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设施农业用履带式电动车辆驱动电机主要参数匹配 预览
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作者 文龙 文龙 《江苏农机化》 2019年第2期26-28,共3页
无线操控独立电驱动的履带式车辆可以有效地解决现有设施农业机械使用过程中出现的问题。作为电动车辆驱动系统的核心,驱动电机的主要参数决定了车辆的性能特点。该文根据不同使用工况,对驱动电机的功率、转速和转矩进行匹配计算,可为... 无线操控独立电驱动的履带式车辆可以有效地解决现有设施农业机械使用过程中出现的问题。作为电动车辆驱动系统的核心,驱动电机的主要参数决定了车辆的性能特点。该文根据不同使用工况,对驱动电机的功率、转速和转矩进行匹配计算,可为车辆设计提供支持。 展开更多
关键词 设施农业 电动车辆 驱动电机 参数匹配
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池塘工业化养殖杂交黄颡鱼试验 预览
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作者 陈平 鲍明明 +3 位作者 朱雷阳 文龙 张呈祥 徐钢春 《科学养鱼》 2019年第5期35-36,共2页
目前,草鱼、斑点叉尾等品种在流水槽养殖中是比较适宜的养殖品种。江阴自2014年首次开展池塘工业化养殖以来,已建设养殖流水槽106条,系统养殖面积超过1万米2。为进一步筛选适宜的养殖鱼类和扩大流水槽养殖推广,2017年江阴市水产指导... 目前,草鱼、斑点叉尾等品种在流水槽养殖中是比较适宜的养殖品种。江阴自2014年首次开展池塘工业化养殖以来,已建设养殖流水槽106条,系统养殖面积超过1万米2。为进一步筛选适宜的养殖鱼类和扩大流水槽养殖推广,2017年江阴市水产指导站主导黄颡鱼池塘工业化养殖试验,从四川眉山引入杂交黄颡鱼水花330万尾,集中培育成鱼种后放入全市5个点、16条流水槽进行养殖,均取得了显著的生产效果。一、养殖前准备1.养殖塘口养殖塘口4个,两个塘口为一组,东区一组塘口面积11.2亩,西区一组塘口面积12.2亩,总面积23.4亩。池形结构中间为平台,四周为环沟。 展开更多
关键词 黄颡鱼 工业化养殖
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Alu元件在染色质三维结构层次上的生物信息学分析 预览
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作者 何超 文龙 +4 位作者 李平 张彦 曾晶 殷作明 赵志虎 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期254-261,共8页
染色质在细胞核内三维高级结构包括最底层的核小体、核小体组成的“串珠”结构、螺线管纤维结构、染色质/DNA环结构(chromatin/DNA loop)、拓扑结构域(topologically associated domain,TAD)等多层次结构。其中,TAD因在不同的细胞类型... 染色质在细胞核内三维高级结构包括最底层的核小体、核小体组成的“串珠”结构、螺线管纤维结构、染色质/DNA环结构(chromatin/DNA loop)、拓扑结构域(topologically associated domain,TAD)等多层次结构。其中,TAD因在不同的细胞类型中相对稳定且保守,被认为是染色质三维结构的基本单元。Alu元件是一种哺乳动物基因组中占据了较大比例的短散在重复元件,其广泛存在且种类繁多,目前关于Alu元件功能上的研究尚不透彻。本研究对Alu元件与染色质三维结构的关系进行研究,分析了Alu元件在染色质三维结构形成中的作用,并通过染色质三维结构上的距离关系对Alu元件子族的演化流程进行了探索。结果发现,Alu元件参与的染色质间相互作用在高强度的染色质相互作用中的比例随着强度增加而逐渐增高,表明Alu在染色质三维结构构建的过程中发挥了重要的作用。同时,研究还发现Alu元件在染色质上相互作用的强度与进化上的关系存在着一定的正相关性,表现在一维序列进化距离上比较接近的Alu元件在染色质的三维结构上也会彼此相互靠近。 展开更多
关键词 染色质三维结构 Alu元件 生物信息 进化树
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一种采用电动推杆间接传动的三点悬挂设计 预览
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作者 鲁鸣 文龙 《南方农机》 2018年第19期80-82,共3页
随着能源危机和环境保护的要求,电动农业机械产品陆续推出。从现有的产品来看,绝大多数的农业机械的电动化主要是将农业机械的动力源进行了更换。配套的三点悬挂装置依旧采用液压装置。为此,笔者根据自己多年的工作实践,针对中小型农业... 随着能源危机和环境保护的要求,电动农业机械产品陆续推出。从现有的产品来看,绝大多数的农业机械的电动化主要是将农业机械的动力源进行了更换。配套的三点悬挂装置依旧采用液压装置。为此,笔者根据自己多年的工作实践,针对中小型农业电动车辆,设计了一种采用电动推杆间接传动的三点悬挂装置。 展开更多
关键词 电动推杆 电动三点悬挂 投影法
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TST加直肠黏膜缝扎术治疗直肠黏膜内脱垂60例临床观察 预览 被引量:1
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作者 文龙 徐臻 刘志强 《中外女性健康研究》 2018年第4期91-91,144共2页
目的:探讨TST加直肠黏膜缝扎术治疗直肠黏膜内脱垂的疗效。方法:对60例直肠黏膜内脱垂患者行TST加直肠黏膜缝扎术治疗。结果:60例患者手术均成功,治愈38例(63.3%),显效15例(25%),好转6例(10%),无效1例(1.7%),无大出血、感染、直肠阴道... 目的:探讨TST加直肠黏膜缝扎术治疗直肠黏膜内脱垂的疗效。方法:对60例直肠黏膜内脱垂患者行TST加直肠黏膜缝扎术治疗。结果:60例患者手术均成功,治愈38例(63.3%),显效15例(25%),好转6例(10%),无效1例(1.7%),无大出血、感染、直肠阴道痿等并发症发生。结论:TST加直肠黏膜缝扎术治疗直肠黏膜内脱垂操作简单,疗效确切。 展开更多
关键词 直肠黏膜内脱垂 TST 黏膜缝扎术.
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平价养车APP的开发与推广 预览
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作者 温杰 文龙 +3 位作者 王宝梁 王志勃 杨斌 严潇 《内燃机与配件》 2018年第21期214-216,共3页
结合现有养车市场线上与线下体验模式,设计出基于Andriod平台开发的"平价养车"APP应用,有效的将养车市场信息流、资金流、物流等有机的结合在一起,形成以客户为中心,以汽车服务机构为载体,提供快速的服务模式。
关键词 开发 平价养车APP 载体 服务模式
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电动农业车辆履带式底盘设计 预览
7
作者 鲁鸣 文龙 《汽车实用技术》 2018年第19期17-19,36共4页
电动汽车的快速发展,带动电动农业车辆的相关研究.履带式车辆对土壤的单位面积压力小和对土壤的附着性能好等优点广泛用于农业机械.根据电动农业车辆的需求,确定了履带式底盘的驱动方式、主要部件的相关参数、驱动电机和减速器的基本要求.
关键词 履带式底盘 驱动方式 参数计算
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综采工作面对接工艺技术研究 预览
8
作者 文龙 《山东煤炭科技》 2018年第1期52-54,共3页
口孜东矿121304工作面里外两段不等长,外段需要增设部分支架.为做好与加长工作面的对接安全,提前做好了相关准备工作,对接过程中严格按规定程序、规定动作进行操作,作业过程中加强现场协调管理,实现了综采工作面的安全顺利对接,保证了... 口孜东矿121304工作面里外两段不等长,外段需要增设部分支架.为做好与加长工作面的对接安全,提前做好了相关准备工作,对接过程中严格按规定程序、规定动作进行操作,作业过程中加强现场协调管理,实现了综采工作面的安全顺利对接,保证了工作面的正常生产. 展开更多
关键词 综采 对接 工艺
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防裂抗渗复合材料对改进核电厂用混凝土性能的影响 预览
9
作者 文龙 程书剑 +2 位作者 黄士奎 张士野 蒋红星 《核科学与工程》 CSCD 北大核心 2018年第1期1-8,共8页
在核电工程建设中,混凝土的性能对核电厂全寿期的安全高效运行具有重要影响。DW-n防裂抗渗复合材料是一种新型的混凝土添加材料,具有更高的力学性能及粘结度等特性。本研究通过掺加DW-n防裂抗渗复合材料的混凝土试块与山东海阳核电站一... 在核电工程建设中,混凝土的性能对核电厂全寿期的安全高效运行具有重要影响。DW-n防裂抗渗复合材料是一种新型的混凝土添加材料,具有更高的力学性能及粘结度等特性。本研究通过掺加DW-n防裂抗渗复合材料的混凝土试块与山东海阳核电站一期工程中实际使用的混凝土进行实时比对试验,定量分析了掺加DW-n防裂抗渗复合材料对核电厂用混凝土各项性能的影响,得出此种新型防裂抗渗复合材料能够优化核电厂用混凝土各项性能的结论。 展开更多
关键词 新型防裂抗渗复合材料 核电混凝土 力学性能 抗渗性 抗裂性
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中国电动拖拉机研究进展 预览 被引量:1
10
作者 文龙 周俊 +2 位作者 姬长英 顾宝兴 Muhammad Sohail Memon 《中国农机化学报》 2017年第10期102-107,共6页
作为解决能源短缺和环境污染的主要措施,电动车辆发展得到世界各国广泛认同。与电动汽车相比,电动拖拉机发展较为缓慢,随着相关基础研究的不断进步,电动拖拉机经过电网供电第一发展阶段,已经进入车载电源供电第二发展阶段。通过筛选第... 作为解决能源短缺和环境污染的主要措施,电动车辆发展得到世界各国广泛认同。与电动汽车相比,电动拖拉机发展较为缓慢,随着相关基础研究的不断进步,电动拖拉机经过电网供电第一发展阶段,已经进入车载电源供电第二发展阶段。通过筛选第二发展阶段相关研究成果,从整机结构设计及其性能分析、电池及能量管理、电机驱动及其控制、系统仿真技术和其他相关研究等五个方面总结中国电动拖拉机研究进展。电动拖拉机整机结构不必完全遵循拖拉机传统方式,应以适应农业作业环境为导向,提升作业性能为要求为方向。加快第二代动力锂电池在电动拖拉机中的应用,设计符合农业工况的拖拉机用电池能量管理系统。紧密联系电机研发厂商,开发适合农用的电机及其驱动和控制技术。进一步探索电动拖拉机系统仿真技术,以加快电动拖拉机开发速度。要以第三代智能控制理论为发展方向,全面提升电动拖拉机的智能化作业能力和使用性能,实现我国农业机械的跨越式发展。 展开更多
关键词 电动拖拉机 结构设计 电池及能量管理 电机驱动及其控制 系统仿真
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消痔方颗粒抗炎止痛作用研究 预览 被引量:1
11
作者 司悦悦 师海波 +3 位作者 高华 文龙 王威 刘坤 《云南中医中药杂志》 2017年第12期67-69,共3页
目的 研究消痔方颗粒的抗炎止痛作用.方法 采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、 角叉菜胶致大鼠足肿胀、 组胺致大鼠毛细 血管通透性增强、 棉球诱导大鼠肉芽组织增生和角叉菜胶致大鼠胸膜炎模型, 观察消痔方颗粒的抗炎作用; 采用热板致小鼠疼痛... 目的 研究消痔方颗粒的抗炎止痛作用.方法 采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、 角叉菜胶致大鼠足肿胀、 组胺致大鼠毛细 血管通透性增强、 棉球诱导大鼠肉芽组织增生和角叉菜胶致大鼠胸膜炎模型, 观察消痔方颗粒的抗炎作用; 采用热板致小鼠疼痛反 应和冰乙酸致小鼠扭体反应模型, 观察消痔方颗粒的止痛作用.结果 与对照组比较, 消痔方颗粒各剂量组均能显著抑制小鼠耳廓 肿胀( P〈0. 01), 高中剂量组显著抑制大鼠毛细血管通透性增强、 肉芽组织增生和胸腔渗出液白细胞总数( P〈 0 . 0 5或 P〈 0 . 0 1或 P〈0. 001), 高剂量组能显著抑制大鼠足肿胀和胸腔渗出液体积( P〈0. 0 5或P 〈 0 . 01 );与模型组比较, 消痔方颗粒高剂量组能显著 提高小鼠的痛阈和减少小鼠扭体反应( P〈0. 05).结论消痔方颗粒具有明显的抗炎作用和一定的止痛作用. 展开更多
关键词 消痔方颗粒 抗炎作用 止痛作用
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全基因组染色质相互作用Hi-C文库制备的优化及其质量控制 预览 被引量:2
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作者 张香媛 何超 +6 位作者 叶丙雨 谢德健 师明磊 张彦 文龙 李平 赵志虎 《遗传》 CSCD 北大核心 2017年第9期847-855,共9页
Hi-C(highest-throughput chromosome conformation capture)技术是近年出现的一种研究染色质相互作用的关键技术。该技术步骤多、耗时长,涉及的试剂耗材繁杂,目前常规流程还有较多可以改进优化的步骤。本研究以GM12878细胞为材料,通过... Hi-C(highest-throughput chromosome conformation capture)技术是近年出现的一种研究染色质相互作用的关键技术。该技术步骤多、耗时长,涉及的试剂耗材繁杂,目前常规流程还有较多可以改进优化的步骤。本研究以GM12878细胞为材料,通过优化常规Hi-C实验中的交联、酶切、限制性内切酶的失活、末端生物素标记、原位连接等关键步骤,建立了稳健的Hi-C流程,制备了相应的Hi-C文库。文库经初步的Sanger测序等质量控制以后,两个生物学重复文库进行了高通量测序。测序结果利用生物信息学处理发现:原始测序数据中可比对率和配对率分别达到90%和72%左右。此外,去除自连片段(self-circular ligation)和dangling-ends片段以后,可获得超过96%的有效相互作用对,其中染色体内相互作用数据达到60%。进一步的染色体相互作用热图分析可见清晰拓扑学相关结构域TADs(topologically associated domains),与已发表的文献报道一致。而两次生物学重复之间的相关性分析则表明bin coverage和all bin pairs的相关性都极强。上述结果表明通过对常规Hi-C流程关键步骤的优化,本研究建立了高效、稳健、可靠的Hi-C流程,对Hi-C技术的进一步使用与推广具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 Hi-C技术 染色质相互作用 高通量测序
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澳大利亚职业教育汽车专业培训包的分析与应用——以发动机课程为例 预览 被引量:1
13
作者 文龙 王宝梁 张秋霞 《机械职业教育》 2017年第9期38-42,共5页
文章介绍澳大利亚职业教育TAFE模式,归纳总结《AUR12汽车服务与维修行业培训包》的组成和内容,提取整合培训包中与发动机相关的资格证书和能力单元,以江苏某高职院校发动机课程为对象进行详细分析。借鉴澳大利亚汽车专业培训包成熟... 文章介绍澳大利亚职业教育TAFE模式,归纳总结《AUR12汽车服务与维修行业培训包》的组成和内容,提取整合培训包中与发动机相关的资格证书和能力单元,以江苏某高职院校发动机课程为对象进行详细分析。借鉴澳大利亚汽车专业培训包成熟的课程开发方法和内容,结合我国高职院校汽车专业的实际情况,给出发动机课程建设方案。 展开更多
关键词 澳大利亚 职业教育 AUR12培训包 发动机课程
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核基质附着区广泛参与基因组三维结构折叠的生物信息学分析 被引量:1
14
作者 何超 李平 +5 位作者 张彦 师明磊 张香媛 谢德建 文龙 赵志虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期638-644,共7页
在细胞分裂间期,每条染色质都占据着特定的染色质领域(chromosome territory,CT)。每个CT领域内进一步分成不同的拓扑学相关区域(topological associated domain,TAD),每个TAD又由若干子TAD(sub-TAD)构成。不同的TAD相互聚集,形... 在细胞分裂间期,每条染色质都占据着特定的染色质领域(chromosome territory,CT)。每个CT领域内进一步分成不同的拓扑学相关区域(topological associated domain,TAD),每个TAD又由若干子TAD(sub-TAD)构成。不同的TAD相互聚集,形成基因活跃表达和不表达的A、B两种组份或区室(compartment)。然而,目前对于染色质折叠方式及维持机制的研究尚无定论。核基质附着区(matrix attachment regions,MARs)是在不同物种基因组中广泛存在的一类富含AT序列的与核基质结合的DNA元件,能够通过与CTCF、SATB1等调控蛋白质相互作用,对远距离的基因表达进行调控。本研究以染色质三维结构为背景,通过整合染色质三维结构及组蛋白修饰等组学数据,对MARs元件与染色质三维结构的关系进行研究,对MARs元件参与形成的相互作用网络的结构及功能进行探索。结果发现,MARs元件与染色质三维结构高度相关,而且在高强度相互作用中占据较大的比例,提示MARs元件在染色质折叠方面发挥作用。此外,通过拓扑结构聚类分析还首次揭示,MARs元件分为不同类型,包括维持染色质领域及空间构象等的结构单元部分,以及调控基因表达等的功能单元部分。这表明,MARs元件在基因组三维高级结构的建立、维持以及功能等方面发挥重要作用。 展开更多
关键词 核基质附着区 染色质三维结构 生物信息学 多组学分析 DNA元件
某有阀式脉动喷气发动机的实验研究与数值仿真 预览
15
作者 文龙 蔡文祥 +2 位作者 余陵 张俊威 林奕林 《科学技术与工程》 北大核心 2017年第6期308-312,共5页
为了研究某亥姆霍兹型有阀式脉动喷气发动机的工作特性在已有实验台基础上完善了实验台和测试系統。在发动机自吸油的情况下,对动机进行了多次的点火启动实验,测量了有关发动机的壁温、燃气压力以及其他相关特性参数。而后研究了在改变... 为了研究某亥姆霍兹型有阀式脉动喷气发动机的工作特性在已有实验台基础上完善了实验台和测试系統。在发动机自吸油的情况下,对动机进行了多次的点火启动实验,测量了有关发动机的壁温、燃气压力以及其他相关特性参数。而后研究了在改变油箱高度从而间接改变发动机自吸油流量的情况下,供油流量大小对发动机燃气压力以及其他参数的影响。实验结果表明随着燃油流量的增加发动机的燃气压力随之升高,壁温和其他参数的值也相应的发生了变化。此外,建立了发动机的三维模型別用CFX软件对发动机的燃烧过程进行了仿真计算。仿真计算得到的结果与实验的结果较为吻合,从而也验证了计算模型的正确性。 展开更多
关键词 有阀式脉动喷气发动机 自主吸油 特性参数 测试系统 CFX仿真
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苹果在线分级系统设计与试验 预览 被引量:1
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作者 张庆怡 顾宝兴 +3 位作者 姬长英 方会敏 郭俊 文龙 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期117-124,共8页
【目的】根据苹果采摘机器人结构和作业特点设计与其配套的在线分级系统,满足实时分级需求。【方法】通过预分级机构剔除果径在等级外的苹果,减少视觉分级的无用功;利用力传感器获取苹果质量信息并确定质量等级;通过机器视觉技术实现苹... 【目的】根据苹果采摘机器人结构和作业特点设计与其配套的在线分级系统,满足实时分级需求。【方法】通过预分级机构剔除果径在等级外的苹果,减少视觉分级的无用功;利用力传感器获取苹果质量信息并确定质量等级;通过机器视觉技术实现苹果大小和腐烂面积的检测;借助Matlab和VS2008开发图像处理算法和界面控制程序;构建基于CAN总线的分布式控制网络。对苹果进行综合分级试验。【结果】苹果实际直径与检测直径的决定系数为0.990 3,实际质量与检测质量的决定系数为0.999 6,实际腐烂面积与检测腐烂面积的决定系数为0.985 5,综合分级成功率可以达到89.71%,连续分级时单果平均分级时间为2.89 s。【结论】该分级系统工作稳定,方便扩展,有较高的分级效率和分级精度,可以满足采摘机器人的实时分级需求。 展开更多
关键词 采摘机器人 预分级 在线实时分级 机器视觉 图像处理算法 综合分级
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内口清除肌间置管对口引流术治疗高位肛周脓肿68例临床观察 预览 被引量:4
17
作者 杨军 文龙 《结直肠肛门外科》 2017年第3期390-392,共3页
高位肛周脓肿感染范围广,可涉及肛门内、外括约肌及肛直环,治疗难度相对较大。传统切开挂线术式创伤大、愈合时间长,术后易出现漏气、漏液等肛门失禁现象,且术后患者肛门疼痛感明显。在追求高治愈率的同时,如何做到更加充分维护肛门的... 高位肛周脓肿感染范围广,可涉及肛门内、外括约肌及肛直环,治疗难度相对较大。传统切开挂线术式创伤大、愈合时间长,术后易出现漏气、漏液等肛门失禁现象,且术后患者肛门疼痛感明显。在追求高治愈率的同时,如何做到更加充分维护肛门的正常形态与功能、减轻患者术后肛门疼痛及缩短住院时间仍是需要不断探讨的内容。需要指出的是,脓肿治疗应注意把握括约肌切断的程度以及降低功能损伤程度。 展开更多
关键词 高位肛周脓肿 外括约肌 肛门部 切开挂线术 疼痛感 引流术 临床观察 漏液 感染范围 肛门失禁
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术后早期肠内与肠外联合营养在胃肠道肿瘤患者中的应用 被引量:8
18
作者 文龙 王钰全 《中华胃肠外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1424-1426,共3页
目的 探讨术后早期肠内与肠外联合营养治疗胃肠道肿瘤患者的临床疗效。方法 前瞻性纳入2012年10月至2015年3月间山东大学齐鲁医院青岛院区收治的拟行手术治疗的89例Ⅱ~Ⅲ期胃肠道肿瘤患者,按照随机数字表法将入组患者分为联合营养组(4... 目的 探讨术后早期肠内与肠外联合营养治疗胃肠道肿瘤患者的临床疗效。方法 前瞻性纳入2012年10月至2015年3月间山东大学齐鲁医院青岛院区收治的拟行手术治疗的89例Ⅱ~Ⅲ期胃肠道肿瘤患者,按照随机数字表法将入组患者分为联合营养组(44例,行术后早期肠内营养联合肠外营养治疗)和肠外营养组(45例,行传统肠外营养治疗)。比较两组患者术后7 d的营养指标(血清总蛋白、血红蛋白及白蛋白)、免疫球蛋白水平(IgA、IgG和IgM)及临床结局(肠道功能恢复时间、术后住院时间和术后并发症)。结果 联合营养组患者术后血清总蛋白、血红蛋白、白蛋白等营养指标和IgA、IgG、IgM等免疫指标均明显高于肠外营养组(均P 〈 0.05),且术后肠道功能恢复时间加快[(61.3±14.8)h比(71.2±15.4)h,P = 0.003],术后住院时间缩短[(7.8±3.8)d比(10.3±3.5)d,P = 0.001],术后并发症发生率降低[15.9%(7/44)比35.6%(16/45),P= 0.034],差异均有统计学意义。结论 术后早期肠内与肠外联合营养支持治疗可以显著改善胃肠道肿瘤患者的营养状况和免疫功能,值得在临床上推广。 展开更多
关键词 胃肠道肿瘤 肠内营养 肠外营养 营养指标 免疫功能
利用CRISPR/Cas9技术构建CTCF蛋白降解细胞系 预览 被引量:3
19
作者 谢德健 师明磊 +7 位作者 张彦 王天艺 文龙 叶丙雨 李平 何超 张香媛 赵志虎 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期651-657,共7页
CTCF是脊椎动物关键的绝缘子蛋白,在细胞生命过程中发挥重要作用,敲除CTCF基因会导致小鼠胚胎死亡。为进一步探讨CTCF的功能,本文利用CRISPR/Cas9介导的同源重组,在内源性CTCF表达框上游敲入一个有丝分裂期降解结构域(Mitosis-special d... CTCF是脊椎动物关键的绝缘子蛋白,在细胞生命过程中发挥重要作用,敲除CTCF基因会导致小鼠胚胎死亡。为进一步探讨CTCF的功能,本文利用CRISPR/Cas9介导的同源重组,在内源性CTCF表达框上游敲入一个有丝分裂期降解结构域(Mitosis-special degradation domain,MD),该结构域可以带动CTCF融合蛋白在M期降解。作为对照,将MD结构域的第42位的精氨酸突变为丙氨酸,形成无降解活性的MD*,可使MD*-CTCF融合蛋白始终稳定存在。将嘌呤霉素与融合蛋白同时表达,即可利用抗生素筛选,高效地筛选到纯合克隆。利用蛋白印迹技术和免疫荧光检测3种细胞在不同细胞周期的CTCF蛋白变化情况,发现MD-CTCF细胞系CTCF蛋白含量约为野生型细胞的10%,MD*-CTCF细胞系的CTCF含量与野生型没有显著差别;通过流式细胞术观测降解CTCF对细胞的影响,发现MD-CTCF细胞系G1期明显延长。总之,利用CRISPR/Cas9技术在CTCF表达框上游高效地插入MD,首个CTCF特异性降解的人类细胞系获得成功构建。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 基因组编辑 CTCF 蛋白质稳定性 蛋白降解
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单染色体靶向富集方法的建立
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作者 谢德健 张田甜 +7 位作者 师明磊 张彦 文龙 叶丙雨 李平 何超 张香媛 赵志虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1060-1066,共7页
靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍... 靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍体细胞CCC-HEL-1建立了一种单染色体靶向富集方法。具体步骤如下:(1)首先将人正常核型二倍体细胞同步化到G2/M期,制备染色体悬液;然后流式分选出21号单染色体。(2)采用多重退火环形扩增技术(MALBAC)对21号染色体DNA进行扩增;用扩增的DNA产物构建文库。(3)利用体外转录合成、生物素标记的RNA探针与文库进行液相杂交,捕获并验证捕获效率。荧光定量PCR检测结果证明,特定的21号染色体呈上百倍的富集,而靶标文库则富集了近60倍。结果提示,特异单染色体靶向富集方法成功建立。该法不仅可实现任一单染色体的靶向富集,用于单条染色体功能组学研究,而且还可能用于查找特定疾病相关的染色体异常(如DNA突变、异位、重复及倒置等),具有一定的实用意义。 展开更多
关键词 多重退火环形扩增 高通量测序 靶向富集 单染色体 流式分选
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