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HEVAg-PLGA纳米颗粒疫苗小鼠体内免疫学研究
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作者 秋兰 高丹丹 +4 位作者 施丽丽 肖艳萍 董晶剑 陈艳 冯昊 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期172-179,共8页
研究重组戊型肝炎抗原(HEVAg)-乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA)纳米颗粒抗原能否在动物体内诱导产生免疫应答。制备HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原后,通过皮下、滴鼻、口服途径接种Balb/c小鼠,每隔4周加强免疫两次,HEVAg与铝盐佐剂(铝佐剂疫苗Al2... 研究重组戊型肝炎抗原(HEVAg)-乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA)纳米颗粒抗原能否在动物体内诱导产生免疫应答。制备HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原后,通过皮下、滴鼻、口服途径接种Balb/c小鼠,每隔4周加强免疫两次,HEVAg与铝盐佐剂(铝佐剂疫苗Al2O3-Ag)为对照组,一定时间内检测抗体及细胞因子的应答水平。结果HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原在小鼠体内诱导产生有效的体液免疫、细胞免疫。滴鼻、口服途径黏膜系统中诱导产生较高滴度的IgA抗体,ELISPOT结果显示鼻腔、唾液腺中IgA ASCs数量显著增加;皮下途径诱导产生较高滴度的IgG抗体;常规铝佐剂疫苗相比于HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原诱导较强的IgG抗体水平,未诱导产生黏膜免疫应答;HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原诱导产生较强细胞免疫应答,皮下接种途径IFN-γ、IL-4生成细胞数量显著高于其它免疫组。与铝佐剂疫苗相比,HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原能有效诱导产生系统免疫及黏膜免疫应答,显示HEVAg-PLGA有潜力成为备选HEV黏膜疫苗抗原,同时展示PLGA颗粒作为黏膜系统抗原递送载体及黏膜佐剂的优越性。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒(HEV) 乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA) 纳米颗粒 黏膜免疫
产AmpC酶肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性分析 被引量:1
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作者 邓敏 谢新生 +5 位作者 徐水凌 秋兰 张戡 吴建明 陆许贞 王旭 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期25-28,共4页
目的了解本地区质粒介导的耐药机制在产AmpC酶肺炎克雷伯菌多重耐药中的作用、氨基糖苷修饰酶(AMEs)基因类型及转移方式。方法头孢西丁三维试验方法,检测产AmpC酶菌株;采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式。采用K-B纸... 目的了解本地区质粒介导的耐药机制在产AmpC酶肺炎克雷伯菌多重耐药中的作用、氨基糖苷修饰酶(AMEs)基因类型及转移方式。方法头孢西丁三维试验方法,检测产AmpC酶菌株;采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式。采用K-B纸片测定产AmpC接合子对4种氨基糖苷类抗生素的敏感性,并采用PCR技术检测AMEs基因。结果临床分离的820株肺炎克雷伯菌共筛选出108株疑产AmpC酶菌株,阳性率为13.17%。经接合转移试验、AmpC酶表型确认试验共获得53株产AmpC接合子。其中67.9%的接合子(36/53)检出氨基糖苷修饰酶基因,aac(3)-I和aac(6′)-II未检出,对4种常用氨基糖苷类抗生素(阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、奈替米星)耐药率分别为37.7%、68.0%、43.4%和62.3%。结论本地区质粒介导AmpC酶是肺炎克雷伯菌产生多重耐药的重要原因,产酶株对氨基糖苷类高度耐药,其耐药性与AMEs密切相关,耐药基因质粒的转移可导致耐药性的传播扩散。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 抗药性 多药 AMPC 超广谱Β-内酰胺酶 质粒
顶空毛细管GC法测定盐酸苯海拉明原料药中乙醇、甲苯的残留量 预览 被引量:1
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作者 谈学惠 秋兰 +1 位作者 刘国强 傅应华 《中国药房》 CAS 北大核心 2016年第18期2563-2565,共3页
目的:建立测定盐酸苯海拉明原料药中乙醇、甲苯残留量的方法。方法:采用顶空毛细管气相色谱法,以丁酮为内标。色谱柱为Agilent DB-624弹性石英毛细管柱,进样口温度为200℃,氢火焰离子化检测器温度为250℃,载气为高纯氮气,流速为3... 目的:建立测定盐酸苯海拉明原料药中乙醇、甲苯残留量的方法。方法:采用顶空毛细管气相色谱法,以丁酮为内标。色谱柱为Agilent DB-624弹性石英毛细管柱,进样口温度为200℃,氢火焰离子化检测器温度为250℃,载气为高纯氮气,流速为3.0 ml/min,柱温为程序升温,进样方式为分流进样,分流比为20∶1,顶空平衡温度为80℃,平衡时间为30 min,进样时间为1 min。结果:在该色谱条件下,乙醇、甲苯与内标峰能得到良好分离;乙醇、甲苯的检测质量浓度线性范围均为0.02~0.8 mg/ml(r=0.9998、0.9994);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3%,乙醇、甲苯的加样回收率分别为95.50%~103.50%、96.91%~103.74%,RSD分别为2.6%、2.2%(n=9)。结论:该方法简单、灵敏、准确,可用于盐酸苯海拉明原料药中乙醇、甲苯残留量的测定。 展开更多
关键词 顶空毛细管气相色谱法 盐酸苯海拉明原料药 残留溶剂 乙醇 甲苯
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产AmpC肺炎克雷伯菌质粒介导的多药耐药性与基因型研究 被引量:7
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作者 张戡 邓敏 +5 位作者 谢新生 徐水凌 秋兰 吴建明 陆许贞 王旭 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期7-9,51共4页
目的探讨产AmpC肺炎克雷伯菌耐药质粒介导的多药耐药性、耐药基因类型及转移方式。方法应用VITEK-2型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,头孢西丁纸片扩散法筛选出疑产AmpC酶阳性菌株,采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式,通过K-... 目的探讨产AmpC肺炎克雷伯菌耐药质粒介导的多药耐药性、耐药基因类型及转移方式。方法应用VITEK-2型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,头孢西丁纸片扩散法筛选出疑产AmpC酶阳性菌株,采用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式,通过K-B法检测受体菌的多药耐药性,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验和PCR测序等试验分析其耐药基因。结果 820株临床分离的肺炎克雷伯菌筛选出疑产AmpC酶阳性菌株108株,阳性率为13.17%;108株疑产AmpC菌经接合试验、AmpC酶表型确认试验获53株产AmpC接合子;经基因测序单纯AmpC酶基因阳性菌株34株,阳性率64.15%;同时携带ESBLs和AmpC基因菌株检出19株,阳性率35.85%;其均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论质粒介导AmpC酶是肺炎克雷伯菌产生多药耐药的重要原因,产酶株对多种抗菌药物耐药,耐药基因质粒的转移可导致耐药性的传播扩散。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 多药耐药性 AMPC 超广谱Β-内酰胺酶 质粒
重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白D9N的表达、纯化及生物学活性的研究 被引量:2
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作者 徐水凌 王兆丰 +2 位作者 秋兰 蒋晓玲 王云华 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期810-814,共5页
目的表达、纯化重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白D9N(rSEB.D9N),了解表达产物rSEB.D9N的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和肿瘤生长抑制作用。方法不同浓度IPTG诱导SEB—D9N突变体原核表达系统pET32a—SEB—D9N—EcoliBL21DE3表达rSEB—D9... 目的表达、纯化重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白D9N(rSEB.D9N),了解表达产物rSEB.D9N的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和肿瘤生长抑制作用。方法不同浓度IPTG诱导SEB—D9N突变体原核表达系统pET32a—SEB—D9N—EcoliBL21DE3表达rSEB—D9N,经Ni-NTA亲和层析法纯化rSEB-D9N,10%SDS-PAGE和高效液相色谱检测其纯度。以Vero细胞为靶细胞,进行rSEB-D9N的细胞毒性作用,并计算TCID5n值。采用MTT法分别检测不同浓度的rSEB—D9N促人淋巴细胞增殖及抑制KB及MCF-7癌细胞株生长的作用。流式细胞术检测rSEB-D9N刺激人淋巴细胞后CD3、CD4、CD8的表达。结果rSEB—D9N表达产量约占细菌总蛋白30%,纯化后获得纯度为90.48%的rSEB-D9N。rSEB和rSEB-D9N对Vero细胞的TCID50值分别为3.12,8.85μg,10.0,20.0mg·L^-1的rSEB—D9N具有显著的促PBMC增殖的作用(P〈0.05),且主要上调CD3,CD4和CD8的表达。5.0~20.0mg·L^-1 SEB-D9N作用的PBMC上清对KB和MCF-7细胞生长均可产生明显抑制作用(P〈0.05)。结论获得并纯化了重组葡萄球菌肠毒素B突变体蛋白(rSEB-D9N),其细胞毒性作用有所降低,但促人淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用仍较强,可作为研制升白细胞、抗肿瘤相关药物的候选突变体。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B 重组突变体蛋白 细胞毒性 淋巴细胞增殖 抑制肿瘤细胞
嘉兴地区幽门螺杆菌临床菌株cagA和vacA优势基因型研究 预览
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作者 秋兰 徐水凌 +2 位作者 李玉梅 王云华 张成文 《浙江预防医学》 2008年第8期 6-8,共3页
目的研究嘉兴地区幽门螺杆菌(Hdicobacter pylori,Hp)临床菌株cagA和vacA优势基因型状况及与疾病的关系。方法从胃、十二指肠疾病患者的胃粘膜活检组织中分离培养出44株HD。采用PCR检测cagA基因和vacA基因的信号区(s)和中间区(m... 目的研究嘉兴地区幽门螺杆菌(Hdicobacter pylori,Hp)临床菌株cagA和vacA优势基因型状况及与疾病的关系。方法从胃、十二指肠疾病患者的胃粘膜活检组织中分离培养出44株HD。采用PCR检测cagA基因和vacA基因的信号区(s)和中间区(m)亚型的分布,用卡方检验分析各基因在不同消化性溃疡或慢性胃炎中的Hp差异。结果44株Hp中cagA的阳性率为100%(44/44),vacA sla/m2基因型阳性率为61.4%(27/44),vacA sla/mlb为25.0%(11/44),vaeA sla/mlb-m2为9.0%(4/44),其中有2株HD同时检出sla/m2和sh/mlb-m2基因,另有2株Hp未检测到m区基因。慢性胃炎患者Hp的vacA sla/m2和vacA sla/mlb基因阳性率赐显高于消化性溃疡患者的Hp(P〈0.05),其余基因在不同类型疾病中的分布无统计学差异(P〉0.05)。结论cagA+vacA sla/m2、cagA+vacA sla/mlb均为嘉兴地区消化性溃疡或慢性胃炎患者感染的Hp的优势基因型,部分患者可混合感染多株不同vacA基因型的HD。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 CAGA基因 VACA基因 消化性溃疡 胃炎
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重组葡萄球菌肠毒素B蛋白表达、纯化及生物活性的实验研究 预览
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作者 徐水凌 毛亚飞 +1 位作者 秋兰 严杰 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期 568-572,共5页
目的 建立重组葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)表达、纯化方法,了解rSEB细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法 采用IPTG(1.0mmol·L^-1)诱导SEB原核表达系统pET32a-SEB-Eco艇也1D耶表达r... 目的 建立重组葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)表达、纯化方法,了解rSEB细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法 采用IPTG(1.0mmol·L^-1)诱导SEB原核表达系统pET32a-SEB-Eco艇也1D耶表达rSEB,10%SDS-PAGE检测其产量,Ni-NTA亲和色谱法纯化rSEB。采用Vero细胞测定rSEB的细胞毒性作用,并计算TCIC50值。通过MTY法分别检测不同浓度rSEB体外促淋巴细胞增殖作用,以及对肿瘤细胞株HepG2、HeLa的生长抑制作用。结果 所构建的SEB原核表达系统中,rSEB表达量约为细菌总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在。纯化的rSEB对Vero细胞的TCIC50为3.02μg。5.0~20.0mg·L^-1的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P〈0.05)。5.0~20.0mg·L。rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P〈0.05)。结论 建立了SEB高效表达、纯化方法,获得rSEB蛋白。所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为后续进一步分析SEB分子中相关活性位点及其减毒SEB突变体的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B 重组蛋白 细胞毒性 淋巴细胞增殖 抑制肿瘤细胞
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幽门螺杆菌感染、细胞凋亡和Bcl-2家族调控机制的研究进展 预览
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作者 陈秀青 王淑玉 +2 位作者 赵桂株 秋兰 徐水凌 《嘉兴学院学报》 2006年第6期 118-121,共4页
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是导致人类慢性胃炎和胃溃疡的重要病原体,也是胃癌发生、发展过程中的重要起始因素。其中胃上皮细胞的增殖与凋亡的失衡,在胃癌发生、发展过程中起着决定性的作用,而Bcl-2家族对细胞凋亡的调... 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是导致人类慢性胃炎和胃溃疡的重要病原体,也是胃癌发生、发展过程中的重要起始因素。其中胃上皮细胞的增殖与凋亡的失衡,在胃癌发生、发展过程中起着决定性的作用,而Bcl-2家族对细胞凋亡的调控,在胃癌发生中又有着重要的意义。该文就幽门螺杆菌感染、细胞凋亡和Bcl-2家族调控机制的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 细胞凋亡 Bel-2家族 幽门螺杆菌 胃癌
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自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的检测 被引量:4
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作者 向军俭 秋兰 +4 位作者 邓宁 王彤歌 王宏 唐勇 江振友 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 625-627,共3页
目的: 探索自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的存在状况.方法: 通过对封闭条件、酶标板类型及抗原用量等条件进行优化,建立了检测自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF抗体的ELISA检测方法.采用建立的最佳检测条件对395例自身免疫性... 目的: 探索自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的存在状况.方法: 通过对封闭条件、酶标板类型及抗原用量等条件进行优化,建立了检测自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF抗体的ELISA检测方法.采用建立的最佳检测条件对395例自身免疫性疾病患者的血清进行了bFGF自身抗体IgG和IgM的检测.结果:在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、慢性肾炎、皮肌炎(DM)、不明原因发热(FOU)和特发性血小板减少紫癜(IPT)等患者血清中检测到了高滴度的抗bFGF的IgG、 IgM自身抗体,各组的平均值和阳性率均明显高于正常对照组(P<0.05).结论: 在自身免疫性疾病患者体内广泛存在着bFGF的自身抗体,对bFGF自身抗体的调查研究将为自身免疫性疾病的机制的探讨奠定基础. 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 自身抗体 ELISA 自身免疫性疾病
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