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福建山羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析 预览
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作者 裕胜 江锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期326-330,共5页
【目的】对福清一山羊养殖场发生的山羊肺炎病原进行确诊,为福建山羊溶血性曼式杆菌的分离鉴定及检测提供研究基础。【方法】对剖检采取的组织进行细菌分离培养,随后对溶血性曼氏杆菌、羊口疮病毒、绵羊肺炎支原体和丝状支原体簇等羊常... 【目的】对福清一山羊养殖场发生的山羊肺炎病原进行确诊,为福建山羊溶血性曼式杆菌的分离鉴定及检测提供研究基础。【方法】对剖检采取的组织进行细菌分离培养,随后对溶血性曼氏杆菌、羊口疮病毒、绵羊肺炎支原体和丝状支原体簇等羊常见呼吸道病原进行PCR检测,对分离菌进行16SrRNA基因克隆测序,并对分离株进行药物敏感性研究。【结果】细菌分离培养结果显示:从病死羊肺脏中分离到1株细菌;PCR检测结果显示,除溶血性曼氏杆菌有扩增条带外,未检测到其他病原;16SrRNA测序结果显示:分离株16SrRNA基因序列与GenBank上公布的其他溶血性曼氏杆菌的同源性为97.1%~100.0%,与溶血性曼氏杆菌美国D171参考株同源性高达100%;以上结果表明分离菌为溶血性曼氏杆菌,命名为FJ-FQ2018。药物敏感性试验表明分离株对氟苯尼考、恩诺沙星、头孢噻吩、头孢唑啉、环丙沙星等高敏,对氨苄西林中敏,对多粘菌素B、林可霉素低敏。【结论】福建某养殖场引进的山羊发生肺炎后经病原分离鉴定确诊为溶血性曼氏杆菌感染,分离菌株对8种抗生素的耐药性存在差异。 展开更多
关键词 山羊 溶血性曼氏杆菌 分离鉴定 药敏试验
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绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 裕胜 李莎莎 +3 位作者 江锦秀 张靖鹏 游伟 胡奇林 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期943-950,共8页
绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Mo)和丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri, Mmc)是引起羊支原体性肺炎(M.pneumonia of sheep and goats, MPSG)的主要病原。为了快速鉴别引起MPSG的主要病原,建立一种可以同时检测Mo... 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Mo)和丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri, Mmc)是引起羊支原体性肺炎(M.pneumonia of sheep and goats, MPSG)的主要病原。为了快速鉴别引起MPSG的主要病原,建立一种可以同时检测Mo和Mmc的双重TaqMan探针荧光定量PCR (Real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)检测方法。根据Mo p113序列和Mmc MLC_1770 (hypothetical protein gene)序列,利用Beacon Designer 7.9结合NCBI Blast软件分析,分别设计出针对Mo和Mmc的特异性引物和探针。通过对引物浓度、探针浓度和退火温度等反应条件的优化,建立了双重TaqMan探针qRT-PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果表明,建立的双重TaqMan探针qRT-PCR的标准曲线相关系数R2分别为0.998和0.999,扩增效率分别为94.8%和97.0%;该方法对其他羊常见病原均无扩增信号,证明该方法具有良好的特异性;该方法对Mo和Mmc的最低检测限均为100 copies/μL,敏感性是常规PCR的100倍;组内和组间变异系数都低于2%,说明重复性好。应用该方法对福建省内收集的187例临床样品进行检测,结果显示,Mo的阳性率为47.6%(89/187),Mmc的阳性率为11.8%(22/187),两种病原体混合感染阳性率为10.2%(19/187)。以上数据结果表明,本研究建立的方法可用于临床上Mo和Mmc的准确、快速检测。本研究为Mo和Mmc的快速检测及流行病学提供了技术支撑。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 丝状支原体山羊亚种 TaqMan探针荧光定量PCR
星敏感器安装误差标定技术研究 预览
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作者 王欣 蔡善军 +1 位作者 吴亮华 胡奇林 《导航定位与授时》 2019年第3期125-130,共6页
星敏感器是一类具有自主高精度姿态测量能力的仪器,输出姿态精度可达到角秒级。但实际组合导航应用中,星敏感器安装误差往往可达角分级,远远大于仪器本身误差,影响其使用品质,因此有必要在使用前对星敏感器安装误差进行建模标定。研究发... 星敏感器是一类具有自主高精度姿态测量能力的仪器,输出姿态精度可达到角秒级。但实际组合导航应用中,星敏感器安装误差往往可达角分级,远远大于仪器本身误差,影响其使用品质,因此有必要在使用前对星敏感器安装误差进行建模标定。研究发现,星敏感器安装误差与惯导姿态误差存在耦合关系,难于分离。设计了一种快速标定方法,利用惯导输出姿态、位置信息以及星敏感器姿态输出构造观测量,建立卡尔曼滤波模型,通过滤波估计实现安装误差的地面标定。仿真结果表明,载体需要进行2个轴向上的机动才能将星敏感器三轴安装误差估计出来。相较于依靠外部基准姿态进行标定的方案,本方法具有快速高效、可操作性强等优点。 展开更多
关键词 星敏感器 安装误差 姿态误差 组合导航系统 姿态机动
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羊传染性脓疱病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 裕胜 江锦秀 +3 位作者 张靖鹏 江斌 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 北大核心 2018年第4期341-345,共5页
根据GenBank公布的羊传染性脓疱病毒VIR基因序列(No.KF666563.1),利用Beacon Designer 7.9软件设计1对特异性引物,建立羊传染性脓疱病毒VIR基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测羊传染性脓疱病毒... 根据GenBank公布的羊传染性脓疱病毒VIR基因序列(No.KF666563.1),利用Beacon Designer 7.9软件设计1对特异性引物,建立羊传染性脓疱病毒VIR基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测羊传染性脓疱病毒,对羊常见病原无特异性扩增;最低检测限为100copies·μL^-1;组内和组间变异系数均小于2%;应用该方法对39份临床样品进行检测,阳性率为94.9%(37/39)。以上结果表明该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,适合于羊传染性脓疱的病原学检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 SYBR Green 实时荧光定量PCR
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辅助配体对酰腙类金属Mn(II)配合物晶体结构的影响 预览
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作者 范辉 胡奇林 +1 位作者 刘怀贤 宋伟明 《人工晶体学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1691-1697,共7页
选择N3-苯甲酰吡啶基-2-甲酰胺腙(Hbpad)作为有机配体,以Mn(II)离子为金属中心,构筑了一例金属配合物[Mn(bpad)2](1)。在此基础上,引入间硝基苯甲酸(Hmnb)作为辅助配体获得了第二例配合物[Mn(Hbpad)(mnb)2·(H 2 O)](2)。利用红... 选择N3-苯甲酰吡啶基-2-甲酰胺腙(Hbpad)作为有机配体,以Mn(II)离子为金属中心,构筑了一例金属配合物[Mn(bpad)2](1)。在此基础上,引入间硝基苯甲酸(Hmnb)作为辅助配体获得了第二例配合物[Mn(Hbpad)(mnb)2·(H 2 O)](2)。利用红外光谱,元素分析、X-射线粉末衍射和X-射线单晶衍射对两例化合物的结构和组成进行了研究。晶体结构分析表明,配合物1属于单斜晶系,P 2/n空间群,最小不对称单元中的两个bpad-配体采用三齿螯合的配位模式与Mn(II)离子结合,导致中心离子形成了一个六配位的扭曲八面体构型;配合物2属于三斜晶系P-1空间群,最小不对称单元由一个Mn(II)离子、bpad-配体、配位水分子和两个mnb-离子组成。尽管Mn(II)离子也呈现了六配位的扭曲八面体几何构型,但金属中心的配位环境明显不同。两例配合物中单核分子间各异的氢键相互作用堆积形成了二者的三维超分子网络结构。 展开更多
关键词 酰腙类希夫碱 辅助配体 MN(II)配合物 晶体结构
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山羊支原体山羊肺炎亚种SYBR GreenⅠqRT-PCR检测方法的建立
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作者 裕胜 江锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期339-345,共7页
山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious capri pleuropneumonia,CCPP)的病原。本研究根据GenBank公布的Mccp F38株(No.LN515398.1)arcD(MCCPF38_00114)基... 山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious capri pleuropneumonia,CCPP)的病原。本研究根据GenBank公布的Mccp F38株(No.LN515398.1)arcD(MCCPF38_00114)基因序列设计1对特异性引物,建立了针对Mccp的SYBR GreenⅠ qRT-PCR方法。结果显示,该方法能特异性检测Mccp,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)、绵羊肺炎支原体(Myplasma ovipenumoniae,Mo)、羊传染性脓疱毒(Orf virus,ORFV)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)等羊常见病原均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;该方法的最低检测限为279 copies/μL,组内和组间变异系数均小于1%,说明该方法灵敏度高、重复性好。本研究建立的检测Mccp arcD基因的SYBR GreenⅠ qRT-PCR方法为CCPP的临床早期诊断及定量分析Mccp感染水平提供了更准确的方法。 展开更多
关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 SYBR GreenⅠ QRT-PCR
福清山羊地方性鼻内肿瘤病毒绵羊肺炎支原体和溶血性曼氏杆菌混合感染的诊断病例 预览
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作者 裕胜 江锦秀 +3 位作者 张靖鹏 游伟 毛坤明 胡奇林 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第10期69-70,130共3页
2017年10月福清市某山羊养殖场发生了以流鼻涕、呼吸困难为主要特征的传染病,其中1~6月龄小羊病死率高达50%以上。通过临床症状、剖检病变和实验室检验,确诊为山羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)、绵羊肺炎支原体... 2017年10月福清市某山羊养殖场发生了以流鼻涕、呼吸困难为主要特征的传染病,其中1~6月龄小羊病死率高达50%以上。通过临床症状、剖检病变和实验室检验,确诊为山羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)混合感染引起的山羊呼吸道疾病,诊断过程报告如下。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌 肺炎支原体 福清山羊 混合感染 诊断过程 地方性 鼻涕 绵羊
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绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和山羊支原体山羊肺炎亚种多重PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 裕胜 江锦秀 +2 位作者 江斌 游伟 胡奇林 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期812-817,共6页
为同时快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)和山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),本研究根据Mo的P80基因,Mmc的MLC_1760和Mccp的arcA基因序列,设计合成了3对特异性引物,建立了同时检测Mo、Mmc和Mccp的多重PCR方法... 为同时快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)和山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),本研究根据Mo的P80基因,Mmc的MLC_1760和Mccp的arcA基因序列,设计合成了3对特异性引物,建立了同时检测Mo、Mmc和Mccp的多重PCR方法。该方法可以同时扩增出Mo、Mmc和Mccp的特异性片段,而对大肠杆菌、巴氏杆菌、羊传染性脓痕病毒等常见羊病病原无交叉反应,对Mo、Mmc和Mccp的最低检出量分别为3.62×10~4拷贝/μL、4.03×10~5拷贝/μL和6.78×10~5拷贝/μL。应用该方法对75份临床样品进行检测,结果与单一PCR检测结果一致。对32份临床样品同时用该多重PCR方法与分离鉴定法进行检测,结果显示,两种方法对Mo、Mmc、Mccp的检测符合率分别为87.5%、100%、100%。本研究建立的多重PCR方法特异性强、敏感性较高,适用于Mo、Mmc和Mccp临床快速检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 丝状支原体山羊亚种 山羊支原体山羊肺炎亚种 多重PCR
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绵羊肺炎支原体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 裕胜 江锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期316-320,共5页
为建立一种快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)的检测方法,本研究根据GenBank登录的Mo Y-98株(KR021380.1)黏附素基因p113基因序列设计1对特异性引物和探针,建立了针对Mo的TaqMan荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测Mo,对丝... 为建立一种快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)的检测方法,本研究根据GenBank登录的Mo Y-98株(KR021380.1)黏附素基因p113基因序列设计1对特异性引物和探针,建立了针对Mo的TaqMan荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测Mo,对丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、莱氏无胆甾原体及羊传染性脓疱病毒(ORFV)等羊常见病原扩增结果均为阴性;该方法最低检测限为10拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%;采用该方法对96份临床样品进行检测,结果Mo的阳性率为67.7%(65/96),比常规PCR法及支原体分离鉴定法更加敏感。以上结果表明本研究建立的Mo TaqMan荧光定量PCR方法可以用于Mo的准确快速检测及羊支原体性肺炎的诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 TAQMAN探针 RF-PCR
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绵羊肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 预览
10
作者 裕胜 江锦秀 +2 位作者 张靖鹏 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 北大核心 2018年第10期1054-1058,共5页
根据GenBank公布的绵羊肺炎支原体Y-98株(No.KM435069.1)P80基因序列,利用Beacon Designer7.9软件设计1对特异性引物,建立了绵羊肺炎支原体的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测绵羊肺炎支原体,对其他... 根据GenBank公布的绵羊肺炎支原体Y-98株(No.KM435069.1)P80基因序列,利用Beacon Designer7.9软件设计1对特异性引物,建立了绵羊肺炎支原体的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测绵羊肺炎支原体,对其他羊常见病原扩增结果无特异性扩增;该方法最低检测限为10copies·μL-1,组内和组间变异系数均小于2%;采用该方法对96份临床样品进行检测,绵羊肺炎支原体的阳性率为67.7%(65/96),结果显示该方法与TaqMan实时荧光定量PCR方法检测结果一致。以上结果表明本研究建立的绵羊肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于绵羊肺炎支原体的病原学检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 SYBR Green 荧光定量PCR
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丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740生物信息学分析 预览
11
作者 张靖鹏 江锦秀 +2 位作者 裕胜 游伟 胡奇林 《福建农业学报》 北大核心 2018年第9期883-887,共5页
为研究丝状支原体山羊亚种Mmc-3740基因编码蛋白的结构与功能,运用生物信息学软件,对该基因编码蛋白的二级结构、跨膜区域、信号肽等生物信息进行预测及分析。结果显示,该基因编码蛋白拥有α螺旋、延伸链、随机卷曲结构;有信号肽,亚细... 为研究丝状支原体山羊亚种Mmc-3740基因编码蛋白的结构与功能,运用生物信息学软件,对该基因编码蛋白的二级结构、跨膜区域、信号肽等生物信息进行预测及分析。结果显示,该基因编码蛋白拥有α螺旋、延伸链、随机卷曲结构;有信号肽,亚细胞定位在细胞外或者细胞质内,可能为分泌蛋白,具有较高的免疫原性,抗原表位偏高的区域主要集中在氨基酸序列的第28~51、60~67、80~130位处;蛋白分子式为C607H1000N184O261S5,分子量15.21kD,等电点(PI值)为4.42,在微生物体内半衰期较短,为不稳定蛋白。该结果为Mmc-3740编码蛋白的进一步研究提供基础数据。 展开更多
关键词 丝状支原体山羊亚种 特异性基因 生物信息学
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羊口疮病毒和丝状支原体簇双重PCR检测方法的建立及应用 预览 被引量:2
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作者 裕胜 江锦秀 +2 位作者 江斌 游伟 胡奇林 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期292-295,共4页
为建立一种同时快速检测羊口疮病毒(ORFV)和丝状支原体簇(Mm cluster)的方法,本研究根据ORFV的B2L基因和Mm cluster的16S rRNA基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了同时检测ORFV核酸和Mm cluster核酸的双重PC... 为建立一种同时快速检测羊口疮病毒(ORFV)和丝状支原体簇(Mm cluster)的方法,本研究根据ORFV的B2L基因和Mm cluster的16S rRNA基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了同时检测ORFV核酸和Mm cluster核酸的双重PCR方法。该方法可以同时扩增出ORFV和Mm cluster的特异性片段,而对其它常见病原的DNA模板均无扩增,对ORFV和Mm cluster的最低检出量分别为3.8×104拷贝/μL和1.3×103拷贝/μL。利用该方法对36份临床样品进行检测,结果显示双重PCR检测结果与单一PCR检测结果符合率为100 %。本研究建立的双重PCR方法特异性强,敏感性高,可重复性好,为临床ORFV和Mm cluster的快速检测、诊断及流行病学调查提供了方法。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 丝状支原体簇 双重PCR 检测
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福建省羊传染性脓疱病毒F1L、B2L和VIR基因的遗传变异分析 预览 被引量:2
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作者 裕胜 江锦秀 +2 位作者 江斌 游伟 胡奇林 《动物医学进展》 北大核心 2017年第2期1-6,共6页
为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株oRFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFVF1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列... 为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株oRFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFVF1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.8%~99.79/6,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.3%~97.1%;同NZ2参考株比较,FJ-YT2014缺失2个氨基酸;10株ORFVB2L基因之间核苷酸序列同源性为97.59/5~99.9%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.7%~99.5%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.7%~97.7%;10株ORFVVIR基因之间的核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,与国内株的核苷酸序列同源性为94.6%~99.6%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为94.6%~96.4%。基于基因核苷酸序列的遗传进化分析表明,10株ORFVF1L基因与福建省分离株、山西株和新疆株亲缘关系较近;10株oRFVB2L基因与新疆、山西、德国毒株亲缘关系较近;10株ORFVVIR‘基因与台湾、新疆株亲缘关系较近。结果提示,当前福建省流行的ORFVF1L、B2L和VIR基因尚未出现明显变异,但是其F1L、B2L和VIR基因核苷酸序列之间普遍存在异质性。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 F1L基因 B2L基因 VIR基因 变异分析
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牛支原体FJ-HJ分离株的分离及鉴定 预览
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作者 江锦秀 裕胜 +2 位作者 游伟 江斌 胡奇林 《中国农学通报》 2017年第20期107-112,共6页
从福建省患呼吸道疾病牛肺组织中分离到1株支原体,采用形态学观察、生化试验、特异性PCR检测和16SrRNA序列分析等进行鉴定,旨在明确该病病原。结果显示分离株菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起,命名为FJ-HJ分离株。分离株不能... 从福建省患呼吸道疾病牛肺组织中分离到1株支原体,采用形态学观察、生化试验、特异性PCR检测和16SrRNA序列分析等进行鉴定,旨在明确该病病原。结果显示分离株菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起,命名为FJ-HJ分离株。分离株不能水解精氨酸,不能发酵葡萄糖,不分解尿素,血细胞吸附试验和溶血试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性;PCR反应扩增出牛支原体特异大小为1911bp的目的片段;分离株16SrRNA基因序列与牛支原体标准株PG45的序列相似性为99.7%。研究结果表明:本次分离到的支原体为牛支原体,证实福建省存在牛支原体病的流行,为福建省牛支原体病的防治提供了科学依据。 展开更多
关键词 牛支原体 分离 鉴定 福建
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检测鸭坦布苏病毒NS1抗体ELISA方法的建立 预览 被引量:1
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作者 孙敏华 郭建伟 +6 位作者 董嘉文 邝瑞欢 吴玄光 张建峰 胡奇林 张春红 《广东畜牧兽医科技》 2017年第1期37-40,共4页
为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况,本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的基础上,建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。棋盘法确定了当纯化的NS1蛋白包被量为0.188μg/孔,待检血清1:200稀释,HRP标记... 为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况,本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的基础上,建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。棋盘法确定了当纯化的NS1蛋白包被量为0.188μg/孔,待检血清1:200稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1:16000倍稀释时反应条件最佳。在最佳反应条件下,阴阳性临界值判定标准为0.467。用建立的间接ELISA方法对番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为6%和10%,显示该方法具有很好的稳定性。用建立的ELISA方法检测临床鸭坦布苏病毒感染鸭及攻毒蛋鸭的55份临床血清样品,测得52份为阳性,阳性率为94.5%,对36份阴性鸭群血清样品进行检测,36份为阴性,阴性率为100%。该方法为鸭坦布苏病毒的诊断和流行病学监测奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 NS1蛋白 ELISA
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ORFV和Mo双重PCR检测方法的建立及应用 被引量:3
16
作者 裕胜 江锦秀 +2 位作者 江斌 游伟 胡奇林 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1374-1380,共7页
羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)是羊传染性脓疱病(Contagious ecthyma,CE)的病原,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma0∥咖neumoniae,Mo)是羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)的主要病原,近年来此... 羊传染性脓疱病毒(Orfvirus,ORFV)是羊传染性脓疱病(Contagious ecthyma,CE)的病原,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma0∥咖neumoniae,Mo)是羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)的主要病原,近年来此两种病原混合感染日益增多,目前采用单一PCR方法检测这两种病原,临床上迫切需要能同时快速检测这两种病原的方法。为了建立能够直接从样品中同时检测ORFV核酸和Mo核酸的双重PCR方法,本研究根据ORFV的主要膜蛋白B2L基因(major envelope protein B2L gene)和DMo的膜蛋白P80基因(membraneproteinP80gene)序列,设计合成了2对特异性引物。结果显示,该方法可以同时扩增出ORFV的402bp和Mo的700bp特异性片段,而对其他常见病原的DNA模板均无扩增,显示出良好的特异性,该方法对ORFV和Mo的最低检出量分别为1.1×10’copies/ixL和3.47×10^3copies/ixL,比单-PCR敏感10倍。对来自福建省部分羊场的883份病山羊(Caprahircus)临床样品进行检测,双重PCR检出ORFV阳性样品28份(阳性率为33.7%),Mo阳性样品33份(阳性率为39.8%),同时感染ORFV和NMo的阳性样品9份(阳性率为10.8%1,检测结果与单-OaFV和Mo PCR结果一致。本研究所建立的双重PCR方法可用于ORFV和Mo的临床检测,为CEfUMPGS的临床快速鉴别诊断和流行病学调查提供了有效的方法。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒(ORFV) 绵羊肺炎支原体(Mo) 双重PCR
山羊地方性鼻内肿瘤病毒和支原体混合感染山羊的诊断 预览 被引量:2
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作者 裕胜 江锦秀 +1 位作者 游伟 胡奇林 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第10期59-61,I0001共4页
2016年10月福州市一山羊养殖户的山羊发病,经临床症状、剖检病变及实验室检验,确诊为羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)和丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma myco... 2016年10月福州市一山羊养殖户的山羊发病,经临床症状、剖检病变及实验室检验,确诊为羊地方性鼻内肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus,ENTV)、绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)和丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)混合感染引起的山羊呼吸道疾病,报告如下。 展开更多
关键词 肺炎支原体 混合感染 地方性 山羊 病毒 肿瘤 诊断
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福建山羊地方性鼻内肿瘤的分子流行病学调查 预览
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作者 江锦秀 裕胜 +4 位作者 江斌 毛坤明 游伟 张靖鹏 胡奇林 《福建农业学报》 北大核心 2017年第8期837-841,共5页
为明确2014-2017年福建省多地区羊发生的一种以流稀薄鼻液为主要症状疾病的病原,对该病进行流行病学调查、肿瘤组织切片观察,特异性PCR诊断以及核酸序列分析,结果显示该病在流行病学、临床症状、病理变化、组织病理变化上与国内外已报... 为明确2014-2017年福建省多地区羊发生的一种以流稀薄鼻液为主要症状疾病的病原,对该病进行流行病学调查、肿瘤组织切片观察,特异性PCR诊断以及核酸序列分析,结果显示该病在流行病学、临床症状、病理变化、组织病理变化上与国内外已报道的病例表现基本一致,RT-PCR鉴定结果为ENTV-2,其中7个分离株与ENTV-2CHN2(分离于中国)处于同一进化树分支,1个分离株与ENTV-SC(分离于中国)、ENTVShaanxi(分离于中国)处于同一进化树分支。说明近几年福建省流行的羊肿瘤病的病原为ENTV-2,为福建省加强该病的防治奠定基础。 展开更多
关键词 山羊 地方性鼻内肿瘤 分子流行病学
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煤质因素对水煤浆制浆浓度的影响 预览
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作者 李和平 李学萍 +1 位作者 胡奇林 刘万毅 《宁夏工程技术》 CAS 2017年第2期143-146,共4页
为了准确把握煤质因素对水煤浆成浆特性的影响,采用干法制浆,参照粒度区间60~140目,140~200目,200目以上煤粉质量分数分别占30%,40%,30%的配比,对宁东—鄂尔多斯—榆林地区16种典型煤样进行制浆实验;按照煤样成浆浓度由高到低排序,研... 为了准确把握煤质因素对水煤浆成浆特性的影响,采用干法制浆,参照粒度区间60~140目,140~200目,200目以上煤粉质量分数分别占30%,40%,30%的配比,对宁东—鄂尔多斯—榆林地区16种典型煤样进行制浆实验;按照煤样成浆浓度由高到低排序,研究了煤的内水质量分数、灰分质量分数、可磨性指数、密度、表面含氧官能团总量、表面接触角、氧质量分数与水煤浆成浆浓度之间的关系,用线性拟合法标定了拟合线斜率K和相关系数R2。结果表明,以流动性为基准进行成浆浓度评价较黏度为基准相关性高;选煤制浆评价的煤质因素选择顺序依次为表面接触角、内水质量分数、O质量分数、密度、含氧官能团总量、可磨性指数、灰分质量分数;在含氧官能团组分中,Ar OH〉RCOOH〉RCOOCO。 展开更多
关键词 煤质 黏度 流动性 成浆浓度 线性拟合系数
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鸭坦布苏病毒JM株E蛋白的截断表达及间接ELISA方法的建立 预览 被引量:1
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作者 董嘉文 +4 位作者 孙敏华 张建峰 邝瑞欢 胡奇林 张春红 《中国动物传染病学报》 北大核心 2017年第1期12-18,共7页
本研究利用RT-PCR扩增鸭坦布苏病毒(DuckTembusuvirus,DTMUV)JM株E基因截断片段(822bp),并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),成功构建了重组质粒pET32a-E。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达。Westernblot... 本研究利用RT-PCR扩增鸭坦布苏病毒(DuckTembusuvirus,DTMUV)JM株E基因截断片段(822bp),并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),成功构建了重组质粒pET32a-E。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达。Westernblot分析表明,重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。将纯化好的DTMUVE蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53%和9.73%。用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,两者的阳性符合率为86.67%,阴性符合率为100%。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 JM株 E蛋白 截断表达 ELISA
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