素酶活性,最终保留荧光素酶活性和稳定性最高的Clone28,Clone28通过体外活体成像检测显示生物发光值与细胞数目呈正相关的线性关系(R^2=0.9948)。A549-luc细胞和A549细胞具有相似的生长特性、迁移和侵袭能力以及细胞周期。成功建立了裸鼠皮下荷瘤模型,其发光强度与肿瘤体积呈正相关的线性关系(R^2=0.9715)。本研究稳定表达荧光素酶的人肺癌细胞的构建并成功建立裸鼠皮下荷瘤模型,可通过活体生物成像系统动态监测肿瘤的变化。 展开更多
关键词 A549细胞 荧光素酶 活体成像 裸鼠 肺癌肿瘤模型
PR8F/NS1不同位点突变株对小鼠致病性的比较研究
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作者 崔卓栋 柴丹 +7 位作者 解长占 溫树波 张萍 朱羿龙 刘云霞 李一 田明尧 金宁一 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期6-12,共7页
为了探索NS1不同位点突变对流感病毒毒力的影响以及NS1毒力相关位点的作用机制。分析流感病毒NS1蛋白的毒力相关关键基因区段和关键位点,以实验室保存的H1N1亚型流感病毒PR8F为模板,对其NS1基因的第42、81、149位氨基酸分别进行定点突... 为了探索NS1不同位点突变对流感病毒毒力的影响以及NS1毒力相关位点的作用机制。分析流感病毒NS1蛋白的毒力相关关键基因区段和关键位点,以实验室保存的H1N1亚型流感病毒PR8F为模板,对其NS1基因的第42、81、149位氨基酸分别进行定点突变。利用反向遗传操作技术,成功拯救出突变毒株PR8F-42、PR8F-81、PR8F-149。将获救病毒接种SPF鸡胚,连续传代5代,至病毒能够稳定扩增后,通过血凝效价分析病毒复制效率。并将获救病毒与PR8F均以106 TCID50/100μL感染BALB/c小鼠,观察各组小鼠临床表现、体重变化及存活率。剖检攻毒后死亡小鼠,观察病理特征,制作肺组织病理切片。并提取小鼠肺脏RNA,通过qPCR检测各组小鼠肺脏的病毒载量。结果表明,PR8F的NS1蛋白第42位氨基酸由丝氨酸(Ser)改变为脯氨酸(Pro)对小鼠的致病性无明显改变。第81位、149位氨基酸突变则都能减弱突变株对小鼠的致病性,进而为研究NS1毒力相关位点的作用机制提供平台。 展开更多
关键词 H1N1亚型流感病毒 定点突变 NS1蛋白 实时荧光定量PCR 致病性
携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用 被引量:3
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作者 尹逊哲 陈爽 +12 位作者 李文杰 朱羿龙 李一 崔传信 李敏 崔英丽 赵津 李善智 郑颖 孙丽丽 李霄 郭焱 金宁一 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1356-1361,共6页
目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响。方法:分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建)感染HeLa细胞后,应用WST-1法检测ATV感染对HeLa细胞... 目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响。方法:分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建)感染HeLa细胞后,应用WST-1法检测ATV感染对HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测ATV感染对HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting法检测ATV感染对HeLa细胞自噬相关蛋白LC3、P62与mTOR表达的影响,MDC染色法检测ATV感染对HeLa细胞自噬水平的影响。结果:ATV感染后抑制HeLa细胞增殖,并具有一定的时间效应关系;以ATV 100 MOI感染72 h后抑制率达到59.26%,其抑制能力明显强于同时间段对照组(P〈0.01)。ATV感染48 h,ATV组HeLa细胞凋亡率显著高于对照组[(38.995±4.009)%vs(14.680±1.174)%,P〈0.01]。感染后的HeLa细胞,随着ATV作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组[(58.490±2.447)%vs(43.235±4.419)%,P〈0.05]。与对照组相比,ATV感染HeLa后,LC3表达量6、12 h逐渐增高,12 h达到最大值(P〈0.01),24 h表达量最低(P〈0.01);P62蛋白在24 h出现最高表达水平(P〈0.01);而mTOR随着作用时间延长逐渐降低(48 h时,P〈0.01)。荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色,随着ATV作用时间延长,自噬小体明显增多;与对照组相比,6、12h自噬小体数量显著增多[(28.000±2.828)vs(8.500±2.121),(37.000±4.243)vs(14.000±1.414);均P〈0.01],24 h相对减少[(12.000±2.828)vs(17.000±1.414),P〈0.01]。结论:携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。 展开更多
关键词 宫颈癌 HELA细胞 凋亡素基因 溶瘤腺病毒 自噬 凋亡
猪戊型肝炎病毒吉林地区分离株全基因序列的分析 被引量:2
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作者 朱光泽 李一 +7 位作者 范园园 兰添 张诺娜 胡宁宁 邢彬 尹秀英 李霄 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期54-59,共6页
为了了解吉林地区HEV分子背景和流行特征,对2013年采自吉林地区养殖场的毒株编号为Ch-S-1的Ⅳ型戊型肝炎病毒(HEV)的全基因序列进行了分析。通过提取病毒RNA,采用RT-PCR方法分段扩增HEV全长基因,两端采用RACE法扩增,经过序列测定... 为了了解吉林地区HEV分子背景和流行特征,对2013年采自吉林地区养殖场的毒株编号为Ch-S-1的Ⅳ型戊型肝炎病毒(HEV)的全基因序列进行了分析。通过提取病毒RNA,采用RT-PCR方法分段扩增HEV全长基因,两端采用RACE法扩增,经过序列测定和拼接,利用ClusterX1.81、MEGA3.0、Phylopwin3.0软件分析基因序列。最终得到了HEVCh-S-1全长基因组(GenBank登录号EF077630,7261bp),其中ORF1、ORF2和0RF3分别编码1706,674,114个氨基酸。与人源及猪源各基因型HEV相比,Ch-S-1与基因Ⅰ-Ⅲ型的ORF1片段同源性在78.8%~86.9%之间,而与基因Ⅳ型的ORF1片段同源性在93.7%~97.6%。Ch-S-1与基因Ⅰ-Ⅲ型的0RF2片段同源性在87.5%~92.4%之间,而与基因Ⅳ型的ORF2片段同源性在95.9~98.2%。Ch-S-1与基因Ⅰ~Ⅲ型的ORF3片段同源性在75.2%~84.0%之间,而与基因Ⅳ型的ORF3片段同源性在97.5%~99.2%。结果表明:HEVCh-S-1全序列的基因结构特征与HEVⅣ型基本一致。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因型 同源性
重组腺病毒Ad-HP对胃癌的抑制作用 预览
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作者 赵津 李奚 +7 位作者 李一 周晔 陈爽 兰添 范园园 李霄 孙丽丽 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期362-365,381共5页
目的:探讨表达HN蛋白的重组腺病毒Ad-HP在体内外对人胃癌细胞的抑制作用。方法:通过MTS法检测Ad-HP(Ad-HN-PEG3p-E1a)对SGC7901细胞的增殖抑制效果,采用Annexin V染色、Caspase酶活性检测、Western blot免疫印迹检测揭示Ad-HP对SGC7... 目的:探讨表达HN蛋白的重组腺病毒Ad-HP在体内外对人胃癌细胞的抑制作用。方法:通过MTS法检测Ad-HP(Ad-HN-PEG3p-E1a)对SGC7901细胞的增殖抑制效果,采用Annexin V染色、Caspase酶活性检测、Western blot免疫印迹检测揭示Ad-HP对SGC7901细胞的抑制方式和途径。对BALB/c裸鼠进行瘤内注射Ad-HP探究其在体内的抗肿瘤作用。结果:体外实验中Ad-HP明显抑制SGC7901细胞增殖,并表现出时间效应和剂量效应关系。Ad-HP能提高Caspase酶活性,并释放细胞色素C。体内实验中Ad-HP能显著延缓瘤体生长并延长模型动物的平均生存期,而且能上调IL-2和IFN-γ等细胞因子,使免疫反应朝向Th1优势。结论:Ad-HP可特异性有效抑制胃癌细胞增殖和肿瘤生长。 展开更多
关键词 人胃癌细胞 溶瘤腺病毒 新城疫 PEG-3
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戊型肝炎病毒长爪沙鼠感染模型的初步研究 预览
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作者 朱光泽 屈勇刚 +6 位作者 李一 兰添 范园园 胡宁宁 张诺娜 李霄 金宁一 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期240-245,共6页
旨在探索应用长爪沙鼠(Meiiones unguiculataus)构建戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)动物模型的可行性,从猪粪便稀释悬液中提取HEV RNA并鉴定,经腹腔和口服接种HEV于长爪沙鼠,并每周采集血液、相关器官(心、肝、脾、肺、肾、... 旨在探索应用长爪沙鼠(Meiiones unguiculataus)构建戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)动物模型的可行性,从猪粪便稀释悬液中提取HEV RNA并鉴定,经腹腔和口服接种HEV于长爪沙鼠,并每周采集血液、相关器官(心、肝、脾、肺、肾、肠系膜淋巴结、脾脏)及粪便。用反转录PCR(RT-PCR)和免疫组化等检测方法分析各个样品。结果表明,感染后第7天开始,可从血液、肾脏、脾脏、肠系膜淋巴结、肝脏、肺、粪便中检测到HEV RNA;通过免疫组化和组织病理学观察,发现HEV可在肝脏中进行表达,并且能引起肝组织病理变化,但感染HEV后长爪沙鼠均缺乏较明显的临床表现症状。结果提示,长爪沙鼠对HEV具有易感性,感染后肝脏出现小叶性肝炎的病理变化,具有作为HEV感染动物模型的潜在价值。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 长爪沙鼠 动物模型
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重组痘苗病毒TTVAC7理化特性
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作者 范园园 李一 +8 位作者 张诺娜 邢彬 胡宁宁 韩继成 兰添 李敏 陈爽 李霄 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1494-1500,共7页
探讨重组痘苗病毒TTVAC7的理化特性,对重组痘苗病毒活载体疫苗的规模化生产、保存、运输和净化具有一定的指导意义。将重组痘苗病毒TTVAC7和天坛株痘苗病毒VTT经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、紫外线照射及超声波破碎处理后,接种于... 探讨重组痘苗病毒TTVAC7的理化特性,对重组痘苗病毒活载体疫苗的规模化生产、保存、运输和净化具有一定的指导意义。将重组痘苗病毒TTVAC7和天坛株痘苗病毒VTT经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、紫外线照射及超声波破碎处理后,接种于BHK-21细胞,通过测定TCID50观察上述理化因子处理前后TTVAC7和VTT毒价的变化,并分析这些理化因子对TTVAC7和VTT的影响。结果显示,TTVAC7经55℃作用15min,VTT经55℃作用30min即可完全被灭活;在pH值3~9的范围内,pH值的变化不会引起TTVAC7和VTT病毒滴度的显著变化;紫外线垂直距离10、30cm照射病毒液60min,不能完全灭活病毒粒子;对氯仿敏感;经1%胰蛋白酶37℃处理60min,TTVAC7和VTT的病毒滴度下降2个滴度以上;对乙醚不敏感;经40、80Hz的非接触式超声处理60min,TTVAC7和VTT的病毒滴度下降低于2个滴度。结果表明,重组痘苗病毒TTVAC7和天坛株痘苗病毒VTT理化性质相似,均不耐高温,耐酸、碱、乙醚、紫外线及超声波,对氯仿和胰蛋白酶敏感。 展开更多
关键词 重组痘苗病毒 天坛株痘苗病毒 理化因子 病毒活性
重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp理化特性检测 预览 被引量:1
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作者 刘继 李昌 +9 位作者 朱羿龙 朱光泽 张艳芳 杜寿文 谭鹏 李一 郭焱 李金泽 邢彬 金宁一 《生物技术通讯》 CAS 2015年第2期223-226,共4页
目的:检测各理化因素对重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp的影响,为临床前研究奠定基础。方法:将重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声破碎、紫外线照射处理后,接种于CEF细胞,通过测定TCID50观察重组鸡痘病毒rFPVHg... 目的:检测各理化因素对重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp的影响,为临床前研究奠定基础。方法:将重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声破碎、紫外线照射处理后,接种于CEF细胞,通过测定TCID50观察重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp毒力活性的变化,由此分析这些理化因素对重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp的影响。结果与结论:重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp不耐高温,在55℃作用45 min或60℃作用15 min即可完全灭活;但是其对酸和乙醚具有一定的耐受性,在pH值为3-9的范围内,pH值的变化对病毒滴度无明显影响;同时紫外线照射无法使得培养基中的病毒粒子完全灭活;该病毒对氯仿、胰蛋白酶较为敏感,二者均可使病毒滴度下降;在适应的条件下,重组鸡痘病毒rFPVHg-Hp对超声波具有一定的耐受性。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 理化因子 病毒滴度
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东北地区戊型肝炎病毒基因特征分析
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作者 朱光泽 屈勇刚 +4 位作者 李一 兰添 范园园 尹秀英 金宁一 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期2075-2083,共9页
为探索东北地区戊型肝炎病毒(HEV)流行背景和特征,本实验用抗-HEV抗体酶联免疫试剂盒检测了不同样品血清中的抗体;对样品用RT-PCR检测HEV RNA,对PCR阳性产物进行克隆测序,然后对序列进行分析。对49个呈RNA阳性的样品进行了序列测定,结... 为探索东北地区戊型肝炎病毒(HEV)流行背景和特征,本实验用抗-HEV抗体酶联免疫试剂盒检测了不同样品血清中的抗体;对样品用RT-PCR检测HEV RNA,对PCR阳性产物进行克隆测序,然后对序列进行分析。对49个呈RNA阳性的样品进行了序列测定,结果显示HEV分离株之间核苷酸同源性为82.2%~100.0%;同时,还与其它四种基因型戊型肝炎病毒进行了核苷酸序列同源性比对,分别在75.6%~81.6%、77.7%~80.9%、73.6%~81.0%和80.9%~95.7%之间。本实验还针对吉林省内的动物源HEV与人源HEV的序列进行了比对,结果其同源性在86.2%~100.0%之间,其中有5对序列完全相同。本研究获得的44个核酸片段结合HEV基因Ⅳ型中已知亚型的12个基因序列进行了亚型分类。结果 44个核酸片段对应3个分支,包括Ⅳa、Ⅳb亚型及另一支独立分支,表明本实验所获得的独立分支里包含的病毒分离株可形成新的亚型,本实验中将其命名为Ⅳh亚型。中国东北地区主要流行的HEV基因型为Ⅳ型,并且人源HEV与动物源HEV有极高的同源性,同时,还发现中国东北地区流行着国内已有报道的Ⅳa、Ⅳb亚型外,存在着一个新的亚型。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因型 同源性
携Apoptin和PEG3启动子双特异性重组腺病毒的构建及鉴定 被引量:1
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作者 兰添 李一 +8 位作者 张诺娜 邢彬 胡宁宁 范园园 陈爽 姜爽 于海玲 李霄 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第11期966-970,共5页
目的利用凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated genes 3,PEG3)构建具有特异性杀伤和特异性复制功能的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,为研究Ad-Apoptin-PEG3p-E1a的抗肿瘤作用奠定基础。方法从pMT-... 目的利用凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated genes 3,PEG3)构建具有特异性杀伤和特异性复制功能的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,为研究Ad-Apoptin-PEG3p-E1a的抗肿瘤作用奠定基础。方法从pMT-E1a和pIRES-neo获得目的基因E1a和PolyA并连接入pKS-PEG3p,用XhoⅠ和SpeⅠ双酶切后连接入pAd-Apoptin,获得穿梭载体pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a。用pacAd-Apoptin-PEG3p-E1a和腺病毒骨架质粒(pAd5)共转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,利用RT-PCR、Western blot和电镜对重组病毒进行鉴定,采用MTS检测病毒对A549细胞的抑制效果及其对L02细胞的影响;通过绘制一步生长曲线,检测重组毒在细胞内的复制情况。结果构建的重组病毒基因组中含有Apoptin目的基因,电镜下具有正常形态。MTS检测重组腺病毒对A549细胞的抑制作用具有时效和量效关系(P〈0.05),抑制作用在100MOI、96h时达峰值为(79.84±1.0)%,对正常细胞L02无显著影响,该双特异性重组腺病毒能够在A549肿瘤细胞内复制,在L02细胞内几乎无复制能力。结论成功包装重组腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a,且该病毒具有肿瘤特异性杀伤和肿瘤特异性复制功能。 展开更多
关键词 重组腺病毒 APOPTIN 进行性增量基因3 特异性 抗肿瘤
吉林地区人群戊型肝炎病毒感染的流行病学调查 被引量:4
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作者 朱光泽 李一 +7 位作者 兰添 范园园 张诺娜 胡宁宁 邢彬 尹秀英 李霄 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第10期919-923,共5页
目的调查吉林地区部分人群戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法用ELISA检测人群血清中抗HEV抗体;对部分血清用RT-PCR检测HEV RNA,对PCR阳性产物进行测序,所得序列构建系统发育树。结果 ELASA方法检测7 514份人血清,1 621份抗HEV抗体阳性... 目的调查吉林地区部分人群戊型肝炎病毒(HEV)感染情况。方法用ELISA检测人群血清中抗HEV抗体;对部分血清用RT-PCR检测HEV RNA,对PCR阳性产物进行测序,所得序列构建系统发育树。结果 ELASA方法检测7 514份人血清,1 621份抗HEV抗体阳性,阳性率21.57%。其中男、女性阳性率分别为30.87%和12.01%,男、女性感染者之比为2.64︰1。感染者抗体水平随年龄增加而升高。不同职业人群HEV率不同,以猪销售人员及养猪从业人员感染率最高,分别为97.18%和97.09%。从戊型肝炎患者中检测HEV RNA,序列分析结果为HEV基因Ⅳ型。结论吉林地区人群HEV感染率较高。从进化关系角度分析,吉林地区人源HEV与猪源HEV可能分化于同一分支。 展开更多
关键词 基因型 同源性 戊型肝炎病毒
携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用 被引量:3
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作者 陈智飞 李一 +5 位作者 胡宁宁 兰添 周晔 李霄 孙丽丽 金宁一 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期16-21,共6页
目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-m... 目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。 展开更多
关键词 溶瘤腺病毒 凋亡素基因 进行性增量基因3 结直肠癌 SW1116细胞 GES细胞
以乙型肝炎病毒核心蛋白为载体的PRRSV病毒样颗粒疫苗的构建 被引量:3
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作者 曹佳媛 田明尧 +7 位作者 辛舒 崔卓栋 李一 曹亮 张艳芳 韩继成 郭海宁 金宁一 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1000-1004,共5页
为采用乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)为载体,构建含美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5糖基化蛋白抗原表位的HBc-GP5病毒样颗粒(VLPs)疫苗,对HBc序列进行密码子优化,将其克隆至pET-28a(+)载体中,获得质粒pEO-NEW。在HBc刺突... 为采用乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)为载体,构建含美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5糖基化蛋白抗原表位的HBc-GP5病毒样颗粒(VLPs)疫苗,对HBc序列进行密码子优化,将其克隆至pET-28a(+)载体中,获得质粒pEO-NEW。在HBc刺突顶端的免疫显性区插入优化后的GP5序列,获得重组表达质粒pEO-LEORF5,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG 22℃诱导表达。利用SDS-PAGE和Western-blot验证融合蛋白pEO-LEORF5的表达。超声破碎后利用蔗糖密度梯度离心对融合蛋白进行纯化,最后用透射电镜观察VLPs的形成情况。结果表明,重组表达质粒pEO-LEORF5构建正确。表达的融合蛋白的分子质量为32ku,以包涵体和可溶性两种形式表达。经浓缩纯化后融合蛋白纯度可达67%,且能自主装配为VLPs。本试验成功构建出新型HBc-GP5VLPs候选疫苗,为研发新型PRRS疫苗提供了新思路。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 核心蛋白 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5抗原表位 病毒样颗粒疫苗
四联重组痘苗病毒的构建及筛选 被引量:2
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作者 王宏宇 徐一鸣 +5 位作者 盛媛 李一 阎富龙 李霄 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1411-1415,1417共6页
构建含黄热病毒E基因、汉坦病毒S基因、克里米亚-刚果出血热病毒M基因及炭疽杆菌POAX2基因的重组天坛株痘苗病毒。设计合成含外源筛选标记EGFP基因和4种拟插入外源基因的重组质粒,利用同源重组和荧光标记筛选技术并结合Cre/Loxp敲除系统... 构建含黄热病毒E基因、汉坦病毒S基因、克里米亚-刚果出血热病毒M基因及炭疽杆菌POAX2基因的重组天坛株痘苗病毒。设计合成含外源筛选标记EGFP基因和4种拟插入外源基因的重组质粒,利用同源重组和荧光标记筛选技术并结合Cre/Loxp敲除系统,最终构建四联重组痘苗病毒。应用PCR对获得的重组痘苗病毒进行鉴定和遗传稳定性的检测,并在电子显微镜下观察其形态特征。构建含4种外源基因的重组痘苗病毒rVTT-C-4+,该重组痘苗病毒在转录水平上具有良好的遗传稳定性,且于电镜下观察具备完整形态。成功构建四联重组天坛株痘苗病毒,为后续疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 天坛株痘苗病毒 多联疫苗 EGFP Cre/Loxp敲除系统
缺失TA35R基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选
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作者 姜爽 阚式绂 +6 位作者 胡宁宁 陈智飞 李一 周晔 李霄 孙丽丽 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1883-1887,共5页
通过敲除痘苗病毒天坛株(vaccinia virus tiantan strain,VTT)复制非必需基因TA35R,结合双筛选标记及同源重组技术,构建TA35R基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TA35R-。人工合成含有TA35R重组臂、同向loxp序列、早晚期启动子PE/L、EGFP及酶切位... 通过敲除痘苗病毒天坛株(vaccinia virus tiantan strain,VTT)复制非必需基因TA35R,结合双筛选标记及同源重组技术,构建TA35R基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TA35R-。人工合成含有TA35R重组臂、同向loxp序列、早晚期启动子PE/L、EGFP及酶切位点的穿梭质粒pTA35R-EGFP。pTA35R-EGFP和野生型VTT共转染BHK-21细胞,通过绿色荧光蚀斑筛选,构建缺失TA35R基因且含FGFP基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R--EGFP+。采用Cre/Loxp系统敲除外源筛选标记EGFP,获得缺失TA35R基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R-,利用PCR方法和电子显微镜对其进行鉴定,通过MTT法检测细胞噬性以评价其减毒效果。结果表明,所构建的痘苗病毒弱毒株rVTT-TA35R-完全缺失了TA35R基因和外源筛选标记EGFP,且细胞毒性减弱。 展开更多
关键词 天坛株痘苗病毒 TA35R基因 同源重组 病毒载体
煤矿企业电能质量问题与补偿优化措施研究 被引量:1
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作者 王惠 李一 +2 位作者 和敬涵 冯阳 李霞 《电气应用》 北大核心 2013年第21期63-67,共5页
现有煤矿企业采用了大量的感性设备,功率因数较低,造成煤矿用户电压水平降低、线路损耗增大。大容量设备的周期性工作制将造成电压波动的电能质量问题。影响企业的经济性运行。SVC能够动态跟踪系统的无功变化进行快速补偿,可以改善... 现有煤矿企业采用了大量的感性设备,功率因数较低,造成煤矿用户电压水平降低、线路损耗增大。大容量设备的周期性工作制将造成电压波动的电能质量问题。影响企业的经济性运行。SVC能够动态跟踪系统的无功变化进行快速补偿,可以改善煤矿企业上述电能质量问题。在对张家湾煤矿供电系统进行动态仿真的基础上。 展开更多
关键词 煤矿企业电能质量 SVC PSCAD 仿真经济效益分析
携带Apoptin及hTERT启动子的双重特异性重组腺病毒的构建及鉴定
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作者 艾迪 李文杰 +10 位作者 李一 陈爽 朱羿龙 崔英丽 李敏 崔传信 尹逊哲 李善智 马艺珍 李霄 金宁一 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期937-941,955共6页
从质粒pMT-E1a和pIRES-neo中获得目的基因E1a和PolyA并连接入质粒pKS-hTERTp,用Xh0I和SpeI双酶切后连接入线性化的pAd—Apoptin,获得穿梭载体pAd—apoptin-PolyA—hTERTp—Ela。穿梭载体pAd—Apoptin-PolyA—hTERTp—Ela和腺病毒骨架... 从质粒pMT-E1a和pIRES-neo中获得目的基因E1a和PolyA并连接入质粒pKS-hTERTp,用Xh0I和SpeI双酶切后连接入线性化的pAd—Apoptin,获得穿梭载体pAd—apoptin-PolyA—hTERTp—Ela。穿梭载体pAd—Apoptin-PolyA—hTERTp—Ela和腺病毒骨架质粒(pAd5)共转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Ad—Apoptin-hTERTp—Ela,采用RT—PCR和Westernblot对重组腺病毒进行鉴定,MTs法检测病毒对A549细胞的抑制作用;绘制重组腺病毒生长曲线,监测重组腺病毒在细胞内的复制能力。结果显示:构建出的重组腺病毒中包含有了目的基因Apoptin和E1a,并且目的基因在细胞中正确的表达;MTs结果显示重组腺病毒对A549具有抑制作用,且抑制作用具有一定的时效及剂效关系;重组腺病毒具有在A549细胞中正常复制的能力。结果表明:成功的构建出了具有特异性杀伤和特异性复制能力的双重特异性重组腺病毒Ad—Apoptin-hTERTp—E1a。 展开更多
关键词 重组腺病毒 凋亡素 人端粒酶末端转移酶 特异性 抗肿瘤
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