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猪圆环病毒病免疫防控关键技术的创建与应用
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作者 姜平 +8 位作者 白娟 蒋伟弼 董彦鹏 张书霞 李玉峰 曹瑞兵 陈溥言 缪芬芳 何海蓉 《中国科技成果》 2019年第12期19-19,21共2页
猪圆环病毒病是因猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的一种全球性重要猪传染病。该病1997年在加拿大暴发,快速传播至欧美亚等国家或地区,发病率达40%~50%,死淘率在20%以上。由于存在病毒培养滴度低、疫苗抗原规模化制备技术瓶颈及诊断技术准... 猪圆环病毒病是因猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的一种全球性重要猪传染病。该病1997年在加拿大暴发,快速传播至欧美亚等国家或地区,发病率达40%~50%,死淘率在20%以上。由于存在病毒培养滴度低、疫苗抗原规模化制备技术瓶颈及诊断技术准确性低等世界性关键技术难题,加上该病毒感染和免疫机制不清,国内外长期缺乏有效的防控措施,成为制约我国养猪业持续健康发展的重要疾病。 展开更多
关键词 猪圆环病毒病 诊断技术 免疫机制 防控 猪圆环病毒2型 应用 持续健康发展 病毒感染
2018年山东省猪伪狂犬病野毒抗体流行病学调查
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作者 曹明珠 吕林 +3 位作者 李玉峰 白娟 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第5期128-130,共3页
为了解2018年山东省猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,对山东省99家猪场共2 240份血清样品进行了PRV gE-ELISA抗体检测。结果:猪场PRV gE抗体阳性率为82.83%(82/99),样本血清gE抗体阳性率为61.74%(1383/2240),而且春季样品阳性率最高,冬季... 为了解2018年山东省猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,对山东省99家猪场共2 240份血清样品进行了PRV gE-ELISA抗体检测。结果:猪场PRV gE抗体阳性率为82.83%(82/99),样本血清gE抗体阳性率为61.74%(1383/2240),而且春季样品阳性率最高,冬季较低。哺乳母猪血清阳性率最高,可达96.00%,其次是种公猪和后备母猪,表明该地区PRV野毒感染率依然较高,制定科学合理免疫程序并加强该病综合防控十分必要。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 流行病学调查 gE抗体
塞内卡病毒A的RT-PCR检测方法的建立和应用 预览
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作者 范慧 李亮 +3 位作者 姜平 李玉峰 白娟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1312-1318,共7页
塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,可引起成年母猪水疱性病变,并导致新生仔猪死亡。为建立SVA的快速检测方法,本研究对NCBI发表的40株SVA的基因序列进行同源比较,选择保守区域设计了3对引物P1、P2和P3,从... 塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,可引起成年母猪水疱性病变,并导致新生仔猪死亡。为建立SVA的快速检测方法,本研究对NCBI发表的40株SVA的基因序列进行同源比较,选择保守区域设计了3对引物P1、P2和P3,从中筛选出最佳扩增引物,通过对引物浓度、退火温度、延长时间、循环次数进行优化,成功建立了SVA的RT-PCR检测方法。用该方法检测SVA、脑心肌炎病毒(EMCV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应,具有良好的特异性。敏感性试验结果显示,病毒检测限可达1TCID50,比国外文献报道的检测方法灵敏性更高。用该方法检测山东省的100份猪组织样品,阳性率为2%。本研究所建立的方法特异性强、敏感性高、可靠性好,为SVA的快速检测及流行病学调查提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A RT-PCR 检测
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猪伪狂犬病毒引起PK-15细胞自噬的研究 预览
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作者 许长萌 志建 +2 位作者 刘倩玉 《南京农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期701-707,共7页
[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬... [目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬。利用自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA分析自噬对病毒复制的影响,再通过沉默自噬相关基因Beclin-1,进一步观察自噬对PRV复制的影响。[结果]PRV感染PK-15细胞后,LC3-Ⅰ显著转化为LC3-Ⅱ,PK-15细胞内自噬小体的数量明显增加。PRV感染增加了LC3阳性斑点的细胞数。同时,变异毒株PRV ZJ01与传统毒株PRV LA诱导的自噬存在差异。自噬的药理学变化试验和siRNA转染结果还显示自噬能够促进PRV的复制。[结论]PRV感染PK-15细胞可以诱导自噬并有利于病毒的复制。 展开更多
关键词 自噬 猪伪狂犬病毒(PRV) LC3 自噬流 复制 BECLIN-1
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伪狂犬病毒UL54蛋白与IRF3互作抑制IFN-β启动子活性
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作者 杨珊珊 白娟 +2 位作者 吕林 姜平 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期379-385,共7页
研究伪狂犬病毒UL54蛋白对I型干扰素表达的作用及机制,为阐明伪狂犬病毒致病机制提供基础。构建表达UL54的真核质粒,采用双荧光素酶报告基因检测系统,检测UL54对IFN-β及其信号通路分子IRF3和NF-κB启动子活性的影响,并测定UL54对RIGI、... 研究伪狂犬病毒UL54蛋白对I型干扰素表达的作用及机制,为阐明伪狂犬病毒致病机制提供基础。构建表达UL54的真核质粒,采用双荧光素酶报告基因检测系统,检测UL54对IFN-β及其信号通路分子IRF3和NF-κB启动子活性的影响,并测定UL54对RIGI、TBK1、IRF3和IKKε诱导IFN-β表达的影响;免疫共沉淀方法检测UL54与IRF3的相互作用。构建UL54截短基因表达载体,用双荧光素酶报告基因检测系统和ELISA方法检测UL54截短基因对IFN-β启动子活性的影响。构建了pCDH-UL54和8个UL54截短基因真核表达载体。UL54显著抑制IFN-β和IRF3启动子活性,对RIGI、TBK1、IRF3、IKKε介导的IFN-β有抑制作用,免疫共沉淀方法检测证明其与IRF3存在互作。UL54的1-146aa、74-361aa和84-361aa截短体仍抑制IFN-β启动子活性,但第94aa后的其他截短体基因均丧失该抑制作用。PRV UL54通过与IRF3互作抑制IFN-β启动子活性,UL54第84-94位氨基酸是其抑制IFN-β表达的关键功能区域。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒(PRV) UL54蛋白 干扰素 IFN-Β 信号通路
慢病毒载体介导稳定表达pAPN的Vero细胞系的构建及应用 被引量:1
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作者 陆倩倩 广操 +2 位作者 许长萌 志建 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期419-426,共8页
将完整的pAPN序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-mCherry,并将该重组质粒pLVX-mCherry-pAPN与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP-VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染Vero细胞,经... 将完整的pAPN序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-mCherry,并将该重组质粒pLVX-mCherry-pAPN与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP-VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染Vero细胞,经过嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法,筛选出表达pAPN的细胞。通过RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)证明了所获细胞株能够稳定表达pAPN蛋白,命名为Vero-APN-B6。IFA试验和TCID50试验结果表明:与Vero细胞相比,Vero-APN-B6更能促进猪流行性腹泻病毒(PEDV)的增殖。利用该细胞株成功地从猪小肠组织中分离到了PEDV SC-MS株;经过鉴定该毒株为变异毒株。 展开更多
关键词 pAPN 细胞系 慢病毒载体 PEDV SC-MS株
两株抗猪伪狂犬病毒的单克隆抗体制备与鉴定 被引量:1
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作者 徐璇 董静 +2 位作者 白娟 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第5期118-120,共3页
采用猪伪狂犬病毒(PRV)ZJ01株纯化病毒免疫BALB/c小鼠,利用融合细胞技术和间接ELISA抗体筛选技术,制备并获得2株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株2B3和5C10,其中,2B3单抗为Ig G2a亚类,5C10为Ig G1亚类,轻链均为κ链。间接免... 采用猪伪狂犬病毒(PRV)ZJ01株纯化病毒免疫BALB/c小鼠,利用融合细胞技术和间接ELISA抗体筛选技术,制备并获得2株能稳定分泌抗PRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株2B3和5C10,其中,2B3单抗为Ig G2a亚类,5C10为Ig G1亚类,轻链均为κ链。间接免疫荧光检测结果表明,2株单克隆抗体均能与PRV发生特异性反应。Western-blot结果表明,2B3单抗针对PRV g C蛋白,5C10单抗针对PRV g E蛋白。本研究为建立快速检测伪狂犬病毒感染的免疫学方法奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 单克隆抗体 杂交瘤
表达猪圆环病毒2型ORF2基因的重组脑心肌炎病毒的构建与鉴定
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作者 李亮 范慧 +3 位作者 武迪 姜平 白娟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期224-230,共7页
以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)作为病毒载体,寻找基因组里理想的外源基因插入位点,为构建多价疫苗奠定基础。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征等多种疾病。脑... 以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)作为病毒载体,寻找基因组里理想的外源基因插入位点,为构建多价疫苗奠定基础。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征等多种疾病。脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)宿主谱广,能够天然感染多种哺乳动物。本研究采用EMCV NJ08毒株cDNA感染性克隆,将PCV2ORF2基因插入EMCV L蛋白基因第6位及第7位氨基酸之间,拯救获得重组EMCV rNJ08/Cap,拯救病毒含有分子遗传标记。Western Blot和IFA结果显示,该重组病毒成功表达Cap蛋白。重组病毒rNJ08/Cap在BHK-21细胞上生长曲线和病毒蚀斑大小与亲本病毒NJ08相似,证明EMCV可以作为表达外源基因的病毒载体,为PCV2和EMCV疫苗研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 猪脑心肌炎病毒 猪圆环病毒2型 病毒载体
猪圆环病毒2型Cap蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及在小鼠体内免疫特性研究
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作者 刘盼娆 周雪晨 +3 位作者 朱雪蛟 白娟 姜平 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期50-56,共7页
猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白基因是该病毒基因工程疫苗的重要目的基因,但其在大肠杆菌表达系统中的表达产物通常以包涵体形式存在,影响其作为亚单位疫苗使用的免疫保护作用。将ORF2基因密码子改造为大肠杆菌偏爱的密码子,或构建MPG与O... 猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白基因是该病毒基因工程疫苗的重要目的基因,但其在大肠杆菌表达系统中的表达产物通常以包涵体形式存在,影响其作为亚单位疫苗使用的免疫保护作用。将ORF2基因密码子改造为大肠杆菌偏爱的密码子,或构建MPG与ORF2基因融合,分别克隆至表达载体p ET28a,再转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western blot结果证实改造后的PCV2 Cap蛋白基因实现了可溶性表达。将上述两种重组蛋白纯化后,分别与GEL01、ISA206或ISA15A三种佐剂混合配制疫苗,小鼠免疫保护试验结果证明,以GEL01为佐剂的两免疫组PCV2 ELISA抗体和中和抗体水平最高。攻毒试验结果显示,除ISA15A组外,其他各免疫组脾脏中PCV2含量都显著低于非免疫对照组,表明两种重组蛋白与佐剂GEL01和ISA206制成的疫苗可诱导产生一定水平的免疫保护作用,为PCV2亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 PCV2 CAP蛋白 可溶性表达 免疫特性
猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型猪体共感染发病模型的建立
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作者 游术梅 张乔亚 +3 位作者 孙涛 朱雪蛟 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期573-578,共6页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)多以混合感染的形式,广泛存在于世界各地的猪群。本研究选取35日龄的阴性健康猪,随机分为4组:PCV2感染组(n=5)、PCV2+PRRSV共感染组(n=5)、PRRSV感染组(n=5)和空白对照... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)多以混合感染的形式,广泛存在于世界各地的猪群。本研究选取35日龄的阴性健康猪,随机分为4组:PCV2感染组(n=5)、PCV2+PRRSV共感染组(n=5)、PRRSV感染组(n=5)和空白对照组(n=4)。攻毒后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重并于不同时间采血,攻毒后第21天剖杀所有猪,荧光定量PCR检测血清中病毒血症和组织中病毒载量。结果表明,PCV2+PRRSV共感染组猪的临床症状最严重,并死亡2头。病理变化主要表现为肺出血、明显的间质性肺炎,淋巴组织及淋巴细胞缺失严重,淋巴滤泡中出现大量核浓缩深染的淋巴细胞;PCV2单独感染组与PRRSV单独感染组猪的临床症状轻微,仅出现短暂性体温升高;空白对照组未出现症状。病毒血症检测结果显示,两种病毒共感染组猪的血清中PCV2与PRRSV含量均高于单独感染组。本研究成功建立了PRRSV与PCV2猪体人工共感染发病模型,为PRRSV与PCV2协同致病机理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 混合感染 断奶仔猪多系统衰竭综合征
猪伪狂犬病病毒经典毒株与变异毒株PCR鉴别方法的建立
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作者 孙涛 董静 +3 位作者 白娟 徐璇 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期814-820,共7页
猪伪狂犬病是危害世界养猪业的重要疫病之一。近年来我国免疫猪群出现暴发、流行,经证实其抗原性和毒力发生了变异。为了有效区分变异毒株和经典毒株,根据国内外伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株和经典毒株基因序列比对结果,针对UL44和UL36... 猪伪狂犬病是危害世界养猪业的重要疫病之一。近年来我国免疫猪群出现暴发、流行,经证实其抗原性和毒力发生了变异。为了有效区分变异毒株和经典毒株,根据国内外伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株和经典毒株基因序列比对结果,针对UL44和UL36区域的基因序列设计了2对引物,建立两步法PCR。第一步PCR针对UL44区域,区分出经典毒株(疫苗株HB98除外)感染与变异毒株感染。第二步PCR针对UL36区域,区分出HB98株与伪狂犬病病毒变异毒株。两步法PCR的敏感度分别达到2~20TCID50和50TCID50病毒量。对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、日本脑炎病毒、脑心肌炎病毒和猪流行性腹泻病毒的核酸应用此方法进行扩增,结果均为阴性。该方法与猪伪狂犬病病毒国家标准PCR检测方法的符合率达到91%,可用于实验室快速诊断。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 变异毒株 HB98 两步法PCR
2014—2015年我国华东部分地区猪流行性腹泻病毒的检测及S基因的序列分析 被引量:3
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作者 广操 陆倩倩 +3 位作者 张梦岩 许长萌 志建 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期702-709,共8页
采用RT-PCR方法对2014年至2015年送至实验室的104份腹泻仔猪小肠组织病料进行检测,结果显示42份为猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性,选择不同地区的7份阳性病料进行S基因克隆和测序,并与Gen Bank中已发布的PEDV S基因比对分析。核苷酸和氨... 采用RT-PCR方法对2014年至2015年送至实验室的104份腹泻仔猪小肠组织病料进行检测,结果显示42份为猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性,选择不同地区的7份阳性病料进行S基因克隆和测序,并与Gen Bank中已发布的PEDV S基因比对分析。核苷酸和氨基酸比对结果显示,7株流行毒株S基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别是98.1%~99.2%和97.6%~99.1%。该7株流行毒株与经典毒株CV777和DR13核苷酸序列的同源性分别为94.0%~94.2%和93.9%~94.1%,氨基酸序列的同源性分别为93.1%~93.6%和92.5%~93.1%。S基因进化树分析结果表明,根据S基因的变异情况PEDV可以分为3个型,本试验分析的7株PEDV流行毒株均属于Ⅲ型,与2012年以来中国流行毒株的亲缘关系较近,与国外传统毒株和中国较早分离到的毒株的亲缘关系较远。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 遗传变异分析
脑心肌炎病毒灭活疫苗佐剂的筛选及其效力评价 被引量:4
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作者 蒋康富 白娟 +2 位作者 李玉峰 姜平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期242-246,共5页
采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和... 采用ISA201、ISA15A、GEL、CP940和1313佐剂分别与脑心肌炎病毒(EMCV)灭活抗原混合,配制成5种疫苗,采用BALB/c小鼠进行免疫保护试验。结果显示,5种佐剂疫苗对小鼠无明显不良反应,均能够诱导机体产生抗EMCV特异性ELISA抗体、中和抗体和淋巴细胞增殖反应,其中ISA15A、ISA201和GEL佐剂组抗体水平和淋巴细胞增殖转化刺激指数都显著高于抗原对照组(P<0.01),而且,ISA15A佐剂组免疫应答反应高于ISA201和GEL佐剂组(P>0.05)。采用EMCV强毒攻击,ISA15A、ISA201和GEL佐剂组免疫保护率均达90%,表明用ISA15A、ISA201和GEL这3种佐剂配制的EMCV灭活疫苗具有较高的免疫疫保护效力,为该病灭活疫苗研制奠定基础。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 灭活疫苗 免疫效力
鉴别检测PCV2a与PCV2b的PCR的建立与应用 被引量:2
14
作者 朱雪蛟 白娟 +1 位作者 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期50-56,共7页
为了快速鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)的2个基因型PCV2a与PCV2b,根据PCV2a和PCV2b基因序列特征,设计PCR引物,成功建立了鉴别检测PCV2a与PCV2b的PCR,并进行了敏感性试验和特异性试验。结果显示,该方法对PCV2a和PCV2b的敏感性分别为9.74fg/μ... 为了快速鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)的2个基因型PCV2a与PCV2b,根据PCV2a和PCV2b基因序列特征,设计PCR引物,成功建立了鉴别检测PCV2a与PCV2b的PCR,并进行了敏感性试验和特异性试验。结果显示,该方法对PCV2a和PCV2b的敏感性分别为9.74fg/μL和16.3fg/μL;与猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等没有交叉反应性。用该方法对采自我国华东地区的125份断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的淋巴组织样品进行检测,结果显示,单独感染PCV2a占8.0%(10/125),PCV2b占41.6%(52/125),PCV2a或PCV2b共感染占50.4%(63/125)。选取PCV2a或PCV2b单独感染的淋巴结组织病料进行病毒分离和全基因序列分析,结果分离获得4株PCV2b和1株PCV2a,与该鉴别PCR的检测结果一致,说明本研究建立的PCR可以有效鉴别PCV2a与PCV2b,具有较高的特异性和敏感性,可用于断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的临床样品中PCV2的快速检测。 展开更多
关键词 PCV2a PCV2b PCR
猪细小病毒2型VP蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
15
作者 何玉 广操 +4 位作者 张梦岩 李玉峰 白娟 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期118-125,共8页
为了有效监测猪细小病毒2型(PPV2)的抗体水平,选择PPV2VP蛋白主要亲水区及高抗原指数区进行原核表达。以表达的重组tVP蛋白为包被抗原建立了检测PPV2抗体的间接ELISA。优化后的反应条件为:抗原包被浓度为0.8μg/mL,血清的最佳稀释度为1... 为了有效监测猪细小病毒2型(PPV2)的抗体水平,选择PPV2VP蛋白主要亲水区及高抗原指数区进行原核表达。以表达的重组tVP蛋白为包被抗原建立了检测PPV2抗体的间接ELISA。优化后的反应条件为:抗原包被浓度为0.8μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,酶标二抗的工作浓度为1∶20 000,检测的临界值为0.400 5(D450nm≥0.400 5判定为阳性)。特异性试验证明,与猪细小病毒1型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒O型血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性试验变异系数均小于10%。应用此方法对采自江苏省的480份临床血清样本进行了检测,PPV2抗体阳性率为31%。试验结果表明,tVP蛋白能很好地获得表达,以此蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA具有较高的特异性和敏感性,可以用于临床血清PPV2抗体的检测。 展开更多
关键词 猪细小病毒2型 重组截短的VP蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验
猪细小病毒3型VP2蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立 预览
16
作者 广操 崔鹏超 +3 位作者 何玉 张梦岩 苑文涛 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期770-773,共4页
为建立检测猪细小病毒3(PPV3)间接ELISA方法,本研究选取PPV3VP2多表位亲水区序列设计引物,扩增并原核表达该基因片段,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了PPV3间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该检测方法仅对PPV3血清检测为阳性... 为建立检测猪细小病毒3(PPV3)间接ELISA方法,本研究选取PPV3VP2多表位亲水区序列设计引物,扩增并原核表达该基因片段,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了PPV3间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该检测方法仅对PPV3血清检测为阳性,与PPV1、PPV2、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒等的标准阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。本研究为临床上PPV3的检测提供了血清学检测手段。 展开更多
关键词 猪细小病毒3型 VP2蛋白 原核表达 间接ELISA 临床应用
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猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌5型二联灭活疫苗研制与免疫效力研究 被引量:1
17
作者 徐蓉 白娟 +3 位作者 刘捷 董彦鹏 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2015年第3期1-6,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)和副猪嗜血杆菌(HPs)混合感染十分普遍,造成我国养猪业严重经济损失。本研究将杆状病毒表达的重组PCV2 Cap蛋白(BCap)和PCV2灭活病毒液(i PCV2),分别与HPs血清5型(HPs5)灭活菌液混合,加入水性佐剂混合制备... 猪圆环病毒2型(PCV2)和副猪嗜血杆菌(HPs)混合感染十分普遍,造成我国养猪业严重经济损失。本研究将杆状病毒表达的重组PCV2 Cap蛋白(BCap)和PCV2灭活病毒液(i PCV2),分别与HPs血清5型(HPs5)灭活菌液混合,加入水性佐剂混合制备成BCap/HPs5与i PCV2/HPs5二联灭活疫苗,进行猪体免疫保护试验。仔猪免疫保护试验结果为:两种疫苗免疫后均可诱导猪体产生PCV2和HPs抗体。免疫后35天用PCV2攻击,两免疫组猪均无明显临床症状,相对日增重(RDWG)与空白对照组相似,但高于攻毒对照组(P〈0.05);攻毒后14天,病毒血症明显低于攻毒对照组(P〈0.05);攻毒后28天剖解,腹股沟淋巴结PCV2载量明显低于攻毒对照组(P〈0.05),病理学变化明显轻于攻毒对照组。免疫后35天用HPs攻击,对照组猪均出现明显临床症状,但两免疫组猪无明显临床症状;攻毒后14天剖检,两免疫组病理学变化方面相似,但明显轻于攻毒对照组。结果表明,BCap/HPs5与i PCV2/HPs5两种二联苗免疫仔猪后均能诱导机体产生免疫应答,产生免疫保护作用,具有较好应用前景。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 副猪嗜血杆菌 5型二联苗 免疫保护
湿法磷酸尾气吸收系统技改及氟、硅资源回收 被引量:1
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作者 张伟 《磷肥与复肥》 CAS 2015年第11期29-31,共3页
针对湿法磷酸反应槽的含氟尾气排放不达标而造成环境污染及氟、硅资源浪费的问题,对尾气吸收系统进行技改。通过工艺改进、增加设施设备,使外排尾气达标,尾气中ρ(F)为6—8mg/m^3,氟、硅资源基本回收,洗涤液中w(H2SiF6)达10%... 针对湿法磷酸反应槽的含氟尾气排放不达标而造成环境污染及氟、硅资源浪费的问题,对尾气吸收系统进行技改。通过工艺改进、增加设施设备,使外排尾气达标,尾气中ρ(F)为6—8mg/m^3,氟、硅资源基本回收,洗涤液中w(H2SiF6)达10%以上,相关设备更换周期及清理周期延长,实现了氟吸收系统的自动化操作和连续性生产。 展开更多
关键词 尾气吸收系统 技改 达标排放 硅资源回收
直升机发动机舱通风、遮挡和隔热对红外辐射特性的影响 被引量:3
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作者 潘丞雄 张靖周 +2 位作者 单勇 杏涛 《航空动力学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期519-525,共7页
为了降低直升机发动机舱蒙皮的温度,减弱直升机红外辐射能量,采用数值仿真的方法研究其处于悬停状态、考虑了旋翼下洗作用的发动机舱蒙皮温度场和直升机红外辐射特性.针对基准发动机舱结构提出了在舱内加设辐射遮挡套、增开通风百叶... 为了降低直升机发动机舱蒙皮的温度,减弱直升机红外辐射能量,采用数值仿真的方法研究其处于悬停状态、考虑了旋翼下洗作用的发动机舱蒙皮温度场和直升机红外辐射特性.针对基准发动机舱结构提出了在舱内加设辐射遮挡套、增开通风百叶窗、排气管尾缘修型和蒙皮内侧敷设隔热层等改进方案,研究了上述改进方案对直升机发动机舱蒙皮温度场和红外辐射特性的影响,得到了如下结论:①在发动机舱内加设辐射遮挡套后,整机侧向探测方位角内3~5“m红外辐射强度出现了约25%的增幅,8~14bcm波段红外辐射与原始结构相当.②在发动机舱顶部增开通风百叶窗,直升机3~5肛m红外辐射低于原始结构约12%,8~14um波段红外辐射与原始结构相当.③在发动机舱顶部增开通风百叶窗的基础上,对排气管尾缘采取延伸遮挡以及在发动机舱蒙皮内侧敷设隔热层,整机3~5tLm波段红外辐射的最大值下降约70%,8~14ttm波段红外辐射的最大值下降约10%. 展开更多
关键词 直升机 发动机舱 通风冷却 辐射遮挡 隔热层 红外辐射
猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4和Nsp12多克隆抗体的制备与鉴定
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作者 田恬 +2 位作者 刘星 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期636-640,共5页
为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)两种非结构蛋白Nsp4和Nsp12的多克隆抗体,将Nsp4基因和Nsp12基因分别克隆至pET-32a(+)和pGEX-6P-1,并转化至BL21(DE3),用IPTG诱导表达,经过Ni-NTA镍离子亲和层析和包涵体洗液纯化,获得纯化的重组... 为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)两种非结构蛋白Nsp4和Nsp12的多克隆抗体,将Nsp4基因和Nsp12基因分别克隆至pET-32a(+)和pGEX-6P-1,并转化至BL21(DE3),用IPTG诱导表达,经过Ni-NTA镍离子亲和层析和包涵体洗液纯化,获得纯化的重组蛋白,然后用它们分别免疫BALB/c小鼠制备抗血清。SDS-PAGE和Western-blot鉴定结果显示,Nsp4和Nsp12分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,大小分别为42ku和44ku,均具有良好的反应原性。Western-blot和IFA结果显示,制备的抗血清均与PRRSV发生特异性反应,ELISA抗体效价均可达1∶32 000。本研究结果为PRRSV Nsp4和Nsp12的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4 Nsp12 多克隆抗体
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