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Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡的结合特性 预览
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作者 李婷 张淑臣 +2 位作者 鸿 师光禄 刘京国 《北京农学院学报》 2019年第1期1-7,共7页
【目的】营养期杀虫蛋白Vip3A是一种由苏云金芽孢杆菌在对数生长期产生的新型杀虫毒素.Vip3A与敏感昆虫中肠上皮细胞的结合是其发挥杀虫活性的关键步骤.为进一步探究Vip3A毒素的杀虫机理,研究Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡(BBMVs)的... 【目的】营养期杀虫蛋白Vip3A是一种由苏云金芽孢杆菌在对数生长期产生的新型杀虫毒素.Vip3A与敏感昆虫中肠上皮细胞的结合是其发挥杀虫活性的关键步骤.为进一步探究Vip3A毒素的杀虫机理,研究Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡(BBMVs)的结合特性.【方法】在大肠杆菌中用IPTG诱导表达Vip3Aa10,用亲和层析和离子交换层析的方法纯化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10-T.然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10-T对甜菜夜蛾的杀虫活性,用免疫印迹法和配体印迹法分析Vip3Aa10-T与甜菜夜蛾BBMVs的结合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的结合蛋白.【结果】Vip3Aa10-T与Vip3Aa10前毒素对甜菜夜蛾的杀虫活性很高.Vip3Aa10-T在pH8.0时更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合,并且能够与非敏感性昆虫黄粉虫BBMVs结合.在相同pH条件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10-T更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合.Vip3Aa10-T在甜菜夜蛾BBMVs上有4条结合蛋白,其分子量分别为80、38、31和22kDa.【结论】活化的Vip3Aa10与甜菜夜蛾BBMVs的结合是pH依赖性的,并且能与BBMVs上的4个蛋白结合. 展开更多
关键词 Vip3Aa10 甜菜夜蛾 刷状缘膜囊泡 杀虫活性
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改革遗传学实验教学,提高人才培养质量 预览 被引量:7
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作者 黄体冉 郭蓓 +3 位作者 刘玉芬 吕鹤书 孙祎振 鸿 《实验科学与技术》 2017年第3期91-93,117共4页
为提高遗传学实验教学质量,夯实专业基础知识,该文立足于都市型高等农业院校遗传学实验教学实际,分析总结了教研室在树立正确的实验教学理念、精选实验教学内容和优化实验教学方法方面对遗传学实验教学进行改革的主要措施,为解决有限的... 为提高遗传学实验教学质量,夯实专业基础知识,该文立足于都市型高等农业院校遗传学实验教学实际,分析总结了教研室在树立正确的实验教学理念、精选实验教学内容和优化实验教学方法方面对遗传学实验教学进行改革的主要措施,为解决有限的实验教学学时与无限的实验教学内容之间的矛盾,提供了实践经验和理论基础。实践证明,以精选基础性、验证性实验内容,增加综合性大实验、增设自主设计实验为主题的遗传学实验教学改革在创新实验教学模式,提高人才培养质量方面取得了显著成绩。 展开更多
关键词 遗传学 实验教学内容 实验教学方法 人才培养质量 改革
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北京农学院生物工程专业实践教学体系的构建 预览 被引量:5
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作者 薛飞燕 刘灿 +3 位作者 鸿 张婧 张国庆 刘京国 《高校生物学教学研究(电子版)》 2017年第1期14-17,共4页
本文分析了北京农学院生物工程专业实践教学体系构建的必要性,重点介绍了"以社会需求为导向,以学生收获为目标,以大学科技园实践平台建设和校外实习基地建设为重点,系统构建生物工程专业教学体系"的思路和具体运行实践;推广应用效果表... 本文分析了北京农学院生物工程专业实践教学体系构建的必要性,重点介绍了"以社会需求为导向,以学生收获为目标,以大学科技园实践平台建设和校外实习基地建设为重点,系统构建生物工程专业教学体系"的思路和具体运行实践;推广应用效果表明,所构建的"校内实验教学中心专题操作-大学科技园实践基地综合实训-校外指选基地专业实习-校外自选单位毕业实习"实践教学体系增强了学生专业综合能力和社会适应能力,为培养符合北京"四个中心"新定位需求的复合应用型人才提供了重要保障。 展开更多
关键词 生物工程专业 实践教学体系 复合应用型人才
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苏云金芽孢杆菌Vip3Aa10毒素结合肽的筛选及活性测定 预览 被引量:2
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作者 丁照鑫 王涵祎 +3 位作者 曹利娟 郝艳同 鸿 刘京国 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第18期3627-3634,共8页
【目的】Vip3A是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素,其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术,论文试图从肽库中筛选到能与Vip3A毒素特... 【目的】Vip3A是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素,其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术,论文试图从肽库中筛选到能与Vip3A毒素特异性结合的多肽,为研究Vip3A毒素的杀虫模式提供线索。【方法】将构建的p ET28a-Vip3Aa10表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,用亲和纯化的方法制备Vip3Aa10,并用胰蛋白酶活化和离子交换层析进一步纯化。以活化的Vip3Aa10毒素为诱饵,经“吸附-洗脱-扩繁”4轮条件逐渐严格的淘选,从噬菌体随机肽库中筛选能特异性地与活化的Vip3Aa10结合的噬菌体。以筛选到的噬菌体基因组DNA为模板,经PCR扩增和测序,获得插入到噬菌体上的外源基因的序列,并推导出相应多肽的氨基酸序列。将化学合成的多肽与活化的Vip3Aa10一起与甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)刷状缘膜囊泡共育后,用免疫印迹方法检测多肽对活化的Vip3Aa10与BBMV结合的影响。将合成的多肽与活化的Vip3Aa10一起涂布在饲料表面,晾干后,每孔放1只1龄的甜菜夜蛾幼虫。6 d后统计昆虫死亡情况。【结果】在25℃条件下用IPTG诱导含p ET28a-Vip3Aa10质粒的大肠杆菌BL21(DE3)可以表达出可溶性的Vip3Aa10蛋白。经亲和纯化、胰蛋白酶活化以及离子交换层析后,可得到较纯的活化的Vip3Aa10。以活化的Vip3Aa10为诱饵,经过4轮条件逐渐严格的淘选,从十二肽库中筛选出9条多肽,其中3条多肽的丰度较高,分别命名为P12-1、P12-2和P12-3,从七肽库中筛选出5条多肽,其中1条多肽的丰度较高,命名为P7-1。结合试验和杀虫活性测定试验结果表明,P12-2和P7-1多肽能不同程度地抑制Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡的结合,以及抑制Vip3Aa10的杀虫活性。【结论】用噬菌体展示技术筛选的多肽P7-1能显著性地抑制V 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 营养期杀虫蛋白 结合肽 筛选 活性分析
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发酵工程课程教学改革的探索与实践 预览 被引量:4
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作者 刘京国 鸿 +2 位作者 薛飞燕 万善霞 刘悦萍 《安徽农业科学》 CAS 2013年第8期3754-3754,3757共2页
为适应企业对发酵人才的需求,本着以培养优秀发酵工程师的理念为导向,对发酵工程课程的教学进行了改革。经过4年的摸索,在加强校企人才互动,提高理论教学的实用性;以工程的理念设计试验,强化学生动手能力;加强基地建设,努力拓宽学生专... 为适应企业对发酵人才的需求,本着以培养优秀发酵工程师的理念为导向,对发酵工程课程的教学进行了改革。经过4年的摸索,在加强校企人才互动,提高理论教学的实用性;以工程的理念设计试验,强化学生动手能力;加强基地建设,努力拓宽学生专业视野等方面做了初步探索,取得了良好的效果。 展开更多
关键词 发酵工程 教学改革 人才互动 综合性实验 基地建设
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类钙粘蛋白对Cry3A毒素杀虫活性的影响 被引量:3
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作者 刘京国 鸿 +3 位作者 李彤春 张玉 杨爱珍 师光禄 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 466-470,共5页
将克隆的黄粉虫类钙粘蛋白基因片段在大肠杆菌中表达纯化,并分析其对Cry3A毒素杀虫活性的影响,从而探讨黄粉虫类钙粘蛋白对Cry3A毒素杀虫活性的增效作用。黄粉虫类钙粘蛋白基因片段在大肠杆菌中表达产物为包涵体,经尿素变性后,用亲和纯... 将克隆的黄粉虫类钙粘蛋白基因片段在大肠杆菌中表达纯化,并分析其对Cry3A毒素杀虫活性的影响,从而探讨黄粉虫类钙粘蛋白对Cry3A毒素杀虫活性的增效作用。黄粉虫类钙粘蛋白基因片段在大肠杆菌中表达产物为包涵体,经尿素变性后,用亲和纯化法可得到较纯的重组蛋白;随着类钙粘蛋白片段与Cry3A质量比值的升高,Cry3A毒素对黄粉虫的杀虫活性也逐步提高,当其比值为1时,活性达到最大,提高了2.5倍,而黄粉虫类钙粘蛋白片段对Cry3Am的杀虫活性却没有显著性影响。研究表明,黄粉虫类钙粘蛋白对Cry3A毒素的杀虫活性具有增效作用。 展开更多
关键词 黄粉虫 类钙粘蛋白 Cry3A毒素 杀虫活性
次郎柿ACC合成酶的转基因工艺研究 预览 被引量:2
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作者 鸿 马俊莲 +2 位作者 张子德 唐霞 张丽 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期 29-32,共4页
为获得抗软化的转基因柿果,初步建立了次郎柿转基因工艺。预培养时间为4 d;菌液OD600值为0.5,侵染时间10 min;共培养时间3 d;壮观霉素适宜浓度为30 mg/L。在此条件下,获得了次郎柿ACC合成酶的RNA干扰基因转基因苗。经PCR检测,得到8个转... 为获得抗软化的转基因柿果,初步建立了次郎柿转基因工艺。预培养时间为4 d;菌液OD600值为0.5,侵染时间10 min;共培养时间3 d;壮观霉素适宜浓度为30 mg/L。在此条件下,获得了次郎柿ACC合成酶的RNA干扰基因转基因苗。经PCR检测,得到8个转基因植株。 展开更多
关键词 次郎柿 ACC合成酶基因(ACS) 转基因
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生物工程核心技术应用教学团队建设的探索与实践 预览
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作者 薛飞燕 鸿 +5 位作者 赵福宽 刘京国 常明明 刘灿 柳春梅 成军 《学周刊》 2019年第12期22-22,共1页
为了促进生物工程专业本科教育教学质量,北京农学院组建了'生物工程核心技术应用教学团队',以生物工程核心技术为主线,通过加强学生上、中、下游实验、实践的全面训练,以提升其对生物工程核心技术的应用能力,通过课程优化、教... 为了促进生物工程专业本科教育教学质量,北京农学院组建了'生物工程核心技术应用教学团队',以生物工程核心技术为主线,通过加强学生上、中、下游实验、实践的全面训练,以提升其对生物工程核心技术的应用能力,通过课程优化、教学改革、教材建设和传帮带运行机制等提升教学团队的整体水平。 展开更多
关键词 生物工程核心技术 应用 教学团队
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