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柴胡属药用植物多重实时荧光PCR检测方法的建立 预览
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作者 张全芳 范阳阳 +7 位作者 刘艳艳 陈雪燕 谭晴晴 胡悦 刘国霞 汪冰 林永强 《药学研究》 CAS 2019年第12期693-696,708共5页
目的用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法测定正品柴胡,为柴胡的分子鉴定提供依据。方法从柴胡根茎中提取总DNA,根据ITS2序列,设计合成针对南柴胡和北柴胡的特异性引物和探针以及柴胡的通用引物与探针,通过对荧光聚合酶链式反应反... 目的用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法测定正品柴胡,为柴胡的分子鉴定提供依据。方法从柴胡根茎中提取总DNA,根据ITS2序列,设计合成针对南柴胡和北柴胡的特异性引物和探针以及柴胡的通用引物与探针,通过对荧光聚合酶链式反应反应体系和反应条件的优化筛选,建立了多重实时荧光聚合酶链式反应方法,在同一聚合酶链式反应反应体系中可以同时鉴别南、北柴胡。结果结果表明本试验设计的引物和探针具有很好的物种特异性,且灵敏度高,DNA检出限为0.08 ng。对46份样品检测,其中17份检出北柴胡源性成分,5份为南柴胡,其他样品均检测为伪品柴胡,检测结果与DNA测序结果一致。结论该方法可以有效地鉴别出南、北柴胡源性成分,及伪品柴胡,对于保证柴胡药材的质量及用药安全具有重要意义。 展开更多
关键词 ITS2基因 多重实时荧光聚合酶链式反应 南柴胡 北柴胡
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桑黄基因组DNA提取方法优化及分子鉴定 预览 被引量:1
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作者 陈力群 谭晴晴 +7 位作者 陈雪燕 刘利平 刘国霞 胡悦 范阳阳 刘艳艳 张全芳 《山东农业科学》 2019年第1期18-21,31共5页
本研究以桑黄为材料,筛选出一种快速直接提取子实体DNA的方法。利用CTAB法、试剂盒及硅珠DNA纯化技术分别对桑黄子实体基因组DNA进行提取,结果表明,硅珠DNA纯化技术的提取效果最好,试剂盒方法次之。经过PCR扩增和测序得到桑黄的rDNAITS... 本研究以桑黄为材料,筛选出一种快速直接提取子实体DNA的方法。利用CTAB法、试剂盒及硅珠DNA纯化技术分别对桑黄子实体基因组DNA进行提取,结果表明,硅珠DNA纯化技术的提取效果最好,试剂盒方法次之。经过PCR扩增和测序得到桑黄的rDNAITS序列,通过BLAST比对及系统进化树构建,发现所检测的样品为哈尔蒂木层孔菌Phellinus hartigii。 展开更多
关键词 桑黄 DNA提取 ITS 分子检测
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药用贝母属系统发育关系分析及多重实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 刘艳艳 张全芳 +7 位作者 范阳阳 谭晴晴 姜欣欣 汪冰 葛付存 林永强 张永清 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2172-2180,共9页
目的探讨多重实时荧光PCR检测方法对川贝母及伪品鉴别的可行性。方法通过对常见贝母属植物的ITS、psbA-trnH、rbcL和matK基因序列种间变异、遗传距离及系统发育关系分析,选择进化速率快、种间变异大、种内变异小的基因作为靶基因,设计... 目的探讨多重实时荧光PCR检测方法对川贝母及伪品鉴别的可行性。方法通过对常见贝母属植物的ITS、psbA-trnH、rbcL和matK基因序列种间变异、遗传距离及系统发育关系分析,选择进化速率快、种间变异大、种内变异小的基因作为靶基因,设计川贝母及伪品贝母的特异性引物和Taqman探针,建立一种多重实时荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度及混合样本检测与测序方法比较进行方法评估。结果贝母属ITS和psbA-trnH变异位点高于rbcL和matK,通过遗传距离分析rbcL和matK基因显著低于ITS和psbA-trnH基因,以ITS作为靶基因,建立多重实时荧光PCR检测方法特异性强,灵敏度达0.01ng,对18份样本抽查检出4份伪品贝母,检测结果与构建的NJ树聚类分析结果完全一致。结论基于ITS区域序列为靶基因建立多重实时荧光PCR检测方法能够成功鉴定川贝母及其混伪品,为川贝母真伪鉴别提供依据。 展开更多
关键词 ITS PSBA-TRNH RBCL MATK 多重实时荧光PCR 川贝母 混伪品
中药材五灵脂特异性PCR鉴别方法的研究 预览 被引量:1
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作者 马德源 谭晴晴 +6 位作者 陈力群 刘艳艳 葛付存 王佩仪 陈雪燕 张全芳 《食品与药品》 CAS 2018年第6期413-417,共5页
目的建立快速检测五灵脂中药材动物源性成分的特异性PCR法.方法从NCBI数据库下载复齿鼯鼠及相关混伪品的16S rDNA序列,通过比对获得特异性DNA片段,设计特异引物,从复齿鼯鼠的干燥粪便中提取DNA,优化PCR扩增条件,通过特异性、灵敏度实验... 目的建立快速检测五灵脂中药材动物源性成分的特异性PCR法.方法从NCBI数据库下载复齿鼯鼠及相关混伪品的16S rDNA序列,通过比对获得特异性DNA片段,设计特异引物,从复齿鼯鼠的干燥粪便中提取DNA,优化PCR扩增条件,通过特异性、灵敏度实验验证,建立特异性PCR检测体系.结果PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后扩增出一条340bp左右条带,而其他样品在相同条件下无扩增条带,该引物的灵敏度可达4.43ng/μl.对15种市售药材的检测结果证明该方法简便可行.结论此PCR法可快速鉴别五灵脂,不受材料和干燥程度的影响,具有操作简便、快速、特异性高的优点. 展开更多
关键词 五灵脂 复齿鼯鼠 特异性 PCR 分子鉴定
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基于InDels标记的大白菜育种材料的亲缘关系鉴定 被引量:3
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作者 刘栓桃 张志刚 +7 位作者 司立英 王荣花 李巧云 王立华 赵智中 梁水美 张全芳 《植物遗传资源学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期657-667,共11页
采用86对InDels引物对105份大白菜育种材料进行了鉴定,共得到189个多态性位点。每对引物所能检测到的等位基因为2-4个,其中82.6%的引物仅能检测到2个等位基因位点;杂合度指数0-0.1880,平均为0.0511;主要等位基因频率为0.3277-0.9664,平... 采用86对InDels引物对105份大白菜育种材料进行了鉴定,共得到189个多态性位点。每对引物所能检测到的等位基因为2-4个,其中82.6%的引物仅能检测到2个等位基因位点;杂合度指数0-0.1880,平均为0.0511;主要等位基因频率为0.3277-0.9664,平均为0.6638;每对引物的多态性信息含量为0.0629-0.6654,平均为0.3444。94.2%的引物杂合度低于0.1,表明所选材料纯合度较高。采用NTSYS软件对供试材料进行UPGMA聚类分析,当相似系数为0.60时所有试材料分为合抱型(类群Ⅰ)与叠抱型(类群Ⅱ)明显的两个类群。叠抱型所在的类群Ⅱ在相似系数0.63时又进一步分为4个亚群。4个杂种优势非常明显的叠抱型品种的亲本材料分别处于不同的亚群或同一亚群中的不同分支。对双亲标记检测结果的进一步分析后挖掘了一批适宜4个杂交种纯度鉴定的引物,从中筛选了3对适宜4个杂交种纯度鉴定的通用引物。研究结果不仅提供了大白菜杂种优势育种的分子证据,同时也为育种实践中杂交组合的高效选配提供了帮助。 展开更多
关键词 大白菜 育种材料 亲缘关系 杂种优势 插入/缺失标记
牛、羊肉中水貂、猪、鼠混杂成分的多重荧光PCR鉴定方法的建立 被引量:2
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作者 胡悦 刘艳艳 +5 位作者 任金瑞 陈蕾 范阳阳 张全芳 陈雪燕 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1621-1630,共10页
针对现阶段肉类食品市场中出现的以劣充优的掺假问题,通过视觉、触觉、嗅觉和味觉等传统方法来鉴定肉的外观、色泽、气味和硬度,已不能满足现阶段肉类质量和源性的鉴别要求。基于现代分析仪器和生物技术的肉类掺假识别方法主要包括:... 针对现阶段肉类食品市场中出现的以劣充优的掺假问题,通过视觉、触觉、嗅觉和味觉等传统方法来鉴定肉的外观、色泽、气味和硬度,已不能满足现阶段肉类质量和源性的鉴别要求。基于现代分析仪器和生物技术的肉类掺假识别方法主要包括:基于蛋白质的检测方法、酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、色谱分析方法和基于DNA序列的分子生物学检测方法。其中,基于DNA序列的分子生物学检测方法特别是荧光PCR法具有特异性强、灵敏度高,快速准确的优点。本实验运用了多重荧光PCR的技术,建立了检测牛羊肉类中掺杂水貂(Mustela lutreola)、猪(Sus scrofa)、鼠(Mus musculus)3种动物源性成分的检测方法。在3种动物源性的线粒体16S rDNA的保守区设计了一对通用引物,在可变区设计了水貂、猪、鼠3种物种特异性的分子信标探针,分别进行了探针的特异性验证、实验体系的灵敏度验证和样品的检出限实验。特异性验证中,3种探针均可有效排除其他物种DNA的干扰,特异扩增;灵敏度验证实验中,设置了7个DNA浓度稀释梯度,每个梯度6个重复,确定了该体系的灵敏度为0.01 ng/μL;样品检出限实验中,设置了3种掺杂方式,每种方式7个不同的掺杂质量比,每个质量比4个平行样,确定了本实验的样品检测灵敏度可达到1%(质量比)。本研究结果显示,本方法能特异、准确、灵敏地鉴别出牛羊肉中水貂、猪和鼠的掺杂成分,为多物种的源性鉴别提供了科学依据。 展开更多
关键词 多重实时荧光PCR 源性鉴定 水貂 猪和鼠源性成分
山东省铁皮石斛引种、产业现状与可持续发展的探讨 预览 被引量:3
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作者 陈雪燕 张全芳 +6 位作者 范阳阳 谭晴晴 刘艳艳 陈淑娟 葛付存 靳光乾 《山东林业科技》 2018年第5期111-114,共4页
山东省具有典型的北方气候,铁皮石斛在山东省引种、栽培的成功,对于选育出适合北方气候铁皮石斛新品种具有重要的现实意义。本文针对山东省铁皮石斛的引种、栽培、产业发展现状进行综述,并根据这些现状和存在问题提出山东省铁皮石斛可... 山东省具有典型的北方气候,铁皮石斛在山东省引种、栽培的成功,对于选育出适合北方气候铁皮石斛新品种具有重要的现实意义。本文针对山东省铁皮石斛的引种、栽培、产业发展现状进行综述,并根据这些现状和存在问题提出山东省铁皮石斛可持续发展的建议,以促进北方铁皮石斛产业的健康发展。 展开更多
关键词 山东 铁皮石斛 产业现状
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应用多重实时荧光PCR方法对8种动物毛纤维种类鉴别的研究 预览
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作者 刘艳艳 范阳阳 +4 位作者 胡悦 东野升金 谭晴晴 张全芳 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1540-1549,共10页
本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇,并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取;根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列... 本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇,并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取;根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针;通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件,建立了多重实时荧光PCR检测体系;并对多重PCR体系的特异性、灵敏度、重复性和适用性进行评估。结果表明,使用SDS-二硫苏糖醇DTT-蛋白酶K结合Chelex-100法,并利用硅珠纯化提取动物毛纤维DNA效果最佳,满足实时荧光PCR检测要求。本方法 DNA灵敏度为0.01ng,混合样本方法检出限为1.0%。因此本方法能够从动物毛纤维提取高质量DNA,建立的多重实时荧光PCR检测体系具有特异性强、重复性好和灵敏度高等优势。本方法可用于水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物及其混合物毛纤维的鉴定,为拓展动物毛纤维在物种识别、分子进化研究、分子标记辅助育种和遗传资源评价等领域中的应用奠定基础。 展开更多
关键词 动物毛纤维 多重实时荧光PCR 鉴定
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一种鉴定西红花和红花源性成分的实时荧光PCR方法
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作者 张全芳 刘艳艳 +5 位作者 谭晴晴 姜欣欣 陈雪燕 葛付存 张永清 《中国中药杂志》 CSCD 北大核心 2018年第23期4575-4581,共7页
该研究根据GenBank中的ITS2序列设计引物,基于SYBRGreen荧光PCR技术建立了一种能快速、灵敏和特异的鉴别西红花和红花源性的实时荧光定量PCR检测体系。与中草药DNA条形码技术相比,该方法检测时间短、特异性强、灵敏度高。利用该方法检... 该研究根据GenBank中的ITS2序列设计引物,基于SYBRGreen荧光PCR技术建立了一种能快速、灵敏和特异的鉴别西红花和红花源性的实时荧光定量PCR检测体系。与中草药DNA条形码技术相比,该方法检测时间短、特异性强、灵敏度高。利用该方法检测15份样品,其中4份为红花,8份样品为西红花,3份为其他源性,与中草药DNA条形码检测结果一致。该方法为药材中西红花与红花源性的快速鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 sYBRGreen实时荧光定量PCR 西红花 红花 源性鉴定
利用环介导等温扩增技术快速检测饮用水中的大肠杆菌 预览 被引量:4
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作者 谷晓红 谭晴晴 +5 位作者 刘艳艳 王文博 范阳阳 朱天翼 张全芳 《山东农业科学》 2017年第1期130-135,共6页
本研究以饮用水为研究对象,利用大肠杆菌mal B保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应条件,建立了适用于快速检测饮用水中大肠杆菌的LAMP方法,可在60℃条件下反应60 min完成检测,检测灵敏度达到1.35 CFU/m L。利用SYBR GreenⅠ染料剂可... 本研究以饮用水为研究对象,利用大肠杆菌mal B保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应条件,建立了适用于快速检测饮用水中大肠杆菌的LAMP方法,可在60℃条件下反应60 min完成检测,检测灵敏度达到1.35 CFU/m L。利用SYBR GreenⅠ染料剂可在紫外灯下直接观察检测结果。通过检测掺入已知大肠杆菌的纯净水样品,结果表明,本研究所建立的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便的特点,可用于饮用水中大肠杆菌致病菌的快速检测,对预防和控制大肠杆菌的传染具有重要意义。 展开更多
关键词 饮用水 环介导恒温扩增 大肠杆菌 快速检测
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基于荧光SSR标记的玉米自交系遗传结构解析 被引量:5
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作者 张全芳 梁水美 +5 位作者 李燕 刘艳艳 范阳阳 郭庆法 鲁守平 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期19-31,共13页
利用多重SSR-PCR荧光标记检测技术,对本单位自育和引进的259份玉米自交系进行遗传多样性和亲缘关系分析,并以11个归属于不同杂种优势群的代表自交系为参照进行群体结构分析。结果显示,50对SSR引物共检测到214个等位基因变异,基因多态性... 利用多重SSR-PCR荧光标记检测技术,对本单位自育和引进的259份玉米自交系进行遗传多样性和亲缘关系分析,并以11个归属于不同杂种优势群的代表自交系为参照进行群体结构分析。结果显示,50对SSR引物共检测到214个等位基因变异,基因多态性指数的平均值为0.50,每个SSR标记的多态性信息量(PIC)平均值为0.44。用UPGMA方法将270份自交系划分成3大类群,进一步进行数值化杂种优势群分析,以明确所用种质资源的杂优类群利用方向,为玉米自交系的有效利用和品种的选育提供依据。 展开更多
关键词 玉米自交系 分子标记 遗传多样性
饲料中狐狸、水貂、貉子和狗源性的五重实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 刘艳艳 李会荣 +5 位作者 胡悦 范阳阳 李祥明 谭晴晴 吴家强 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期67-76,共10页
为了快速鉴别饲料中的狐狸、水貂、貉子和狗源性成分,根据线粒体16S r DNA种间保守序列,设计合成针对狐狸、水貂、貉子和狗的特异性引物和探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了多重实时荧光PCR方法,在同一PCR反应体... 为了快速鉴别饲料中的狐狸、水貂、貉子和狗源性成分,根据线粒体16S r DNA种间保守序列,设计合成针对狐狸、水貂、貉子和狗的特异性引物和探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了多重实时荧光PCR方法,在同一PCR反应体系中可以同时完成4种动物源性成分检测。通过对15种其他物种的源性成分的检测,结果表明所设计的引物和探针具有很好的物种特异性,且灵敏度高,狐狸、水貂、貉子和狗的DNA检出限为0.01ng。对40份样品检测,其中5份检测出貉子、狐狸和水貂源性成分。结果表明,该方法可以有效地鉴别出饲料中狐狸、水貂、貉子和狗源性成分,同时适用于相关动物产品中。 展开更多
关键词 线粒体16S r DNA多重实时荧光PCR狐狸 水貂 貉子和狗动物源性成分
LAMP法检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7 预览 被引量:1
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作者 范阳阳 张全芳 +5 位作者 刘艳艳 谭晴晴 胡悦 朱天翼 王文博 《食品与药品》 CAS 2017年第6期381-387,共7页
目的 建立-种能快速准确检测牛奶中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌O517:H7(Escherichia coli O517:H7)的环介导恒温扩增方法(loopmediated isothermal amplification... 目的 建立-种能快速准确检测牛奶中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌O517:H7(Escherichia coli O517:H7)的环介导恒温扩增方法(loopmediated isothermal amplification,LAMP).方法 以牛奶为研究对象,分别利用金黄色葡萄球菌nuc,鼠伤寒沙门菌invA和大肠杆菌O517:H7的rfbE保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应温度、时间等条件,建立检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应体系.并验证了本方法的特异性和灵敏度.结果 LAMP法对牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的灵敏度均为1.0×102拷贝/μL,比常规PCR灵敏度提高了10倍.金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应条件为60℃、30min,鼠伤寒沙门菌为60℃、60min.利用SYBR Green I染料在紫外光下可直接观察检测结果,金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7阳性样品均呈绿色;进一步利用荧光定量PCR仪可检测到对应的扩增曲线.通过牛奶样品模拟掺杂实验,验证了方法的实用性和可靠性.结论 本研究建立的检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点,可用于牛奶中相关致病菌的检测,对预防和控制3种致病菌的传染有重要意义. 展开更多
关键词 环介导恒温扩增 金黄色葡萄球菌 鼠伤寒沙门菌 大肠杆菌O517:H7
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乌头驴和三粉驴微卫星遗传多态性分析 预览 被引量:2
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作者 刘艳艳 谭晴晴 +5 位作者 范阳阳 张全芳 盛清凯 贾涛 董书光 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期44-50,共7页
实验旨在了解德州驴中乌头驴和三粉驴2个品系的遗传多态性。利用13个微卫星位点,通过建立多重多色毛细管电泳荧光检测方法,对39头三粉驴和16头乌头驴进行遗传多样性分析,对等位基因数、多态信息含量(PIC)、遗传杂合度和有效等位基因... 实验旨在了解德州驴中乌头驴和三粉驴2个品系的遗传多态性。利用13个微卫星位点,通过建立多重多色毛细管电泳荧光检测方法,对39头三粉驴和16头乌头驴进行遗传多样性分析,对等位基因数、多态信息含量(PIC)、遗传杂合度和有效等位基因数进行统计分析。结果表明:13对微卫星位点三粉驴PIC指数平均值为0.47,乌头驴PIC指数平均值为0.40,德州驴2个品系PIC总的平均值为0.47。其中乌头驴品系平均等位基因数为3.31,平均观测杂合度为0.27,有效等位基因数为2.11。三粉驴品系平均等位基因数为4.46,平均观测杂合度为0.33,有效等位基因数为2.61。由此可见,三粉驴比乌头驴的遗传多态性高,但2个驴品系的遗传杂合度均偏低,遗传变异程度较小。 展开更多
关键词 微卫星 遗传多样性 乌头驴 三粉驴
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一种驴和马及狐狸源性成分快速检测方法的研究 预览 被引量:3
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作者 卞如如 范阳阳 +6 位作者 刘艳艳 霍胜楠 盛清凯 谭晴晴 张全芳 张卉 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期100-104,共5页
实验旨在建立快速检测驴、马和狐狸源性成分的方法。以驴、马和狐狸的线粒体保守序列16S r RNA基因为靶基因,设计通用引物和以不同荧光素标记的特异Taq Man探针,构建与通用引物共用的阳性扩增内标(Internal Amplification Control,IAC... 实验旨在建立快速检测驴、马和狐狸源性成分的方法。以驴、马和狐狸的线粒体保守序列16S r RNA基因为靶基因,设计通用引物和以不同荧光素标记的特异Taq Man探针,构建与通用引物共用的阳性扩增内标(Internal Amplification Control,IAC)作为PCR监控反应体系。通过优化PCR反应体系和条件,建立能同时检测驴、马和狐狸源性成分的四重实时荧光PCR方法。结果表明:利用驴、马、狐狸、牛、猪、羊、水貂、狗、鸡、鸭、大豆、小麦、玉米等物种检测没有交叉反应,证明该方法特异性高,准确性好。该方法模板DNA检测灵敏度为0.01 ng。本研究建立的驴、马和狐狸源性四重荧光实时PCR检测体系灵敏度高、特异性强,能有效鉴别动物产品中驴、马和狐狸的源性成分,也可用作相关动物皮张真伪的鉴别方法。 展开更多
关键词 16S RRNA基因 多重实时荧光PCR法 狐狸 源性成分
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一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立 预览 被引量:1
16
作者 范阳阳 张荦嘉 +5 位作者 刘艳艳 卞如如 霍胜楠 张卉 张全芳 《山东农业科学》 2016年第6期118-123,共6页
羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物... 羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以及相应的Taq Man-MGB探针,建立羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测方法,并引入内标质控有效保证检测体系的准确性。本检测体系对羊奶、牛奶及豆浆的基因组DNA检测敏感度为0.01 ng;对羊奶中掺入牛奶和豆浆的体积掺假检测灵敏度均为0.1%。因此,本研究建立的羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测体系具有通量大、灵敏度高、特异性好等优点,实现了对羊奶中其他源性成分快速、准确的检测,对保障相关产品市场安全具有重要意义。 展开更多
关键词 羊奶 牛奶 豆浆 多重实时荧光定量PCR
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多重实时荧光PCR鉴别金钱白花蛇源性方法研究 预览 被引量:2
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作者 李燕 刘艳艳 +3 位作者 卞如如 张旭童 张全芳 《食品与药品》 CAS 2016年第4期246-251,共6页
目的用多重实时荧光聚合酶链式反应(多重实时荧光PCR)快速鉴别金钱白花蛇源性。方法以线粒体细胞色素C基因为目标靶基因,根据其特异性核酸序列设计引物和探针,通过优化引物及探针浓度、退火温度等PCR体系和条件,建立从活体材料和... 目的用多重实时荧光聚合酶链式反应(多重实时荧光PCR)快速鉴别金钱白花蛇源性。方法以线粒体细胞色素C基因为目标靶基因,根据其特异性核酸序列设计引物和探针,通过优化引物及探针浓度、退火温度等PCR体系和条件,建立从活体材料和粉末制剂等中药材中检测金钱白花蛇源性的二重二色实时荧光PCR检测体系。结果通过检测市售15块金钱白花蛇药材,发现其中5块不含金钱白花蛇源性成分;10份金钱白花蛇粉末制剂中3份未检出金钱白花蛇成分;5份活体样本均为金钱白花蛇。检测结果与DNA测序结果一致。结论本研究建立的方法可用于金钱白花蛇源性的检测,能有效保障金钱白花蛇相关名贵中药及制品的安全性。 展开更多
关键词 金钱白花蛇 多重实时荧光PCR 线粒体细胞色素C基因
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阿胶加工工艺过程中DNA降解规律研究 预览 被引量:5
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作者 刘艳艳 董书光 +3 位作者 耿加亮 谭晴晴 张全芳 《药学研究》 CAS 2016年第9期501-507,共7页
目的本文以阿胶传统工艺加工过程样品为研究对象,探讨关键加工阶段阿胶样品中驴基因组DNA核基因和线粒体基因的降解变化规律。方法提取阿胶工艺过程中的驴基因组DNA,分别利用超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、普通PCR、荧光定量PCR和... 目的本文以阿胶传统工艺加工过程样品为研究对象,探讨关键加工阶段阿胶样品中驴基因组DNA核基因和线粒体基因的降解变化规律。方法提取阿胶工艺过程中的驴基因组DNA,分别利用超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复(SSR)微卫星毛细管电泳(CE)检测方法对提取的DNA质量进行评价。结果研究结果显示,在原料驴皮、化皮、双效、浓缩和加辅料阶段,琼脂糖凝胶电泳均能检测到清晰的条带,普通PCR可扩增到200~1 600 bp左右的片段,而在凝胶阶段DNA降解最为严重,只能利用琼脂糖凝胶电泳检测到100~800 bp的目的片段,利用荧光定量PCR检测技术线粒体基因在阿胶加工各个阶段均可检测出,核基因凝胶阶段未检出;通过PCR-SSR-CE检测在凝胶阶段核基因未检出特征峰,更进一步证明了凝胶阶段DNA核基因降解严重。结论对阿胶工艺加工过程DNA变化规律发现,随着阿胶加工的深入进行,各个阶段DNA发生不同程度的降解,其中凝胶成品阶段降解最为严重,本研究对比普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复微卫星毛细管电泳检测方法,发现荧光定量PCR检测方法最快速、灵敏和可靠,通过比较发现以线粒体基因为靶基因在阿胶的各个加工阶段均能满足DNA溯源的要求。 展开更多
关键词 驴皮 阿胶 DNA降解 质量检测 分子生物学
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利用多重荧光定量PCR检测阿胶原料驴、马、驴骡和马骡皮张的源性 预览 被引量:4
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作者 刘艳艳 张全芳 +2 位作者 卞如如 陈杰 《药学研究》 CAS 2016年第10期569-574,578共7页
目的建立快速检测阿胶原料皮张源性的方法。方法根据马、驴、驴骡和马骡的核基因肌酸激酶CKM和线粒体基因组DNA(mtDNA)的16S rRNA基因序列设计特异,并引入18S rDNA作为内参质控,建立能检测4种动物源性的5重多色荧光定量PCR检测体系... 目的建立快速检测阿胶原料皮张源性的方法。方法根据马、驴、驴骡和马骡的核基因肌酸激酶CKM和线粒体基因组DNA(mtDNA)的16S rRNA基因序列设计特异,并引入18S rDNA作为内参质控,建立能检测4种动物源性的5重多色荧光定量PCR检测体系。结果本研究开发的引物和分子信标探针的特异性强,能同时区分同源性相近的驴、马、驴骡和马骡源性;灵敏度高,检测限为0.01ng·μL-1。通过对某阿胶制品公司收购的驴皮源性检测,检测结果与DNA测序一致率达100%。结论本方法在一管PCR反应中能同时检测4种动物源性,更简单、准确和高效,为驴皮、马皮及骡子皮张的源性鉴定探索了新的途径。 展开更多
关键词 动物皮张 多重荧光定量PCR 源性检测
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适用于多重荧光SSR检测的玉米基因组DNA提取方法 被引量:3
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作者 张全芳 张荦嘉 +5 位作者 梁水美 李燕 郭庆法 姚国旗 鲁守平 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期29-34,共6页
通过比较植物DNA提取试剂盒法、SDS法、磁珠法和质粒DNA小提试剂盒法提取玉米叶片全基因组DNA的质量,确定最适用于多重荧光SSR检测的方法。结果表明,4种方法获得全基因组DNA的ODA260/ODA280平均值分别为1.92、2.16、2.22和2.00;DNA浓度... 通过比较植物DNA提取试剂盒法、SDS法、磁珠法和质粒DNA小提试剂盒法提取玉米叶片全基因组DNA的质量,确定最适用于多重荧光SSR检测的方法。结果表明,4种方法获得全基因组DNA的ODA260/ODA280平均值分别为1.92、2.16、2.22和2.00;DNA浓度平均值分别为19.16、2 050.58、69.12、53.56 ng/μL。比较发现,SDS法和植物DNA提取试剂盒法因为提取DNA杂质多和提取成本高,均不适用于多重SSR-PCR大量样本的检测;质粒DNA小提试剂盒法和磁珠法提取的全基因组DNA都适用于多重SSR-PCR检测,分别适合人工操作和机械自动化提取。 展开更多
关键词 玉米 基因组DNA提取方法 多重荧光SSR标记
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