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游离型HPV16细胞类型特异性增强子片段的变异对启动子活性的影响 预览
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作者 李玲 刘文康 +2 位作者 雍烈 刘湘 任健康 《延安大学学报:医学科学版》 2014年第2期1-4,共4页
目的 研究宫颈癌中游离型HPV16中细胞特异性增强子(cell-type specific enhancer,CTSE)片段的变异对启动子P97活性的影响,探讨CTSE片段变异与游离型HPV16致癌机制的关系.方法 分别构建含HPV16突变型及野生型CTSE片段的重组报道基因载... 目的 研究宫颈癌中游离型HPV16中细胞特异性增强子(cell-type specific enhancer,CTSE)片段的变异对启动子P97活性的影响,探讨CTSE片段变异与游离型HPV16致癌机制的关系.方法 分别构建含HPV16突变型及野生型CTSE片段的重组报道基因载体(pCAT3-Promoter)表达系统,利用脂质体将重组的报道基因载体转染HeLa细胞;ELISA法测定细胞中CAT蛋白表达量的变化,了解变异CTSE片段对启动子活性的影响.结果 与无增强子的CAT报道质粒pCAT3-Promoter相比,插入HPV16 CTSE序列的pCAT3-Promoter重组报道质粒CAT蛋白表达量增加1.5 ~2.5倍;插入突变型CTSE序列的报道载体与插入野生型CTSE序列的报道载体相比,报道基因CAT蛋白表达量增加了约1.6倍.结论 陕西地区宫颈癌组织中HPV16 YY1位点突变的CTSE序列可激活启动子活性,YY1位点的突变与游离型HPV16 DNA致宫颈癌有密切关系. 展开更多
关键词 宫颈癌 游离型HPV16 细胞特异性增强子 YY1位点 启动子活性
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慢性丙型肝炎患者血清prohibitin表达水平的检测 预览 被引量:1
2
作者 寻萌 何谦 +3 位作者 李步荣 党双锁 孙明珠 雍烈 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2014年第9期1069-1071,共3页
目的 检测抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)在慢性丙型肝炎患者血清中的表达水平,为探讨PHB在丙型肝炎病毒(HCV)致病机制中的作用提供临床资料.方法 应用双抗体夹心法ELISA定量检测63例慢性丙型肝炎患者及30例正常体检者血清PHB浓度,同... 目的 检测抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)在慢性丙型肝炎患者血清中的表达水平,为探讨PHB在丙型肝炎病毒(HCV)致病机制中的作用提供临床资料.方法 应用双抗体夹心法ELISA定量检测63例慢性丙型肝炎患者及30例正常体检者血清PHB浓度,同时检测丙型肝炎患者血清病毒滴度及肝功能指标.结果 丙型肝炎患者及正常人血清PHB浓度分别为31.88 ng/L及76.94 ng/L,丙肝患者血清PHB含量明显低于正常人(U=344.00,P=0.000),丙肝患者肝功能指标天冬氨酸转氨酶(AST)、直接胆红素(DBIL)与PHB浓度呈负相关(r=-0.484,P=0.012;r=-0.446,P=0.022).结论 慢性丙型肝炎患者血清PHB含量低于正常人,并与肝损伤的严重程度呈负相关,肝损伤越重,PHB含量越低. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗增殖蛋白 酶联免疫吸附试验 血清
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丙型肝炎患者血清蛋白质组差异表达的初步研究 预览 被引量:2
3
作者 代晓霞 王晓琴 +3 位作者 寻萌 雷金娥 王聪 雍烈 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期210-213,共4页
目的观察丙型肝炎病毒(HCV)患者血清蛋白质组的变化情况,为研究丙型肝炎的发病机制及治疗提供新的线索。方法收集丙型肝炎患者和健康对照者血清,去除血清中高丰度蛋白;应用双向凝胶电泳技术构建2组研究对象血清二维电泳图谱,Image... 目的观察丙型肝炎病毒(HCV)患者血清蛋白质组的变化情况,为研究丙型肝炎的发病机制及治疗提供新的线索。方法收集丙型肝炎患者和健康对照者血清,去除血清中高丰度蛋白;应用双向凝胶电泳技术构建2组研究对象血清二维电泳图谱,Image Master软件分析所得图谱,寻找差异蛋白质点;基质辅助激光解吸电离一飞行时间质谱法对2组间比较所得目标蛋白质点进行质谱鉴定。结果获得了HCV患者血清蛋白质双向电泳图谱,对表达差异2倍以上进行质谱鉴定,共鉴定出15种蛋白质。结论成功鉴定了15个HCV相关蛋白质,为进一步研究其发病机制及治疗手段提供了实验基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎 蛋白质组学 双向电泳 质谱
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金黄色葡萄球菌基因调节系统研究进展 被引量:3
4
作者 宋娟 雍烈 《生命科学》 CSCD 2012年第5期 463-469,共7页
金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌,可以引起许多临床表现不同的感染性疾病。它所致感染的多样性和严重度取决于不同毒力因子的协同表达,而这些数量众多的毒力因子的表达会受到不同调节系统的控制,同时这些调节系统之间也存在着... 金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌,可以引起许多临床表现不同的感染性疾病。它所致感染的多样性和严重度取决于不同毒力因子的协同表达,而这些数量众多的毒力因子的表达会受到不同调节系统的控制,同时这些调节系统之间也存在着复杂的相互作用关系。这些基因调节系统主要有两大类:一类是双组分信号转导系统(如Agr、SaeRS、SrrAB、ArlSR、LytRS、WalKR);另一类是转录因子f如Sar、Rot、MgrA、SigmaB)。它们的协同作用有助于金黄色葡萄球菌对外界环境信号做出反应,调节致病过程中毒力因子在不同情况下的表达。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 基因调节 双组分信号转导系统 转录因子
肿瘤患者真菌医院感染情况及耐药性分析 被引量:6
5
作者 慕玉东 王聪 +1 位作者 王永兴 雍烈 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期 1980-1982,共3页
目的研究肿瘤患者深部真菌感染的病原菌构成特点及抗菌药物敏感性分析,为临床合理应用抗菌药物提供较为科学的依据。方法对205例真菌感染的肿瘤患者进行回顾性分析,真菌的培养和药敏试验严格按照《全国临床检验操作规程》进行。结果肿... 目的研究肿瘤患者深部真菌感染的病原菌构成特点及抗菌药物敏感性分析,为临床合理应用抗菌药物提供较为科学的依据。方法对205例真菌感染的肿瘤患者进行回顾性分析,真菌的培养和药敏试验严格按照《全国临床检验操作规程》进行。结果肿瘤患者真菌医院感染以呼吸道为主,占81.4%,其次是泌尿生殖道,占11.2%;真菌感染以白色假丝酵母菌为主,占75.6%,其次为热带假丝酵母菌,占6.4%;真菌药敏试验结果表明,真菌对于两性霉素B和制霉菌素的敏感性最好,对咪唑类药物的敏感性相对较低。结论重视肿瘤患者真菌感染的病原学检查和药敏试验,能有效控制感染。 展开更多
关键词 肿瘤患者 医院感染 真菌 药敏试验 抗真菌药物
左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达的影响 被引量:3
6
作者 宋娟 雍烈 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第2期 94-97,128,共5页
目的研究左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达的影响及对细菌生长的作用。方法分别在不同抑菌浓度左氧氟沙星干扰情况下,培养金黄葡萄球菌实验株RN6390和RN1HG001,提取RNA,用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同菌株中RNAⅢ、... 目的研究左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达的影响及对细菌生长的作用。方法分别在不同抑菌浓度左氧氟沙星干扰情况下,培养金黄葡萄球菌实验株RN6390和RN1HG001,提取RNA,用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同菌株中RNAⅢ、RsaA、RsaE、RsaG、RsaH的含量,比较不同抑菌浓度左氧氟沙星作用下小RNA的表达差异。结果在MH培养液和BH培养液中左氧氟沙星对RN6390和RN1HG001的MIC均为0.25μg/ml。5种小RNA中,RNAⅢ的表达量最多,RsaG最少;当左氧氟沙星浓度≥1/4MIC时,开始对金黄葡萄球菌的生长产生明显抑制作用,5种小RNA的表达均开始下降;在RN6390菌株,1/16 MIC和1/8 MIC的左氧氟沙星能促进RsaH表达。结论不同浓度左氧氟沙星对金黄葡萄球菌小RNA表达具有抑制或者促进作用,提示除了其本身具有的阻碍细菌DNA合成的功能外还可能影响细菌基因的转录。 展开更多
关键词 金黄葡萄球菌 左氧氟沙星 小RNA QRT-PCR
细胞角蛋白8真核表达载体的构建、表达及生物信息学分析
7
作者 寻萌 赵四海 +5 位作者 曹春霞 薛欣 邵明明 李薇 徐琨 雍烈 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期 123-127,共5页
目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMDl8-Tsimple vector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP—C1,构建... 目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMDl8-Tsimple vector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP—C1,构建真核表达载体pEGFP—CK8。脂质体介导转染SMMC7721细胞,荧光显微镜、realtimePCR和Westernblot检测CK8的表达。生物信息学软件分析CK8理化特性、信号肽及功能位点等。结果:PCR、酶切和测序结果均证实重组质粒含有人CK8全长CDS序列,转染实验表明CK8在SMMC7721细胞中发生了高表达。结论:成功地构建了人CK8全长CDS真核表达载体,并使其在SMMC7721细胞中获得高表达,为研究CK8的生物学功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 细胞角蛋白8 全长编码序列 真核表达 生物信息学分析
特异性siRNA抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6基因的表达 预览 被引量:2
8
作者 刘文康 姜向阳 +1 位作者 任健康 雍烈 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第4期 656-659,共4页
目的:研究RNAi技术抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6癌基因的表达以及对细胞生物学特性的影响。方法:构建真核细胞表达特异性shRNA的pGENESIL-1/E6(PS6)重组质粒,脂质体转染细胞后用半定量RT-PCR技术检测CaSKi细胞中E6mRNA水平的变化... 目的:研究RNAi技术抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6癌基因的表达以及对细胞生物学特性的影响。方法:构建真核细胞表达特异性shRNA的pGENESIL-1/E6(PS6)重组质粒,脂质体转染细胞后用半定量RT-PCR技术检测CaSKi细胞中E6mRNA水平的变化,然后用western blotting检测RNA干扰前后p53和p21蛋白的表达来验证RNAi效应。用透射电子显微镜观察CaSKi/PS6细胞形态变化;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,最后利用细胞计数和裸鼠成瘤实验测定CaSKi/PS6细胞增殖能力。结果:成功构建了真核细胞表达特异性siRNA的PS6重组质粒;在RNA干扰24、48和72小时后CaSKi/PS6细胞中E6mRNA分别下降了21.50%、52.60%和65.60%;CaSKi/PS6细胞出现凋亡的特征性改变;RNA干扰24h、48h和72h后CaSKi/PS6细胞的凋亡率分别为27.94%、31.95%和56.63%,细胞生长周期停滞于S期。结论:应用RNA干扰技术能有效地、特异地抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6基因的表达,为RNA干扰应用于研究宫颈癌发病分子机制、临床治疗和干预性预防提供了新的方法。 展开更多
关键词 HPV16 宫颈癌 E6基因 RNA干扰
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《生物信息学》教学实践探讨 预览 被引量:7
9
作者 寻萌 陈艳炯 +4 位作者 杨娥 邵明明 李薇 宋娟 雍烈 《西北医学教育》 2011年第6期 1220-1223,共4页
从教学实际出发,总结了医学院校《生物信息学》教学实践中的一些体会,探讨了提高学生生物医学信息处理能力的教学模式、教学内容和方法。期望通过《生物信息学》课程的讲授,使学生了解到生物信息学发展的前沿,掌握生物信息学的基本分析... 从教学实际出发,总结了医学院校《生物信息学》教学实践中的一些体会,探讨了提高学生生物医学信息处理能力的教学模式、教学内容和方法。期望通过《生物信息学》课程的讲授,使学生了解到生物信息学发展的前沿,掌握生物信息学的基本分析方法,最终达到能够在科研中独立应用生物信息学进行分析的目的。 展开更多
关键词 生物信息学 教学实践 教学方式
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肿瘤患者感染病原菌的分布及耐药性分析 预览 被引量:6
10
作者 慕玉东 雍烈 王永兴 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第2期 350-351,共2页
目的:了解肿瘤患者感染病原菌的分布及耐药性分析,为合理用药提供依据。方法:对本院肿瘤患者送检的合格标本分离菌株进行培养鉴定和耐药性分析。结果:405株病原菌中G-杆菌228株,占56.3%;G+球菌67株,占16.5%;真菌110株,占2... 目的:了解肿瘤患者感染病原菌的分布及耐药性分析,为合理用药提供依据。方法:对本院肿瘤患者送检的合格标本分离菌株进行培养鉴定和耐药性分析。结果:405株病原菌中G-杆菌228株,占56.3%;G+球菌67株,占16.5%;真菌110株,占27.2%;药敏试验结果提示G-杆菌对亚胺培南、美罗培南高度敏感,对氨苄西林、哌拉西林耐药率很高。结论:肿瘤患者易发生院内感染且易产生耐药株,在选择抗生素时应依据药敏实验结果合理选用药物,控制病原菌的耐药性。 展开更多
关键词 肿瘤患者 病原菌 耐药性
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内质网应激与prion疾病 预览 被引量:1
11
作者 徐琨 雍烈 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期 196-199,共4页
1引言内质网(endoplasmic reticulum,ER)是真核细胞中钙离子贮存库,也是调节蛋白质合成及合成后加工、折叠和聚集的场所,是一种重要的细胞器。近年来,在生物医学研究领域中出现了一个新概念-"内质网应激"(ER stress),即:在饥饿... 1引言内质网(endoplasmic reticulum,ER)是真核细胞中钙离子贮存库,也是调节蛋白质合成及合成后加工、折叠和聚集的场所,是一种重要的细胞器。近年来,在生物医学研究领域中出现了一个新概念-"内质网应激"(ER stress),即:在饥饿、影响钙离子平衡 展开更多
关键词 内质网 内质网应激 朊病毒病 细胞凋亡
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结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药与embB基因突变的相关性研究 被引量:1
12
作者 李薇 薛欣 +3 位作者 雍烈 邱奕 宋娟 郑建武 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期506-508,共3页
目的分析西安地区耐乙胺丁醇(EMB)结核杆菌临床分离株embB基因突变的特点,建立快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检... 目的分析西安地区耐乙胺丁醇(EMB)结核杆菌临床分离株embB基因突变的特点,建立快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测104株结核分枝杆菌临床分离株的embB基因。结果以H37Rv标准株为对照,35株药物敏感株的SSCP和RFLP分析结果均与标准株一致,不存在突变;69株耐乙胺丁醇分离株中,39株(56.52%)SSCP泳动与标准株不一致,存在基因异常;19株(27.54%)RFLP分析存在基因异常。结论西安地区结核杆菌临床分离株对乙胺丁醇耐药与embB基因(尤其是306位密码子)突变有关,PCR-SSCP和PCR-RFLP技术可快速、准确地检测结核分枝杆菌对EMB的耐药性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药 基因突变 EMBB基因
人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 李薇 寻萌 +1 位作者 雍烈 郑建武 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 41-43,共3页
目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物。方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple... 目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物。方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vector中,获得重组质粒pMD18-CK8,转化感受态大肠杆菌DH5α。继而采用PCR技术从重组质粒pMD18-CK8中扩增出约1500bp目的片段,再次级克隆到原核表达质粒pET-28a(+)载体中,获得pET-28a-CK8重组原核表达质粒;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21(DE3)菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达。采用SDS-PAGE电泳及Western blot检测CK8蛋白表达水平。结果:成功建立了人CK8基因cDNA重组体的无性繁殖系。②在原核细胞中成功地表达出人CK8蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性。结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了人细胞角蛋白8(CK8)基因,为进一步研究CK8的基因型及探讨该基因编码的CK8蛋白的性质和生物学活性创造条件。 展开更多
关键词 人细胞角蛋白8CK8 基因克隆 原核表达
朊蛋白同源蛋白Doppel的分子生物学研究进展 预览
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作者 徐琨 董小平 雍烈 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期 481-483,486,共4页
朊病毒病又称可传播性海绵状脑病 ( Transmis- sion spongiform encephalopathy, TSE), 是一组累及人类及多种动物中枢神经系统的退行性疾病,致死率可达100%,如人类的克雅氏病(CJD),动物的疯牛病(BSE)等。此类疾病具有明显的... 朊病毒病又称可传播性海绵状脑病 ( Transmis- sion spongiform encephalopathy, TSE), 是一组累及人类及多种动物中枢神经系统的退行性疾病,致死率可达100%,如人类的克雅氏病(CJD),动物的疯牛病(BSE)等。此类疾病具有明显的传染性,其感染因子“PrPsc”,被认为仅由蛋白质组成,它是由细胞内生的正常朊蛋白PrPsc空间构象发生变化, 展开更多
关键词 朊蛋白 分子生物学 同源蛋白 可传播性海绵状脑病 退行性疾病 PRPSC 中枢神经系统 蛋白质组成
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结核分枝杆菌异烟肼耐药基因katG的检测 被引量:1
15
作者 薛欣 邱奕 +3 位作者 雍烈 赵四海 邵明明 曹春霞 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第7期496-497,523共3页
目的探讨结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药的分子机制,建立快速检测结核分枝杆菌INH耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测105株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因,运用DNA测序和生物信息分析比... 目的探讨结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药的分子机制,建立快速检测结核分枝杆菌INH耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测105株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因,运用DNA测序和生物信息分析比对进行验证。结果以H37Rv标准株为对照,34株敏感株中5株(14.7%)存在KatG基因异常,105株耐药株中55株(52.4%)存在KatG基因异常。结论结核分枝杆菌对INH耐药与KatG基因突变有关,PCR-RFLP技术可快速、准确地检测结核分枝杆菌对INH的耐药性。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 耐药 异烟肼 基因突变 限制性片段长度多态性
核基质蛋白LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织中的差异表达 预览 被引量:1
16
作者 何谦 张淑群 +2 位作者 赵丽华 王香玲 雍烈 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期495-498,共4页
目的:采用比较蛋白质组学方法研究正常乳腺和乳腺癌组织中的差异表达核基质蛋白(nuclear matrix protein,NMP),并在蛋白质水平对差异蛋白LaminA/C进一步地确证。方法:分别提取4例正常乳腺和乳腺癌组织的核基质蛋白,进行双向凝... 目的:采用比较蛋白质组学方法研究正常乳腺和乳腺癌组织中的差异表达核基质蛋白(nuclear matrix protein,NMP),并在蛋白质水平对差异蛋白LaminA/C进一步地确证。方法:分别提取4例正常乳腺和乳腺癌组织的核基质蛋白,进行双向凝胶电泳。分离出的差异表达蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI—TOF—MS)分析,获得肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting,PMF),应用Mascot搜索引擎在NCBInr数据库中进行检索鉴定。最后用免疫组化和Western blotting方法验证差异蛋白LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织的相对表达量。结果:经双向凝胶电泳和质谱鉴定,正常乳腺组合有(904±58)个蛋白质点,乳腺癌组检测出含有(944±70)个蛋白质点,共发现27个差异表达蛋白,成功鉴定出12种蛋白,其中包括LaminA/C。用免疫组化方法分析LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织各20例中的表达,结果显示LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织中的阳性率分别为15%(3/20)和40%(8/20),P〈0.05。用Western blot方法观察LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织各10例中的表达,结果显示乳腺癌组中LaminA/C/β-actin灰度值比值为0.40±0.13,是正常乳腺组LaminA/C/β-actin灰度值比值(0.21±0.13)的1.91倍(P〈0.05)。结论:LaminA/C在乳腺癌组织中表达明显增高,LaminA/C蛋白在乳腺癌的发生和发展中可能起一定的作用。 展开更多
关键词 蛋白质组学 LaminA/C 乳腺癌
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人doppel蛋白及其类似蛋白PrPΔ32-121对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用 预览
17
作者 徐琨 王新 +7 位作者 田婵 石崧 王桂荣 石琦 周瑞敏 姜惠英 雍烈 董小平 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 32-35,46,共5页
目的体外观察细胞瞬时表达的人Dpl(doppel)蛋白对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,并与其结构类似蛋白——截短型PrP(PrPΔ32-121)加以比较。方法通过PCR方法获得人PRND基因及截短型PRNP基因并克隆至真核表达载体,瞬时转染SH-SY5Y... 目的体外观察细胞瞬时表达的人Dpl(doppel)蛋白对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,并与其结构类似蛋白——截短型PrP(PrPΔ32-121)加以比较。方法通过PCR方法获得人PRND基因及截短型PRNP基因并克隆至真核表达载体,瞬时转染SH-SY5Y细胞后,观察蛋白表达及其定位情况;采用MTT实验检测转染细胞的生长状态;用流式细胞仪、Western blot等方法检测转染细胞的凋亡状态。结果两种蛋白均可在转染细胞中表达,并存在于细胞膜上;MTT结果显示,在转染24 h后均出现明显的细胞毒性作用;细胞凋亡相关实验发现,转染细胞AnnexinV/PI双染阳性细胞数量增多,pro-casepase-3和Bcl-2因子水平降低。结论瞬时表达的Dpl蛋白与截短型PrP可产生类似的神经细胞毒性作用,并诱导启动细胞凋亡过程。 展开更多
关键词 doppel蛋白 朊蛋白 细胞毒性作用 细胞凋亡
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角蛋白8在四氯化碳诱导的小鼠肝损伤中的表达 预览 被引量:1
18
作者 赵四海 雍烈 刘恩岐 《浙江大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 37-42,共6页
目的:探讨角蛋白8在四氯化碳诱导的小鼠肝损伤中的表达和角蛋白8可能参与肝损伤过程的机制。方法:取ICR小鼠40只,分为4组,每组10只,雌雄各半。A组接受四氯化碳处理2周(6%的四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射,300μl/kg体重,每周3次);B组... 目的:探讨角蛋白8在四氯化碳诱导的小鼠肝损伤中的表达和角蛋白8可能参与肝损伤过程的机制。方法:取ICR小鼠40只,分为4组,每组10只,雌雄各半。A组接受四氯化碳处理2周(6%的四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射,300μl/kg体重,每周3次);B组接受四氯化碳处理4周;C组接受四氯化碳处理6周;D组为空白对照组。各组分别在最后一次注射四氯化碳的第3天,过量麻醉处死后取材。依次分离脾脏、双肾和心脏等重要脏器并称重。提取肝脏总RNA、RT-PCR和免疫组化方法检测角蛋白8的表达变化。结果:四氯化碳处理导致肝脏重量和体重的比值增高,第0、2、4和6周分别为5.60%、6.87%、7.83%和7.76%,差别具有统计学意义(P〈0.01),脾脏重量和体重的比值也增高(P〈0.05)。HE染色显示,肝损伤程度随四氯化碳处理时间延长而加重。RT-PCR和免疫组化检测发现,角蛋白8在肝脏的表达随四氯化碳处理时间延长而升高。结论:在四氯化碳诱导的小鼠肝损伤模型中,角蛋白8的表达水平和肝损伤程度在一定条件下呈正相关。角蛋白8的细胞内积累可能是肝损伤的分子机制之一。 展开更多
关键词 四氯化碳 角蛋白 免疫组织化学 疾病模型 动物 肝疾病 化学诱导 基因表达
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针对HPV16E7基因的RNA干扰对CaSKi细胞生物学特性的影响 预览 被引量:1
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作者 姜向阳 刘文康 +1 位作者 张镇西 雍烈 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第6期 1029-1031,共3页
目的:探讨RNA干扰抑制HPV16E7基因对宫颈癌细胞系CaSKi细胞生物学特性的影响。方法:用脂质体将pGENESIL—1/E7(PS7)转染CaSKi细胞内,用透射电子显微镜观察细胞形态变化;细胞计数法测定细胞增殖能力的变化;流式细胞仪测定DNA含... 目的:探讨RNA干扰抑制HPV16E7基因对宫颈癌细胞系CaSKi细胞生物学特性的影响。方法:用脂质体将pGENESIL—1/E7(PS7)转染CaSKi细胞内,用透射电子显微镜观察细胞形态变化;细胞计数法测定细胞增殖能力的变化;流式细胞仪测定DNA含量来检测细胞是否发生特征性的凋亡;最后比较细胞裸鼠的成瘤能力。结果:透射电镜显示,凋亡细胞体积变小,细胞核染色质浓缩、趋边,细胞膜表面伪足消失,产生凋亡小体。流式细胞仪检测结果表明,RNA干扰24h、48h和72h后,CaSKi/PSN细胞的凋亡率分别为0.21%、0%、1.62%,CaSKi/PS7细胞的凋亡率分别为31.49%、28.95%、31.54%。生长周期停滞于S期;裸鼠荷瘤实验比较研究显示,RNA干扰后的CaSKi/PS7组的瘤结节体积、重量均较CaSKi/PSN瘤细胞显著降低(P〈0.05),CaSKi/PS7组的平均抑瘤率为55.4%。结论:本研究为RNA干扰应用于研究宫颈癌发病分子机制、临床治疗、信息分子药物的开发和干预性预防提供了新的资料和方法。 展开更多
关键词 HPV16 CASKI细胞 E7基因 RNA干扰
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胃癌组织中HPV16与幽门螺杆菌感染相关性研究 预览 被引量:2
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作者 刘文康 张美萍 +1 位作者 雍烈 张镇西 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第6期 1012-1016,共5页
目的:研究胃癌组织中人类乳头瘤病毒16型(HPV16)感染与幽门螺杆菌感染之间的相关性。方法:运用原位PCR和免疫组化技术分别检测陕西省地区胃癌组织中HPV16癌基因E6和幽门螺杆菌(Hp)。结果:在40例胃癌组织(GC)中HPV16E6的阳性率... 目的:研究胃癌组织中人类乳头瘤病毒16型(HPV16)感染与幽门螺杆菌感染之间的相关性。方法:运用原位PCR和免疫组化技术分别检测陕西省地区胃癌组织中HPV16癌基因E6和幽门螺杆菌(Hp)。结果:在40例胃癌组织(GC)中HPV16E6的阳性率为27.5%(11/40)而在40例癌旁正常组织(GANM)中未检测到;Gc组中HPV16E6阳性率明显高于GANM组(P=0.0004);贲门癌中HPV16的感染率明显高于非贲门癌(P=0.0136);胃癌中HPV16与幽门螺杆菌感染无明显相关性(P=0.0829)。HPV16与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤浸润、淋巴结转移以及病理分级均无明显相关性(P〉0.05)。结论:本研究结果提示,在胃癌的发生过程中,HPV16可能不依赖或者不与幽门螺杆菌协作而发挥作用。 展开更多
关键词 胃癌 HPV16 E6基因 原位PCR 幽门螺杆菌
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