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杂交竹抗梢枯病诱导因子筛选及其持续期研究 预览
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作者 何倩倩 刘雨欣 +4 位作者 方馨玫 朱天辉 谯天敏 韩珊 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期81-89,共9页
本文利用病原毒素同源异质的特点诱导杂交竹抗病潜力,筛选出抗梢枯病的最佳诱导因子并排除其对病原菌的直接作用,经琼脂玻片萌发法测定3种诱导因子(温度灭活毒素、蛋白酶降解毒素和细胞壁成分)对杂交竹梢枯病病原菌暗孢节菱孢菌孢子萌... 本文利用病原毒素同源异质的特点诱导杂交竹抗病潜力,筛选出抗梢枯病的最佳诱导因子并排除其对病原菌的直接作用,经琼脂玻片萌发法测定3种诱导因子(温度灭活毒素、蛋白酶降解毒素和细胞壁成分)对杂交竹梢枯病病原菌暗孢节菱孢菌孢子萌发的抑制作用,结果显示经过60℃灭活毒素浓度为40μg/mL处理的孢子萌发效果最为理想。通过最佳诱导因子对杂交竹不同品种诱导持续期进行测定,采用针刺法先接种诱导因子后挑战接种病原菌,1~40 d内观察抗感品种对诱导因子响应的差异,症状上杂交竹8#的感病程度重于3#和6#,40 d时叶片和枝干变黄干枯,病情指数结果表明,3个杂交竹品种接种诱导因子后感病程度降低,诱抗效果显示杂交竹6#的诱抗指数高于3#和8#。以上结果证明诱导因子使不同杂交竹品种均产生了一定的抗性且抗性越强的品种诱导抗性越好。 展开更多
关键词 杂交竹梢枯病 暗孢节菱孢菌 诱导因子 抗病性 孢子萌发
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板栗CmWRKY基因的克隆、序列分析与原核表达 预览
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作者 刘裕峰 朱天辉 +4 位作者 刘应高 谯天敏 龙旭梅 韩珊 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期37-45,共9页
为深入研究板栗WRKY转录因子基因在板栗抗病过程中的分子作用机制,根据板栗转录组数据库分析获得EST序列,利用RT-PCR技术,克隆板栗WRKY转录因子cDNA(CmWRKY)序列,分析CmWRKY基因及其编码蛋白的相关信息并进行原核表达研究。结果表明,CmW... 为深入研究板栗WRKY转录因子基因在板栗抗病过程中的分子作用机制,根据板栗转录组数据库分析获得EST序列,利用RT-PCR技术,克隆板栗WRKY转录因子cDNA(CmWRKY)序列,分析CmWRKY基因及其编码蛋白的相关信息并进行原核表达研究。结果表明,CmWRKY基因为1437bp,编码479个氨基酸,推测蛋白分子质量为52.12896ku,理论等电点为9.15,具有2个WRKY保守结构域和2个C2H2锌指结构域,属于WRKY家族的第Ⅰ组,基因登录号为KY312850.1。CmWRKY核苷酸序列与巴旦木等植物的WRKY基因一致性均在80%以上,与西班牙栓皮栎WRKY基因一致性最高,达到97%。同源建模表明,CmWRKY蛋白三级结构与拟南芥AtWRKY1蛋白结构相似,推测其可能与AtWRKY1具有相似的调控功能。分子进化分析显示,板栗CmWRKY与西班牙栓皮栎及核桃WRKY蛋白亲缘关系最近。SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,CmWRKY蛋白最佳诱导表达条件为0.2mmol/LIPTG在30℃下诱导10h,蛋白分子质量为56ku,其主要以可溶性蛋白的形式存在。为板栗CmWRKY基因的生物学功能研究及应用奠定基础。 展开更多
关键词 板栗 CmWRKY 基因克隆 序列分析 原核表达
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利用响应面法优化贝莱斯芽孢杆菌ZJ20发酵参数 预览
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作者 王淋敏 +2 位作者 谯天敏 韩珊 朱天辉 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第2期88-96,共9页
【目的】优化贝莱斯芽孢杆菌的培养条件,以提高其菌落数和抗菌活性,为该菌株工业化生产提供理论依据。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌ZJ20为供试菌株,采用单因素试验,研究培养基、pH、温度、转速对ZJ20菌落数和抗菌活性的影响;在此基础上,以... 【目的】优化贝莱斯芽孢杆菌的培养条件,以提高其菌落数和抗菌活性,为该菌株工业化生产提供理论依据。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌ZJ20为供试菌株,采用单因素试验,研究培养基、pH、温度、转速对ZJ20菌落数和抗菌活性的影响;在此基础上,以菌落数为考察指标,采用响应面法对pH、温度、转速3个因素进行进一步的优化,得到了贝莱斯芽孢杆菌ZJ20的最佳培养条件;最后在温室采用盆栽试验,研究最佳培养条件得到的贝莱斯芽孢杆菌ZJ20对杂交竹梢枯病的防治效果。【结果】单因素试验结果显示,供试培养基中,NB培养基(牛肉膏3g,蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂20g,蒸馏水1L,pH7.0~7.2)上贝莱斯芽孢杆菌ZJ20的菌落数和抑菌圈直径均最高,分别为4.11×10^8CFU/mL和6.10mm,且显著高于其余培养基,说明NB培养基更有利于贝莱斯芽孢杆菌的生长。当pH为4~10时,随着pH的增加,贝莱斯芽孢杆菌ZJ20的菌落数和抑菌圈直径均先增后降,其中当pH为7~8时ZJ20的菌落数和抑菌圈直径均显著高于其他处理;在此基础上的复筛结果显示,7.0~7.4为贝莱斯芽孢杆菌的最优pH。当转速为140~200r/min时,随着转速的增加,贝莱斯芽孢杆菌ZJ20的菌落数和抑菌圈直径均先增后降,其中当转速为160~180r/min时,菌落数和抑菌圈直径均较高。温度为22~30℃时,随着温度的升高,菌落数和抑菌圈直径均先增加后下降,其中当温度为22~28℃时菌落数和抑菌圈直径均较高。响应面试验结果显示,3个因素中,转速对菌落生长和繁殖的影响最大,其次是温度,影响最小的是pH,贝莱斯芽孢杆菌ZJ20最优培养条件为:pH7.27,转速160r/min,温度28℃,在此条件下测定的菌落数为769×10^7CFU/mL。盆栽试验结果显示,优化培养条件下得到的ZJ20悬液防治效果明显提高,均超过50%。【结论】得到了贝莱斯芽孢杆菌的最佳培养条件,这不仅使其菌落数增加,而且极大地增强了� 展开更多
关键词 贝莱斯芽孢杆菌 发酵参数优化(向应面法 抗菌活性
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板栗铁型超氧化物歧化酶基因(CmFeSOD)的克隆及原核表达 预览
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作者 韩珊 刘裕峰 +6 位作者 朱天辉 刘应高 谯天敏 汪煜伶 徐缨络 莫义英 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期935-944,共10页
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是逆境条件下清除细胞内活性氧的关键酶,而铁型超氧化物歧化酶(FeSOD)作为该酶系中的关键酶之一,与植物的抗病性关系密切。根据板栗(Castanea mollissimaBl)转录组数据中分析得到FeSOD基因EST... 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是逆境条件下清除细胞内活性氧的关键酶,而铁型超氧化物歧化酶(FeSOD)作为该酶系中的关键酶之一,与植物的抗病性关系密切。根据板栗(Castanea mollissimaBl)转录组数据中分析得到FeSOD基因EST序列设计PCR扩增引物,以板栗幼叶的cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆获得CmFeSOD基因cDNA序列,通过生物信息学方法分析该基因的cDNA序列,并推定其氨基酸序列,同时将该基因片段连接到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行不同条件的诱导表达。结果表明,板栗CmFeSOD基因开放阅读框(ORF)大小为705bp,共编码234个氨基酸,推测其蛋白分子质量为26.0165ku,理论等电点(pI)为6.86,具有FeSOD家族的特征基序和保守结构域,GenBank登录号为KY312852。遗传进化分析表明,板栗CmFeSOD与核桃的亲缘关系最近。SDS-PAGE电泳分析表明,通过原核表达获得CmFeSOD蛋白的分子质量约为29ku,CmFeSOD蛋白在30℃,添加0.4mmol/LIPTG,诱导6h表达量最高,主要以包涵体的形式存在。 展开更多
关键词 板栗 超氧化物歧化酶 基因克隆 原核表达
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板栗过氧化氢酶基因CmCAT的克隆与原核表达 预览
5
作者 刘裕峰 朱天辉 +4 位作者 刘应高 谯天敏 龙旭梅 韩珊 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期168-176,共9页
【目的】旨在克隆板栗CmCAT基因全长cDNA序列,分析其编码蛋白相关信息并进行原核表达研究。【方法】采用RT-PCR技术从板栗品种"石丰"中克隆获得CmCAT基因,用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推定的氨基酸序列进行分析。构建... 【目的】旨在克隆板栗CmCAT基因全长cDNA序列,分析其编码蛋白相关信息并进行原核表达研究。【方法】采用RT-PCR技术从板栗品种"石丰"中克隆获得CmCAT基因,用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推定的氨基酸序列进行分析。构建原核表达载体pET28a-CmCAT,经PCR和酶切鉴定后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。【结果】板栗CmCAT基因开放阅读框(ORF)为1 479 bp,共编码492个氨基酸,推测蛋白分子质量为56.883 kDa,理论等电点pI为5.83,GenBank登录号为KY312851。其核苷酸序列与核桃(Juglans regia)CAT基因序列相似性最高,为85%。遗传进化分析表明,板栗CmCAT与核桃的亲缘关系最近。SDS-PAGE电泳分析表明,在30℃条件下,0.2 mmol/L IPTG诱导6 h表达量最佳,诱导的目的蛋白分子量约为60 kDa,其主要以包涵体的形式存在。【结论】成功克隆了板栗CmCAT基因,并对其编码蛋白的理化性质进行了预测分析,在大肠杆菌中获得了大量的表达,为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 板栗 过氧化氢酶 基因克隆 原核表达
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甲基营养型芽孢杆菌对黄柏苗的促生作用 预览
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作者 黎肇家 张焓涟 +1 位作者 朱天辉 《湖南农业科学》 2019年第5期63-66,共4页
为确定甲基营养型芽孢杆菌菌液对黄柏促生效应的最佳浓度,将甲基营养型芽孢杆菌进行发酵培养并配制成0~1000倍菌液处理黄柏幼苗,测定处理后的幼苗形态特性和生理特性。结果表明:甲基营养型芽孢杆菌与水相比,能显著促进黄柏幼苗生长(P<... 为确定甲基营养型芽孢杆菌菌液对黄柏促生效应的最佳浓度,将甲基营养型芽孢杆菌进行发酵培养并配制成0~1000倍菌液处理黄柏幼苗,测定处理后的幼苗形态特性和生理特性。结果表明:甲基营养型芽孢杆菌与水相比,能显著促进黄柏幼苗生长(P<0.05),随着菌液浓度的降低,促生效果先上升再下降,其中以T50处理效果最佳;幼苗经过T50处理之后,叶绿素含量和POD活性表现出增长的趋势;不同浓度菌液处理黄柏幼苗之后,在NR活性方面表现出差异性。因此,甲基营养型芽孢杆菌浓度在1×10^6~1×10^8CFU/mL范围内促生效应显著。 展开更多
关键词 甲基营养型芽孢杆菌 生理指标 形态指标 黄柏 促生作用
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不同林分条件下黄柏膏药病的发生及生理响应 预览
7
作者 曾艳玲 +3 位作者 方馨玫 崔玉婷 何倩倩 朱天辉 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期82-88,共7页
【目的】探讨林分因子、黄柏抗性生理指标与黄柏膏药病发生程度之间的相关性.【方法】采用踏查法进行调 查,以树皮肿胀度代表含水量,采用考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量,氮蓝四唑光化还原法测定酶活性,硫代巴 比妥酸比色法测定丙二醛含... 【目的】探讨林分因子、黄柏抗性生理指标与黄柏膏药病发生程度之间的相关性.【方法】采用踏查法进行调 查,以树皮肿胀度代表含水量,采用考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量,氮蓝四唑光化还原法测定酶活性,硫代巴 比妥酸比色法测定丙二醛含量.【结果】树龄大的黄柏, 病情指数更高,阴坡比阳坡发病率高,树种组成单-的黄柏 林更易发病.黄柏感病后,树皮含水量大大降低,树皮相对肿胀度与发病率、病情指数极显著负相关.3 个样地健 康黄柏防御酶活性均较高,感病黄柏中超氧化物歧化酶(SOD)活性波动较大,过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨 酶 (PAL)活性呈显著下降趋势,3 种酶活性与病情指数为显著或极显著负相关.感病黄柏树皮中的可溶性蛋白和 丙二醛含量在病害发生最严重时期显著升高.【结论】树龄、地形、树种组成等因子对黄柏膏药病的发生有显著影 响;树皮含水量、防御酶(SOD、 POD、 PAL)活性、丙二醛含量等抗性生理指标受病害影响显著. 展开更多
关键词 黄柏 膏药病 林分因子 抗性生理 发病率 病情指数
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桑氏链霉菌KJ40全基因组测序及分析
8
作者 张博阳 朱天辉 +3 位作者 韩珊 王莹 谯天敏 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第4期805-818,共14页
【背景】桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii)KJ40是一株具有防病、促生多重功能的放线菌,有作为生物农药的潜力。目前还没有相关研究报道S.sampsonii全基因组序列,这限制了其功能基因、代谢产物合成途径及比较基因组学等研究。【目... 【背景】桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii)KJ40是一株具有防病、促生多重功能的放线菌,有作为生物农药的潜力。目前还没有相关研究报道S.sampsonii全基因组序列,这限制了其功能基因、代谢产物合成途径及比较基因组学等研究。【目的】解析S.sampsonii KJ40的基因组序列信息,以深入研究该菌株防病促生机制及挖掘次级代谢产物基因资源。【方法】利用Illumina HiSeq高通量测序平台对KJ40菌株进行全基因组测序,使用相关软件对测序数据进行基因组组装、基因预测和功能注释、预测次级代谢产物合成基因簇、共线性分析等。【结果】基因组最后得到9个Scaffolds和578个Contigs,总长度为7 261 502 bp,G+C%含量平均为73.41%,预测到6 605个基因、1 260个串联重复序列、804个小卫星序列、67个微卫星序列、90个tRNA、9个rRNA和19个sRNA。其中,2 429、3 765、2 890、6 063和1 911个基因分别能够在COG、GO、KEGG、NR和Swiss-Prot数据库提取到注释信息。同时,还预测得到21个次级代谢产物合成基因簇。基因组测序数据提交至NCBI获得Gen Bank登录号:LORI00000000。S.sampsonii KJ40与Streptomyces coelicolor A3(2)、Streptomyces griseus subsp.griseus NBRC 13350三株链霉菌基因组存在翻转、易位等基因组重排,3个基因组共有1 711个蛋白聚类簇。【结论】研究为从基因组层面上解析KJ40菌株具有良好促生防病效果的内在原因提供基础数据,为深入了解链霉菌次级代谢合成途径提供参考信息,对S.sampsonii后续相关研究具有重要意义。 展开更多
关键词 桑氏链霉菌 基因组 基因注释 次级代谢 比较基因组分析
桑氏链霉菌几丁质酶ChiKJ40基因的克隆表达及其抑菌作用
9
作者 张博阳 朱天辉 +3 位作者 韩珊 王莹 谯天敏 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1016-1026,共11页
【背景】目前关于桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii)生防基因的研究不多,仅从其基因组中克隆了2个几丁质酶基因片段,其单个几丁质酶的完整基因序列相关研究未见报道。【目的】克隆S.sampsonii KJ40的几丁质酶基因Chi KJ40并进行原... 【背景】目前关于桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii)生防基因的研究不多,仅从其基因组中克隆了2个几丁质酶基因片段,其单个几丁质酶的完整基因序列相关研究未见报道。【目的】克隆S.sampsonii KJ40的几丁质酶基因Chi KJ40并进行原核表达,纯化重组蛋白并研究其抑菌作用。【方法】采用PCR扩增法从S.sampsonii KJ40中克隆几丁质酶基因Chi KJ40,连接到表达载体p ET-32a,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。使用His标记蛋白质微量纯化试剂盒对重组几丁质酶进行纯化,Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定粗酶液和纯化酶液的浓度,几丁质酶试剂盒测定粗酶液和纯化酶液的几丁质酶活性。观察重组几丁质酶对桉树焦枯病菌(Cylindrocladium scoparium)、栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)、链格孢菌(Alternaria alternate)、紫丝核菌(Rhizoctonia violacea)几种致病真菌的抑菌作用。【结果】Chi KJ40基因(登录号为MF434484)在E.coli中经IPTG诱导表达,获得42 k D的重组几丁质酶,不同浓度IPTG在37℃诱导3 h,蛋白产量无明显变化。0.2 mmol/L IPTG 16℃诱导过夜,重组几丁质酶主要以可溶性形式存在于上清,小部分以包涵体存在于沉淀中。粗酶液几丁质酶活性为0.080 U/m L,酶比活力为0.041 U/mg,纯化酶液几丁质酶活性为0.046 U/m L,酶比活力为0.115 U/mg,纯化倍数为2.8,酶活回收率为57.5%。重组几丁质酶处理后,C.scoparium、C.parasitica和A.alternata菌丝细胞出现分节、膨胀,R.violacea菌丝溶解且部分被破坏成碎片。【结论】Chi KJ40基因的研究补充了S.sampsonii的生防背景,为几丁质酶基因找到了新的来源,并为其应用奠定了理论基础。 展开更多
关键词 桑氏链霉菌 几丁质酶 克隆 原核表达 抑菌作用
实时荧光定量PCR检测核桃胶胞炭疽菌 预览
10
作者 余鹏举 朱天辉 +3 位作者 万雪琴 王若梅 韩珊 《东北林业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期87-90,100共5页
为快速灵敏检测核桃炭疽病病原菌,根据GenBank中炭疽属(Colletotrichum)不同种的ITS序列差异,设计了核桃炭疽病病原菌胶胞炭疽菌(C.gloeosporioides)的特异性引物YH1/YH2,并优化建立了检测核桃胶胞炭疽菌的SYBR Green I实时荧光定量PCR... 为快速灵敏检测核桃炭疽病病原菌,根据GenBank中炭疽属(Colletotrichum)不同种的ITS序列差异,设计了核桃炭疽病病原菌胶胞炭疽菌(C.gloeosporioides)的特异性引物YH1/YH2,并优化建立了检测核桃胶胞炭疽菌的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测体系。结果表明:该引物能从实验室分离保存鉴定的13株核桃胶胞炭疽菌中特异性扩增出306bp的目的条带,而对于其他6种核桃常见病害病原菌、健康核桃植株组织及所有微生物总基因组DNA均未扩增出特异性条带;建立的实时荧光定量PCR检测体系灵敏度为1×10-3 mg·L-1,是常规PCR检测方法的100倍;对10份采集于四川、陕西、湖北等地的林间感病核桃植株组织进行定量检测,实时荧光定量PCR的阳性检出率为80%,且样品病症表现越明显检测到的含菌量越高。建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法可用于核桃感病组织内胶胞炭疽菌的分子鉴定和早期检测。 展开更多
关键词 核桃 胶胞炭疽菌 SYBR Green I实时荧光定量PCR 分子检测
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莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)固液双相发酵配方研究 预览 被引量:1
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作者 彭娇洋 +6 位作者 朱涵明月 刘倩 王诗玮 朱天辉 黄祖惠 吴继云 张霞 《四川林业科技》 2017年第5期33-37,共5页
莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)通过基础培养基基质、碳、氮、维生素筛选,玉米(50 g)、葡萄糖(1.5 g)、水解酪蛋白(1.5 g)、抗坏血酸(0.5 mg)、水50 m L为最佳固体培养基质(培养10 d),产孢量达4.78×10^10cfu·m L^-... 莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)通过基础培养基基质、碳、氮、维生素筛选,玉米(50 g)、葡萄糖(1.5 g)、水解酪蛋白(1.5 g)、抗坏血酸(0.5 mg)、水50 m L为最佳固体培养基质(培养10 d),产孢量达4.78×10^10cfu·m L^-1。以SMY为液体培养基质,莱氏野村菌最适发酵条件:1.0×10^8cfu·m L^-1接种浓度,25℃、p H=6、全天光照、180 r·min^-1振荡培养7 d,菌丝干重为690.2 mg。固体发酵为复合粉炮生产提供基础配方,液体发酵缩短时间后可作为固体培养生产莱氏野村菌菌粉的二级种子,发酵产品为杜仲梦尼夜蛾粉炮防治重要生物制剂。 展开更多
关键词 莱氏野村菌 发酵 培养基 杜仲梦尼夜蛾
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板栗咖啡酸氧甲基转移酶基因CmCOMT的克隆及原核表达 预览
12
作者 刘裕峰 朱天辉 +4 位作者 刘应高 龙旭梅 余鹏举 韩珊 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2332-2341,共10页
该研究根据板栗(Castanea mollissima Bl.)cDNA文库分析得到EST序列,采用RTPCR技术,克隆板栗咖啡酸氧甲基转移酶(caffeicacidOmethyltransferase,COMT)基因全长cDNA(CmCOMT),分析其编码蛋白的相关信息并进行原核表达研究,为板栗木质素... 该研究根据板栗(Castanea mollissima Bl.)cDNA文库分析得到EST序列,采用RTPCR技术,克隆板栗咖啡酸氧甲基转移酶(caffeicacidOmethyltransferase,COMT)基因全长cDNA(CmCOMT),分析其编码蛋白的相关信息并进行原核表达研究,为板栗木质素合成关键酶基因CmCOMT的生物学功能研究与应用奠定基础。结果表明:(1)CmCOMT基因(GenBank登录号为KU365322)具有一个1098bp开放阅读框(ORF),共编码365个氨基酸,推测蛋白分子质量为39.6849kD,理论等电点为5.83,具有植物SAM依赖甲基转移酶的典型特征。(2)CmCOMT核苷酸序列及其编码氨基酸序列与垂枝桦(Betulapendula)和白桦(Betulaplatyphylla)的相应序列一致性均在90%以上;同源建模表明,CmCOMT的3D模型与苜蓿(Medicagosativa)MsCOMT的蛋白结构相似,推测其可能与MsCOMT具有相似的功能;系统发育树分析显示,CmCOMT与其他植物COMTs具有相同的进化祖先,与桦木科植物物种亲缘关系最近。(3)SDSPAGE电泳分析表明,CmCOMT蛋白最佳诱导表达条件为0.3mmol/LIPTG在25℃下诱导6h,蛋白分子量约为44kD,其主要以可溶性蛋白的形式存在。 展开更多
关键词 板栗 咖啡酸氧甲基转移酶 基因克隆 原核表达
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解淀粉芽孢杆菌BA-12可湿性粉剂研制及对核桃根腐病的防治效果 预览 被引量:8
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作者 方馨玫 +2 位作者 曾艳玲 樊苏恒 朱天辉 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期619-626,共8页
为获得对核桃根腐病具有优良防治效果的解淀粉芽孢杆菌BA-12可湿性粉剂,采用单因素法和正交试验法筛选出对菌株BA-12活性影响最小和悬浮率最佳的载体和助剂及其配比。可湿性粉剂的配方为解淀粉芽孢杆菌10%,载体高岭土30%,湿润剂十二烷... 为获得对核桃根腐病具有优良防治效果的解淀粉芽孢杆菌BA-12可湿性粉剂,采用单因素法和正交试验法筛选出对菌株BA-12活性影响最小和悬浮率最佳的载体和助剂及其配比。可湿性粉剂的配方为解淀粉芽孢杆菌10%,载体高岭土30%,湿润剂十二烷基苯磺酸钠10%、分散剂三聚磷酸钠5%、保护剂腐殖酸2.5%。主要性能检测结果表明可湿性粉剂活菌含量为1×10~8 cfu/g,湿润时间为40 s,悬浮率为79%,pH 6.72,含水率2.61%。稳定性测定中,菌剂对温度、酸碱、紫外光耐受性强,30~45℃、p H 6~8、紫外照射20~30 min均对菌剂影响小。盆栽试验得到500~1000倍稀释的菌剂为防治核桃根腐病推荐使用浓度。 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 可湿性粉剂 核桃根腐病 防治效果
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花椒根腐病生防芽孢杆菌的筛选鉴定及定殖和防治效果 预览 被引量:6
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作者 朱天辉 +1 位作者 谯天敏 韩珊 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2016年第4期114-122,共9页
[目的] 对花椒根腐病生防芽孢杆菌进行分离、筛选、定殖和防效评价,为开发高效、稳定、持久的生物农药提供理论与实践基础。[方法] 采用稀释平板涂布法分离健康花椒根际土中的芽孢杆菌,利用点菌法和打孔法2次筛选拮抗效果最佳的芽孢杆菌... [目的] 对花椒根腐病生防芽孢杆菌进行分离、筛选、定殖和防效评价,为开发高效、稳定、持久的生物农药提供理论与实践基础。[方法] 采用稀释平板涂布法分离健康花椒根际土中的芽孢杆菌,利用点菌法和打孔法2次筛选拮抗效果最佳的芽孢杆菌,根据形态特征和生理生化试验对其进行初步鉴定,并测定其对1年生花椒根腐病的防治效果。用链霉素标记拮抗芽孢杆菌,并检测该菌在花椒根际及根内土壤中的定殖动态,以此为基础,运用灌根法对花椒根腐病进行预防和治疗处理,计算发病率、病情指数和防治效果。[结果] 在分离获得的20株芽孢杆菌中,编号为B3的菌株拮抗作用最强,抑菌圈直径达26.0mm,高温处理后仍具有活性,初步确定其为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus。盆栽试验[结果]表明,花椒根腐病发病率和病情指数随B3菌株发酵液稀释倍数增加而增加,B3发酵液原液至稀释200倍以下防治效果显著。定殖动态试验[结果]表明,无论病原菌存在与否,抗300μg/mL链霉素的突变菌株均能在根际土壤和根内定殖,但根际土菌量大于根内,且早于根内达到峰值,随接种时间延长,定殖量下降并维持稳定。田间试验中,突变菌株B3无论预防还是治疗试验,均能发挥很好的效果,并优于原始菌株和化学农药双效灵。[结论] 菌株B3能在花椒根际和根内很好地定殖、排挤病原物,具有对花椒根腐病进行生物防治的潜力和良好的发展前景。 展开更多
关键词 花椒 根腐病 腐皮镰刀菌 芽孢杆菌 生物防治
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四川松树内生拟盘多毛孢的多样性及其防病效果 预览 被引量:3
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作者 刘韩 刘应高 +2 位作者 帅伟 刘燕云 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2015年第12期41-48,57共9页
【目的】对四川松树内生拟盘多毛孢Pestalotiopsis的生态分布及其对松树病害的防治效果进行分析,为松树病害无公害治理提供理论与实践基础。【方法】对分布于四川的松树内生拟盘多毛孢的多样性进行调查统计,分析树种、松树组织、海拔和... 【目的】对四川松树内生拟盘多毛孢Pestalotiopsis的生态分布及其对松树病害的防治效果进行分析,为松树病害无公害治理提供理论与实践基础。【方法】对分布于四川的松树内生拟盘多毛孢的多样性进行调查统计,分析树种、松树组织、海拔和季节对内生拟盘多毛孢定殖率、Shannon-Weiner指数和相似性指数的影响。在此基础上,筛选对松落针病菌、烂皮病菌、赤枯病菌有拮抗作用的内生拟盘多毛孢,浸渍法检测其对松针的致病性,采用喷雾法和针刺法分别对室内盆栽湿地松苗接种拮抗菌和3种病原菌,计算发病率、病情指数和防治效果。【结果】湿地松、马尾松、火炬松中内生拟盘多毛孢的多样性明显高于华山松和云南松,内生拟盘多毛孢在针叶中的分布多于枝和干,其多样性在海拔较低地区(400-600 m)相对较高,不同季节则以春季多样性最高。此外,散沫拟盘多毛孢(P.lawsoniae)、小孢拟盘多毛孢(P.microspor)和石楠拟盘多毛孢(P.photiniae)对松落针病菌、松烂皮病菌、松赤枯病菌3种病原均有拮抗作用,抑制率达38.49%-77.42%,其中P.lawsoniae的作用最为明显,且在致病性测定中对松针无伤害作用。室内对湿地松苗病害的防治试验中,P.lawsoniae孢子原液及稀释液(50倍液和500倍液)对3种病害均表现出了较好的防治效果,防治效果达40.90%-89.77%。【结论】松树内生拟盘多毛孢资源丰富,对松树病害具有生物防治潜力,其中P.lawsoniae对松树落针病、烂皮病和赤枯病具有良好的生防前景。 展开更多
关键词 内生拟盘多毛孢 多样性 松树病害 生物防治
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温哥华假单胞菌菌株PAN4解磷能力及对核桃的促生作用 预览 被引量:2
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作者 谯天敏 +2 位作者 韩珊 朱天辉 王树山 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期117-124,共8页
【目的】探讨温哥华假单胞菌Pseudomonas vancouverensis菌株PAN4解磷能力的动态变化及不同培养条件对菌株解磷能力的影响,及其对核桃Juglans sigllata苗的促生作用和光合特性的影响.【方法】利用Pikovskaya培养液[液体蒙金娜培养基(PV... 【目的】探讨温哥华假单胞菌Pseudomonas vancouverensis菌株PAN4解磷能力的动态变化及不同培养条件对菌株解磷能力的影响,及其对核桃Juglans sigllata苗的促生作用和光合特性的影响.【方法】利用Pikovskaya培养液[液体蒙金娜培养基(PVK)]研究温哥华假单胞菌溶磷特性,单因素试验测定碳源、氮源、初始培养液pH、温度对其解磷能力的影响,采用盆栽试验探究在灭菌土和未灭菌土中菌剂对核桃苗的促生效应.【结果和结论】随时间延长,温哥华假单胞菌菌株PAN4培养的离心上清液中,有效磷含量显著增加,48h时达到峰值;麦芽糖、玉米浆分别为最适碳源、氮源;pH7、温度28℃时,菌体生长量最大,解磷能力最强,二者呈显著正相关关系.不同浓度菌剂均可使核桃苗的株高、地径、净光合速率、呼吸速率和叶绿素含量不同程度地增加,浓度越高增幅越大;施复合肥的效果不如108和10^9cfu·mL^-1的菌剂;菌剂在非灭菌土中的促生效果比灭菌土好. 展开更多
关键词 温哥华假单胞菌 解磷能力 核桃 促生作用 光合特性
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桑氏链霉菌突变株的抑菌活性及对杨树紫纹羽病的盆栽防效 预览 被引量:2
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作者 朱天辉 +2 位作者 余琴 谯天敏 韩珊 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期61-68,共8页
本文在平板对峙法测定桑氏链霉菌突变株 MV-2和 MV-4拮抗活性的基础上,用不同有机溶剂对其发酵液和菌丝体进行萃取,采用孔洞法测定发酵液萃取物和菌丝体浸出物的抑菌活性,并分析活性物质的热、酸碱、光稳定性,耐储藏性和对福美双的... 本文在平板对峙法测定桑氏链霉菌突变株 MV-2和 MV-4拮抗活性的基础上,用不同有机溶剂对其发酵液和菌丝体进行萃取,采用孔洞法测定发酵液萃取物和菌丝体浸出物的抑菌活性,并分析活性物质的热、酸碱、光稳定性,耐储藏性和对福美双的耐受性;通过盆栽试验,探索突变株抑菌物质和福美双对杨树紫纹羽病的防治效果。结果表明,两株突变株和原始菌株 KJ40对除终极腐霉外的7种植物病原真菌均有拮抗作用,对紫纹羽丝核菌作用最强。乙酸乙酯的发酵液萃取物和菌丝体浸出物的抑菌效果最明显;突变株 MV-2的抑菌效果略好于 MV-4和KJ40。在稳定性检测中,突变株比原始菌株具有更好的热、酸碱、光、储藏稳定性,对福美双耐受性更强。说明突变株更适宜于生产,具有较大的开发潜力。在盆栽防效试验中,抑菌物质和福美双混合施用比单独施用效果更好,其中 MV-2和福美双混合施用预防杨树紫纹羽病的效果最好,防治效果超过80%;原始菌株的抑菌物质无论和福美双混合还是单独施用,效果都不如突变株。 展开更多
关键词 桑氏链霉菌 突变菌株 抑真菌作用 防治效果
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板栗愈伤组织对栗疫菌Cp-毒素的抗性响应 被引量:1
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作者 韩珊 朱天辉 +3 位作者 谯天敏 汪菊 张博阳 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1-6,共6页
为了探讨板栗愈伤组织对栗疫病的抗性机制,采用栗疫菌Cp-毒素处理板栗愈伤组织,分析了毒素对不同抗性的板栗品种愈伤组织病程相关蛋白、植物保卫素及游离脯氨酸含量的影响。研究表明:在较低浓度毒素处理范围内(5~100μg/m L),板栗愈... 为了探讨板栗愈伤组织对栗疫病的抗性机制,采用栗疫菌Cp-毒素处理板栗愈伤组织,分析了毒素对不同抗性的板栗品种愈伤组织病程相关蛋白、植物保卫素及游离脯氨酸含量的影响。研究表明:在较低浓度毒素处理范围内(5~100μg/m L),板栗愈伤组织内的游离脯氨酸含量、植物保卫素含量、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性与Cp-毒素有关,抗病品种酶活性升幅大于感病品种;当毒素质量浓度高于100μg/m L后,植物保卫素含量以及几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性下降,感病品种降幅大于抗病品种,而游离脯氨酸含量在品种间变化不大。说明在毒素低浓度处理下不同品种抗性物质含量都有所增加,证明了几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶、植物保卫素是板栗愈伤组织抵抗病原菌毒素的内在机制,而游离脯氨酸含量变化不是引起品种抗性差异的重要因子。 展开更多
关键词 栗疫菌 板栗愈伤组织 Cp-毒素 病程相关蛋白 抗性物质
梢枯病菌蛋白毒素对杂交竹线粒体结构和功能的影响 预览
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作者 谯天敏 +2 位作者 韩珊 朱天辉 车冠男 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期119-125,共7页
采用不同检测技术(荧光偏振法、中性红法、氧电极法等)测定梢枯病菌蛋白毒素对不同杂交竹品种嫩枝离体线粒体膜的流动性、表面电位、肿胀度、聚集度及脂质过氧化物 MDA、辅酶 Q10(CoQ10)含量、线粒体呼吸功能的影响。结果表明:蛋... 采用不同检测技术(荧光偏振法、中性红法、氧电极法等)测定梢枯病菌蛋白毒素对不同杂交竹品种嫩枝离体线粒体膜的流动性、表面电位、肿胀度、聚集度及脂质过氧化物 MDA、辅酶 Q10(CoQ10)含量、线粒体呼吸功能的影响。结果表明:蛋白毒素胁迫使4个竹品种的线粒体膜流动性减弱、表面电位减低、肿胀度增大、聚集度降低; CoQ10含量下降,MDA含量增加,细胞色素C氧化酶( CCO)、ATPase活性亦下降,呼吸控制率( RCR)和磷氧比( P/O)明显降低。说明蛋白毒素对杂交竹嫩枝线粒体膜造成损伤,线粒体脂质过氧化程度增加,膜完整性被破坏,呼吸作用受抑制。以上各项指标中,抗病品种(3#和6#)受蛋白毒素的影响均显著低于感病品种(8#和30#)。 展开更多
关键词 蛋白毒素 线粒体 生物物理特性 呼吸作用
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耐福美双桑氏链霉菌生物型的选育 预览 被引量:2
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作者 余琴 朱天辉 +1 位作者 安晓龙 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期133-136,142共5页
为选育抗药性桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii),采用紫外线照射与药物培养基驯化结合法,筛选出MV-1、MV-2、MV-3、MV-4、MV-5等5株能在含有200 mg/L福美双的培养基上生长的抗性突变株。结果显示:出发原菌株KJ40对福美双最敏感,EC5... 为选育抗药性桑氏链霉菌(Streptomyces sampsonii),采用紫外线照射与药物培养基驯化结合法,筛选出MV-1、MV-2、MV-3、MV-4、MV-5等5株能在含有200 mg/L福美双的培养基上生长的抗性突变株。结果显示:出发原菌株KJ40对福美双最敏感,EC50为12.82 mg/L,致死浓度为40 mg/L。5株突变株中,MV-2和MV-5的EC50值最高,为129.28 mg/L,抗性水平最高,达10.09;MV-1最低,EC50为100.13 mg/L,抗性水平7.81。通过抑菌效果测定发现,MV-2和MV-4对紫丝核菌(Rhizoctonia crocorum)抑菌力显著高于KJ40,抑菌率为80.39%和76.08%,分别比KJ40提高了10.59%和6.28%;MV-5无抑菌效果;MV-1和MV-3对病原菌的抑菌效果与KJ40无显著差异。拮抗活性高于亲本的MV-2和MV-4与福美双协同使用,抑菌效果高于菌株和福美双药液单独使用。 展开更多
关键词 桑氏链霉菌 抗福美双 紫外线诱变
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