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辅助降血糖作用乳杆菌的筛选与评价
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作者 李天敏 赵玉娟 +6 位作者 赵子健 段翠翠 高磊 王超 牛春华 李盛钰 《东北农业科学》 北大核心 2019年第1期91-96,共6页
为了筛选具有辅助降血糖功能的益生菌,本研究以高脂饮食结合链脲佐菌素诱导2型糖尿病模型,以自主分离鉴定的乳杆菌连续4周灌胃2型糖尿病小鼠,检测小鼠体重和空腹血糖含量,测定血清中脂质、胰岛素和炎症因子水平等相关生化指标,筛选具有... 为了筛选具有辅助降血糖功能的益生菌,本研究以高脂饮食结合链脲佐菌素诱导2型糖尿病模型,以自主分离鉴定的乳杆菌连续4周灌胃2型糖尿病小鼠,检测小鼠体重和空腹血糖含量,测定血清中脂质、胰岛素和炎症因子水平等相关生化指标,筛选具有辅助降糖作用的新菌株。结果表明:植物乳杆菌S2能够显著降低模型小鼠的空腹血糖含量,降低小鼠血清中血脂相关指标(总胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸、低密度脂蛋白胆固醇)、炎症细胞因子(肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6)及超敏C反应蛋白水平,明显提升血清中高密度脂蛋白胆固醇、胰岛素水平。以上结果均表明植物乳杆菌S2具有辅助降血糖的功效。 展开更多
关键词 植物乳杆菌S2 2型糖尿病 降血糖功能
以无纺布为载体的菌落总数测试片的研究
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作者 刘爽 刘桐 +4 位作者 苑帅 司南 任大勇 陈萍 《现代食品科技》 北大核心 2018年第5期209-214,266共7页
本文通过研究菌落总数测试片中无纺布的种类,加工工艺,冷水可溶性凝胶与培养基配比及质构特性,应用于需氧菌计数测试片,对其检测性能进行评价。对菌落总数测试片中冷水可溶性凝胶与培养基在不同比例配比情况下质构特性进行测定,当凝胶... 本文通过研究菌落总数测试片中无纺布的种类,加工工艺,冷水可溶性凝胶与培养基配比及质构特性,应用于需氧菌计数测试片,对其检测性能进行评价。对菌落总数测试片中冷水可溶性凝胶与培养基在不同比例配比情况下质构特性进行测定,当凝胶与培养基比例为3:7时,硬度、脆性、粘着性、弹性、内聚性、胶着性、回弹性与1%琼脂培养基无显著性差异,并选取60 g/m~2的水刺无纺布为载体,采用浸入培养基加入方式,菌落生长情况良好,清晰可见,菌落计数方便。基于本研究以无纺布为载体测定5种试验菌株的菌落总数并与国标需氧菌平板计数法比较,可达到相同水平的检测限2 CFU/mL和灵敏度(100%);准确度较高,线性相关系数R~2达到0.996。水刺无纺布可作为菌落总数测试片的良好载体。 展开更多
关键词 无纺布 菌落总数测试片 质构特性 冷水可溶性凝胶
不同人参皂苷为标准品测定皂苷含量的比较研究
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作者 王溪竹 +3 位作者 姜珊 李娜 郑明珠 刘景圣 《食品工业》 北大核心 2018年第8期200-203,共4页
人参皂苷是显示人参根和根茎的生物及药理活性、特征的主要成分。其中,二醇组人参皂苷含量高达四分之三。测定皂苷的方法因类而宜,每一种方法都有其局限性。目前国标方法中采用比色法并以三醇组人参皂苷R_e为标准品进行人参总皂苷含量... 人参皂苷是显示人参根和根茎的生物及药理活性、特征的主要成分。其中,二醇组人参皂苷含量高达四分之三。测定皂苷的方法因类而宜,每一种方法都有其局限性。目前国标方法中采用比色法并以三醇组人参皂苷R_e为标准品进行人参总皂苷含量测定。试验通过比色法,分别以R_e和二醇组人参皂苷R_C为标准品,对二醇组人参总皂苷、三醇组人参总皂苷和人参茎叶总皂苷的皂苷含量进行检测。以R_e为标准品计算出的三种样品的人参总皂苷的平均含量,分别为0.341 8,0.581 9和0.550 7 mg;以R_C为标准品的含量分别为0.297 9,0.521 0和0.491 9 mg。以R_e为标准品计算出的总人参皂苷含量比R_C高。加标准品R_C比R_e所测的回收率高。试验同时进行了稳定性、精密度和重复性检测,该方法简便、准确、重复性好。用不同标品检测人参总皂苷含量存在误差,可用两种标品进行检测,取平均值更具有意义。 展开更多
关键词 人参总皂苷 人参皂苷RE 人参皂苷RC 含量测定
人参皂苷Re、Rg2对α-葡萄糖苷酶的活性抑制 预览
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作者 李娜 +3 位作者 姜珊 王溪竹 郑明珠 刘景圣 《食品研究与开发》 北大核心 2018年第13期24-27,共4页
研究人参皂苷Re、Rg2对α-葡萄糖苷酶活性的抑制。利用人参皂苷Re、Rg2,用分光光度法测定反应体系中α-葡萄糖苷酶的活力变化,并与阳性对照阿卡波糖进行比较,判定人参皂苷Re、Rg2对α-葡萄糖苷酶的抑制情况。人参皂苷Rg2对α-葡萄糖苷... 研究人参皂苷Re、Rg2对α-葡萄糖苷酶活性的抑制。利用人参皂苷Re、Rg2,用分光光度法测定反应体系中α-葡萄糖苷酶的活力变化,并与阳性对照阿卡波糖进行比较,判定人参皂苷Re、Rg2对α-葡萄糖苷酶的抑制情况。人参皂苷Rg2对α-葡萄糖苷酶的活性抑制为18.1%,人参皂苷Re的抑制率为13.4%。人参皂苷Re、Rg2对α-葡萄糖苷酶的活性有抑制作用。 展开更多
关键词 人参皂苷RE 人参皂苷RG2 Α-葡萄糖苷酶 活性抑制
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稀有原人参三醇型皂苷的生物转化研究进展 被引量:1
5
作者 姜珊 +1 位作者 郑明珠 刘景圣 《中草药》 CSCD 北大核心 2017年第19期4120-4125,共6页
人参是传统的名贵中药,其主要活性成分为人参皂苷,对心血管、肿瘤、中枢神经系统等疾病有显著的疗效。特别是原人参三醇(PPT)型皂苷Rh_1具有良好的抗炎、抗过敏、提高记忆力等活性。人参皂苷Rh_1仅微量地存在于人参、三七、西洋参中... 人参是传统的名贵中药,其主要活性成分为人参皂苷,对心血管、肿瘤、中枢神经系统等疾病有显著的疗效。特别是原人参三醇(PPT)型皂苷Rh_1具有良好的抗炎、抗过敏、提高记忆力等活性。人参皂苷Rh_1仅微量地存在于人参、三七、西洋参中。生物转化方法制备稀有人参皂苷已成为一种有效的途径。综述利用生物转化方法对PPT型人参皂苷进行转化,生成稀有人参皂苷的研究进展,以期为稀有人参皂苷的进一步开发利用提供参考。 展开更多
关键词 原三醇型皂苷 生物转化 人参皂苷RH1 抗炎活性 抗过敏活性
Thermotoga neapolitana中α-半乳糖苷酶基因的克隆表达与酶学性质研究 预览 被引量:1
6
作者 徐琳琳 +3 位作者 姜珊 李娜 王溪竹 王玉华 《中国酿造》 CAS 北大核心 2017年第1期61-65,共5页
将新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)的耐热α-半乳糖苷酶基因经PCR扩增,以pET-28a为表达载体,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行表达,用0.8mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,采用超... 将新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)的耐热α-半乳糖苷酶基因经PCR扩增,以pET-28a为表达载体,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行表达,用0.8mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,采用超声波细胞破碎菌体得到α-半乳糖苷酶。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的方法获得α-半乳糖苷酶的分子质量约为35ku。并对α-半乳糖苷酶的酶学性质进行研究,结果表明:该α-半乳糖苷酶的最适反应温度为85℃;最适反应pH值为5.0;在金属离子对酶活影响的研究中发现Al^2+、Na^+、K^+、Ca^2+、Mn^2+、Zn^2+、Co^2+对酶活起到促进作用,Cu^2+、Fe^2+、Ag^2+、Mn^2+Ni^2+的终浓度达到100mmol/L时对酶活有较强的抑制作用;具有较好的热稳定性,在95℃处理38h后仍具有50%的活性。 展开更多
关键词 Α-半乳糖苷酶 基因克隆 表达 酶学性质
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低聚糖在功能性食品中的应用及研究进展 预览 被引量:6
7
作者 徐琳琳 +1 位作者 姜珊 王玉华 《粮食与油脂》 北大核心 2017年第1期5-8,共4页
介绍了低聚糖的生理功能,并列举具有代表性的低聚糖及其应用和研究进展。
关键词 低聚糖 生理功能 应用
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α-葡萄糖苷合成酶的制备及其合成低聚糖的研究
8
作者 姜仁凤 +3 位作者 王丽娜 徐琳琳 姜珊 王玉华 《食品工业》 北大核心 2017年第5期162-166,共5页
一种新型的合成低聚糖的方法是利用来自于嗜热古菌Thermotoga neapolitana的α-葡萄糖苷酶及其突变后形成的糖苷合成酶。这种糖苷合成酶的构建是在糖苷酶催化中心亲核体氨基酸位点用非亲核体氨基酸取代亲核体氨基酸,从而使糖苷酶水解活... 一种新型的合成低聚糖的方法是利用来自于嗜热古菌Thermotoga neapolitana的α-葡萄糖苷酶及其突变后形成的糖苷合成酶。这种糖苷合成酶的构建是在糖苷酶催化中心亲核体氨基酸位点用非亲核体氨基酸取代亲核体氨基酸,从而使糖苷酶水解活性丧失,只具有糖苷合成能力,使寡糖的合成量增加。此糖苷合成酶合成寡糖过程是利用氟代吡喃葡萄糖作为供体,麦芽糖作为受体,产物为麦芽三糖。产物用HPLC进行分析,然后通过正交试验对合成低聚糖反应条件进行优化,得到最适加酶量为0.06 mg/mL,最适底物浓度为35 mmol/L,最适反应时间为6 h。 展开更多
关键词 Α-葡萄糖苷酶 低聚糖合成 定点突变
嗜热果糖苷酶的基因克隆及表达优化 预览
9
作者 徐琳琳 +3 位作者 姜珊 李娜 王溪竹 王玉华 《中国食品添加剂》 北大核心 2017年第4期74-82,共9页
从嗜热菌Thermotoga neapolitana DSM4359得到嗜热果糖苷酶基因片段,以p ET-28a(+)为表达载体,在Escherichia.coil BL21(DE3)中高效表达。由SDS-PAGE检测可得构建后嗜热果糖苷酶的分子量约为60 KDa。通过单因素试验和响应面法对该... 从嗜热菌Thermotoga neapolitana DSM4359得到嗜热果糖苷酶基因片段,以p ET-28a(+)为表达载体,在Escherichia.coil BL21(DE3)中高效表达。由SDS-PAGE检测可得构建后嗜热果糖苷酶的分子量约为60 KDa。通过单因素试验和响应面法对该嗜热果糖苷酶的产酶培养基进行优化选择,最终确定最佳产酶培养基为:蔗糖10.11 g/L,硝酸铵12.30 g/L,安琪酵母浸粉FM905 8.24 g/L,MgSO4·7H2O 5.61 mmol/L,NaCl 10 g/L。相比优化前,经优化后的培养基所产嗜热果糖苷酶酶活提高了近2.1倍。达到了提高嗜热果糖苷酶表达量的目的。 展开更多
关键词 嗜热果糖苷酶 基因克隆 表达 优化
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耐酸性α-淀粉酶研究进展 被引量:1
10
作者 贾冬梅 华晓曼 +5 位作者 王玉华 王雨珊 南博 王心哲 游颖 《食品科技》 CAS 北大核心 2016年第10期224-228,共5页
耐酸性α-淀粉酶是最重要的碳水化合物降解酶。文章归纳整理了国内外耐酸性α-淀粉酶的主要来源及其特性,介绍了高产菌株的选育方法和研究现状,预计对钙离子没有依赖性的耐酸性α-淀粉酶将会成为研究热点。
关键词 耐酸性Α-淀粉酶 菌种选育 研究进展
D-乳糖醇代替异丙基-β-D-巯基半乳糖苷对重组蛋白诱导表达的影响 预览 被引量:2
11
作者 姜仁凤 +3 位作者 何舒 任大勇 徐琳琳 沈明浩 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第7期128-133,共6页
目的:用D-乳糖醇代替异丙基-β-D-巯基半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)作为诱导剂,诱导重组葡萄糖苷酶的表达。方法:首先通过单因素试验探讨D-乳糖醇浓度、诱导时间及诱导温度对重组葡萄糖苷酶表达的影响,从而确定... 目的:用D-乳糖醇代替异丙基-β-D-巯基半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)作为诱导剂,诱导重组葡萄糖苷酶的表达。方法:首先通过单因素试验探讨D-乳糖醇浓度、诱导时间及诱导温度对重组葡萄糖苷酶表达的影响,从而确定最佳影响因素的水平值,然后在单因素试验的基础上采用三因素三水平的响应面法对重组葡萄糖苷酶表达进行优化分析,依据回归分析方法确定最佳诱导工艺条件。结果:最佳诱导工艺条件为D-乳糖醇的诱导终浓度1.0 mmol/L、诱导时间7.0 h、诱导温度34℃。结论:D-乳糖醇可以代替IPTG作为一种高效的lac及其衍生物的启动子基因工程重组蛋白的理想诱导剂。 展开更多
关键词 Α-葡萄糖苷酶 诱导 响应面 D-乳糖醇
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玉米醇溶蛋白的制备及酶解产物的生物学活性研究进展
12
作者 徐琳琳 +2 位作者 姜仁凤 郑明珠 刘景圣 《食品工业》 CAS 北大核心 2015年第11期252-257,共6页
玉米醇溶蛋白(Zein)是一种醇溶谷蛋白,也是玉米的主要贮藏蛋白。玉米醇溶蛋白的独特的物理化学性质使其在不同的工业领域都有广泛的应用,尤其是在食品科学、制药学和生物医学领域。作为一种天然高聚物,除了在工业中的应用,玉米醇溶蛋... 玉米醇溶蛋白(Zein)是一种醇溶谷蛋白,也是玉米的主要贮藏蛋白。玉米醇溶蛋白的独特的物理化学性质使其在不同的工业领域都有广泛的应用,尤其是在食品科学、制药学和生物医学领域。作为一种天然高聚物,除了在工业中的应用,玉米醇溶蛋白也是科学研究的热点。综述了玉米醇溶蛋白的结构特点、制备工艺及酶解后多肽的生物学活性。 展开更多
关键词 玉米醇溶蛋白 制备工艺 酶解 生物学活性
紫甘薯花青素酸乳的制备及功能特性研究 被引量:1
13
作者 姜仁凤 +2 位作者 武学宁 徐琳琳 沈明浩 《食品科技》 CAS 北大核心 2015年第5期94-99,共6页
以紫甘薯为研究对象,研究紫甘薯花青素酸乳的制备工艺,同时研究了紫甘薯酸乳的功能特性。得到紫甘薯花青素酸乳的最佳工艺条件为:花青素添加量20%、白砂糖添加量6%、接种量7%、发酵时间7 h,此时紫甘薯花青素酸乳的酸乳风味、色泽、组... 以紫甘薯为研究对象,研究紫甘薯花青素酸乳的制备工艺,同时研究了紫甘薯酸乳的功能特性。得到紫甘薯花青素酸乳的最佳工艺条件为:花青素添加量20%、白砂糖添加量6%、接种量7%、发酵时间7 h,此时紫甘薯花青素酸乳的酸乳风味、色泽、组织状态最好,产品品质最佳。紫甘薯花青素酸乳超氧阴离子清除率为66%,羟基自由基清除率为85%,均高于抗坏血酸,具有很强的抗氧化作用。 展开更多
关键词 紫甘薯 花青素 酸乳 功能特性
灵芝活性组分在小鼠体内的降糖功效研究 预览 被引量:5
14
作者 包焜 陈萍 +3 位作者 王佳男 方洪帅 苗玉强 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第1期29-32,共4页
为了探究灵芝活性组分灵芝多肽、多糖的降血糖机理,采用四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型,经不同组分灵芝提取物灌胃连续4周后测定空腹血糖值、胰岛素浓度、肝糖原、肌糖原含量、肝脏SOD活性MDA含量。结果表明,灵芝多糖能有效增加小鼠血... 为了探究灵芝活性组分灵芝多肽、多糖的降血糖机理,采用四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型,经不同组分灵芝提取物灌胃连续4周后测定空腹血糖值、胰岛素浓度、肝糖原、肌糖原含量、肝脏SOD活性MDA含量。结果表明,灵芝多糖能有效增加小鼠血清胰岛素浓度( P<0.05);灵芝多肽和多糖可显著降低糖尿病小鼠空腹血糖含量,降糖率分别为19.1%和29.8%;显著增强小鼠肝脏SOD活性(P<0.05),升高率分别为13.4%和19.7%;降低肝脏MDA含量(P<0.05),且分别降低了27.8%和35.1%。 展开更多
关键词 灵芝 多肽 多糖 血糖 胰岛素
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紫薯花青素提取工艺和纯化的研究 被引量:7
15
作者 姜仁凤 +2 位作者 武学宁 徐琳琳 沈明浩 《食品科技》 CAS 北大核心 2015年第2期259-263,共5页
以紫甘薯为研究对象,通过单因素和正交试验对紫甘薯提取剂的选择和提取工艺及纯化条件进行探讨,筛选出最佳提取剂和提取工艺及纯化条件,紫甘薯中花青素的最佳提取剂为乙醇的酸性溶液,提取最佳工艺条件为:80%乙醇酸性溶液,料液比为1:10... 以紫甘薯为研究对象,通过单因素和正交试验对紫甘薯提取剂的选择和提取工艺及纯化条件进行探讨,筛选出最佳提取剂和提取工艺及纯化条件,紫甘薯中花青素的最佳提取剂为乙醇的酸性溶液,提取最佳工艺条件为:80%乙醇酸性溶液,料液比为1:10,提取温度为60℃,提取时间为3 h。紫甘薯花青素的纯化条件为:大孔树脂吸附温度为35℃,吸附p H值为2.5;大孔树脂乙醇解吸浓度为70%,解吸时间为0.5 h。 展开更多
关键词 紫甘薯 花青素 提取工艺 纯化
多媒体技术在实验动物学教学中的应用 预览
16
作者 沈明浩 《产业与科技论坛》 2014年第11期143-144,共2页
实验动物学课程内容多,一些内容抽象。多媒体教学作为一种现代教学方式对实验动物学教学有很好的辅助作用,本文对实验动物学使用多媒体的技术的优势、可能出现的问题及在实际教学中的应用进行了探讨。
关键词 实验动物学 多媒体教学 现代化教学
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天然酪氨酸酶抑制剂的种类及其对酪氨酸酶抑制作用的研究进展 预览 被引量:12
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作者 宋凤瑞 刘志强 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期454-459,共6页
本文综述了几类天然植物来源的化合物,如黄酮及其衍生物、有机酸、苷类、萜类、醛类、酯类和香豆素类等天然产物成分对酪氨酸酶活力的抑制作用及其机制。其抑制作用可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制和混合型抑制。同类化合物的抑制能... 本文综述了几类天然植物来源的化合物,如黄酮及其衍生物、有机酸、苷类、萜类、醛类、酯类和香豆素类等天然产物成分对酪氨酸酶活力的抑制作用及其机制。其抑制作用可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制和混合型抑制。同类化合物的抑制能力与化合物活性基团的种类、数量和位置有关联。许多化合物对酪氨酸酶的抑制能力强于当前的标准抑制剂。本文重点阐述了几类天然成分对酪氨酸酶的抑制机理,为酪氨酸酶在各个领域的应用提供依据。 展开更多
关键词 酪氨酸酶 抑制剂 天然药用植物 褐变
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川乌与白芍配伍对CYP450酶活性影响及其代谢指纹的研究 被引量:5
18
作者 郑重 +2 位作者 皮子凤 刘志强 宋凤瑞 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1705-1710,共6页
利用UPLC-MS/MS的多反应监控(MRM)技术,结合多探针底物方法,评价川乌-白芍配伍对肝脏主要药物代谢酶CYP 1A2、CYP 2C、CYP 2E1、CYP 2D、CYP 3A的活性影响。结果表明:与川乌单煎液相比,白芍与川乌不同配比溶液均能降低川乌对CYP3A、C... 利用UPLC-MS/MS的多反应监控(MRM)技术,结合多探针底物方法,评价川乌-白芍配伍对肝脏主要药物代谢酶CYP 1A2、CYP 2C、CYP 2E1、CYP 2D、CYP 3A的活性影响。结果表明:与川乌单煎液相比,白芍与川乌不同配比溶液均能降低川乌对CYP3A、CYP2D、CYP2C及CYP1A2的抑制作用,而对CYP2E1基本无影响。制川乌组分-白芍配伍溶液的CYP代谢指纹图谱分析结果表明,与川乌单煎液相比,共煎液经CYP代谢后双酯型生物碱的丰度明显降低,而单酯型生物碱的丰度明显增加。表明白芍与川乌共用,能使川乌中的双酯型毒性生物碱加快降解,生成抗炎活性较好的单酯型生物碱,起到减毒增效的作用。 展开更多
关键词 川乌 白芍 CYP450 代谢指纹图谱 减毒 增效
6种中药提取物体外对大鼠肝细胞色素CYP450活性的影响
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作者 朱洪彬 +2 位作者 邢俊鹏 刘志强 宋凤瑞 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1131-1135,共5页
利用UPLC-MS/MS的多反应监测(MRM)技术,结合多探针底物方法,对6种中药提取物——山楂叶提取物、淫羊藿提取物、刺五加叶提取物、红车轴草提取物、银杏叶提取物和葛根提取物对细胞色素亚型CYP1A2、CYP2C、CYP2E1、CYP2D和CYP3A的活性... 利用UPLC-MS/MS的多反应监测(MRM)技术,结合多探针底物方法,对6种中药提取物——山楂叶提取物、淫羊藿提取物、刺五加叶提取物、红车轴草提取物、银杏叶提取物和葛根提取物对细胞色素亚型CYP1A2、CYP2C、CYP2E1、CYP2D和CYP3A的活性影响进行了系统研究。结果表明,6种提取物对各CYP亚型酶均有抑制能力,其中山楂叶提取物对CYP2D的抑制能力最强,IC50值仅为4.04μg.mL 1;红车轴草提取物对CYP2D的抑制能力也较强,其IC50值为5.73μg.mL 1;山楂叶提取物对CYP2E1也有较强的抑制能力,IC50值为10.91μg.mL 1。此外,银杏叶提取物对CYP3A、2D、2E1的IC50值分别为45.12、35.45和22.41μg.mL 1,刺五加叶提取物对CYP2E1抑制的IC50值为32.89μg.mL 1。机理性抑制实验结果表明,山楂叶提取物和葛根提取物对CYP2E1和CYP2D的抑制随着预孵时间延长而增强。 展开更多
关键词 中药提取物 CYP450 UPLC-MS MS
栖热袍菌α-葡糖苷酶的基因克隆表达及酶学性质 预览
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作者 刘琼 李大军 +3 位作者 陈丽丽 曲宁宁 张雪 《食品与发酵科技》 CAS 2013年第1期4-7,12共5页
用分子克隆手段获得栖热袍茵(TherrnotoganeapolitanaDSM4359)中的α-葡糖苷酶基因,构建该基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。以RThermotoganeapolitanaDSM4359的α-葡糖苷酶基因DNA为模板,通过PCR扩增目的基因... 用分子克隆手段获得栖热袍茵(TherrnotoganeapolitanaDSM4359)中的α-葡糖苷酶基因,构建该基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。以RThermotoganeapolitanaDSM4359的α-葡糖苷酶基因DNA为模板,通过PCR扩增目的基因,并连接至表达载体中,构建重组质粒pET-28a-甜u,然后转化到大肠杆菌中,加IPTG诱导获得重组蛋白。提取粗酶,用葡萄糖测定试剂盒测酶活。序5,1分析结果表明,该基因的读码框碱基长度为2166bp,编码722个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,α-葡糖苷酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达.蛋白分子量约为62KDa;酶的最适反应温度为70℃,最适pH为5.0。 展开更多
关键词 pET-28a Α-葡糖苷酶 克隆 表达
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