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少孢节丛孢菌Aoz1基因的生物信息学分析及原核表达条件的优化
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作者 尹相吉 王新芳 +8 位作者 聂福贵 郭少平 钱英红 陈湘江 乔一丹 李泽浩 符江涛 王瑞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期333-340,共8页
为获悉少孢节丛孢菌内蒙古株Aoz1基因的详细信息,以研究捕食线虫性真菌对线虫的作用机制,本试验以捕食线虫性真菌的代表种--少孢节丛孢菌内蒙古株为研究对象,首先扩增其胞外丝氨酸蛋白酶的基因编码序列,并进行生物信息学分析,然后将其... 为获悉少孢节丛孢菌内蒙古株Aoz1基因的详细信息,以研究捕食线虫性真菌对线虫的作用机制,本试验以捕食线虫性真菌的代表种--少孢节丛孢菌内蒙古株为研究对象,首先扩增其胞外丝氨酸蛋白酶的基因编码序列,并进行生物信息学分析,然后将其构建至原核表达载体pET-32a中,再转化至Transetta(DE3)表达感受态细胞中,进行表达条件的优化以及表达产物的纯化。结果表明,少孢节丛孢菌内蒙古株丝氨酸蛋白酶Aoz1基因与已发表的丝氨酸蛋白酶Aoz1基因的同源性为99%,其蛋白具备螺旋结构;在原核系统中进行表达,其最适IPTG诱导浓度为1.5 mmol/L,最佳诱导时间为8 h,确定了重组蛋白的最佳表达条件,并获得了重组蛋白。对该酶基因的分析,为后续有关蛋白酶和捕食线虫性真菌杀灭寄生性线虫机理方面的研究提供了参考资料。 展开更多
关键词 捕食线虫性真菌 少孢节丛孢菌 丝氨酸蛋白酶 Aoz1基因
少孢节丛孢菌Aoz1基因调控区的发掘及分析
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作者 王新芳 尹相吉 +8 位作者 聂福贵 陈湘江 郭宏年 梁萌 罗小平 钱英红 郭少平 王瑞 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第23期21-26,共6页
为了确定少孢节丛孢菌内蒙古株丝氨酸蛋白酶Aoz1基因的潜在启动子区,试验采用透析膜培养的方法培养出少孢节丛孢菌内蒙古株并提取基因组DNA,与NCBI上Aoz1基因进行比对,选定Aoz1基因上游侧翼长度为2 000 bp的序列(命名为AP1)并据此设计引... 为了确定少孢节丛孢菌内蒙古株丝氨酸蛋白酶Aoz1基因的潜在启动子区,试验采用透析膜培养的方法培养出少孢节丛孢菌内蒙古株并提取基因组DNA,与NCBI上Aoz1基因进行比对,选定Aoz1基因上游侧翼长度为2 000 bp的序列(命名为AP1)并据此设计引物,用PCR法扩增该序列并构建至平末端载体后测序,使用启动子在线预测软件Web Promoter Scan Service、NNPP以及CpG岛预测软件EMBOSS对AP1进行生物信息学分析。结果表明:所提取的基因组DNA完整性良好;成功构建出重组平末端质粒PEASY-AP1-Blunt,测序结果正确;通过相应软件预测出AP1含有的启动子基本元件,如TATA框、转录起始位点(TSS位点),以及参与Aoz1基因表达调控的转录因子结合位点Sp1、GHO、E2F、T-Ag和GCF等,同时确定了CpG岛的Obs/Exp值与GC含量的百分比分布。说明AP1序列具有启动子的基本结构和特点,初步确定了少孢节丛孢菌Aoz1基因的潜在启动子区。 展开更多
关键词 少孢节丛孢菌 Aoz1基因 PCR 启动子 生物信息学分析 启动子预测
厚垣普可尼亚菌胞外蛋白酶的诱导及发酵液生化性质的研究
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作者 梁萌 +6 位作者 王新芳 王文蕊 郭宏年 钱英红 陈湘江 王瑞 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第2期211-216,共6页
为探讨不同培养基对厚垣普可尼亚菌胞外蛋白质的诱导效果及相应发酵液的生化性质,以更好地利用该菌对家畜寄生性线虫进行生物防治,在本实验室前期研究的基础上,设计使用3种常用真菌液体培养基对厚垣普可尼亚菌进行发酵培养,并检测发酵... 为探讨不同培养基对厚垣普可尼亚菌胞外蛋白质的诱导效果及相应发酵液的生化性质,以更好地利用该菌对家畜寄生性线虫进行生物防治,在本实验室前期研究的基础上,设计使用3种常用真菌液体培养基对厚垣普可尼亚菌进行发酵培养,并检测发酵液的蛋白质质量浓度、蛋白酶活性,磷酸酶活性及杀虫效力等,筛选出适合该菌液体培养的最佳培养基。结果表明,在3组培养基中,LMZ培养基组的蛋白质种类最丰富,蛋白质质量浓度(2 320 mg/L±10.00 mg/L)、蛋白酶活性(2.95 U/m L±0.23 U/m L)与磷酸酶活性[1.546 U/100 m L±0.035 U/100 m L(酸性磷酸酶)和0.516 U/100 m L±0.069 U/100 m L(碱性磷酸酶)]都较高,对线虫的杀虫率也是3种培养基中最高的,可达60%,与其他各组间差异极显著(P〈0.01)。因此从生物防治的角度,在试验的3种培养基中,以LMZ液体培养基为最佳选择。这一发现可为今后对厚垣普可尼亚菌液体发酵培养、杀虫物质的产生以及作用机制进行深入探究提供重要基础资料。 展开更多
关键词 卵寄生性真菌 捕食线虫性真菌 厚垣普可尼亚菌 胞外蛋白质 发酵液 杀虫作用
利用MTT法检测活体线虫的主要影响因素及可行性研究
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作者 王瑞 +6 位作者 梁萌 王新芳 王文蕊 陈林军 钱英红 陈湘江 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1711-1715,共5页
MTT法是一种灵敏、快速和便捷的计数生物活细胞的方法。为探讨这一方法用于计数活体线虫的主要影响因素和可行性,本试验以秀丽新杆线虫为研究对象,对MTT法检测秀丽新杆线虫的检测波长、MTT的用量、溶解用DMSO用量和与药物作用时间等主... MTT法是一种灵敏、快速和便捷的计数生物活细胞的方法。为探讨这一方法用于计数活体线虫的主要影响因素和可行性,本试验以秀丽新杆线虫为研究对象,对MTT法检测秀丽新杆线虫的检测波长、MTT的用量、溶解用DMSO用量和与药物作用时间等主要影响因素进行分析,并将MTT法检测结果与显微镜直接镜检计数法结果比较。结果表明:甲瓒(Formazan)生成量与线虫活虫体数呈正相关;在试验反应体系中,MTT为10g/L,反应3h时,Formazan的最大吸收波长为550nm,溶解用DMSO最佳用量为150μL,与药物作用时间为24h;MTT法检测和直接镜检结果相似。结果表明,MTT法可用于秀丽新杆线虫虫体等的计数,且可以大大缩短检测的时间,有效减少人力的消耗,结果准确性也较高,对大批量的进行药物或其他物质对虫体活力作用的研究具有重要积极意义。 展开更多
关键词 秀丽新杆线虫 线虫计数 MTT 甲瓒
捕食性真菌Duddingtoniaflagrans捕食马圆线虫幼虫动态观察 预览
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作者 李军燕 罗宏亮 +6 位作者 王瑞 莲茹 赵治国 张伟 李斌 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期122-125,共4页
为探讨捕食性真菌Duddingtonia印agrans在捕食线虫的过程中产生的细微变化,如捕食器的形成过程,捕获虫体前后的变化等,利用线虫三期幼虫作为诱导物,在玻片培养基中刺激捕食性真菌产生捕食器,然后对其捕食线虫过程进行了适时动态的... 为探讨捕食性真菌Duddingtonia印agrans在捕食线虫的过程中产生的细微变化,如捕食器的形成过程,捕获虫体前后的变化等,利用线虫三期幼虫作为诱导物,在玻片培养基中刺激捕食性真菌产生捕食器,然后对其捕食线虫过程进行了适时动态的观察。结果显示,接种有较强活力的线虫三期幼虫2h后捕食器,即菌环开始形成,而后联合形成菌网;4h后虫体被捕食器捕获,24h后线虫即被完全致死;5d后,虫体发生皱缩直至完全消解。D.flagrans还可以自发产生捕食器(菌环),显示了其较强的捕食线虫的效率和能力。本研究为阐明捕食性真菌捕食机制提供了重要的参考依据。 展开更多
关键词 捕食线虫真菌 Duddingtoniaflagrans 马圆线虫3期幼虫 生物防治 捕食器
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互联网金融背景下商业银行经营策略研究 预览
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作者 刘兴维 +1 位作者 张静 《北方经贸》 2018年第8期91-92,共2页
商业银行凭借着政策、信用发展状况等诸多有利的发展条件在我国经济中占据重要地位.但随着互联网金融公司出现,大数据、云计算等现代网络技术的广泛运用,微信、支付宝等支付平台的出现以及其业务的拓展,使传统银行的经营业务被分割,对... 商业银行凭借着政策、信用发展状况等诸多有利的发展条件在我国经济中占据重要地位.但随着互联网金融公司出现,大数据、云计算等现代网络技术的广泛运用,微信、支付宝等支付平台的出现以及其业务的拓展,使传统银行的经营业务被分割,对传统经营模式所代表的商业银行造成了冲击.现以互联网金融的大环境为研究背景、以商业银行经营模式的转型为研究对象、以商业银行面对互联网金融的挑战所应确立的转型目标,提出以市场为主导,整合传统业务和网上业务,利用自身行业规范的优势,加强与互联网金融企业的合作等经营策略. 展开更多
关键词 互联网背景 技术改革 调整经营策略
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内蒙古部分地区规模化牛场常见寄生虫的流行病学调查 预览
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作者 聂福贵 尹相吉 +5 位作者 钱英红 郭少平 陈湘江 徐跃峰 王瑞 《畜牧与饲料科学》 2018年第8期92-95,共4页
为了解内蒙古部分地区规模化牛场牛体寄生虫的感染情况,从2015—2017年,采用饱和盐水漂浮法、离心沉淀法、麦克马斯特氏虫卵计数法、血清学和免疫学等方法,对内蒙古呼和浩特市和锡林郭勒盟等地的牛场进行了流行病学调查。结果显示:... 为了解内蒙古部分地区规模化牛场牛体寄生虫的感染情况,从2015—2017年,采用饱和盐水漂浮法、离心沉淀法、麦克马斯特氏虫卵计数法、血清学和免疫学等方法,对内蒙古呼和浩特市和锡林郭勒盟等地的牛场进行了流行病学调查。结果显示:所检牛群主要感染的寄生虫为毛圆科线虫和艾美耳球虫;2015年还检出了新孢子虫,个别牧场有肺丝虫检出;未有吸虫、绦虫、血液原虫和毛滴虫检出。在为期3年的调查中,经针对性地治疗,寄生虫的感染率呈显著的下降趋势。这些数据的取得为了解所调查牧场的寄生虫感染状况,并根据调查数据开展相关寄生虫的防治工作提供了重要信息。 展开更多
关键词 寄生虫 感染率 流行病学调查 血清学
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利用套式PCR法检测内蒙古部分地区奶牛隐孢子虫感染情况及其虫种鉴定
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作者 尹相吉 聂福贵 +9 位作者 郭少平 钱英红 陈湘江 徐跃峰 王新芳 郭宏年 梁萌 王文蕊 王瑞 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第16期92-96,共5页
为了调查内蒙古部分地区规模化牛场奶牛隐孢子虫的感染情况及其虫种类型,试验在4个牛场采集了295份奶牛的粪样,从粪便样品中直接提取DNA进行套式PCR法检测,之后将其目的片段克隆至p GM-T载体上进行测序和同源性分析以鉴定虫种。结果表... 为了调查内蒙古部分地区规模化牛场奶牛隐孢子虫的感染情况及其虫种类型,试验在4个牛场采集了295份奶牛的粪样,从粪便样品中直接提取DNA进行套式PCR法检测,之后将其目的片段克隆至p GM-T载体上进行测序和同源性分析以鉴定虫种。结果表明:可通过套式PCR法从阳性粪便的DNA抽提物中扩增出目的条带,大小分别为800 bp和505 bp;对测得的序列和NCBI上已发表的安氏隐孢子虫(C.andersoni)18S rRNA基因序列进行BLAST比对分析,相似度为100%;采集样品的阳性率为14.9%(44/295)。说明套式PCR法可用于检测奶牛粪便样品中的隐孢子虫,且在一定程度上能够很好地反映出奶牛隐孢子虫的感染情况,并能有效鉴别其虫种。 展开更多
关键词 隐孢子虫 套式PCR 奶牛粪便 内蒙古 同源性分析 18S rRNA基因
捕食性真菌Duddingtonia flagrans线虫诱导发酵液的蛋白质组学分析
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作者 梁萌 陈林军 +10 位作者 王新芳 尹相吉 聂福贵 李莹莹 郭宏年 王文蕊 钱英红 郭少平 陈湘江 王瑞 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第9期1093-1101,共9页
捕食性真菌Duddingtonia flagrans杀虫机理是近年来生物防制领域的热点,而对其发酵液中的蛋白质组进行深入分析和研究.有利于揭示D.flagrans杀线虫的生化机制。本研究首次采用基于液质联用的蛋白质组学非标记定量(1abelfree)技术... 捕食性真菌Duddingtonia flagrans杀虫机理是近年来生物防制领域的热点,而对其发酵液中的蛋白质组进行深入分析和研究.有利于揭示D.flagrans杀线虫的生化机制。本研究首次采用基于液质联用的蛋白质组学非标记定量(1abelfree)技术,对线虫幼虫诱导下的D.flagrans发酵液与普通营养菌丝发酵液进行了大规模蛋白质表达相对定量分析。结果,共鉴定出蛋白质258个,其中46个为显著差异表达蛋白质。进一步对差异蛋白质进行GO注释,结果表明,经线虫幼虫诱导的D.flagrans发酵液中差异蛋白参与的蛋白功能和生物学过程更加多样。以催化和结合功能为主,同时还参与感知环境刺激、信号转导、过氧化活性及胞壁合成等过程。进一步分析表明,与对照组相比,过氧化氢酶和三羧酸循环中柠檬酸甲酯合酶前体上调表达加快了有氧呼吸,推测D.flagrans分泌胞外蛋白酶还需要氧化应激。此外,丝氨酸酶与酪氨酸酶前体显著差异表达.可能该类酶是D.flagrans侵染线虫的重要毒力因子。KEGG代谢通路分析表明,差异蛋白还主要参与了糖、脂质和氨基酸等初级产物以及次级代谢物的合成与代谢过程。通过对差异蛋白质组的深入解析和研究,有利于揭示D.flagrans对线虫的作用机理,为应用D.flagrans对线虫生物防控提供了强有力的支撑。 展开更多
关键词 捕食性真菌 Duddingtonia flagrans 发酵液 非标记定量蛋白质组学
骆驼福斯盘尾丝虫病组织病理学观察
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作者 于志超 +4 位作者 张伟 李军燕 王瑞 莲茹 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期62-67,共6页
为更有效地对骆驼盘尾丝虫病进行防治,利用流行病学调查和常规病理学观察的方法,对骆驼盘尾丝虫病进行研究。结果表明:内蒙古阿拉善左旗骆驼盘尾丝虫病平均感染率为85.4%,感染强度为1~15峰-1,虫体形成的结节分布在骆驼的颈项韧带处;共... 为更有效地对骆驼盘尾丝虫病进行防治,利用流行病学调查和常规病理学观察的方法,对骆驼盘尾丝虫病进行研究。结果表明:内蒙古阿拉善左旗骆驼盘尾丝虫病平均感染率为85.4%,感染强度为1~15峰-1,虫体形成的结节分布在骆驼的颈项韧带处;共收集到209个结节,它们的形态和质地各不相同,软的结节内形成纤维组织囊腔,硬的结节内形成钙化灶;骆驼年龄段不同,结节的分布呈不同变化;病理组织学观察显示,囊腔周围有各种炎性细胞侵润,囊腔内有不同状态的雌虫虫体,骆驼盘尾丝虫病表现为骆驼的寄生虫性肉芽肿。 展开更多
关键词 福斯盘尾丝虫 骆驼 流行病学调查 病理组织学观察
内蒙古三个双峰驼主产区的蝇种比较研究 预览
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作者 赵治国 +6 位作者 莲茹 顾巍 王瑞 张伟 成含波 秦世昌 《四川动物》 北大核心 2017年第4期456-459,共4页
为了研究双峰驼Camelus bactrianus斯氏副柔线虫病传播媒介——吸血蝇的分布,对内蒙古阿拉善盟、乌兰察布市和巴彦淖尔市3个双峰驼主产区的蝇类进行了网捕,对捕捉到的7 153只蝇进行了形态学鉴定,共鉴定出9科17属25种,其中3种为吸血蝇,... 为了研究双峰驼Camelus bactrianus斯氏副柔线虫病传播媒介——吸血蝇的分布,对内蒙古阿拉善盟、乌兰察布市和巴彦淖尔市3个双峰驼主产区的蝇类进行了网捕,对捕捉到的7 153只蝇进行了形态学鉴定,共鉴定出9科17属25种,其中3种为吸血蝇,即西方角蝇Haematobia irritans、截脉角蝇H.titillans和厩螫蝇Stomoxys calcitrans;比较分析了3个地区双峰驼生活环境的优势蝇种、蝇种多样性指标及相似程度,发现3个地区的优势蝇种各不相同:蝇种丰富度指数以巴彦淖尔市最高;物种多样性指数和均匀度指数均较低,以阿拉善盟最高、巴彦淖尔市最低;阿拉善盟蝇种与其他2个地区极不相似,巴彦淖尔市蝇种与乌兰察布市中等不相似。 展开更多
关键词 内蒙古 双峰驼 形态学鉴定 蝇种 分布
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骆驼斯氏副柔线虫病传播媒介西方角蝇和截脉角蝇各虫态的系统形态学研究 被引量:1
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作者 邓侨 莲茹 +4 位作者 王瑞 李斌 张伟 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1077-1083,共7页
本研究旨在完善西方角蝇和截脉角蝇各虫态的系统形态学资料,为野外采集两种角蝇各虫态样本的分类鉴定提供理论依据,进而为研究斯氏副柔线虫在角蝇体内发育过程,以及制定防控骆驼斯氏副柔线虫病的有效措施等奠定基础。通过实验室人工... 本研究旨在完善西方角蝇和截脉角蝇各虫态的系统形态学资料,为野外采集两种角蝇各虫态样本的分类鉴定提供理论依据,进而为研究斯氏副柔线虫在角蝇体内发育过程,以及制定防控骆驼斯氏副柔线虫病的有效措施等奠定基础。通过实验室人工饲养角蝇,收集西方角蝇和截脉角蝇的卵、各龄幼虫、蛹和成蝇,详细观察并描述两种角蝇各虫态的形态结构,以明确两种角蝇各虫态之间的形态学差异。除西方角蝇和截脉角蝇1龄幼虫外,两种角蝇的卵、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和成蝇都存在可识别的形态学差异。本研究详细描述了西方角蝇和截脉角蝇各虫态的形态特征,并确定了多处可用于区分两种角蝇卵、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和成蝇的形态特征差异。 展开更多
关键词 骆驼斯氏副柔线虫病 西方角蝇 截脉角蝇 形态学
一种食线虫性真菌——厚垣普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)ARSEF3539生长特性的研究 预览
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作者 许开华 +4 位作者 王新芳 梁萌 张伟 王瑞 《畜牧与饲料科学》 2017年第4期1-4,共4页
对厚垣普可尼亚(Pochonia chlamydosporia)ARSEF3539真菌的生长特性——菌丝生长过程、形态、分生孢子与厚垣孢子的形成及发育过程进行了研究。通过试验发现,该菌在0.4 g/L玉米粉琼脂固体(CMA)培养基和沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基... 对厚垣普可尼亚(Pochonia chlamydosporia)ARSEF3539真菌的生长特性——菌丝生长过程、形态、分生孢子与厚垣孢子的形成及发育过程进行了研究。通过试验发现,该菌在0.4 g/L玉米粉琼脂固体(CMA)培养基和沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养基2种培养基上生长速度略有不同,SDA培养基上菌丝生长速度快,菌落为厚重的白色棉絮状;CMA培养基上菌丝生长速度略慢,菌落为较单薄的棉絮状。2种培养基上菌丝皆呈放射状生长,菌丝致密,气生菌丝发达,分生孢子梗单个或轮生于菌丝,每个孢子梗有4~5个分支,每个分支顶端分生孢子聚生,孢子透明,呈卵圆或圆形。老的气生菌丝膨大处形成厚垣孢子,厚垣孢子内部砖格状、多室、厚壁。 展开更多
关键词 食线虫性真菌 厚垣普可尼亚菌 生长特性 分生孢子 厚垣孢子
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内蒙古乌审旗地区羊寄生虫感染流行病学调查 预览
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作者 李莹莹 乌翠兰 +9 位作者 李斌 王瑞 贡庆扎布 乌云其其格 陈林军 刘大程 李平安 王凤龙 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第4期55-57,I0003共4页
内蒙古乌审旗地区是一个以畜牧业为主体经济的蒙古族聚居旗县。养羊业是乌审旗畜牧业的传统优势产业之一,目前乌审旗成为全国县域著名的优质羊产业基地。寄生虫病是羊养殖业中最常见的慢性消耗性疾病,羊感染寄生虫会导致生产性能上的损失,
关键词 内蒙古乌审旗 寄生虫感染 养羊业 流行病学调查 慢性消耗性疾病 优势产业 产业基地 寄生虫病
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捕食性真菌Duddingtonia flagrans原生质体获得与再生的荧光标记评价 被引量:1
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作者 张伟 +3 位作者 王瑞 王新芳 梁萌 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期302-310,共9页
为了更准确快捷地评价利用酶解法酶解捕食性真菌Duddingtonia flagrans菌丝产生的原生质体数量及菌丝细胞壁降解情况,采用活体荧光染料羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE),对该捕食性真菌菌... 为了更准确快捷地评价利用酶解法酶解捕食性真菌Duddingtonia flagrans菌丝产生的原生质体数量及菌丝细胞壁降解情况,采用活体荧光染料羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE),对该捕食性真菌菌丝酶解后产生的原生质体进行荧光标记,分别考察了标记浓度、标记时间、孵育温度对原生质体标记效果的影响,并观察CFSE标记后的原生质体再生情况。结果表明CFSE终浓度为10μmol/L,标记时间为15min,孵育温度为36℃,是CFSE标记捕食性真菌原生质体的理想条件,该试验同时表明CFSE不影响原生质体的再生率。CFSE作为一种活细胞示踪荧光探针,可以快速高效地标记捕食性真菌原生质体,该方法为捕食性真菌原生质体制备质量的快速评价提供了新的思路。 展开更多
关键词 羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE) 荧光标记 标记浓度 标记时间 孵育温度 原生质体再生
捕食线虫性真菌-少孢节丛孢菌冻干生物制剂的制备 被引量:1
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作者 陈林军 刘省段 +2 位作者 王瑞 张伟 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1512-1516,共5页
通过在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养少孢节丛孢菌(Arthrobotry soligospora)再转接到玉米粒培养基的方法,对少孢节丛孢菌分生孢子进行培养。在不同时间点,将培养好的分生孢子从培养基上洗脱并进行计数,然后制成... 通过在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养少孢节丛孢菌(Arthrobotry soligospora)再转接到玉米粒培养基的方法,对少孢节丛孢菌分生孢子进行培养。在不同时间点,将培养好的分生孢子从培养基上洗脱并进行计数,然后制成冻干制剂,并观察其复苏情况,从而为少孢节丛孢菌冻干制剂的临床应用提供基础数据。结果显示:通过对少孢节丛孢菌冻干制剂在萌发率、生长率和捕食率三方面的复苏情况观察,少孢节丛孢菌冻干后的分生孢子在接种后4d,萌发率达到最大值79.5%,平均生长率为3.4mm/d,加入虫体后7d捕食率最高,为95.8%,平均每天捕食率为74.0%;少孢节丛孢菌冻干制剂在平均生长率和捕食率方面与对照组相比,差异均不显著(P〉0.1)。结果表明,冻干制剂材料易得,方法简单易行,复苏效果良好,进一步优化后将具有产业化应用的前景。 展开更多
关键词 捕食线虫性真菌 少孢节丛孢菌 孢子培养 冻干制剂
捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组DNA的提取及基因组survey分析
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作者 张伟 王瑞 +6 位作者 王新芳 梁萌 莲茹 李军燕 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期2090-2094,共5页
采用透析膜培养法结合DNA柱式提取法进行基因组DNA提取,同时利用第2代高通量测序技术,分析了捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组概况。结果显示:透析膜培养结合DNA柱式提取法所提取的基因组DNA质量及浓度均能达到测序标准;捕食... 采用透析膜培养法结合DNA柱式提取法进行基因组DNA提取,同时利用第2代高通量测序技术,分析了捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组概况。结果显示:透析膜培养结合DNA柱式提取法所提取的基因组DNA质量及浓度均能达到测序标准;捕食性真菌Duddingtonia尼agrans基因组约为37.6Mb,GC含量为44.95%,基因组杂合度较低。结果表明:透析膜培养法结合柱式法提取其基因组DNA的方法简便可行,为丝状真菌DNA提取,提供了新的思路;基因组survey分析为捕食性真菌Duddingtonia理agrans全基因组精细图谱的绘制奠定了基础。 展开更多
关键词 捕食性真菌 Duddingtonia flagrans 13NA提取 基因组测序 GC含量 杂合度
Duddingtonia flagrans冻干制剂厚壁孢子优化培养及其杀线虫幼虫剂量研究 预览
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作者 陈林军 刘省段 +4 位作者 王瑞 李莹莹 李军燕 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第9期39-45,共7页
【目的】探究捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans冻干制剂厚壁孢子的批量培养方法及其对线虫幼虫的毒杀剂量。【方法】通过玉米粒或大麦粒培养基的单步培养法,以及先在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养7d后继而转接到玉... 【目的】探究捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans冻干制剂厚壁孢子的批量培养方法及其对线虫幼虫的毒杀剂量。【方法】通过玉米粒或大麦粒培养基的单步培养法,以及先在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养7d后继而转接到玉米粒或大麦粒培养基的双步培养法,以培养3~5周后洗脱的每克固体培养基中的厚壁孢子数为依据,对D.flagrans的最优培养方法进行筛选;然后使用最优培养法培养D.flagrans厚壁孢子并将其冻干后用于体外杀线虫幼虫试验,研究D.flagrans冻干制剂的杀线虫幼虫剂量。【结果】培养基质不同时,D.flagrans的菌落颜色有一定差异,玉米粒培养基中的菌落颜色呈微黄色,而大麦粒培养基中的菌落呈白色;D.flagrans的适宜培养时间为3周。采用单步培养法时,玉米粒培养基培养的厚壁孢子数量为2.4×10~5个/g,大麦粒培养基培养的厚壁孢子数量为3.2×10~5个/g;而采用双步培养法时,玉米粒培养基培养的厚壁孢子数量为3.0×10~5个/g,大麦粒培养基培养的厚壁孢子数量为3.5×10^5个/g。D.flagrans冻干制剂杀线虫幼虫剂量的阈值为每克粪便4×10~5个D.flagrans厚壁孢子,相应对线虫幼虫的杀虫率为95.2%。【结论】采用双步培养法培养厚壁孢子并将其制备成冻干制剂,在D.flagrans生物防治寄生性线虫病方面有较好的应用前景。 展开更多
关键词 Duddingtonia flagrans 厚壁孢子 培养优化 线虫幼虫 毒杀剂量
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捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans冻干制剂的杀虫效果
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作者 李莹莹 乔蕾 +5 位作者 王瑞 陈林军 李军燕 连建华 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2310-2314,共5页
本试验通过在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养Duddiugtomia flagrans(D.flagruns)再转接到玉米粒培养基的方法,对D.flagrans厚壁孢子进行培养,之后将其洗脱并制备成冻干制剂,然后对冻干制剂的萌发率和杀虫率进行... 本试验通过在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养Duddiugtomia flagrans(D.flagruns)再转接到玉米粒培养基的方法,对D.flagrans厚壁孢子进行培养,之后将其洗脱并制备成冻干制剂,然后对冻干制剂的萌发率和杀虫率进行观察。结果显示,D.flagrans冻干制剂厚壁孢子在接种玉米粉琼脂培养基(CMA)培养后5d萌发率达到峰值78.3%;经口饲喂绵羊D.flagrans冻干厚壁孢子剂量为1×10^6个/kg时,幼虫平均减少率为81.4%。结果表明,D.flagrans冻干制剂使用方便,复苏和杀虫效果较好,其在生物防制家畜胃肠道线虫病方面有很大的应用前景。 展开更多
关键词 Duddingtonia flagrans 冻干制剂 杀虫效果
细粒棘球蚴线粒体ND1基因的克隆与序列研究 预览
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作者 于晶峰 +4 位作者 李丽 王瑞 莲茹 木兰 《内蒙古师范大学学报:自然科学汉文版》 北大核心 2016年第5期700-702,共3页
为了研究细粒棘球蚴(Echinococcus granulasus)种间遗传标记特点,在内蒙古地区采集羊肝脏中的细粒棘球蚴,或通过手术将患者的包虫剥离囊包后采集细粒棘球蚴,提取虫体DNA,扩增线粒体细胞色素氧化酶1(ND1)基因,将其克隆到PGM-T载体后,... 为了研究细粒棘球蚴(Echinococcus granulasus)种间遗传标记特点,在内蒙古地区采集羊肝脏中的细粒棘球蚴,或通过手术将患者的包虫剥离囊包后采集细粒棘球蚴,提取虫体DNA,扩增线粒体细胞色素氧化酶1(ND1)基因,将其克隆到PGM-T载体后,用PCR技术鉴定阳性菌落,并进行测序.研究结果表明,细粒棘球蚴DNA扩增出的羊株、人株ND1基因序列片段长度为895bp,ND1基因序列稳定保守,无宿主特异性,可作为细粒棘球蚴理想的种间遗传标记. 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 ND1基因 克隆 序列分析 遗传标记
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