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脑心肌炎病毒VP2基因真核表达质粒的构建
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作者 张海霞 王兴陇 +8 位作者 王丹 李倩 韩玉梅 赵克学 梁浩勤 邓盈盈 李向茸 李琼 冯若飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期139-143,共5页
目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检... 目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检测EMCV VP2基因mRNA的转录情况,免疫组化法及Western blot法检测EMCV VP2蛋白的表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pcDNA3. 1-VP2构建正确。EMCV VP2基因m RNA及蛋白可在CHO细胞中正常转录及表达,且EMCV VP2蛋白可与兔抗EMCV阳性血清发生特异性结合,主要分布于CHO细胞膜上。结论成功构建了重组质粒pcDNA3. 1-VP2,并有效地在CHO细胞中进行了表达,为EMCV VP2基因体外表达及其功能的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 VP2基因 基因重组 真核表达 CHO细胞
泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 邓盈盈 谢晶莹 +5 位作者 韩玉梅 张海霞 李向茸 李琼 魏锁成 冯若飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期355-362,共8页
为建立一种泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为泛素基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中公布的泛素基因序列设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测泛素基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法... 为建立一种泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为泛素基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中公布的泛素基因序列设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测泛素基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法进行条件优化与评价。结果显示,建立的实时荧光定量PCR方法的线性关系好,以质粒标准品构建的标准曲线的相关系数r~2为0.999;灵敏性、特异性及重复性均较高;应用建立的方法对多种种属来源细胞进行检测,能检测出不同类型细胞中泛素的含量。结果表明,成功建立了一种快速、准确检测泛素TaqMan实时荧光定量PCR方法。 展开更多
关键词 泛素 实时荧光定量PCR TAQMAN探针
跨膜蛋白39A基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及评价 预览
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作者 李向茸 王兴陇 +5 位作者 李倩 马瑞仙 张海霞 李琼 马忠仁 冯若飞 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期1958-1964,共7页
为建立一种快速检测跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因的方法,根据GenBank中登录的不同种属TMEM39A基因序列的保守区域,设计并合成1对荧光定量通用性引物,经过条件优化,建立了检测TMEM39A基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示:标准... 为建立一种快速检测跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因的方法,根据GenBank中登录的不同种属TMEM39A基因序列的保守区域,设计并合成1对荧光定量通用性引物,经过条件优化,建立了检测TMEM39A基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示:标准品模板在3.937×10^8~3.937×10^3拷贝·μL^-1范围内呈良好的线性关系,R^2可达0.999;该方法特异性较好,检测灵敏度可达3.937×10^2拷贝·μL^-1;组内和组间变异系数均小于1%,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法能够检测出不同细胞中的TMEM39A含量,具有种属通用性。该研究方法的建立为临床上提供了一种TMEM39A的快速检测和定量分析技术。 展开更多
关键词 跨膜蛋白39A SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 特异性 灵敏性
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鼠源VCAM-1真核表达载体构建及在同源细胞中过表达研究 预览
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作者 王兴陇 李向茸 +6 位作者 李倩 马瑞仙 李生军 李琼 张海霞 马忠仁 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第3期20-24,共5页
构建鼠源VCAM-1基因的真核表达载体,并使其在C2C12细胞中过表达,为相关病毒受体研究奠定基础.采用RT-PCR方法扩增鼠源VCAM-1基因,构建重组载体pcDNA3.1-VCAM-1.通过脂质体法转染至C2C12细胞内;采用实时荧光定量PCR和Western-blot分别检... 构建鼠源VCAM-1基因的真核表达载体,并使其在C2C12细胞中过表达,为相关病毒受体研究奠定基础.采用RT-PCR方法扩增鼠源VCAM-1基因,构建重组载体pcDNA3.1-VCAM-1.通过脂质体法转染至C2C12细胞内;采用实时荧光定量PCR和Western-blot分别检测目的基因和蛋白的过表达情况.应用间接免疫荧光实验分析VCAM-1在细胞中的定位.构建的重组质粒pcDNA3.1-VCAM-1转染C2C12细胞后,实验组VCAM-1基因和蛋白表达均显著高于对照组细胞(P<0.01),且主要表达定位于胞浆中.结果表明,实验成功地构建了鼠源VCAM-1真核表达载体,并在同源细胞中实现过表达. 展开更多
关键词 VCAM-1 C2C12细胞 过表达
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牛轮状病毒VP4、VP6、VP7基因分子生物学研究进展 预览
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作者 梁浩勤 李琼 +4 位作者 赵克学 邓盈盈 赖露菊 魏锁成 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第3期33-39,共7页
轮状病毒是引起幼龄动物急性胃肠炎和腹泻的主要病因.犊牛感染轮转病毒会对集中饲养的牛群造成严重的经济损失,制约养牛产业的发展.轮状病毒的11个节段基因分别编码了6种结构蛋白(VP1-VP4,VP6,VP7)和6种非结构蛋白(NSP1-NSP6),其中VP4和... 轮状病毒是引起幼龄动物急性胃肠炎和腹泻的主要病因.犊牛感染轮转病毒会对集中饲养的牛群造成严重的经济损失,制约养牛产业的发展.轮状病毒的11个节段基因分别编码了6种结构蛋白(VP1-VP4,VP6,VP7)和6种非结构蛋白(NSP1-NSP6),其中VP4和VP7与病毒的毒力密切相关,分别决定了病毒的P型和G型.VP6是病毒的特异性抗原,也是决定轮状病毒分组的重要蛋白.通过综述VP4、VP6、VP7的分子特征及研究进展,对目前开发的疫苗产品进行了简述. 展开更多
关键词 牛轮状病毒 VP4 VP6 VP7 疫苗
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《微生物学实验》模块化教学体系的问卷调查与分析 预览
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作者 王冬梅 雒晓芳 +2 位作者 程燕 李琼 刘翊中 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第2期83-86,共4页
模块化微生物学实验教学体系以开展综合探索性大实验、建立以实验技能考核为主的多元量化考核制度等为主要内容,通过三年的实践,对学生的问卷调查分析表明:此教学体系可激发学生的学习兴趣,强化基本实验技能,培养学生发现、分析和处理... 模块化微生物学实验教学体系以开展综合探索性大实验、建立以实验技能考核为主的多元量化考核制度等为主要内容,通过三年的实践,对学生的问卷调查分析表明:此教学体系可激发学生的学习兴趣,强化基本实验技能,培养学生发现、分析和处理问题的能力,提升学生良好的综合素质,达到了实施该教学模式的预期目标. 展开更多
关键词 微生物课程 模块化教学 问卷调查与分析
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习近平党的纪律建设思想论析 预览
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作者 李琼 《理论观察》 2018年第10期18-20,共3页
纪律严明是党的光荣传统和独特优势,加强纪律建设是全面从严治党的治本之策。习近平党的纪律建设思想是习近平新时代中国特色社会主义思想的重要组成部分,是新时代解决党内突出纪律问题的迫切需要。利用文献研究法和理论联系实际研究法... 纪律严明是党的光荣传统和独特优势,加强纪律建设是全面从严治党的治本之策。习近平党的纪律建设思想是习近平新时代中国特色社会主义思想的重要组成部分,是新时代解决党内突出纪律问题的迫切需要。利用文献研究法和理论联系实际研究法,在探讨习近平党的纪律建设思想的理论渊源的基础上,较为全面的梳理了习近平党的纪律建设思想的深刻内涵,阐述了重大意义。 展开更多
关键词 习近平 党的纪律建设 深刻内涵 重大意义
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重组人白细胞介素7在HEK293细胞中稳定分泌表达 预览
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作者 李向茸 王兴陇 +5 位作者 令瑛 徐雷 李琼 张海霞 包晓婧 冯若飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第5期24-28,共5页
通过构建人白细胞介素7的重组真核表达载体,转染HEK293细胞,实现IL-7在HEK293细胞中的稳定分泌表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。从质粒p LV-CMV-EF1-GP-r IL-7中扩增人IL-7全长基因,并将其构建于pc DNA3.1真核表达载体上。利用脂质体... 通过构建人白细胞介素7的重组真核表达载体,转染HEK293细胞,实现IL-7在HEK293细胞中的稳定分泌表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。从质粒p LV-CMV-EF1-GP-r IL-7中扩增人IL-7全长基因,并将其构建于pc DNA3.1真核表达载体上。利用脂质体法将重组质粒转染HEK293细胞,经G418筛选及单克隆,获得稳定分泌表达IL-7的HEK293-r IL-7细胞系。成功构建真核表达质粒pc DNA3.1-r IL-7,并实现IL-7在HEK293细胞上的稳定分泌表达,最终获得了1株表达量较高的细胞株,命名为HEK293-IL7-2G3细胞,培养48 h的细胞上清中IL-7的含量为3.2 ng/m L。为进一步实现人白细胞介素7在哺乳动物细胞中的分泌表达及药物开发奠定基础。 展开更多
关键词 白细胞介素7 转染 绿色荧光蛋白 分泌表达
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微生物学实验课教学质量提升之探讨 预览
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作者 王冬梅 雒晓芳 +2 位作者 程燕 李琼 刘翊中 《西北民族大学学报:自然科学版》 2017年第2期88-90,95共4页
注重学生基本实验技能的训练,采用多媒体、启发式以及反馈互动式等相结合的教学方法,建立以实验技能考核为主的多元量化考核方式等改革措施,激发了学生的学习兴趣和创新精神,提高了学生发现问题、分析问题和解决问题的能力,从而也提高... 注重学生基本实验技能的训练,采用多媒体、启发式以及反馈互动式等相结合的教学方法,建立以实验技能考核为主的多元量化考核方式等改革措施,激发了学生的学习兴趣和创新精神,提高了学生发现问题、分析问题和解决问题的能力,从而也提高了微生物实验课的教学质量. 展开更多
关键词 微生物学 实验课 实验技能 教学质量
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脑心肌炎病毒VP1基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫效果的研究
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作者 张海霞 令瑛 +8 位作者 杨术伟 凡静静 李琼 李向茸 马玉梅 包晓婧 魏嘉 马忠仁 冯若飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期315-321,共7页
为构建脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因的重组腺病毒,以期为EMCV疫苗研制提供试验依据。扩增EMCV VP1基因并与载体pYr-adshuttle-4连接构建pYr-ads-4-VP1穿梭载体;穿梭质粒通过体外重组与腺病毒载体进行重组,获得pAd-VP1-EGFP重组腺病毒载... 为构建脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因的重组腺病毒,以期为EMCV疫苗研制提供试验依据。扩增EMCV VP1基因并与载体pYr-adshuttle-4连接构建pYr-ads-4-VP1穿梭载体;穿梭质粒通过体外重组与腺病毒载体进行重组,获得pAd-VP1-EGFP重组腺病毒载体,将此载体于HEK293细胞中包装最终成功获得rAd-VP1-EGFP重组腺病毒,并测定其TCID50;构建的重组腺病毒感染细胞后在基因水平、蛋白水平对VP1进行检测;最后通过对小鼠免疫重组腺病毒后进行EMCV攻毒试验,验证其免疫效果。结果显示,成功构建了EMCV VP1基因重组腺病毒rAd-VP1-EGFP,测得其TCID50为10-8.5/mL;感染细胞后基因水平及蛋白水平均可检测到VP1基因的表达;重组腺病毒免疫小鼠后的存活情况表明,重组腺病毒对小鼠有较好的免疫效果,且二次免疫后保护率显著高于单次免疫。结果表明,本试验成功制备了EMCV基因重组腺病毒,且对小鼠具有较好的免疫效果,可为进一步开发EMCV基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 结构蛋白VP1 腺病毒 免疫效果
膜联蛋白A2对脑心肌炎病毒在BHK-21细胞中增殖的影响
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作者 李琼 包晓婧 +6 位作者 张海霞 马玉梅 李向茸 令瑛 魏嘉 马忠仁 冯若飞 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期331-337,共7页
膜联蛋白A2是一种参与调节多种病毒增殖的重要宿主蛋白。本研究通过构建过表达膜联蛋白A2的BHKAnxa2细胞系及瞬时敲低膜联蛋白A2,探讨膜联蛋白A2对脑心肌炎病毒在BHK-21细胞中增殖的影响。通过RT-PCR从BHK-21细胞中扩增膜联蛋白A2全长cD... 膜联蛋白A2是一种参与调节多种病毒增殖的重要宿主蛋白。本研究通过构建过表达膜联蛋白A2的BHKAnxa2细胞系及瞬时敲低膜联蛋白A2,探讨膜联蛋白A2对脑心肌炎病毒在BHK-21细胞中增殖的影响。通过RT-PCR从BHK-21细胞中扩增膜联蛋白A2全长cDNA,测序正确后克隆入pcDNA3.1整合表达载体中;用重组载体pcDNA3.1-Anxa2转染BHK-21细胞,经G418筛选获得抗性克隆,qRT-PCR和Western blot试验证明BHKAnxa2过表达膜联蛋白A2;EMCV感染试验证明BHK-Anxa2细胞中病毒滴度高于对照组。通过siRNA降低BHK-21细胞中膜联蛋白A2表达,EMCV感染试验证明膜联蛋白A2表达下降后EMCV增殖也随之下降。以上试验结果表明鼠膜联蛋白A2表达改变可导致病毒在BHK-21细胞中的增殖发生变化,提示膜联蛋白A2与EMCV在BHK-21细胞中的增殖相关。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒(ECMV) 膜联蛋白A2 BHK-21细胞 SIRNA
蚀斑法分离纯化BHV-1和BPIV-3混合病毒 预览
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作者 马玉梅 张海霞 +6 位作者 包晓婧 令瑛 李向茸 李琼 魏嘉 李倬 冯若飞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期37-38,42共3页
利用蚀斑试验方法对牛疱疹病毒1型(BHV-1)和牛副流感病毒3型(BPIV-3)的混合病毒进行分离纯化及鉴定,为BHV-1、BPIV-3感染的诊断提供科学依据。将不同稀释度的BHV-1和BPIV-3混合病毒接种至牛肾原代细胞,加营养琼脂培养,产生蚀斑后扩... 利用蚀斑试验方法对牛疱疹病毒1型(BHV-1)和牛副流感病毒3型(BPIV-3)的混合病毒进行分离纯化及鉴定,为BHV-1、BPIV-3感染的诊断提供科学依据。将不同稀释度的BHV-1和BPIV-3混合病毒接种至牛肾原代细胞,加营养琼脂培养,产生蚀斑后扩增并RT-PCR鉴定。将纯化后毒液分别进行二次蚀斑纯化及鉴定。结果 BHV-1和BPIV-3混合病毒第6-7 d可产生明显蚀斑。鉴定阳性的BHV-1和BPIV-3进行二次蚀斑,鉴定结果均为阳性,且分离的两种病毒TCID_(50)测定结果为10-(-8.5)/0.1 m L、10-(-6.5)/0.1 m L。首次通过蚀斑试验,成功分离并得到了两株毒力较高且纯化的BHV-1和BPIV-3病毒株。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒1型 牛副流感病毒3型 蚀斑试验 病毒分离 病毒纯化
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CD63基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及评价 被引量:1
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作者 包晓婧 张海霞 +7 位作者 李琼 马玉梅 令瑛 魏嘉 李向茸 徐雷 冯若飞 马忠仁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1141-1146,共6页
为建立一种CD63基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为CD63基因的动态检测提供有效的实验手段,根据GenBank中公布的CD63基因序列,设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测CD63基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法... 为建立一种CD63基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为CD63基因的动态检测提供有效的实验手段,根据GenBank中公布的CD63基因序列,设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测CD63基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法进行条件优化。结果显示,建立的实时荧光定量PCR方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数r2为0.997;灵敏性及重复性均较高;应用建立的方法对多种种属来源细胞进行检测,能检出不同类型细胞中CD63的含量。结果表明,成功建立了一种快速、准确检测CD63基因的TaqMan实时荧光定量PCR方法。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR TAQMAN探针 CD63
缺氧诱导因子-1在病毒感染中的作用 预览
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作者 李琼 冯若飞 +1 位作者 乔自林 马忠仁 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第1期88-91,共4页
缺氧诱导因子-1(hypoxia—inducible factor-1,HIF-1)是一种由β亚单位和α亚单位组成的异二聚体转录因子,其表达产物参与细胞的许多生理过程。越来越多的研究提示HIF-1在病毒感染中发挥着重要作用。通过检索相关文献,对人病毒感染... 缺氧诱导因子-1(hypoxia—inducible factor-1,HIF-1)是一种由β亚单位和α亚单位组成的异二聚体转录因子,其表达产物参与细胞的许多生理过程。越来越多的研究提示HIF-1在病毒感染中发挥着重要作用。通过检索相关文献,对人病毒感染中HIF-1活性改变及其在病毒感染中的作用进行了综述,为研究HIF-1在病毒感染中的作用提供参考。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子-1(HIF-1) 人免疫缺陷病毒-1 丙型肝炎病毒 戊型肝炎病毒 呼吸道合胞病毒
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GnRH激动剂主动免疫母羊对生殖激素分泌的作用 预览 被引量:4
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作者 魏锁成 巩转娣 +6 位作者 欧阳霞辉 董江陵 李琼 韦敏 谢坤 张锋 孙建龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 132-136,共5页
目的:探讨GnRH激动剂(GnRHa)主动免疫对绵羊生殖激素合成与分泌的作用,并深入研究GnRH-A免疫调节动物生殖功能的机理。方法:42只5~6月龄母绵羊(Ovis aries)随机分为6组(n=7),EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0和14天皮下注射阿拉瑞... 目的:探讨GnRH激动剂(GnRHa)主动免疫对绵羊生殖激素合成与分泌的作用,并深入研究GnRH-A免疫调节动物生殖功能的机理。方法:42只5~6月龄母绵羊(Ovis aries)随机分为6组(n=7),EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0和14天皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300、0、7、14和21天各一次,共4次;对照组在0和14天皮下注射抗原溶媒(除不用阿拉瑞林外,其余成分和制备方法与阿拉瑞林抗原相同)2.0 ml。无菌采集不同时段的血液,分离血清。以ELISA测定血清GnRH抗体浓度,用激素检测试剂盒(ELISA)分别测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果:①阿拉瑞林首次免疫7天后,各实验组的抗体浓度逐渐升高,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在28、28和35天达到峰值(P〈0.05),EG-IV和EG-V则在在45天达到峰值(P〈0.01),至60天时仍明显高于对照组(P〈0.05)。14~60天间EG-IV和EG-V抗体浓度均高于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ(P〈0.05)。②EG-Ⅰ、EG-Ⅱ的GnRH在21和28天抵谷值(P〈0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45天抵谷值(P〈0.01),且以EG-Ⅴ为最低。谷值之后逐渐上升趋势,70天时达到免疫注射前水平。③实验组血清FSH浓度始终高于对照组(P〈0.05)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于28、28和35天达到峰值(P〈0.05),而EG-IV和EG-V在60天达到高峰值(P〈0.01)。④实验组绵羊血清LH呈下降趋势,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在21、21和28天达到谷值(P〈0.01),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35天达到谷值(P〈0.01)。35天时EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。⑤各组的血清E2含量无显著差异。结论:GnRH激动剂(阿拉瑞林)抗原主动免疫可促进GnRH抗体的生成,抑制母羊GnRH和LH的合成与分泌,增强FSH的合成与分泌,且随着注射剂量和注射次数的增加,这种作用更加明显,而对血清E2无明显影响。 展开更多
关键词 促性腺激素释放激素激动剂 阿拉瑞林 生殖激素 绵羊
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Alarelin免疫绵羊对垂体GnRHR、FSHR和LHR基因表达与生殖激素分泌的作用 预览 被引量:3
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作者 魏锁成 巩转娣 +3 位作者 董江陵 谢坤 李琼 韦敏 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第10期1137-1142,共6页
目的探讨GnRHa主动免疫对绵羊腺垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及生殖激素的作用。方法 42只5~6月龄母绵羊均分为6组。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg,0和14 d各1次;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ皮下注射阿拉瑞林抗原200、30... 目的探讨GnRHa主动免疫对绵羊腺垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及生殖激素的作用。方法 42只5~6月龄母绵羊均分为6组。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg,0和14 d各1次;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ皮下注射阿拉瑞林抗原200、300μg,0、7、14和21 d各1次;对照组皮下注射药物的溶媒。于70 d无菌切取腺垂体、子宫及卵巢。实时荧光定量PCR测定GnRHR、FSHR和LHR mRNA的表达。ELISA测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果实验组GnRHR、FSHR和LHR mRNAs的2-(ΔΔCt)值均低于对照组,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ的GnRHR、FSHR和LHR mRNA的2-(ΔΔCt)值低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ(P〈0.05)。EG-Ⅰ和EG-Ⅱ血清GnRH在21和28 d达到谷值(P〈0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45d达到谷值(P〈0.01)。实验组血清FSH始终高于对照组(P〈0.05),EG-IV和EG-V在45和60 d达到峰值(P〈0.01)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ血清LH分别在21、21和28 d抵至谷值(P〈0.05),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35 d抵至谷值(P〈0.01);35 d时,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。结论阿拉瑞林主动免疫可抑制垂体GnRHR、FSHR和LHR mRNAs表达,促进FSH的合成与释放,降低GnRH和LH的合成与释放,增加抗原的注射剂量和次数,作用更明显。 展开更多
关键词 促性腺激素释放激素激动剂 受体 表达 生殖激素 绵羊
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微生物学实验教学新体系的构建 预览 被引量:5
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作者 董开忠 刘翊中 +2 位作者 王冬梅 雒晓芳 李琼 《实验科学与技术》 2010年第2期 88-90,共3页
实验教学是培养学生实践能力和创新精神的重要教学环节。文章旨在探索培养学生创新能力的微生物学实验教学新体系,通过对实验教学体系、内容、方法和考核方法等的改革,构建了新的微生物学实验教学体系。实践证明,新的实验教学体系成... 实验教学是培养学生实践能力和创新精神的重要教学环节。文章旨在探索培养学生创新能力的微生物学实验教学新体系,通过对实验教学体系、内容、方法和考核方法等的改革,构建了新的微生物学实验教学体系。实践证明,新的实验教学体系成效明显,是培养学生创新能力的有效方式。 展开更多
关键词 微生物学 实验教学 课程体系 创新能力
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新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性 预览 被引量:7
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作者 马忠仁 冯玉萍 +5 位作者 李明生 冯若飞 乔自林 李琼 侯兰新 李倬 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第41期 8171-8174,共4页
背景:现已证实,人肌腱、牛肌腱、鼠尾、猪皮、新生牛跟腱制备的胶原蛋白海绵有良好的细胞相容性。目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其与羔羊肾成纤维细胞的相容性。设计、时间及地点:对比观察实验,于20... 背景:现已证实,人肌腱、牛肌腱、鼠尾、猪皮、新生牛跟腱制备的胶原蛋白海绵有良好的细胞相容性。目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其与羔羊肾成纤维细胞的相容性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。材料:出生24h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮,岷县黑裘皮羔羊肾原代成纤维细胞。方法:取新生牛犊皮,经脱毛、胃蛋白酶+冰醋酸联合处理、盐析、透析、冻干后制备胶原蛋白海绵。将海绵与羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(橡胶塞浸提液)。主要观察指标:应用倒置相差显微镜及JVC数码摄像系统观察、拍摄与记录细胞形态、生长情况。培养20,35d,对共培养物进行AO染色,观察细胞在胶原海绵中的增殖情况。培养65d后制石蜡切片,行苏木精-伊红染色,观察细胞在胶原海绵中的生长情况。结果:阳性对照组细胞培养24h细胞圆缩,不贴壁,3d后全部死亡。胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好。随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明。AO染色显示培养20,35d的胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长。苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维。结论:制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的相容性。 展开更多
关键词 新生牛皮 胶原蛋白海绵 羔羊肾细胞 生物相容性 生物材料
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新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性 预览 被引量:2
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作者 马忠仁 冯玉萍 +5 位作者 李明生 冯若飞 乔自林 李琼 侯兰新 李倬 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第26期 5147-5150,共4页
目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其生物学活性与细胞相容性。方法:实验于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。实验方法:①取出生24h内宰杀的新... 目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其生物学活性与细胞相容性。方法:实验于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。实验方法:①取出生24h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮制备胶原蛋白海绵。②将新生牛皮胶原蛋白海绵与黑裘皮羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(橡胶塞浸提液)。实验评估:①应用倒置相差显微镜观察细胞形态。②培养20,35d对细胞与胶原蛋白海绵共培养物进行AO染色观察细胞在胶原海绵中的增殖情况。③培养65d后制石蜡切片,行苏木精-伊红染色观察细胞在胶原海绵中的生长情况。结果:①细胞形态观察结果:阳性对照组细胞培养24h细胞圆缩,不贴壁,3d后全部死亡。胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好。随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明。②细胞在胶原海绵中的增殖情况:吖啶橙-AO染色显示培养20,35d胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长。③细胞在胶原海绵中的生长情况:苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维。结论:制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的生物相容性,无细胞毒性。 展开更多
关键词 新生牛皮 胶原蛋白海绵 黑裘皮羔羊肾细胞 生物相容性
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泡球蚴组织的体外培养及在药物筛选中的应用 预览 被引量:8
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作者 李琼 陈根 +2 位作者 包根书 周海霞 史大中 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第4期 263-265,277,F0003,共5页
目的 建立泡球蚴组织的体外培养模型,对4种药物的体外抗泡球蚴疗效进行初步筛选。方法 泡球蚴组织体外培养9周后,分为7组:阿苯达唑组、汉防己甲素组、己酮可可碱组、苦豆碱组、氧氟沙星组、未用药组和二甲基亚砜组。在加药24h和18d... 目的 建立泡球蚴组织的体外培养模型,对4种药物的体外抗泡球蚴疗效进行初步筛选。方法 泡球蚴组织体外培养9周后,分为7组:阿苯达唑组、汉防己甲素组、己酮可可碱组、苦豆碱组、氧氟沙星组、未用药组和二甲基亚砜组。在加药24h和18d后,分别取样固定并在电子显微镜下观察超微结构。实验期间对囊泡计数。实验结束后,将培养物接种BALB/c小鼠进行活力测试。结果 汉防己甲素和己酮可可碱在体外能抑制泡球蚴的生长(P〈0.005),氧氟沙星对泡球蚴没有作用(P〉0.005),苦豆碱能促进泡球蚴生长。接种各药物组培养物的BALB/c小鼠饲养80d后处死并解剖,发现所有小鼠的腹腔中均有泡球蚴生长。结论 汉防己甲素和己酮可可碱在体外对泡球蚴有一定的抑制作用,氧氟沙星和苦豆碱对寄生虫无治疗作用。活力测试提示所选药物只能抑制寄生虫生长而无杀灭作用。 展开更多
关键词 泡球蚴 体外培养 药物治疗 汉防己甲素 己酮可可碱 苦豆碱 氧氟沙星
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