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福建山羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析 预览
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作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期326-330,共5页
【目的】对福清一山羊养殖场发生的山羊肺炎病原进行确诊,为福建山羊溶血性曼式杆菌的分离鉴定及检测提供研究基础。【方法】对剖检采取的组织进行细菌分离培养,随后对溶血性曼氏杆菌、羊口疮病毒、绵羊肺炎支原体和丝状支原体簇等羊常... 【目的】对福清一山羊养殖场发生的山羊肺炎病原进行确诊,为福建山羊溶血性曼式杆菌的分离鉴定及检测提供研究基础。【方法】对剖检采取的组织进行细菌分离培养,随后对溶血性曼氏杆菌、羊口疮病毒、绵羊肺炎支原体和丝状支原体簇等羊常见呼吸道病原进行PCR检测,对分离菌进行16SrRNA基因克隆测序,并对分离株进行药物敏感性研究。【结果】细菌分离培养结果显示:从病死羊肺脏中分离到1株细菌;PCR检测结果显示,除溶血性曼氏杆菌有扩增条带外,未检测到其他病原;16SrRNA测序结果显示:分离株16SrRNA基因序列与GenBank上公布的其他溶血性曼氏杆菌的同源性为97.1%~100.0%,与溶血性曼氏杆菌美国D171参考株同源性高达100%;以上结果表明分离菌为溶血性曼氏杆菌,命名为FJ-FQ2018。药物敏感性试验表明分离株对氟苯尼考、恩诺沙星、头孢噻吩、头孢唑啉、环丙沙星等高敏,对氨苄西林中敏,对多粘菌素B、林可霉素低敏。【结论】福建某养殖场引进的山羊发生肺炎后经病原分离鉴定确诊为溶血性曼氏杆菌感染,分离菌株对8种抗生素的耐药性存在差异。 展开更多
关键词 山羊 溶血性曼氏杆菌 分离鉴定 药敏试验
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绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 林裕胜 李莎莎 +3 位作者 锦秀 张靖鹏 游伟 胡奇林 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期943-950,共8页
绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Mo)和丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri, Mmc)是引起羊支原体性肺炎(M.pneumonia of sheep and goats, MPSG)的主要病原。为了快速鉴别引起MPSG的主要病原,建立一种可以同时检测Mo... 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Mo)和丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri, Mmc)是引起羊支原体性肺炎(M.pneumonia of sheep and goats, MPSG)的主要病原。为了快速鉴别引起MPSG的主要病原,建立一种可以同时检测Mo和Mmc的双重TaqMan探针荧光定量PCR (Real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)检测方法。根据Mo p113序列和Mmc MLC_1770 (hypothetical protein gene)序列,利用Beacon Designer 7.9结合NCBI Blast软件分析,分别设计出针对Mo和Mmc的特异性引物和探针。通过对引物浓度、探针浓度和退火温度等反应条件的优化,建立了双重TaqMan探针qRT-PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果表明,建立的双重TaqMan探针qRT-PCR的标准曲线相关系数R2分别为0.998和0.999,扩增效率分别为94.8%和97.0%;该方法对其他羊常见病原均无扩增信号,证明该方法具有良好的特异性;该方法对Mo和Mmc的最低检测限均为100 copies/μL,敏感性是常规PCR的100倍;组内和组间变异系数都低于2%,说明重复性好。应用该方法对福建省内收集的187例临床样品进行检测,结果显示,Mo的阳性率为47.6%(89/187),Mmc的阳性率为11.8%(22/187),两种病原体混合感染阳性率为10.2%(19/187)。以上数据结果表明,本研究建立的方法可用于临床上Mo和Mmc的准确、快速检测。本研究为Mo和Mmc的快速检测及流行病学提供了技术支撑。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 丝状支原体山羊亚种 TaqMan探针荧光定量PCR
羊传染性脓疱病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 林裕胜 锦秀 +3 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 北大核心 2018年第4期341-345,共5页
根据GenBank公布的羊传染性脓疱病毒VIR基因序列(No.KF666563.1),利用Beacon Designer 7.9软件设计1对特异性引物,建立羊传染性脓疱病毒VIR基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测羊传染性脓疱病毒... 根据GenBank公布的羊传染性脓疱病毒VIR基因序列(No.KF666563.1),利用Beacon Designer 7.9软件设计1对特异性引物,建立羊传染性脓疱病毒VIR基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测羊传染性脓疱病毒,对羊常见病原无特异性扩增;最低检测限为100copies·μL^-1;组内和组间变异系数均小于2%;应用该方法对39份临床样品进行检测,阳性率为94.9%(37/39)。以上结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,适合于羊传染性脓疱的病原学检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 SYBR Green 实时荧光定量PCR
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绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种多重PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 游伟 胡奇林 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期812-817,共6页
为同时快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)和山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),本研究根据Mo的P80基因,Mmc的MLC_1760和Mccp的arcA基因序列,设计合成了3对特异性引物,建立了同时检测Mo、Mmc和Mccp的多重PCR方法... 为同时快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)和山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),本研究根据Mo的P80基因,Mmc的MLC_1760和Mccp的arcA基因序列,设计合成了3对特异性引物,建立了同时检测Mo、Mmc和Mccp的多重PCR方法。该方法可以同时扩增出Mo、Mmc和Mccp的特异性片段,而对大肠杆菌、巴氏杆菌、羊传染性脓痕病毒等常见羊病病原无交叉反应,对Mo、Mmc和Mccp的最低检出量分别为3.62×10~4拷贝/μL、4.03×10~5拷贝/μL和6.78×10~5拷贝/μL。应用该方法对75份临床样品进行检测,结果与单一PCR检测结果一致。对32份临床样品同时用该多重PCR方法与分离鉴定法进行检测,结果显示,两种方法对Mo、Mmc、Mccp的检测符合率分别为87.5%、100%、100%。本研究建立的多重PCR方法特异性强、敏感性较高,适用于Mo、Mmc和Mccp临床快速检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 丝状支原体山羊亚种 山羊支原体山羊肺炎亚种 多重PCR
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绵羊肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 预览
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作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 北大核心 2018年第10期1054-1058,共5页
根据GenBank公布的绵羊肺炎支原体Y-98株(No.KM435069.1)P80基因序列,利用Beacon Designer7.9软件设计1对特异性引物,建立了绵羊肺炎支原体的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测绵羊肺炎支原体,对其他... 根据GenBank公布的绵羊肺炎支原体Y-98株(No.KM435069.1)P80基因序列,利用Beacon Designer7.9软件设计1对特异性引物,建立了绵羊肺炎支原体的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测绵羊肺炎支原体,对其他羊常见病原扩增结果无特异性扩增;该方法最低检测限为10copies·μL-1,组内和组间变异系数均小于2%;采用该方法对96份临床样品进行检测,绵羊肺炎支原体的阳性率为67.7%(65/96),结果显示该方法与TaqMan实时荧光定量PCR方法检测结果一致。以上结果表明本研究建立的绵羊肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于绵羊肺炎支原体的病原学检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 SYBR Green 荧光定量PCR
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丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740生物信息学分析 预览
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作者 张靖鹏 锦秀 +2 位作者 林裕胜 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 北大核心 2018年第9期883-887,共5页
为研究丝状支原体山羊亚种Mmc-3740基因编码蛋白的结构与功能,运用生物信息学软件,对该基因编码蛋白的二级结构、跨膜区域、信号肽等生物信息进行预测及分析。结果显示,该基因编码蛋白拥有α螺旋、延伸链、随机卷曲结构;有信号肽,亚细... 为研究丝状支原体山羊亚种Mmc-3740基因编码蛋白的结构与功能,运用生物信息学软件,对该基因编码蛋白的二级结构、跨膜区域、信号肽等生物信息进行预测及分析。结果显示,该基因编码蛋白拥有α螺旋、延伸链、随机卷曲结构;有信号肽,亚细胞定位在细胞外或者细胞质内,可能为分泌蛋白,具有较高的免疫原性,抗原表位偏高的区域主要集中在氨基酸序列的第28~51、60~67、80~130位处;蛋白分子式为C607H1000N184O261S5,分子量15.21kD,等电点(PI值)为4.42,在微生物体内半衰期较短,为不稳定蛋白。该结果为Mmc-3740编码蛋白的进一步研究提供基础数据。 展开更多
关键词 丝状支原体山羊亚种 特异性基因 生物信息学
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山羊支原体山羊肺炎亚种SYBR GreenⅠqRT-PCR检测方法的建立
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作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期339-345,共7页
山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious capri pleuropneumonia,CCPP)的病原。本研究根据GenBank公布的Mccp F38株(No.LN515398.1)arcD(MCCPF38_00114)基... 山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious capri pleuropneumonia,CCPP)的病原。本研究根据GenBank公布的Mccp F38株(No.LN515398.1)arcD(MCCPF38_00114)基因序列设计1对特异性引物,建立了针对Mccp的SYBR GreenⅠ qRT-PCR方法。结果显示,该方法能特异性检测Mccp,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)、绵羊肺炎支原体(Myplasma ovipenumoniae,Mo)、羊传染性脓疱毒(Orf virus,ORFV)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)等羊常见病原均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;该方法的最低检测限为279 copies/μL,组内和组间变异系数均小于1%,说明该方法灵敏度高、重复性好。本研究建立的检测Mccp arcD基因的SYBR GreenⅠ qRT-PCR方法为CCPP的临床早期诊断及定量分析Mccp感染水平提供了更准确的方法。 展开更多
关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 SYBR GreenⅠ QRT-PCR
绵羊肺炎支原体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期316-320,共5页
为建立一种快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)的检测方法,本研究根据GenBank登录的Mo Y-98株(KR021380.1)黏附素基因p113基因序列设计1对特异性引物和探针,建立了针对Mo的TaqMan荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测Mo,对丝... 为建立一种快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)的检测方法,本研究根据GenBank登录的Mo Y-98株(KR021380.1)黏附素基因p113基因序列设计1对特异性引物和探针,建立了针对Mo的TaqMan荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测Mo,对丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、莱氏无胆甾原体及羊传染性脓疱病毒(ORFV)等羊常见病原扩增结果均为阴性;该方法最低检测限为10拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%;采用该方法对96份临床样品进行检测,结果Mo的阳性率为67.7%(65/96),比常规PCR法及支原体分离鉴定法更加敏感。以上结果表明本研究建立的Mo TaqMan荧光定量PCR方法可以用于Mo的准确快速检测及羊支原体性肺炎的诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 TAQMAN探针 RF-PCR
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福清山羊地方性鼻内肿瘤病毒绵羊肺炎支原体和溶血性曼氏杆菌混合感染的诊断病例 预览
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作者 林裕胜 锦秀 +3 位作者 张靖鹏 游伟 毛坤明 胡奇林 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第10期69-70,130共3页
2017年10月福清市某山羊养殖场发生了以流鼻涕、呼吸困难为主要特征的传染病,其中1~6月龄小羊病死率高达50%以上。通过临床症状、剖检病变和实验室检验,确诊为山羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)、绵羊肺炎支原体... 2017年10月福清市某山羊养殖场发生了以流鼻涕、呼吸困难为主要特征的传染病,其中1~6月龄小羊病死率高达50%以上。通过临床症状、剖检病变和实验室检验,确诊为山羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)混合感染引起的山羊呼吸道疾病,诊断过程报告如下。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 肺炎支原体 福清山羊 混合感染 诊断过程 地方性 鼻涕 绵羊
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羊口疮病毒和丝状支原体簇双重PCR检测方法的建立及应用 预览 被引量:2
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作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 游伟 胡奇林 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期292-295,共4页
为建立一种同时快速检测羊口疮病毒(ORFV)和丝状支原体簇(Mm cluster)的方法,本研究根据ORFV的B2L基因和Mm cluster的16S rRNA基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了同时检测ORFV核酸和Mm cluster核酸的双重PC... 为建立一种同时快速检测羊口疮病毒(ORFV)和丝状支原体簇(Mm cluster)的方法,本研究根据ORFV的B2L基因和Mm cluster的16S rRNA基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了同时检测ORFV核酸和Mm cluster核酸的双重PCR方法。该方法可以同时扩增出ORFV和Mm cluster的特异性片段,而对其它常见病原的DNA模板均无扩增,对ORFV和Mm cluster的最低检出量分别为3.8×104拷贝/μL和1.3×103拷贝/μL。利用该方法对36份临床样品进行检测,结果显示双重PCR检测结果与单一PCR检测结果符合率为100 %。本研究建立的双重PCR方法特异性强,敏感性高,可重复性好,为临床ORFV和Mm cluster的快速检测、诊断及流行病学调查提供了方法。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 丝状支原体簇 双重PCR 检测
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福建省羊传染性脓疱病毒F1L、B2L和VIR基因的遗传变异分析 预览 被引量:2
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作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 游伟 胡奇林 《动物医学进展》 北大核心 2017年第2期1-6,共6页
为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株oRFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFVF1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列... 为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株oRFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFVF1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.8%~99.79/6,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.3%~97.1%;同NZ2参考株比较,FJ-YT2014缺失2个氨基酸;10株ORFVB2L基因之间核苷酸序列同源性为97.59/5~99.9%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.7%~99.5%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.7%~97.7%;10株ORFVVIR基因之间的核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,与国内株的核苷酸序列同源性为94.6%~99.6%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为94.6%~96.4%。基于基因核苷酸序列的遗传进化分析表明,10株ORFVF1L基因与福建省分离株、山西株和新疆株亲缘关系较近;10株oRFVB2L基因与新疆、山西、德国毒株亲缘关系较近;10株ORFVVIR‘基因与台湾、新疆株亲缘关系较近。结果提示,当前福建省流行的ORFVF1L、B2L和VIR基因尚未出现明显变异,但是其F1L、B2L和VIR基因核苷酸序列之间普遍存在异质性。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 F1L基因 B2L基因 VIR基因 变异分析
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福建山羊地方性鼻内肿瘤的分子流行病学调查 预览
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作者 锦秀 林裕胜 +4 位作者 毛坤明 游伟 张靖鹏 胡奇林 《福建农业学报》 北大核心 2017年第8期837-841,共5页
为明确2014-2017年福建省多地区羊发生的一种以流稀薄鼻液为主要症状疾病的病原,对该病进行流行病学调查、肿瘤组织切片观察,特异性PCR诊断以及核酸序列分析,结果显示该病在流行病学、临床症状、病理变化、组织病理变化上与国内外已报... 为明确2014-2017年福建省多地区羊发生的一种以流稀薄鼻液为主要症状疾病的病原,对该病进行流行病学调查、肿瘤组织切片观察,特异性PCR诊断以及核酸序列分析,结果显示该病在流行病学、临床症状、病理变化、组织病理变化上与国内外已报道的病例表现基本一致,RT-PCR鉴定结果为ENTV-2,其中7个分离株与ENTV-2CHN2(分离于中国)处于同一进化树分支,1个分离株与ENTV-SC(分离于中国)、ENTVShaanxi(分离于中国)处于同一进化树分支。说明近几年福建省流行的羊肿瘤病的病原为ENTV-2,为福建省加强该病的防治奠定基础。 展开更多
关键词 山羊 地方性鼻内肿瘤 分子流行病学
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牛支原体FJ-HJ分离株的分离及鉴定 预览
13
作者 锦秀 林裕胜 +2 位作者 游伟 胡奇林 《中国农学通报》 2017年第20期107-112,共6页
从福建省患呼吸道疾病牛肺组织中分离到1株支原体,采用形态学观察、生化试验、特异性PCR检测和16SrRNA序列分析等进行鉴定,旨在明确该病病原。结果显示分离株菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起,命名为FJ-HJ分离株。分离株不能... 从福建省患呼吸道疾病牛肺组织中分离到1株支原体,采用形态学观察、生化试验、特异性PCR检测和16SrRNA序列分析等进行鉴定,旨在明确该病病原。结果显示分离株菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起,命名为FJ-HJ分离株。分离株不能水解精氨酸,不能发酵葡萄糖,不分解尿素,血细胞吸附试验和溶血试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性;PCR反应扩增出牛支原体特异大小为1911bp的目的片段;分离株16SrRNA基因序列与牛支原体标准株PG45的序列相似性为99.7%。研究结果表明:本次分离到的支原体为牛支原体,证实福建省存在牛支原体病的流行,为福建省牛支原体病的防治提供了科学依据。 展开更多
关键词 牛支原体 分离 鉴定 福建
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ORFV和Mo双重PCR检测方法的建立及应用 被引量:3
14
作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 游伟 胡奇林 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1374-1380,共7页
羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)是羊传染性脓疱病(Contagious ecthyma,CE)的病原,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma0∥咖neumoniae,Mo)是羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)的主要病原,近年来此... 羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)是羊传染性脓疱病(Contagious ecthyma,CE)的病原,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma0∥咖neumoniae,Mo)是羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)的主要病原,近年来此两种病原混合感染日益增多,目前采用单一PCR方法检测这两种病原,临床上迫切需要能同时快速检测这两种病原的方法。为了建立能够直接从样品中同时检测ORFV核酸和Mo核酸的双重PCR方法,本研究根据ORFV的主要膜蛋白B2L基因(major envelope protein B2L gene)和DMo的膜蛋白P80基因(membraneproteinP80gene)序列,设计合成了2对特异性引物。结果显示,该方法可以同时扩增出ORFV的402bp和Mo的700bp特异性片段,而对其他常见病原的DNA模板均无扩增,显示出良好的特异性,该方法对ORFV和Mo的最低检出量分别为1.1×10’copies/ixL和3.47×10^3copies/ixL,比单-PCR敏感10倍。对来自福建省部分羊场的883份病山羊(Caprahircus)临床样品进行检测,双重PCR检出ORFV阳性样品28份(阳性率为33.7%),Mo阳性样品33份(阳性率为39.8%),同时感染ORFV和NMo的阳性样品9份(阳性率为10.8%1,检测结果与单-OaFV和Mo PCR结果一致。本研究所建立的双重PCR方法可用于ORFV和Mo的临床检测,为CEfUMPGS的临床快速鉴别诊断和流行病学调查提供了有效的方法。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒(ORFV) 绵羊肺炎支原体(Mo) 双重PCR
福建省羊支原体性肺炎分子流行病学研究 预览 被引量:5
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作者 锦秀 林裕胜 +2 位作者 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2017年第1期12-16,共5页
为了解福建羊支原体性肺炎和山羊传染性胸膜肺炎的分子流行情况,于2014-2016年从福建省6个市采集到疑似羊支原体性肺炎或山羊传染性胸膜肺炎病料61份,用支原体目引物、绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、山... 为了解福建羊支原体性肺炎和山羊传染性胸膜肺炎的分子流行情况,于2014-2016年从福建省6个市采集到疑似羊支原体性肺炎或山羊传染性胸膜肺炎病料61份,用支原体目引物、绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、山羊支原体山羊亚种、精氨酸支原体、莱氏无胆甾原体和无乳支原体的特异引物,通过PCR方法进行检测。挑取部分PCR阳性病料进行支原体分离和纯化,用16SrRNA基因通用引物进行克隆测序。结果显示61份样品中检出绵羊肺炎支原体45份(73.77%),检出丝状支原体山羊亚种4份(6.56%),检出莱氏无胆甾原体4份(6.56%),检出精氨酸支原体2份(3.28%)。该研究结果表明福建省发生的类传染性胸膜肺炎是以绵羊肺炎支原体为主的羊支原体性肺炎,为福建省羊支原体性肺炎的有效防治提供了科学依据。 展开更多
关键词 羊支原体性肺炎 分子流行病学 福建省
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丝状支原体山羊亚种SYBR Green ⅠqRT-PCR快速检测方法的建立 被引量:3
16
作者 林裕胜 锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1895-1902,共8页
丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)可以引起羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)。现有的方法费时、不能定量,不利于Mmc的准确快速检测。为建立检测Mmc的SYBR Green I qRT-PCR方... 丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)可以引起羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)。现有的方法费时、不能定量,不利于Mmc的准确快速检测。为建立检测Mmc的SYBR Green I qRT-PCR方法,本研究基于Mmc的MLC1770基因(hypothetical protein gene)序列进行特异性引物设计,用构建的Mmc-1770重组质粒为阳性标准品建立标准曲线,进行了该方法的特异性、灵敏性和重复实验。结果显示:标准曲线相关系数R2为0.999,扩增效率是101.3%;该方法对山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipenumoniae,Mo)、巴氏杆菌(Pasteurell amultocida,Pm)、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)及羊传染性脓疱毒(Orf virus,ORFV)均无交叉反应;最低检测限为226拷贝/μL,比常规PCR高100倍;组内变异系数为0.54%0.79%,组间变异系数为0.70%0.96%;对临床95份疑似MPGS样品进行检测,阳性率为11.6%(11/95)。实验结果证明该方法特异性强、敏感性高、重复性好,适合于临床样品中Mmc的快速准确检测。 展开更多
关键词 丝状支原体山羊亚种 SYBR GreenⅠ QRT-PCR 检测方法
山羊地方性鼻内肿瘤病毒和支原体混合感染山羊的诊断 预览 被引量:2
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作者 林裕胜 锦秀 +1 位作者 游伟 胡奇林 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第10期59-61,I0001共4页
2016年10月福州市一山羊养殖户的山羊发病,经临床症状、剖检病变及实验室检验,确诊为羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)和丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma myco... 2016年10月福州市一山羊养殖户的山羊发病,经临床症状、剖检病变及实验室检验,确诊为羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)和丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)混合感染引起的山羊呼吸道疾病,报告如下。 展开更多
关键词 肺炎支原体 混合感染 地方性 山羊 病毒 肿瘤 诊断
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丝状支原体山羊亚种FJ-GT株的分离和鉴定 预览 被引量:2
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作者 锦秀 林裕胜 +2 位作者 游伟 胡奇林 《中国农学通报》 2016年第29期11-16,共6页
为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,用16S r RNA通用引物对分离株进行克隆测序。将分离菌株命名为FJ-GT。结果显示菌落呈典型的油煎蛋... 为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,用16S r RNA通用引物对分离株进行克隆测序。将分离菌株命名为FJ-GT。结果显示菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起;分离株能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,血细胞吸附试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性,溶血试验为β溶血;PCR结果扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)特异大小为394 bp的目的片段;菌株16S r RNA序列与丝状支原体山羊亚种标准株PG3的序列比较,同源性为99.5%。鉴定结果表明本次分离到的支原体为丝状支原体山羊亚种。本研究首次从病原学角度证明了福建省存在由丝状支原体山羊亚种引起的羊支原体性肺炎,对福建省羊支原体性肺炎的诊断和有效防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 丝状支原体山羊亚种 分离 鉴定 羊支原体性肺炎 福建
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山羊莱氏无胆甾原体 FJ-NP 株的分离鉴定 预览
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作者 锦秀 林裕胜 +2 位作者 游伟 胡奇林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3329-3335,共7页
为明确福建省某羊场发生的疑似羊支原体性肺炎病例的病原,利用支原体培养基对发病羊肺脏组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性 PCR 方法进行鉴定,并对分离株16S rRNA 进行测序分析。结果显示,分离株菌落呈油煎蛋状,有棕... 为明确福建省某羊场发生的疑似羊支原体性肺炎病例的病原,利用支原体培养基对发病羊肺脏组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性 PCR 方法进行鉴定,并对分离株16S rRNA 进行测序分析。结果显示,分离株菌落呈油煎蛋状,有棕黄色中心突起;能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,氯化四氮唑还原反应、胆固醇需要试验、血细胞吸附试验及溶血试验的结果均为阴性,美兰还原反应阳性。经 PCR 扩增出莱氏无胆甾原体支原体(Acholeplasma laidlawii ,AL)大小为505 bp 的特异性目的片段,分离株16S rRNA 序列与莱氏无胆甾原体标准株 PG8同源性为99.8%。鉴定结果表明,本次从山羊肺脏组织分离到的支原体为莱氏无胆甾原体,命名为 FJ-NP 株,但该分离株与山羊发病性的关系有待进一步研究。 展开更多
关键词 山羊支原体性肺炎 莱氏无胆甾原体 分离 鉴定
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羊传染性脓疱病毒研究进展 预览 被引量:8
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作者 林裕胜 锦秀 +1 位作者 林甦 胡奇林 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期91-96,共6页
羊传染性脓疱病毒是羊传染性脓疱(羊口疮)的病原,能够感染山羊、绵羊和野生小反刍动物,也能够感染人,主要引起口腔黏膜、眼睛、外阴、蹄等部位形成丘疹、水疱、脓疱和疣状痂皮,病畜因衰竭和继发感染而死亡。论文对羊传染性脓疱病毒的... 羊传染性脓疱病毒是羊传染性脓疱(羊口疮)的病原,能够感染山羊、绵羊和野生小反刍动物,也能够感染人,主要引起口腔黏膜、眼睛、外阴、蹄等部位形成丘疹、水疱、脓疱和疣状痂皮,病畜因衰竭和继发感染而死亡。论文对羊传染性脓疱病毒的特征、致病性、致病机理、免疫机理、免疫逃逸机制、检测方法和疫苗研究进行了综述。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 致病机理 免疫机理 检测方法 疫苗
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