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基于DNA条形码的翠云草快速鉴定方法研究 预览
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作者 覃桂 聂晶 +3 位作者 张飞 肖凌 汪波 《世界科学技术:中医药现代化》 CSCD 北大核心 2018年第5期697-702,共6页
目的:基于卷柏属植物DNA条形码鉴定序列,运行Taq Man探针技术探讨翠云草快速鉴定新方法。方法:本文利用DNA条形码鉴定技术对采集的11种32份卷柏属样本提取总DNA扩增ITS2序列,结合Genbank数据库的34种103条序列综合分析,针对翠云草设... 目的:基于卷柏属植物DNA条形码鉴定序列,运行Taq Man探针技术探讨翠云草快速鉴定新方法。方法:本文利用DNA条形码鉴定技术对采集的11种32份卷柏属样本提取总DNA扩增ITS2序列,结合Genbank数据库的34种103条序列综合分析,针对翠云草设计特异引物及探针,运用实时荧光PCR检测技术比较序列扩增荧光信号差异实现翠云草的快速鉴定。结果:在所分析的物种中ITS2序列可将翠云草与其它卷柏属近源物种有效区分,Taq Man探针及引物特异性较好,本研究建立的方法在翠云草的鉴别中具有良好的特异性、重复性及灵敏性,甚至可从低至1 mg的样品中提取DNA得到有效检出。结论:基于DNA条形码鉴定序列变异位点信息,运用高特异Taq Man探针实时荧光PCR检测技术,可实现翠云草真伪快速鉴别,具有中药材市场监管应用前景,将为中药材快速鉴定应用研究提供参考。 展开更多
关键词 翠云草 DNA条形码 TAQMAN探针 荧光定量PCR 快速鉴定
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茯苓β-tubulin基因实时荧光定量PCR体系的建立和评估 预览
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作者 吴亚运 赵小龙 +2 位作者 陈平 张绍鹏 《武汉轻工大学学报》 2016年第3期49-55,共7页
旨在以不同生长时期茯苓为材料,β-tubulin基因为内参基因,建立实时荧光定量PCR体系。根据Gen Bank上同为真菌的黄曲霉菌β-tubulin基因保守区域设计内参引物,以茯苓菌丝体、初期菌核和成熟期菌核c DNA为模版,检测内参引物的特异性和稳... 旨在以不同生长时期茯苓为材料,β-tubulin基因为内参基因,建立实时荧光定量PCR体系。根据Gen Bank上同为真菌的黄曲霉菌β-tubulin基因保守区域设计内参引物,以茯苓菌丝体、初期菌核和成熟期菌核c DNA为模版,检测内参引物的特异性和稳定性;并对PCR反应体系中的引物浓度和模板浓度进行优化;最后利用茯苓转录组数据中6个显著差异表达基因对优化后的反应体系进行表达分析与验证。结果显示,综合扩增曲线和溶解曲线分析,在茯苓不同生长发育时期,β-tubulin基因表达水平基本恒定;对比内参引物在不同浓度条件下的扩增效率,得到模板和引物的最优浓度分别为80 ng/μL和1μmol/L。在优化后的反应体系中,6个差异表达基因的表达变化趋势与转录组测序结果基本一致,得到的线性相关系数r值均大于0.9,呈显著性正相关。成功地建立了以β-tubulin基因为内参基因的茯苓实时荧光定量PCR体系。 展开更多
关键词 茯苓 Β-TUBULIN 实时荧光定量PCR SYBRGreen I 转录组
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珍稀药用植物珠子参的转录组测序及分析 被引量:13
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作者 张绍鹏 金健 +6 位作者 吴亚运 闫祺 曾万勇 郑用琏 张西峰 陈平 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2084-2089,共6页
药用植物珠子参的根茎在中国西南区域已有上千年的药用历史,三萜皂苷为珠子参最主要的活性成分。为了探索珠子参根茎中皂苷物质生物合成的分子基础,该文采用Illumina Hi Seq 2000高通量测序获得珠子参根茎的转录组数据;使用Trinity和TG... 药用植物珠子参的根茎在中国西南区域已有上千年的药用历史,三萜皂苷为珠子参最主要的活性成分。为了探索珠子参根茎中皂苷物质生物合成的分子基础,该文采用Illumina Hi Seq 2000高通量测序获得珠子参根茎的转录组数据;使用Trinity和TGICL软件实现Unigene的de novo拼接;基于BLAST完成Unigene的蛋白功能注释、KOG功能注释、GO分类和KEGG代谢通路分析。最终获得了短读序15.6 Gb,通过de novo拼接注释得到Unigene 62 240个。研究发现,珠子参根茎部表达的19个Unigene与三萜碳环骨架合成相关;69个Unigene与介导三萜碳环骨架的氧化和羟基化等修饰的CYP450相关,18个Unigene与负责三萜碳环骨架的糖基化的糖基化转移酶相关。该研究发现的三萜皂苷合成相关候选基因对于阐明珠子参三萜皂苷合成方式研究提供了重要的基础。 展开更多
关键词 珠子参 转录组 三萜皂苷
严把"四关"夯基础 重在引导谋发展--江西省财政厅挂钩上饶县郑坊乡扶 … 预览
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作者 晓莲 《地方政府管理》 2000年第5期 27-28,共2页
关键词 江西 财政厅 扶贫工作 基础设施环境 思想教育
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