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青鱼Dazl基因的原核表达及其多克隆抗体制备 预览
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作者 王艺舟 +6 位作者 王乾 夏必琳 罗君志 方健 邓羽 廖明聪 陈天圣 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第3期27-31,共5页
实验进行了青鱼( Mylopharyngodon piceus ) Dazl 基因的原核表达,兔抗青鱼源Dazl多克隆抗体的制备及抗体的特异性验证。首先将青鱼 Dazl 基因的编码区利用重组表达引物从pCS2- MpDazl 质粒中扩增出来,经酶切后连接到pET-28a载体中,构建... 实验进行了青鱼( Mylopharyngodon piceus ) Dazl 基因的原核表达,兔抗青鱼源Dazl多克隆抗体的制备及抗体的特异性验证。首先将青鱼 Dazl 基因的编码区利用重组表达引物从pCS2- MpDazl 质粒中扩增出来,经酶切后连接到pET-28a载体中,构建pET-28a- MpDazl 重组表达载体。然后将pET-28a- MpDazl 重组质粒转化至大肠杆菌( Escherichia coli )BL21中,利用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,获得分子量为27 kD的Dazl重组蛋白。将纯化的Dazl重组蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,抗体的效价和特异性通过ELISA法和 Western blot检测。结果:成功构建重组表达载体pET-28a- MpDazl;以0.5 mmol/L IPTG在37 ℃条件下诱导4 h可获得高效表达的Dazl重组蛋白;制备的兔抗青鱼Dazl多克隆抗体能够特异性识别原核表达Dazl蛋白、青鱼卵巢的内源Dazl蛋白以及细胞中过表达的Dazl蛋白,并证实了青鱼Dazl蛋白在性腺中表达的特异性。 展开更多
关键词 青鱼( Mylopharyngodon piceus ) DAZL 原核表达 多克隆抗体
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团头鲂转录因子Oct4的原核表达和多克隆抗体的制备
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作者 于淼 方健 +5 位作者 李玲玉 薛亭 邓羽 陈凯 陈天圣 《上海海洋大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期8-15,共8页
为进一步分析鱼类干细胞多能性转录因子Oct4的功能,将团头鲂(Megalobrama amblycephala)Oct4进行原核表达并制备了兔抗Oct4多克隆抗体。采用RT-PCR方法从团头鲂卵巢中扩增Oct4基因的部分编码片段,插入载体pET32a中构建重组原核表达载... 为进一步分析鱼类干细胞多能性转录因子Oct4的功能,将团头鲂(Megalobrama amblycephala)Oct4进行原核表达并制备了兔抗Oct4多克隆抗体。采用RT-PCR方法从团头鲂卵巢中扩增Oct4基因的部分编码片段,插入载体pET32a中构建重组原核表达载体pET32a-MaOct4;将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导、Ni2+亲和柱层析纯化获得分子量约49 ku的可溶性重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备抗体,通过ELISA法测定其效价,Western blot鉴定其特异性。实验结果表明:该重组载体在37℃,0.5 mmol/L IPTG条件下诱导4 h可获得Ma-Oct4重组蛋白的高效表达;制备的团头鲂Oct4多克隆抗体能够分别与纯化的Oct4蛋白、原核表达的Oct4蛋白、团头鲂胚胎中的内源Oct4蛋白以及HepG2细胞中过表达的Ma-Oct4:DsRed融合蛋白特异结合。为后续深入研究团头鲂Oct4在干细胞多能性调控中的作用提供了有效的分子工具。 展开更多
关键词 团头鲂 OCT4 原核表达 多克隆抗体 转录因子
团头鲂的胚胎发育与观察方法优化 预览
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作者 于淼 方健 +6 位作者 薛亭 陈凯 李玲玉 王艺舟 邓羽 陈天圣 《河南师范大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第1期89-94,共6页
通过人工繁殖获得团头鲂受精卵,在体视显微镜下对其胚胎和早期仔鱼发育过程进行了连续观察、拍照与测量.结果显示,团头鲂受精卵呈圆球形,具黏性,卵径(1.18±0.09)mm;在水温(21±1)℃条件下,团头鲂胚胎发育从受精到孵化历时39h10... 通过人工繁殖获得团头鲂受精卵,在体视显微镜下对其胚胎和早期仔鱼发育过程进行了连续观察、拍照与测量.结果显示,团头鲂受精卵呈圆球形,具黏性,卵径(1.18±0.09)mm;在水温(21±1)℃条件下,团头鲂胚胎发育从受精到孵化历时39h10min,经历了胚盘形成、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、器官形成期和出膜期7个发育阶段;初孵仔鱼体长(3.44±0.29)mm,出膜后第4d仔鱼鳔完全充气,卵黄囊消失;观察时,受精卵至尾鳍出现期胚胎置0.7%生理盐水中,肌肉效应期和后面各时期的胚胎经4%多聚甲醛固定后置3%甲基纤维素中拍照可获得良好效果.该工作为研究团头鲂胚胎早期发育过程提供了实时和动态的图像资料,并为鱼类胚胎发育观察提供了基本技术参考. 展开更多
关键词 团头鲂 胚胎发育 鲤科 显微观察 甲基纤维素
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睡美人转座子在草鱼CIK细胞中介导的高效基因整合 预览
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作者 陈凯 薛亭 +3 位作者 王艺舟 于淼 陈天圣 《水生生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期264-270,共7页
为研究睡美人(SleepingBeauty,SB)转座子系统在草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肾脏细胞(CIK)中介导的整合特性,构建了SB转座子和转座酶在两个质粒的二元反式(trans)转座子系统,以及转座子和转座酶元件在同一个质粒的一元顺式(cis)转座... 为研究睡美人(SleepingBeauty,SB)转座子系统在草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肾脏细胞(CIK)中介导的整合特性,构建了SB转座子和转座酶在两个质粒的二元反式(trans)转座子系统,以及转座子和转座酶元件在同一个质粒的一元顺式(cis)转座子系统;通过转染CIK细胞,用荧光显微镜、流式细胞仪和荧光定量PCR分析了转染2d后及嘌呤霉素筛选4周后的细胞,测定DsRed转染效率和整合效率,并结合高效热不对称交互式PCR扩增获得SB转座子整合位点的序列。结果表明,SB二元转座子系统的整合效率远高于一元系统;SB转座子与转座酶比例为1鲶2时,外源基因DsRed的整合效率最高;SB转座子偏向于插入草鱼基因组TA序列处。研究表明优化SB转座子和转座酶的比例能提高外源基因在草鱼细胞中的整合效率并快速获得突变细胞,同时为在鱼类细胞中采用SB转座子建立突变体文库提供理论基础。 展开更多
关键词 睡美人转座子 转座酶 草鱼肾脏细胞 整合位点
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HPLC测定大鼠血浆中钩藤碱的浓度 预览 被引量:1
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作者 张锋 +4 位作者 曾奎 刘婵 吴芹 陆远富 石京山 《遵义医学院学报》 2011年第6期 570-571,575,共3页
目的建立HPLC测定大鼠血浆中钩藤碱浓度的方法。方法色谱柱为ZORBAX SB C18柱(150mm×4.6 mm,5 m)。以甲醇-水(80:20)(含0.0025 mol.L-1三乙胺,冰乙酸调pH至7.5)为流动相,检测波长为254 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,进... 目的建立HPLC测定大鼠血浆中钩藤碱浓度的方法。方法色谱柱为ZORBAX SB C18柱(150mm×4.6 mm,5 m)。以甲醇-水(80:20)(含0.0025 mol.L-1三乙胺,冰乙酸调pH至7.5)为流动相,检测波长为254 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,进样量为20 l。结果钩藤碱与内源性杂质有较好分离度,钩藤碱在0.39~12.50g/ml浓度范围内呈良好线性关系;最低检测浓度为0.39 g/ml;回收率大于95%;日内和日间RSD均小于7%。结论此方法准确可靠,可用于测定钩藤碱的血药浓度。 展开更多
关键词 钩藤碱 高效液相色谱法 血药浓度 大鼠
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油管高温高压自动清洗系统设计 预览 被引量:2
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作者 孔德军 +1 位作者 徐兴宝 朱伟 《石油机械》 北大核心 2008年第3期 31-33,共3页
为了解决油管中稠油的清洗问题,利用高压水射流技术瞬间产生高温高压的特点开发了油管除垢专用自动清洗系统。对自动清洗线进行了总体设计,包括清洗流程、清洗工位等,完成了喷淋系统设计,可适应污渍多、难清洗的油管清洗。对不同的... 为了解决油管中稠油的清洗问题,利用高压水射流技术瞬间产生高温高压的特点开发了油管除垢专用自动清洗系统。对自动清洗线进行了总体设计,包括清洗流程、清洗工位等,完成了喷淋系统设计,可适应污渍多、难清洗的油管清洗。对不同的油垢可以采用不同的清洗压力,对系统的部分执行部件采用PLC智能控制,提高了生产效率,清洗检修1根油管的成本仅为150~200元,给企业带来了可观的经济效益。 展开更多
关键词 高压水射流技术 清洗流程 清洗工位 油管清洗 喷淋系统
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用开放的探究教学《孵小鸡》 预览
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作者 《科学课:小学版》 2007年第2期 18-21,共4页
一、实施前的设想与教学资源开发 以前的自然教学,我们经常会看到全班研究一个问题,每个小组都采用教师预先设定的同样材料,用同一种方法进行研究,每个学生获得的都是教材给出的标准答案。新课程实施以来,现在的课堂中一般都包括... 一、实施前的设想与教学资源开发 以前的自然教学,我们经常会看到全班研究一个问题,每个小组都采用教师预先设定的同样材料,用同一种方法进行研究,每个学生获得的都是教材给出的标准答案。新课程实施以来,现在的课堂中一般都包括创设情景,引出问题;提出问题,进行假设;设计方案,实验验证;交流展示,总结成果,基本上是四个大块。 展开更多
关键词 探究教学 开放 教学资源开发 新课程实施 自然教学 标准答案 创设情景 提出问题
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构建和谐科学课堂 预览
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作者 《科学课:小学版》 2007年第6期 50-51,共2页
“和谐”一词在《现代汉语词典》中的解析是:配合得适当和匀称。目前我国提出要创建和谐社会、和谐社区,“和谐”这个词的意义就有了拓展和延伸。相应之下许多学校提出要创建和谐校园、和谐课堂。对于科学课来说,实践的经验告知我们... “和谐”一词在《现代汉语词典》中的解析是:配合得适当和匀称。目前我国提出要创建和谐社会、和谐社区,“和谐”这个词的意义就有了拓展和延伸。相应之下许多学校提出要创建和谐校园、和谐课堂。对于科学课来说,实践的经验告知我们,立足了科学探究本质,做到活动和思维统一,课堂就是和谐的。 展开更多
关键词 “和谐” 科学课堂 《现代汉语词典》 和谐社会 和谐社区 词的意义 和谐校园 和谐课堂
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《刮风了》教学设计 预览
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作者 《科学课:小学版》 2005年第11期 30-31,共2页
教材分析 本课教材以“帆船航模大赛”这一学生熟悉的情景,通过学生简明的对话,引出该课的任务,驱动学生产生探究风的方向和强弱的欲望,引出本课的学习。通过刮风的现象、观测风和风是怎样形成的三个活动,让学生经历“实验观察—... 教材分析 本课教材以“帆船航模大赛”这一学生熟悉的情景,通过学生简明的对话,引出该课的任务,驱动学生产生探究风的方向和强弱的欲望,引出本课的学习。通过刮风的现象、观测风和风是怎样形成的三个活动,让学生经历“实验观察——记录现象——分析结果——发现规律(得出结论)”的活动过程。本课的大部分时间安排在室外探究。 展开更多
关键词 教学设计 教材分析 实验观察 时间安排 《刮风了》 小学 科学课 粤教版
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民生在勤 勤则不匮——记杭州民生药业集团有限公司董事长、总裁竺福江 预览
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作者 《中国第三产业》 2003年第6期 31-38,共8页
关键词 杭州民生药业集团有限公司 医药工业 国有企业 体制改革 资产重组 经营机制
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学校外的小街 预览
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作者 《中文自修》 1998年第12期30-31,共2页
小街的人们以能与这所学校为邻而自豪,学校因坐落于这条小街才有了远避都市喧嚣的宁静与温馨。一条小街,一条洒满阳光的河流,每天清晨起就从来校的学生心间流过。那琅琅书声,迎面而来老人慈祥的笑容,书屋老板的殷勤、憨厚,沿街各种店... 小街的人们以能与这所学校为邻而自豪,学校因坐落于这条小街才有了远避都市喧嚣的宁静与温馨。一条小街,一条洒满阳光的河流,每天清晨起就从来校的学生心间流过。那琅琅书声,迎面而来老人慈祥的笑容,书屋老板的殷勤、憨厚,沿街各种店铺周到的服务……这美好的街景成为回忆,也使得最终从这里离校迈入社会的学子们难以忘怀。文中一个个蒙太奇的镜头与画面的再现,不经意间已给人留下难忘的印象。 展开更多
关键词 学校 学生 老人 宁静 同学 蒙太奇 社会 期望 微笑 河流
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靖州县10年农村改水回顾与思考 预览
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作者 王先培 《中国初级卫生保健》 1995年第7期42-43,共2页
靖州苗族侗族自治县,地处湘西南边陲,总面积2200.51平方公里,辖16个乡镇、190个村,总人口23.82万人,其中农村人口20.66万人。自1985年以来,在县委、县政府、县人大、县政协直接关怀支持下,在各级党政领导亲自指挥与职能部门水电局、... 靖州苗族侗族自治县,地处湘西南边陲,总面积2200.51平方公里,辖16个乡镇、190个村,总人口23.82万人,其中农村人口20.66万人。自1985年以来,在县委、县政府、县人大、县政协直接关怀支持下,在各级党政领导亲自指挥与职能部门水电局、计委、民委、财政局、物资局、建委、县卫生防疫站等部门通力配合下,截至1994年,全县共投资666.6万元兴建了508处自来水工程和1225个手动压泵井,使占55.65%的农村人口饮用上了卫生自来水,使92.87%的村民饮用上了清洁水。经湖南省爱卫会检查验收, 被确认为“提前完成国家‘八五’农村改水达标县。” 展开更多
关键词 农村改水 靖州县 改水工程 自来水工程 农村人口 勘探设计 卫生工作 县政协 县政府 爱卫会
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我国社会总供求对比关系的探讨 预览
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作者 《中央财经大学学报》 CSSCI 1989年第S1期18-20,87共4页
【正】 在经济运行过程中,社会总供给与总需求,在通常情况下是不平衡的。那么,从我国当前宏观经济管理角度讲,是社会总需求大于总供给好,还是略大于总供给好,抑或先实现总需求略大于总供给,尔后实现总需求略小于总给供为好?这对国民经... 【正】 在经济运行过程中,社会总供给与总需求,在通常情况下是不平衡的。那么,从我国当前宏观经济管理角度讲,是社会总需求大于总供给好,还是略大于总供给好,抑或先实现总需求略大于总供给,尔后实现总需求略小于总给供为好?这对国民经济能否长期稳定发展,对经济体制改革能否顺利进行,关系极大。本文将根据社会主义有计划商品经济的客观要求,并结合改革十年来的有关历史资料,作一些分析和探索。 展开更多
关键词 总供给与总需求 社会总需求 对比关系 经济体制改革 总供求 宏观经济管理 我国社会 国民经济 有计划商品经济 全民所有制单位
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试论经济稳定发展与财政合理分配的关系 预览
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作者 《中央财经大学学报》 CSSCI 1989年第5期14-18,共5页
【正】 经济决定财政,财政影响经济。两者关系的最佳模式是什么,本文结合我国的实践,谈点粗浅看法。一、经济的稳定发展决定财政资金积累的稳步增长
关键词 财政收入 合理分配 经济稳定 国民收入的增长 稳定发展 通货膨胀 财政平衡 国民经济综合平衡 物资的综合平衡 财政收支平衡
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关于财政控制的几个问题 预览
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作者 《中央财经大学学报》 1988年第S1期38-42,共5页
【正】 加强宏观经济的管理和控制,是发展社会主义有计划商品经济的客观要求,也是深化经济体制改革的必然要求。在党的十三大代表大会上,赵紫阳同志的报告,总结了经济体制改革的实践,提出:“为了实现国民经济在提高效益的基础上稳定发... 【正】 加强宏观经济的管理和控制,是发展社会主义有计划商品经济的客观要求,也是深化经济体制改革的必然要求。在党的十三大代表大会上,赵紫阳同志的报告,总结了经济体制改革的实践,提出:“为了实现国民经济在提高效益的基础上稳定发展,必须努力保持社会总需求与总供给大体平衡”。为了实现这一基本目标,加强和改善宏观经济的管理与控制,具 展开更多
关键词 财政控制 预算外资金 固定资产投资 产业结构 国民经济 几个问题 财政监督 财政收支平衡 经济体制改革 物资的综合平衡
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买手链的小男孩——我的班级文化教育故事 预览
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作者 李娟 《科学咨询》 2015年第44期142-142,共1页
学校门外不远处有一个商店,商店虽然不大,但是里面的东西倒是很多。每天上下学,学生总是喜欢在里面买点吃的,或者小玩具什么的。这一天一大早,我来到校门口,看见班上的小男孩喻行从商店里走出来。“喻行,你买的什么呢?”
关键词 文化教育 故事 手链 商店 校门
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让数据说话 预览
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作者 《探秘:科学课》 2012年第1期 48,共1页
《在斜坡上》一课,课本安排了“探究斜面是否省力”和“探究斜面省力规律”两个活动。许多教师在指导学生开展探究活动时都会让学生填写记录表。
关键词 探究活动 记录表 省力 斜面 学生
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要考虑学生的需求 预览
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作者 《探秘:科学课》 2010年第9期 57,共1页
我们先来看看学生喜欢怎样的科学教师。作为科学教师,要让孩子服你,一个是你有真正爱孩子的心,另一个是你的业务水平,也就是说,你要有学科底气,懂教育,能研究。
关键词 学生 教师 科学 孩子
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下司种犬犬瘟热的诊断及处理报告 预览
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作者 李发勋 《贵州畜牧兽医》 2007年第2期 8,共1页
贵州下司犬是我国著名的猎犬之一,主产于苗岭主峰雷公山国家自然保护区及其周围地区。近年来,下司犬面临着优良基因流失和性能逐年退化的威胁。为此,县畜牧水产局于2005年7月在下司镇建立了贵州下司犬保种基地。2006年3月下旬到4月... 贵州下司犬是我国著名的猎犬之一,主产于苗岭主峰雷公山国家自然保护区及其周围地区。近年来,下司犬面临着优良基因流失和性能逐年退化的威胁。为此,县畜牧水产局于2005年7月在下司镇建立了贵州下司犬保种基地。2006年3月下旬到4月底,该基地饲养的10只下司犬相继发生一种以鼻流脓性鼻液、双眼有粘性分泌物、咳嗽、呕吐、排暗红色恶臭稀粪为特征的疫病。经临床症状观察、病理剖检和实验室检验,确诊为犬瘟热,并采取措施,对症治疗,取得了良好的效果,现报道如下。 展开更多
关键词 犬瘟热 国家自然保护区 诊断 种犬 实验室检验 周围地区 基因流失 临床症状
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亏损单位的透视及对策 预览
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作者 《苏盐科技》 1995年第2期38-38,共1页
单位亏损往往是由多种因素造成的,既有内部因素,又有外部因素,如果不进行全面透视,就难以找准亏损原因。那么,单位亏损主要是有哪些因素造成的呢? 1、管理混乱。目前,少数单位重经营、轻管理,办事不量力而行,大手大脚摆阔气,片面认为... 单位亏损往往是由多种因素造成的,既有内部因素,又有外部因素,如果不进行全面透视,就难以找准亏损原因。那么,单位亏损主要是有哪些因素造成的呢? 1、管理混乱。目前,少数单位重经营、轻管理,办事不量力而行,大手大脚摆阔气,片面认为;“只要年成好,麻雀吃多少”,一味寄希望于内部层层承包,以包代管,一包了事,放松了各项基础管理工作,让少数人钻了空子,给单位带来了不应有的经济损失。有人将这种情形作了形象的比喻:“穷了寺庙,富了和尚。” 展开更多
关键词 亏损单位 基础管理工作 亏损原因 按客观规律办事 自然规律 市场观念 经济损失 经济效益 内部因素 心律不齐
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