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鸭腺病毒3型PCR检测方法的建立
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作者 万春和 陈翠腾 +6 位作者 施少华 龙飞 傅光华 刘荣昌 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2019年第2期20-23,共4页
鸭3型腺病毒(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。为建立特异性的检测DAdV-3的PCR方法,研究通过分析鸭群中鸭腺病毒A型(DAdV-A)、鸭源禽腺病毒4型(FAdV-4)、鸭... 鸭3型腺病毒(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。为建立特异性的检测DAdV-3的PCR方法,研究通过分析鸭群中鸭腺病毒A型(DAdV-A)、鸭源禽腺病毒4型(FAdV-4)、鸭2型腺病毒(DAdV-2)和DAdV-3的Fiber 2基因特征,建立特异性检测DAdV-3的PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为54℃,对DAdV-3扩增片段大小为548 bp;敏感性强,最低检测限为36.4 pg;特异性好,对DAdV-A、FAdV-4、鸭病毒性肠炎(DEV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸭圆环病毒(DuCV)和鹅多瘤病毒(GHPV)均无特异性扩增。表明该方法可有效用于开展新发DAdV-3的流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭3型腺病毒 FIBER 2基因 PCR
鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物的耐药性检测及耐药基因分析 预览
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作者 陈红梅 龙飞 +8 位作者 邓辉 刘荣昌 傅光华 施少华 傅秋玲 万春和 郑庆礼 黄瑜 黄小红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期223-230,共8页
为明确鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物的耐药性及耐药基因的分布特征,试验采用琼脂二倍稀释法对分离自福建、广东和江西等地的89株鸭源多杀性巴氏杆菌进行甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐受性检测,用PCR法检测各耐药菌株的磺胺类耐药基因(sul1... 为明确鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物的耐药性及耐药基因的分布特征,试验采用琼脂二倍稀释法对分离自福建、广东和江西等地的89株鸭源多杀性巴氏杆菌进行甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐受性检测,用PCR法检测各耐药菌株的磺胺类耐药基因(sul1、sul2和sul3),并利用多位点序列分型(MLST)分析耐药菌株间的亲缘关系。结果显示,33株鸭源多杀性巴氏杆菌对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐受,耐药率为37.1%(33/89);在耐药菌株中,sul1、sul2和sul3基因检出率分别为100%(33/33)、97.0%(32/33)和21.2%(7/33),其中sul1和sul2基因同时检出率为97.0%(32/33),sul1、sul2和sul3基因同时检出率为21.2%(7/33);所有耐药菌株均属于ST129型。以上结果表明,鸭源多杀性巴氏杆菌对磺胺类药物具有一定的耐药性,其中的耐药菌株都属于同一序列型ST129,均携带有sul1耐药基因,且绝大多数耐药菌株同时携带sul1与sul2两种耐药基因,提示在福建、广东和江西等地需慎用磺胺类药物来防治该细菌的感染。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 磺胺类药物 多位点序列分型 sul1基因 sul2基因 sul3基因
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禽源多杀性巴氏杆菌耐药性分析及氟苯尼考耐药基因floR分布
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作者 陈红梅 龙飞 +9 位作者 邓辉 刘荣昌 傅光华 施少华 万春和 傅秋玲 郑庆礼 白丁平 黄小红 黄瑜 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第3期93-96,共4页
为了解禽源多杀性巴氏杆菌的药物敏感性及氟苯尼考的耐药基因的分布特征,采用琼脂二倍稀释法,对分离自福建、广东和江西等南方数省部分地区113株禽源多杀性巴氏杆菌进行9种抗生素的耐药性分析,并应用PCR方法检测氟苯尼考耐药基因floR的... 为了解禽源多杀性巴氏杆菌的药物敏感性及氟苯尼考的耐药基因的分布特征,采用琼脂二倍稀释法,对分离自福建、广东和江西等南方数省部分地区113株禽源多杀性巴氏杆菌进行9种抗生素的耐药性分析,并应用PCR方法检测氟苯尼考耐药基因floR的分布情况。结果显示:上述菌株对四环素表现高水平耐药,耐药率为65.49%(74/113);对链霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、氟苯尼考、卡那霉素与恩诺沙星表现中等水平耐药,耐药率分别是43.36%(49/113)、39.82%(45/113)、27.43%(31/113)、25.66%(29/113)与24.78%(28/113);对氨苄西林、头孢噻呋与头孢克洛较为敏感,耐药率分别为4.42%(5/113),2.65%(3/113)与1.77%(2/113);其中52.21%(59/113)菌株能耐受3类及3类以上的抗菌药物;氟苯尼考耐药基因floR的检出率为64.04%(72/113),且所有氟苯尼考耐药菌株均含有floR基因。结论:113株禽源多杀性巴氏杆菌存在多重耐药现象,且floR耐药基因较为流行。本研究结果为上述地区针对禽源多杀性巴氏杆菌临床用药提供科学依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 耐药性 耐药基因 floR基因
鸭三种病毒性疾病多重PCR检测方法的建立及初步应用 预览
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作者 李海琴 傅光华 +5 位作者 黄江南 傅秋玲 谢金防 龙飞 黄瑜 韦启鹏 《福建农业学报》 北大核心 2018年第7期655-659,共5页
为了一次性检测临床样品中是否存在鸭新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DPV)或鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染,本研究根据GenBank已登录的3种病原的保守基因序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了可同时检测NDV、DPV和DTMUV的多重PC... 为了一次性检测临床样品中是否存在鸭新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DPV)或鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染,本研究根据GenBank已登录的3种病原的保守基因序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了可同时检测NDV、DPV和DTMUV的多重PCR检测方法。特异性检验表明,该多重PCR方法可同时扩增出NDV(510bp)、DPV(400bp)、DTMUV(300bp)的特异片段,对其他鸭常感染病毒扩增结果均为阴性;敏感性测定表明,该多重PCR技术最低能检出1.02×104拷贝·μL-1NDV、3.50×103拷贝·μL-1DPV和1.17×104拷贝·μL-1DTMUV。采用建立的多重PCR方法对250份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。以上结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法具有快速、特异性强、敏感性高等优点,适用于临床样品中上述3种病原的检测。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鸭瘟病毒 鸭坦布苏病毒 多重PCR
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鸭瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立 预览
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作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 龙飞 施少华 傅光华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第6期722-728,共7页
根据鸭瘟病毒(DEV)gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10^1-1.0×10^6拷贝·μL^-1时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性... 根据鸭瘟病毒(DEV)gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10^1-1.0×10^6拷贝·μL^-1时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性扩增,其标准曲线方程为:y=-3.480x+37.955,扩增相关系数为0.999,敏感性强,最低检测限为10拷贝·μL^-1,特异性好,仅对DEV强毒株和弱毒活疫苗株检测到阳性扩增信号,对鸭源其他传染病病原(番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、禽1型副粘病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性,重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%-1.14%和0.69%-2.40%.对临床送检疑似DEV感染的14份样品进行检测,并与常规PCR方法、病毒分离鉴定进行比较,阳性率分别为85.71%(12/14)、71.43%(10/14)和57.14%(8/14),且与常规PCR方法、病毒分离鉴定的阳性符合率均为100%.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,可用于开发DEV快速诊断试剂盒,用于开展DEV流行病学调查. 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 GE基因 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR方法
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“短喙侏儒综合征”半番鸭病原学检测及病理组织学特征 被引量:1
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作者 刘荣昌 黄瑜 +6 位作者 卢荣辉 傅秋玲 万春和 傅光华 龙飞 施少华 陈红梅 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期51-58,共8页
旨在明确福建省漳州地区3个“短喙侏儒综合征”半番鸭群的病原及病理组织学特征。对患病半番鸭体质量、喙长、喙宽进行测定及统计分析,采集患病半番鸭肝、脾、胰腺组织进行病原学检测、病毒分离鉴定和基因序列测定与分析,同时采集心... 旨在明确福建省漳州地区3个“短喙侏儒综合征”半番鸭群的病原及病理组织学特征。对患病半番鸭体质量、喙长、喙宽进行测定及统计分析,采集患病半番鸭肝、脾、胰腺组织进行病原学检测、病毒分离鉴定和基因序列测定与分析,同时采集心、肝、脾、肺、肾等10种组织进行病毒分布及病理组织学研究。结果表明,患病半番鸭喙长,体质量与同场正常未感染半番鸭相比,发病鸭体质量减少达49.00%,喙长缩短达32.00%,喙宽缩短达22.00%;经PCR或RT—PCR检测显示,所采样品禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒、坦布苏病毒、鸭甲肝病毒、呼肠孤病毒、鸭圆环病毒、鸭疫里默氏菌、鸭大肠杆菌、鸭沙门菌均为阴性,均为水禽细小病毒阳性;对组织匀浆液致死的鸭胚尿囊液检测表明,分离毒株均为水禽细小病毒,经进一步基因序列分析显示所分离3株病毒与番鸭细小病毒病(MDPV)各代表株核苷酸同源性达97.7%以上,与新型MDPVSAAS—SHNH株核苷酸同源性高达98.9%。组织病毒分布检测结果显示,患病半番鸭心、肝、脾、肺、肾等10种组织均不同程度带毒,其中以胸腺、法氏囊、心、脾和胰腺病毒含量最高,肝、肺、脑、小肠次之,肾脏最低;病理组织学研究可见心肌颗粒变性,肝脏水泡变性,胸腺出血,骨骼肌出血、坏死。以上结果表明,福建省漳州地区的3个半番鸭群发生的“短喙侏儒综合征”由新型MDPV所致,且与经典的MDPV在感染宿主、临床症状、病变特征等方面存在较大差异,为新型MDPV病的诊断提供了科学依据和借鉴。 展开更多
关键词 半番鸭 短喙侏儒综合征 新型番鸭细小病毒 病毒分布 病理组织学
鸭肠炎病毒强毒和疫苗弱毒鉴别诊断PCR方法的建立 预览
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作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 龙飞 傅光华 施少华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《福建农业学报》 北大核心 2018年第3期219-224,共6页
为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7... 为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7.0,设计一组可对DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因进行编码区全长扩增的特异性引物,经条件优化后建立DEV强毒和疫苗弱毒鉴别诊断的PCR方法。结果表明,DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上存在528bp的连续核苷酸序列缺失。优化后的PCR方法最佳退火温度为55℃,对DEV强毒和疫苗弱毒扩增片段大小分别为1 019bp和491bp;敏感性强,最低检测限为15.3pg;特异性好,对鸭源常见传染病(如番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)均无特异性扩增。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 强毒 疫苗弱毒 UL2基因 PCR 鉴别诊断
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鸭腺病毒A型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 万春和 刘荣昌 +5 位作者 龙飞 施少华 傅光华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第5期1341-1348,共8页
试验旨在建立鸭腺病毒A型(duck adenovirus A,DAdV-A)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据DAdV-A Hexon基因序列设计特异性引物和探针,建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性进行检测... 试验旨在建立鸭腺病毒A型(duck adenovirus A,DAdV-A)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据DAdV-A Hexon基因序列设计特异性引物和探针,建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性进行检测,用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和常规PCR方法同时对福建地区临床收集的85份番鸭源病料进行DAdV-A感染的检测,比较其符合率。结果表明,试验成功建立了检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,其扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.9%;特异性强,对鸭常见病原(如鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;灵敏度高,最低检测限为8.37拷贝/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.54%~1.28%和0.61%~2.39%。对临床送检的85份病料,TaqMan实时荧光定量PCR方法的阳性率为7.06%(6/85),PCR方法的阳性率为5.88%(5/85),且PCR检测的阳性样品经TaqMan实时荧光定量PCR方法检测均为阳性,符合率为100%。本研究建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,为鸭群中开展DAdV-A的分子流行病学研究提供了有效技术手段。 展开更多
关键词 鸭腺病毒A型 Hexon基因 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR方法
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禽坦布苏病毒E基因与沙门菌鞭毛保守区的嵌合表达研究
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作者 施少华 龙飞 +6 位作者 傅光华 陈红梅 万春和 傅秋玲 刘荣昌 林建生 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2018年第10期17-20,共4页
利用PCR方法从禽坦布苏病毒和肠炎沙门茵分别扩增出E基因和鞭毛基因保守片段(FlicAC和FlicDB),随后通过over—lappingPCR方法将FlicAC片段、E基因和FlicDB片段依序串联后获得FlicAC—E—FlicDB目的片段,克隆到pMD18-T载体中获得重... 利用PCR方法从禽坦布苏病毒和肠炎沙门茵分别扩增出E基因和鞭毛基因保守片段(FlicAC和FlicDB),随后通过over—lappingPCR方法将FlicAC片段、E基因和FlicDB片段依序串联后获得FlicAC—E—FlicDB目的片段,克隆到pMD18-T载体中获得重组质粒pMD-FlicAC—E—FlicDB.经BamHI和HindⅢ双酶切后接入pET-32a栽体,构建原核表达重组质粒pET—FlicAC—E—FlicDB。表达质粒转化入感受态细胞BL21(DE3)后,经IPTG诱导后表达出FlicAC—E—FlicDB嵌合蛋白,Western—blot鉴定证实与预期融合蛋白一致。 展开更多
关键词 禽坦布苏病毒 E基因 沙门菌 鞭毛 嵌合表达
我国部分地区鸭1型甲肝病毒流行株遗传变异分析 预览
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作者 傅光华 陈翠腾 +7 位作者 温名根 施少华 陈红梅 万春和 傅秋玲 龙飞 刘荣昌 黄瑜 《福建农业学报》 北大核心 2018年第2期109-113,共5页
为了解鸭群中鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)的流行及其分子变异情况,对2015-2016年福建、广东、浙江及江西鸭群采集的327份临床样品进行检测、病毒分离鉴定、序列测定与分析。结果表明,自327份临床样品中检出DHAV-1阳性样品35份,阳性率10.7%;... 为了解鸭群中鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)的流行及其分子变异情况,对2015-2016年福建、广东、浙江及江西鸭群采集的327份临床样品进行检测、病毒分离鉴定、序列测定与分析。结果表明,自327份临床样品中检出DHAV-1阳性样品35份,阳性率10.7%;从阳性样品中分离获得23株DHAV-1,主要来自30日龄以内的麻鸭和半番鸭。对DHAV-1的VP1基因分子特征及遗传变异分析,表明23株病毒VP1基因核苷酸序列同源性介于93.3%~99.9%,分属2个病毒亚群,两亚群间的遗传距离为0.06。23株临床分离株中有18株与引起雏鸭胰腺泛黄的毒株(MPZJ1206株)处于同一亚群,为目前流行的优势毒株,与国内外疫苗株核苷酸同源性在91.3%~96.2%,存在较大差异。由此可见,我国福建省及周边地区鸭群中不同DHAV-1流行株之间及流行毒株与疫苗株间均存在不同程度的差异。 展开更多
关键词 鸭1型甲肝病毒 VP1基因 变异分析
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红毛鸭胚源鹅细小病毒江西株的分离鉴定与NS基因的分析 预览
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作者 傅秋玲 傅光华 +9 位作者 万春和 韦启鹏 陈红梅 黄江南 龙飞 施少华 刘荣昌 陈翠腾 李海琴 黄瑜 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第12期6-9,共4页
自死亡的红毛鸭胚中分离获得1株病毒株(命名为JX-JA-2017株),经胶体金试纸条检测呈鹅细小病毒(GPV)阳性,经中和试验测定可被GPV阳性血清特异性中和,表明该毒株为GPV。对其进行非结构基因(NS)特征分析发现,其NS基因与GenBank登入的13株... 自死亡的红毛鸭胚中分离获得1株病毒株(命名为JX-JA-2017株),经胶体金试纸条检测呈鹅细小病毒(GPV)阳性,经中和试验测定可被GPV阳性血清特异性中和,表明该毒株为GPV。对其进行非结构基因(NS)特征分析发现,其NS基因与GenBank登入的13株鹅细小病毒核苷酸序列同源性为94%-99.6%,氨基酸同源性为94.8%-99.5%;经分子进化分析发现,该株病毒与亚洲型GPV分离株共处于一个进化分支。以上结果揭示,红毛鸭胚存在GPV感染,且其JX-JA-2017株病毒与经典的GPV具有共同的遗传起源,丰富了GPV的流行病学与分子生态学内涵,为加强我国鹅细小病毒病的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 红毛鸭胚 鹅细小病毒 胶体金试纸条 NS 基因分析
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两例Cornelia de Lange综合征患儿的临床表现与基因突变分析
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作者 苗业权 朱越跃 +6 位作者 张其刚 郭浩伟 赵玉祥 龙飞 韩良荣 宁颖 潘琼 《中华医学遗传学杂志》 CSCD 2018年第4期493-497,共5页
目的对两例疑诊为Cornelia de Lange综合征(CdLS)的新生儿进行基因突变检测。方法抽取患儿及其父母的静脉血样,提取DNA,采用目标区域序列捕获及高通量测序技术对CdLS的相关基因(NIPBL、SMCIA、SMC3、RAD21和HDAC8)进行测序,用San... 目的对两例疑诊为Cornelia de Lange综合征(CdLS)的新生儿进行基因突变检测。方法抽取患儿及其父母的静脉血样,提取DNA,采用目标区域序列捕获及高通量测序技术对CdLS的相关基因(NIPBL、SMCIA、SMC3、RAD21和HDAC8)进行测序,用Sanger测序法对可疑突变进行验证。结果在两例患儿的NIPBL基因中分别检测到c.7219C〉T(P.R2407X)杂合无义突变和C.7015_7024delGATcAGcAAC(P.D2339Lfs*4)杂合移码突变,后者为尚未报道的致病性突变。未发现sMC1A、SMC3、RAD21和HDAC8基因的致病性突变。结论NIPBL基因的c.7219C〉T和c.7015_7024delGATCAGCAAC突变可能是两例患儿的发病原因。 展开更多
关键词 Cornelia DE Lange综合征 NIPBL基因 突变
禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的克隆表达及抗原性鉴定 预览
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作者 陈翠腾 龙飞 +5 位作者 刘荣昌 万春和 傅光华 陈珍 朱春华 黄瑜 《福建农业学报》 北大核心 2018年第5期451-455,共5页
为了对禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白H(Omp H)的免疫学活性进行鉴定,本研究根据已发表的多杀性巴氏杆菌X-73株(U50907.1)设计了两对引物,用PCR方法扩增了禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株的Omp H,扩增片段为1 348bp(ORF为1 056bp)... 为了对禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白H(Omp H)的免疫学活性进行鉴定,本研究根据已发表的多杀性巴氏杆菌X-73株(U50907.1)设计了两对引物,用PCR方法扩增了禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株的Omp H,扩增片段为1 348bp(ORF为1 056bp)。扩增的Omp H与GenBank中登录号为AE004439.1(Pm70株)、EF635422.1(C44-1株)、EU016232.1(P52株)、JQ082510.1(XJ121株)、U50907.1(X-73株)、U52200.1(P-1059株)的序列比对分析结果表明,其核苷酸同源性范围在80.2%-98.4%,氨基酸同源性范围在79.6%-98.5%。扩增了去信号肽的Omp H基因,构建原核重组表达质粒pET-Omp H,转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果表明,表达蛋白约为56ku,与预期分子量的大小相符;蛋白免疫印迹试验结果表明,该蛋白具有良好的免疫学活性,为建立禽Pm血清学检测方法以及禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白H基因 原核表达
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樱桃谷鸭源鹅出血性多瘤病毒(GHPV)全基因组克隆与分析
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作者 万春和 陈翠腾 +6 位作者 刘荣昌 龙飞 施少华 傅光华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1410-1418,共9页
鹅出血性多瘤病毒(Goose hemorrhagic polyomavirus, GHPV)为近年来我国鸭群新发病原。为明确我国鸭源GHPV基因组特征,本研究利用分段PCR扩增技术克隆获得樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domestica)源GHPV(FJ201601株)全基因组序... 鹅出血性多瘤病毒(Goose hemorrhagic polyomavirus, GHPV)为近年来我国鸭群新发病原。为明确我国鸭源GHPV基因组特征,本研究利用分段PCR扩增技术克隆获得樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domestica)源GHPV(FJ201601株)全基因组序列,并对其进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析。结果表明,克隆的GHPV(FJ201601株)全基因组序列长为5 254 bp(GenBank登录号MG544856),(G+C)%含量为48.01%,编码的6个主要功能基因(ORF-X, VP2, VP3, VP1, Large T和Small T)长度分别为510、981、654、1 062、1 911和483 bp。核苷酸同源性分析表明,FJ201601株和其他不同地区、不同宿主来源GHPV相互之间基因组核苷酸同源性较高(99.7%以上);其6个主要功能基因和其他不同地区、不同宿主来源GHPV相应基因的核苷酸(99.4%以上)和氨基酸同源性(98.2%以上)均极高。从全基因组及其编码的6个主要功能基因遗传进化关系可见,GHPV各分离株在基因组上亲缘关系较近,6个主要功能基因在遗传进化上差异不大,但北京鸭源GHPV和樱桃谷鸭源GHPV在遗传进化上仍存在细微差别,且不同宿主(多品种鸭和鹅)源GHPV在遗传进化上不存在宿主特异性。本研究丰富了GHPV分子流行病学数据,明确了GHPV基因组分子特征,为后续开展GHPV相关研究提供参考。 展开更多
关键词 鹅出血性多瘤病毒(GHPV) 樱桃谷鸭源 基因组 序列分析 遗传进化
同时检测水禽3种常见病原菌的环介导间接PCR方法的建立 被引量:2
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作者 龙飞 傅光华 +7 位作者 林群群 刘荣昌 陈翠腾 傅秋玲 万春和 施少华 陈红梅 黄瑜 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期96-99,共4页
为建立同时检测大肠杆菌、禽源多杀性巴氏杆菌和鸭疫里默氏菌等水禽常见病原菌的环介导间接PCR方法,根据大肠杆菌的gapA基因、禽源多杀性巴氏杆菌的KMTl基因、鸭疫里默氏菌的OmpA基因序列,分别设计引物、标记于猪线粒体基因片段的两... 为建立同时检测大肠杆菌、禽源多杀性巴氏杆菌和鸭疫里默氏菌等水禽常见病原菌的环介导间接PCR方法,根据大肠杆菌的gapA基因、禽源多杀性巴氏杆菌的KMTl基因、鸭疫里默氏菌的OmpA基因序列,分别设计引物、标记于猪线粒体基因片段的两端,制备不同细菌的捕获探针;将捕获探针与待检测菌的基因组杂交、补平缺口、环化。采用1对引物反向扩增捕获探针,建立检测水禽3种常见病原菌的环介导间接PCR方法,扩增片段大小分别为328,422和504bp。沙门菌、金黄色葡萄球菌、小鹅瘟病毒的检测结果为阴性。该方法能检测出100Pg的细菌基因组DNA,与常规PCR的符合性为]00%。该方法可用于水禽3种常见病原菌的同时检测,是一种特异性好、灵敏度高的快速病原学诊断方法。 展开更多
关键词 大肠杆菌 多杀性巴氏杆菌 鸭疫里默氏菌 环介导间接PCR
鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立 预览
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作者 万春和 刘荣昌 +5 位作者 龙飞 傅光华 施少华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1558-1566,共9页
鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染,该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大,复制非必需区多,可容纳多个外源基因的插入,被广泛用来作为基因... 鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染,该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大,复制非必需区多,可容纳多个外源基因的插入,被广泛用来作为基因工程载体来开发疫苗。当前,尚未见仅针对DEV疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法相关研究报道。本研究通过分析DEV疫苗株和强毒株UL2基因特点,明确DEV疫苗株在UL2基因上存在528bp连续核苷酸缺失,设计针对该差异的实时荧光定量PCR引物,建立了EvaGreen实时荧光定量PCR检测DEV疫苗株的方法。结果表明,建立的检测DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,当UL2基因含量为5.25×10^1~5.25×10^6拷贝·μL^-1时有良好的线性扩增,其标准曲线方程Y轴截距为34.95,斜率为-3.218,扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%;敏感性强,最低检测限为52.5拷贝·μL^-1;特异性好,对DEV疫苗株扩增产物的熔解曲线分析,仅出现1个单特异峰值[Tm=(90.62±0.28)℃],无引物二聚体,对其他鸭源传染病病原(如鸭肠炎病毒强毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、番鸭源鹅细小病毒、新型基因重组型鸭细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭源鹅多瘤病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.55%~1.72%和0.92%~2.49%。本研究建立了DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,为评价DEV活载体基因工程疫苗免疫防控机制提供参考。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 疫苗株 UL2基因 EvaGreen 实时荧光定量PCR方法
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三个低血磷抗维生素D佝偻病家系的PHEX基因突变分析
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作者 张舒 张其刚 +5 位作者 龙飞 黄晓莉 彭圆 梁喆 郭浩伟 潘琼 《中华医学遗传学杂志》 CSCD 2018年第5期644-647,共4页
目的对3个疑诊为X-连锁低血磷抗维生素D佝偻病(X-linked hypophosphatemia,XLH)的家系进行PHEX基因的突变检测。方法提取患者及其家系成员外周血的基因组DNA,用PCR扩增PHEX基因的全部外显子及其侧翼序列,用Sanger测序法检测潜在的... 目的对3个疑诊为X-连锁低血磷抗维生素D佝偻病(X-linked hypophosphatemia,XLH)的家系进行PHEX基因的突变检测。方法提取患者及其家系成员外周血的基因组DNA,用PCR扩增PHEX基因的全部外显子及其侧翼序列,用Sanger测序法检测潜在的突变,并在家系中进行基因型与表型的相关性分析,评价突变的致病性。结果家系1检测出PHEX基因第8外显子c.871C〉T(p.R291X)致病突变;家系2检测出第15外显子c.1601C〉T(p.P534L)杂合致病突变;家系3检测出第11外显子c.1234delA(p.S412Vfs*12)杂合突变,造成密码子阅读框发生移码,而使蛋白质翻译的提前终止,经查询HGMD数据库及国内外文献均未见报道。结论检测出的3种PHEX基因突变可能是3个XLH家系的致病原因。新突变的发现扩展了PHEX基因的突变谱。 展开更多
关键词 低血磷抗维生素D佝偻病 X-连锁 PHEX基因 突变
三峡库区江边回填土在库区水位反复升降过程中的土体渗流模型 预览
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作者 熊礼全 付亚男 +2 位作者 龙飞 郭远臣 毛海涛 《科学咨询》 2018年第14期35-36,共2页
了解三峡库区江边填土在坝区水位反复升降过程中土的渗透性模型是研究该地区土体受力的关键,同时也是研究边坡稳定及事故处理的基础。
关键词 回填土 水位变化 渗流模型
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非规则曲线桥梁漂浮抗震体系理论及试验研究 预览
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作者 闫磊 李青宁 +3 位作者 赵花静 龙飞 郭远臣 申纪伟 《土木建筑与环境工程》 CSCD 北大核心 2018年第4期103-110,共8页
强烈地震使得桥梁结构灾变严重,非规则曲线桥梁表现更为突出。首先,提出适用于非规则曲线桥梁的一种新型抗震体系—漂浮抗震体系,并阐明其基本概念;其次,建立该体系的基本力学模型,并推导其动力方程;最后,以一座相似比为1/20的非规则曲... 强烈地震使得桥梁结构灾变严重,非规则曲线桥梁表现更为突出。首先,提出适用于非规则曲线桥梁的一种新型抗震体系—漂浮抗震体系,并阐明其基本概念;其次,建立该体系的基本力学模型,并推导其动力方程;最后,以一座相似比为1/20的非规则曲线桥梁为对象,采用不同地震波分别对其进行地震模拟振动台试验研究。研究结果表明:支座滑动后,梁体加速度峰值相比墩顶有不同程度降低,最大降低率达65%;试验过程中,墩梁相对位移较大,防落梁限位装置的设置在非规则曲线桥梁中不可或缺;试验结束后,模型桥梁损伤较小,未出现落梁、整体倒塌等严重震害,证明该体系具有良好的抗震性能,应用于高烈度地区非规则曲线桥梁的抗震设计完全可行。 展开更多
关键词 非规则曲线桥梁 漂浮抗震体系 振动台试验 抗震性能
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鹦鹉幼雏病病毒福建株VP1基因的克隆及序列分析 预览
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作者 万春和 龙飞 +6 位作者 傅光华 施少华 陈红梅 傅秋玲 刘荣昌 林建生 黄瑜 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第6期1661-1667,共7页
为明确虎皮鹦鹉源鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease polyomavirus,BFPyV)福建株(命名为FJ-2016株)结构蛋白VP1基因特征,本研究针对BFPyVVP1基因特点设计特异性引物,利用PCR方法扩增获得FJ-2016株VP1基因全长序列,目的... 为明确虎皮鹦鹉源鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease polyomavirus,BFPyV)福建株(命名为FJ-2016株)结构蛋白VP1基因特征,本研究针对BFPyVVP1基因特点设计特异性引物,利用PCR方法扩增获得FJ-2016株VP1基因全长序列,目的片段经胶回收后进行克隆测序。结果显示,BFPyV FJ-2016株VP1基因全长为1 032bp,编码343个氨基酸。所编码VP1蛋白的理论等电点为5.77,不稳定指数为40.91,是不稳定蛋白;脂肪系数为74.72;总平均疏水性指数为-0.366。将获得的VP1基因序列提交至GenBank,登录号为:MG148345。核苷酸同源性分析表明,不同时间、地区和品种BFPyV的VP1基因十分保守,相互之间的核苷酸同源性均在99.1%以上。遗传进化分析发现,不同时间和地域BFPyV相互之间亲缘关系较近,但可细分为两个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2)。从宿主品种来看,虎皮鹦鹉源BFPyV各分离株的遗传进化与分离时间及地域无明显关系,虎皮鹦鹉源BFPyV分离株在Clade 1和Clade 2分支均有分布。本研究首次证实福建地区虎皮鹦鹉中存在BFPyV感染,相关研究结果为丰富不同地区BFPyV分子流行病学数据提供参考。 展开更多
关键词 鹦鹉幼雏病病毒 虎皮鹦鹉 VP1基因 序列分析
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