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抑制LIF/Stat3信号通路促进小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化 预览 被引量:1
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作者 广 徐岩 +1 位作者 邹传德 王爱玲 《安徽医科大学学报》 北大核心 2017年第5期645-650,共6页
目的研究LIF/Stat3信号通路对小鼠胚胎干细胞(m ESCs)分化成心肌细胞的影响。方法利用m ESCs形成拟胚体(EBs)进行心肌分化。在野生型m ESCs形成EBs的过程中加入Janus激酶(JAK)抑制剂以抑制LIF/Stat3信号通路(JAKi组)。而在融合... 目的研究LIF/Stat3信号通路对小鼠胚胎干细胞(m ESCs)分化成心肌细胞的影响。方法利用m ESCs形成拟胚体(EBs)进行心肌分化。在野生型m ESCs形成EBs的过程中加入Janus激酶(JAK)抑制剂以抑制LIF/Stat3信号通路(JAKi组)。而在融合表达雌激素受体(ER)和Stat3的Stat3ER细胞株进行分化过程中添加4-羟基他莫西酚(4HT)以激活LIF/Stat3信号通路(4HT组)。用qRT-PCR检测心脏特异转录因子NKX2.5、α-肌球蛋白重链(α-MHC)和连接蛋白43(Cx43)以及m ESCs自我更新基因oct4、nanog和Stat3下游基因socs3的表达水平。用Western blot检测和免疫荧光染色法验证α-MHC和Cx43的相对表达。结果免疫荧光结果显示在自发搏动的EBs中出现α-MHC和Cx43的荧光,表明心肌细胞分化成功。随着分化时间的延长,NKX2.5、α-MHC和Cx43的mRNA表达量逐渐增加,至第15天时最为明显,且JAKi组高于对照组(P〈0.01);对照组高于4HT组(P〈0.01)。而nanog、oct4随着分化时间的延长逐渐降低,且JAKi组低于对照组(P〈0.05),而4HT组高于其对照组(P〈0.05)。Socs3的表达量在JAKi组一直较低且低于对照组,在4HT组表达较高且高于对照组(P〈0.01)。Western blot检测结果显示第15天的Cx43和α-MHC蛋白表达量JAKi组明显高于对照组(P〈0.05),4HT组低于其对照组(P〈0.05)。结论抑制LIF/Stat3信号通路促进小鼠胚胎干细胞分化成心肌细胞;激活LIF/Stat3信号通路抑制小鼠胚胎干细胞的心肌细胞分化。 展开更多
关键词 LIF STAT3 小鼠胚胎干细胞 心肌细胞
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CHIR99021和Wnt3a在小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化中的作用 预览
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作者 邹传德 广 王爱玲 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第1期73-78,共6页
目的观察Wnt/β-catenin信号通路激活剂CHIR99021和Wnt3a在小鼠胚胎干细胞(mESCs)向心肌细胞分化中的作用。方法 采用悬浮一步培养法形成拟胚体(EBs),在EBs形成后第2天至第5天分别加入CHIR99021、Wnt3a,命名为CHIR99021组及Wnt3a组... 目的观察Wnt/β-catenin信号通路激活剂CHIR99021和Wnt3a在小鼠胚胎干细胞(mESCs)向心肌细胞分化中的作用。方法 采用悬浮一步培养法形成拟胚体(EBs),在EBs形成后第2天至第5天分别加入CHIR99021、Wnt3a,命名为CHIR99021组及Wnt3a组,将自动分化的EBs作为对照组。用免疫荧光法检测心肌特异性蛋白肌球蛋白重链(α-MHC)、肌钙蛋白T(cTNT)及膜联蛋白43(CX43)的表达。用qRT-PCR检测中胚层标志基因Brachyury、心肌前体细胞标志基因Nkx2.5、心肌细胞特异性标志基因α-MHC、cTnT和Cx43mRNA的表达。用Westernblot法检测α-MHC、cTNT和CX43蛋白表达。结果 免疫荧光法提示各组mESCs能够向心肌细胞分化。在CHIR99021和Wnt3a诱导分化过程中,Brachyury在分化第7天达高峰;Nkx2.5、α-MHC、cTnT和Cx43的mRNA表达量随着分化时间的延长而逐渐增加,第15天增加最为明显,且CHIR99021组和Wnt3a组高于对照组;CHIR99021组优于Wnt3a组(P〈0.05,P〈0.01)。Westernblot检测结果显示CHIR99021组和Wnt3a组α-MHC、cTNT和CX43蛋白表达量明显高于对照组,CHIR99021组高于Wnt3a组。结论 CHIR99021和Wnt3a在分化早期阶段通过活化Wnt/β-catenin信号通路可促进mESCs心肌细胞分化,且CHIR99021促心肌分化作用优于Wnt3a。 展开更多
关键词 CHIR99021 WNT3A 小鼠胚胎干细胞 心肌细胞
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低表达NADH脱氢酶[辅酶Q]铁硫蛋白4对乳鼠心肌细胞线粒体功能的影响 预览
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作者 李杰 王爱玲 广 《安徽医学》 2017年第8期959-962,共4页
目的 探讨低表达NADH脱氢酶[辅酶Q]铁硫蛋白4(NDUFS4)蛋白对乳鼠心肌细胞线粒体功能的影响。方法通过原代培养30只乳鼠心肌细胞,将培养出的心肌细胞80盘简单随机分为siRNA处理组和对照组,每组40盘细胞。siRNA处理组:在乳鼠心肌细胞... 目的 探讨低表达NADH脱氢酶[辅酶Q]铁硫蛋白4(NDUFS4)蛋白对乳鼠心肌细胞线粒体功能的影响。方法通过原代培养30只乳鼠心肌细胞,将培养出的心肌细胞80盘简单随机分为siRNA处理组和对照组,每组40盘细胞。siRNA处理组:在乳鼠心肌细胞上转染NDUFS4 siRNA;对照组:在乳鼠心肌细胞上转染无义siRNA。继续培养48 h后,比较两组细胞在NDUFS4蛋白的表达、线粒体膜电位、细胞活性氧簇(ROS)水平、线粒体钙离子摄取能力和线粒体呼吸控制率上的差异。结果 乳鼠心肌细胞NDUFS4蛋白表达处理组较对照组下调73.58%(P〈0.001),线粒体的膜电位处理组较对照组下降20.49%(P〈0.05),同时ROS水平处理组较对照组上升32.11%(P〈0.001)。乳鼠心肌细胞线粒体钙离子摄取能力处理组较对照组降低33.33%(P〈0.001),细胞最大呼吸速率处理组较对照组下降29.18%(P〈0.05)。结论 NDUFS4在乳鼠心肌细胞线粒体中维持膜电位、ROS的生成、MPTP的开放和能量供应等过程中发挥着重要的功能。 展开更多
关键词 线粒体 心力衰竭 NADH脱氢酶[辅酶Q]铁硫蛋白4 活性氧
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CHIR99021对小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化的双重作用 预览
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作者 广 邹传德 王爱玲 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第12期1733-1737,共5页
目的研究CHIR99021在小鼠胚胎干细胞(m ESCs)分化为心肌细胞的作用。方法运用经典的悬滴培养法促进m ESCs形成拟胚体(EBs)。在不同分化时间段加入糖原合成激酶-3β(GSK-3β)抑制剂CHIR99021,诱导m ESCs向心肌细胞分化,相差显微镜... 目的研究CHIR99021在小鼠胚胎干细胞(m ESCs)分化为心肌细胞的作用。方法运用经典的悬滴培养法促进m ESCs形成拟胚体(EBs)。在不同分化时间段加入糖原合成激酶-3β(GSK-3β)抑制剂CHIR99021,诱导m ESCs向心肌细胞分化,相差显微镜在不同时间点观察不同组EBs搏动百分率。RT-PCR法检测心肌特异性转录因子Nkχ2.5、α-肌球蛋白重链(α-MHC)基因表达水平的变化。Western blot法和免疫荧光染色法检测心肌特异性蛋白c Tn T的表达。实验时将不加入CHIR99021命名为对照组,分化第2~5天和第6~10天加入CHIR99021分别命名为2~5 d组和6~10 d组。结果通过悬滴培养法能够形成EBs,且形成的EBs能够出现自发性搏动并有c Tn T表达。在诱导分化的过程中,第2~5天加入CHIR99021的2~5 d组的搏动EBs百分率比对照组更高,Nkχ2.5、α-MHC基因表达的水平也比对照组高;6~10 d组的结果跟2~5 d组相反。各组中都可通过Western blot和免疫荧光染色法检测到c Tn T的表达,但2~5d组的c Tn T的表达量高于对照组,6~10 d组的c Tn T的表达量低于对照组。结论GSK-3β抑制剂CHIR99021对m ESCs心肌细胞分化具有双重作用,即分化前期(2~5 d)促进分化,可获得更高的分化率,分化后期(6~10 d)结果相反。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 心肌细胞 分化 GSK3Β CHIR99021
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