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可视化多重荧光LAMP鉴别诊断牛轮状病毒和产肠毒素性大肠杆菌的研究
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作者 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1119-1127,共9页
本研究旨在建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和产肠毒大肠杆菌(ETEC)的多重荧光LAMP检测方法。根据GenBank中BRV和ETEC的基因保守区域设计3套LAMP引物,在每条内引物FIP的5’端标记荧光基团,在同一体系中进行多重LAMP扩增,对各反应条件... 本研究旨在建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和产肠毒大肠杆菌(ETEC)的多重荧光LAMP检测方法。根据GenBank中BRV和ETEC的基因保守区域设计3套LAMP引物,在每条内引物FIP的5’端标记荧光基团,在同一体系中进行多重LAMP扩增,对各反应条件进行优化,应用该方法对采集自广西各地牛场的56份样品进行检测。结果显示,该方法能特异地鉴别牛轮状病毒和产肠毒大肠杆菌,并与其他对照病原不发生交叉反应;每个反应的检测灵敏度均为100拷贝。对56份腹泻样品的检测结果显示,BRV的感染率为14.3%,ETEC的感染率为57.1%,2种病原的混合感染率为8.9%;与荧光PCR和常规PCR检测方法相比,此多重LAMP方法敏感性为100%,符合率为100%。建立的方法可快速、准确地检测2种犊牛腹泻病原体,为病原学诊断和分子流行病学调查提供了有效技术支持。 展开更多
关键词 轮状病毒 产肠毒大肠杆菌 多重LAMP 检测
鸡胚成纤维细胞cDNA文库构建及其与禽呼肠孤病毒σA相互作用宿主蛋白的筛选 预览
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作者 叶丽娜 谢芝勋 +8 位作者 谢丽基 王盛 邓显文 谢志勤 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 罗思思 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1362-1368,共7页
【目的】构建鸡胚成纤维细胞(CEF)的cDNA文库并筛选与禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白相互作用的宿主蛋白,为揭示互作蛋白对ARV复制及凋亡的分子调控机制打下基础。【方法】采用TRIzol法提取CEF细胞总RNA,以SMART技术和LD-PCR合成双链cDNA(ds ... 【目的】构建鸡胚成纤维细胞(CEF)的cDNA文库并筛选与禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白相互作用的宿主蛋白,为揭示互作蛋白对ARV复制及凋亡的分子调控机制打下基础。【方法】采用TRIzol法提取CEF细胞总RNA,以SMART技术和LD-PCR合成双链cDNA(ds cDNA),ds cDNA和pGADT7-Rec共转化Y187酵母感受态细胞,构建cDNA文库;将pGBKT7-σA诱饵质粒转至Y2HGold酵母感受态细胞中,并与构建的cDNA文库进行酵母双杂交筛选,筛选出的候选文库菌经质粒提取后与pGBKT7-σA诱饵质粒再共转化Y2HGold酵母菌,筛选出能在SD-/Trp/-Leu/-Ade/-His/X-α-Gal/Aba固体培养基上生长且明显变蓝的菌落,最后提取蓝色酵母菌质粒进行测序分析。【结果】构建的CEF细胞cDNA文库库容为1.6×10^6CFU,文库滴度为3.1×10^8 CFU/mL,插入片段大小集中在300~2000bp,重组率为91.67%。以含有pGBKT7-σA的Y2HGold酵母菌与cDNA文库酵母菌进行双杂交,阳性克隆能在SD-/Trp/-Leu/-Ade/-His/X-α-Gal/Aba(SD/-4/X/A)固体培养基上长出菌落且明显变蓝,测序结果显示共筛选出4个能与σA蛋白相互作用的宿主蛋白,分别是初期多肽相关复合体α亚基(NACA)、核苷二磷酸激酶2(NME2)、假定蛋白及线粒体核糖体蛋白S9(MRPS9)。【结论】通过SMART技术构建的CEF细胞cDNA文库具有较好的库容和滴度,且从cDNA文库中筛选出4种与ARV σA蛋白相互作用的宿主蛋白,为后续研究互作蛋白对ARV复制及凋亡的分子调控机制提供了可靠数据。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σA蛋白 CDNA文库 互作蛋白 酵母双杂交
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禽呼肠孤病毒σA蛋白在HEK293T细胞中的表达
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作者 任红玉 谢芝勋 +9 位作者 谢丽基 王盛 黄娇玲 罗思思 张艳芳 曾婷婷 张明秀 谢志勤 邓显文 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第14期59-62,共4页
为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARVS2基因序列(登录号为KF741763.1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA... 为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARVS2基因序列(登录号为KF741763.1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA基因的特异性序列,并将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组pMD18-T-σA表达质粒,再用限制性内切酶KpnⅠ和NotⅠ同时双酶切pMD18-T-σA和真核表达质粒pEF1α-HA,将胶回收的σA基因和pEF1α-HA进行连接,构建真核表达质粒pEF1α-HA-σA。真核表达质粒经菌落PCR、双酶切和测序验证正确后,将其转染HEK293T细胞,于24h后收取蛋白质,通过WesteRn-blot验证目的蛋白。结果表明:本试验成功克隆了ARVσA基因,构建了其真核表达质粒pEF1α-HA-σA,并在HEK293T细胞中表达。说明该蛋白可以在HEK293T细胞中准确表达。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σA基因 克隆 σA蛋白 真核表达质粒
联合移植的脂肪间充质干细胞对胰岛移植物功能及生存的影响
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作者 焦自钊 薛武军 +4 位作者 安茂竹 李杨 李凤楼 张作华 《中华器官移植杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期428-433,共6页
目的探讨联合移植的脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,AMSCs)对胰岛移植物功能及生存的影响.方法分离纯化人的AMSCs和胰岛,移植于雄性Balb/c糖尿病裸鼠背部皮下,设联合AMSCs胰岛移植组、单纯胰岛移植组、PBS对照组及正... 目的探讨联合移植的脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,AMSCs)对胰岛移植物功能及生存的影响.方法分离纯化人的AMSCs和胰岛,移植于雄性Balb/c糖尿病裸鼠背部皮下,设联合AMSCs胰岛移植组、单纯胰岛移植组、PBS对照组及正常对照组4组.免疫组化双染观察胰岛细胞活性、凋亡状况及胰岛移植物血管化程度,并比较各组糖尿病裸鼠血糖、胰岛素水平及胰岛移植物存活时间.结果多元分析糖尿病裸鼠血糖、血清胰岛素水平,联合AMSCs胰岛移植组优于单纯胰岛移植组(P<0.01);联合AMSCs胰岛移植组胰岛移植物于移植术后平均存活时间(mean survival time,MST)为(81.33±7.58)d,经Log-rank检验长于单纯胰岛移植组的(58.17±6.91)d(P<0.05).胰岛移植后第7天,免疫组化双染,联合AMSCs胰岛移植组胰岛移植物的胰岛素染色强度高于单纯胰岛移植组,自杀相关因子(factor associated suicide,Fas)的表达密度则低于单纯胰岛移植组;血管计数显示联合AMSCs胰岛移植组胰岛移植物及周围微血管密度(microvascu-lar density,M VD)为21.8±5.6,显著高于单纯胰岛移植组的14.6±4.1(P<0.05).结论联合移植的AMSCs具有改善胰岛移植物功能、延长移植物存活时间及促进移植物血管再生的作用. 展开更多
关键词 胰岛移植 脂肪间充质干细胞 糖尿病
禽呼肠孤病毒σA基因对鸡胚成纤维细胞天然免疫相关基因转录水平的调控影响
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作者 黄莉 谢芝勋 +9 位作者 谢丽基 王盛 黄娇玲 罗思思 张艳芳 曾婷婷 张民秀 邓显文 谢志勤 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期611-618,共8页
为了明确禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σA基因对宿主天然免疫应答的影响,本研究利用实时荧光定量PCR方法检测pCAGEN-σA转染鸡胚成纤维细胞(DF1)后,不同时间点(转染后第3、6、12、24和36小时)DF1细胞中天然免疫相关基因,包括Toll... 为了明确禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σA基因对宿主天然免疫应答的影响,本研究利用实时荧光定量PCR方法检测pCAGEN-σA转染鸡胚成纤维细胞(DF1)后,不同时间点(转染后第3、6、12、24和36小时)DF1细胞中天然免疫相关基因,包括Toll样受体(TLRs)、MDA5、MAVS、My D88、TRIF、IRF-3、IRF7、NF-κB、IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-8、IFITM3、Mx1和OASL等基因的转录水平变化。结果,与空载体转染细胞相比,pCAGEN-σA转染细胞中上述这些天然免疫基因的m RNA水平出现不同程度变化(P<0.05或P<0.01)。TLR3应对最快速,其m RNA水平在转染后第3小时和第6小时迅速上升,但9 h后逐渐下降;MDA5和TLR7的m RNA水平,则分别在转染后第6小时和第12小时开始显著升高,并分别在转染后第12小时和第36小时达到峰值(P<0.05或P<0.01);TLR15的m RNA水平整体变化不明显。My D88和MAVS的m RNA水平呈表达上调趋势;TRIF在转染后第6小时表达量迅速达到峰值(2.83倍),随后急速下降。NF-κB呈表达上调趋势;而IRF3/7的表达则被抑制。I型干扰素(IFN-α和IFN-β)呈现相似的表达模式,在转染后第6小时和第24小时表达量增加,其他时间点均为表达量下降;IL-6和IL-8则表达上调,分别在转染后第9小时和第6小时达到峰值(P<0.01)。IFITM3、Mx1、OASL的m RNA水平也显著升高,均在转染后第12小时达到峰值(P<0.01)。上述试验结果表明,在DF-1细胞中过表达σA基因,能显著引起天然免疫相关基因的表达的变化,为进一步阐释ARV的分子致病机制和免疫应答机理奠定了基础。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σA基因 天然免疫相关基因 鸡胚成纤维细胞
H10亚型和N8亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立 预览
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作者 罗思思 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 邓显文 黄娇玲 张艳芳 王盛 曾婷婷 张民秀 《中国兽药杂志》 2019年第4期1-5,共5页
根据基因库中H10亚型禽流感病毒(AIV)HA基因、N8亚型AIVNA基因和所有亚型AIVM基因序列,分别设计筛选出3对特异性引物,优化引物之间的浓度,建立了H10亚型和N8亚型AIV三重RT-PCR检测方法。该法对含有H10和N8亚型AIV的模板可特异性扩增出26... 根据基因库中H10亚型禽流感病毒(AIV)HA基因、N8亚型AIVNA基因和所有亚型AIVM基因序列,分别设计筛选出3对特异性引物,优化引物之间的浓度,建立了H10亚型和N8亚型AIV三重RT-PCR检测方法。该法对含有H10和N8亚型AIV的模板可特异性扩增出267bp(H10亚型AIV)、464bp(N8亚型AIV)和693bp(AIV)目的条带,对H10亚型AIV扩增出267、693bp目的条带,对N8亚型AIV扩增出464、693bp目的条带,对其他亚型AIV仅扩增出693bp目的条带,对常见禽病病原体均未扩增出任何条带。该法对H10亚型和N8亚型AIV检测下限为103拷贝/μL。120份临床样品检测结果与病毒分离鉴定一致。研究建立的H10亚型和N8亚型AIV三重RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高,为同时快速鉴别检测H10亚型和N8亚型AIV提供一种简便、快速和有效的方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H10亚型 N8亚型 三重RT-PCR
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牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立 预览
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作者 谢志勤 +11 位作者 谢芝勋 张民秀 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 李孟 李丹 刘加波 《中国动物检疫》 CAS 2019年第1期70-75,共6页
为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvrC基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程... 为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvrC基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法。该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170bp。特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响。综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 二重二温式PCR 牛支原体 牛病毒性腹泻病毒 检测
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牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立 预览
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作者 谢志勤 谢芝勋 +10 位作者 张民秀 罗思思 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 王盛 谢丽基 邓显文 刘加波 庞耀珊 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期20-25,共6页
为建立基于TaqMan探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的TaqMan探针,1对BVDV的特... 为建立基于TaqMan探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的TaqMan探针,1对BVDV的特异性引物和1条ROX标记的TaqMan探针,建立双重荧光定量PCR检测IBRV和BVDV的方法。对建立的检测方法进行特异性和敏感性测定,并用临床样品进行检测验证。特异性试验结果显示,该方法检测参试的IBRV毒株,在波长530μm(FAM)时收集到特异性荧光信号曲线,检测参试的BVDV毒株,在610μm(ROX)时收集到特异性荧光信号曲线,无交叉信号出现,对照的毒株无论是在530μm(FAM),还是610μm(ROX)处,均无荧光信号曲线出现,方法的特异性好;敏感性试验结果显示,该双重荧光定量PCR可检测到100个拷贝的IBRV和BVDV质粒DNA模板;临床样品检测结果表明,对保存在-70℃的127份牛病料样品核酸进行检测,IBRV阳性12份,BVDV阳性26份,IBRV和BVDV同为阳性2份,为混合感染,检测的拷贝数分别为6.24×105和6.32×104拷贝/μL。阳性样品经序列比对分析,分别与IBRV和BVDV的序列100%同源。建立的双重实时荧光定量PCR方法检测IBRV和BVDV具有特异、敏感等优点,可用于临床样品的鉴别检测。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 双重荧光定量PCR TAQMAN探针 检测
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鸡细小病毒和鸡新城疫病毒双重PCR检测方法的建立 预览
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作者 奉彬 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 王盛 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期1-5,共5页
旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PC... 旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法。结果表明,建立的双重PCR同时扩增出687 bp ChPV和453 bp NDV片段,对ChPV与NDV的敏感性分别达到64 fg和25 fg,但对其他对照组病原体均无扩增,对ChPV与NDV混合感染的临床病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果相符。说明建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法可用于临床上两种病毒混合感染的快速诊断。 展开更多
关键词 鸡细小病毒 鸡新城疫病毒 双重PCR 特异性 敏感性
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甘草锌颗粒联合氯雷他定片治疗慢性荨麻疹疗效观察 预览 被引量:2
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作者 贺燕妮 +4 位作者 杜凌波 朱瑞政 庞艳花 张彤 汪五清 《现代中西医结合杂志》 CAS 2018年第3期273-275,共3页
目的探讨甘草锌颗粒联合氯雷他定片治疗慢性荨麻疹的疗效.方法将慢性荨麻疹患者76例随机分为对照组与观察组,每组各38例,对照组采用氯雷他定片治疗,观察组在对照组治疗基础上给予甘草锌颗粒治疗,比较2组治疗8周及停药3个月后的疗效,治... 目的探讨甘草锌颗粒联合氯雷他定片治疗慢性荨麻疹的疗效.方法将慢性荨麻疹患者76例随机分为对照组与观察组,每组各38例,对照组采用氯雷他定片治疗,观察组在对照组治疗基础上给予甘草锌颗粒治疗,比较2组治疗8周及停药3个月后的疗效,治疗前及治疗8周、停药3个月后血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-10水平.结果观察组治疗8周及停药3个月后总有效率、IFN-γ、IL-2水平均显著高于对照组(P均〈0.05),IL-4、IL-10水平均显著低于同期对照组(P均〈0.05).结论甘草锌颗粒联合氯雷他定片治疗慢性荨麻疹可更好地纠正Th1/Th2细胞失衡状态,疗效显著. 展开更多
关键词 中药甘草锌颗粒 氯雷他定片 慢性荨麻疹 TH1/TH2细胞
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IBRV与MB二温式多重PCR检测方法的建立 预览
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作者 熊文婕 谢芝勋 +3 位作者 谢志勤 谢丽基 黄莉 《中国奶牛》 2018年第12期1-3,共3页
本研究根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)的保守基因设计了两对特异引物,建立了可同时检测IBRV和MB的二温式多重PCR检测方法。结果表明,IBRV和MB的扩增长度分别为727bp和412bp,而其他对照病毒的检测结果均为阴性;该方法的I... 本研究根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)的保守基因设计了两对特异引物,建立了可同时检测IBRV和MB的二温式多重PCR检测方法。结果表明,IBRV和MB的扩增长度分别为727bp和412bp,而其他对照病毒的检测结果均为阴性;该方法的IBRV和MB标准品最低检测限均为104拷贝。 展开更多
关键词 二温式多重PCR 牛传染性鼻气管炎病毒 牛支原体 检测
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二重荧光RT-LAMP方法鉴别检测口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒 预览
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作者 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期996-1004,共9页
口蹄疫和水泡性口炎是牛常见高度急性病毒传染病,在全球范围内广泛存在。本研究旨在建立一种可同时鉴别口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据口蹄疫病毒(FMDV)3D基因和水泡性口炎病毒(VSV)N基因的保守序列,... 口蹄疫和水泡性口炎是牛常见高度急性病毒传染病,在全球范围内广泛存在。本研究旨在建立一种可同时鉴别口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据口蹄疫病毒(FMDV)3D基因和水泡性口炎病毒(VSV)N基因的保守序列,设计了2套特异性引物,在每条内引物的5′端标记荧光基团,通过扩增产物颜色判断检测结果。优化反应条件,建立了可同时检测口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒的二重荧光RT-LAMP方法。结果显示,该方法灵敏性高,每个反应最低能够检测到100个拷贝混合模板;特异性好,能在同一个反应管里检测到两种病毒,对其他牛病原体无扩增;干扰性小,扩增效率不受模板浓度影响。本研究建立的口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒二重荧光RT-LAMP方法具有简便、快速、特异、敏感等优点,可用于FMDV和VSV的临床检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 水泡性口炎病毒 二重荧光RT-LAMP 检测
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牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒三重二温式PCR检测方法的建立及应用 预览 被引量:3
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作者 谢芝勋 +10 位作者 谢志勤 谢丽基 黄莉 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 庞耀珊 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期43-48,共6页
为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5’端非编码区(5TUTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物... 为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5’端非编码区(5TUTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将三温式PCR扩增程序简化为两个温度梯度,优化反应条件建立了用于同时检测MB、BVDV以及IBRV3种常见牛呼吸道传染病病原的三重二温式PCR。结果显示,该方法特异性好,只对MB、BVDV和IBRV模板进行扩增,扩增的目的片段长度分别为412、170、727bp,对其他牛病原体无特异性扩增;灵敏度高,最低能同时检测到10000拷贝的目的核酸;干扰性小,能同时检测3个不同浓度的模板。研究所建立的MB、BVDV和IBRV三重二温式PCR检测方法,具有特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有很高的临床应用价值。 展开更多
关键词 三重二温式PCR 牛支原体 牛病毒性腹泻病毒 传染性鼻气管炎病毒 检测
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2016—2017年广西4种野生鸟类新城疫病原学检测与遗传进化分析 预览 被引量:1
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作者 谢丽基 谢芝勋 +8 位作者 罗思思 邓显文 谢志勤 王盛 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 张民秀 《中国动物检疫》 CAS 2018年第5期21-24,50共5页
为研究广西野生鸟类中的新城疫病毒(NDV)感染状况,从4种临床健康鸟类中,采集口咽/泄殖腔棉拭子650份,通过病毒分离、RT-PCR和F基因序列测定,进行NDV感染状况调查和分子特征分析。结果显示:共分离到10株NDV,分离率为1.54%;10株分离株F基... 为研究广西野生鸟类中的新城疫病毒(NDV)感染状况,从4种临床健康鸟类中,采集口咽/泄殖腔棉拭子650份,通过病毒分离、RT-PCR和F基因序列测定,进行NDV感染状况调查和分子特征分析。结果显示:共分离到10株NDV,分离率为1.54%;10株分离株F基因的氨基酸裂解位点基序均为112R-R-Q-K-R-F117,符合NDV强毒株的典型特征;分离的10株毒株中,5株来源于斑鸠,3株来源于鸽子,2株来源于鹧鸪,8株为II类NDV基因VI型,2株为XII型。结果表明,我国野鸟中流行的NDV以II类基因VI型强毒株为主,但已出现了新基因型(基因XII型)。因此,应加大对野鸟NDV监测的力度,防止其将病毒传染给家禽,同时应开展当前疫苗对NDVXII型的免疫效果评估。 展开更多
关键词 新城疫病毒 野生鸟类 病原学检测 遗传进化分析
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基于UL2基因B片段序列建立鸭瘟强毒检测方法的可行性分析
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作者 谢丽基 黄莉 +8 位作者 谢芝勋 王盛 黄娇玲 张艳芳 罗思思 谢志勤 邓显文 钟传德 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期272-275,共4页
摘耍:通过比较10株鸭瘟强毒与11株鸭瘟弱毒的UL2基因序列(包括GenBank中所有登录的鸭瘟病毒UL2基因序列),发现鸭瘟弱毒的UL2基因均缺失了528bp的B片段。基于UL2基因B片段序列设计引物,建立了理论上能特异检测鸭瘟强毒的荧光定量PC... 摘耍:通过比较10株鸭瘟强毒与11株鸭瘟弱毒的UL2基因序列(包括GenBank中所有登录的鸭瘟病毒UL2基因序列),发现鸭瘟弱毒的UL2基因均缺失了528bp的B片段。基于UL2基因B片段序列设计引物,建立了理论上能特异检测鸭瘟强毒的荧光定量PCR和常规PCR检测方法(即对鸭瘟强毒的检测为阳性,对鸭瘟弱毒的检测为阴性),并对PCR产物进行了克隆和测序分析。结果显示,2种检测方法除了对鸭瘟强毒的检测为阳性外,对5株鸭瘟弱毒的检测也均为阳性,PCR产物的测序分析也说明扩增产物为UL2基因的B片段。结果表明,不能通过在UL2基因的B片段设计引物,来建立特异检测鸭疸强毒的检测方法。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 强毒IB片段 UL2基圆
Vero细胞中禽呼肠孤病毒的增殖特性研究
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作者 沈文康 谢芝勋 +10 位作者 王盛 黄莉 谢丽基 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 张民秀 罗思思 谢志勤 邓显文 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第1期141-143,254共4页
为了研究绿猴肾(Vero)细胞中禽呼肠孤病毒(ARV)的增殖特性,试验采用了光学显微镜观察、半数组织感染量(TCID50)测定、RT-PCR检测等方法对细胞培养物进行了研究。结果表明:ARV S1133毒株在Vero细胞中能有效增殖,并出现细胞破碎、... 为了研究绿猴肾(Vero)细胞中禽呼肠孤病毒(ARV)的增殖特性,试验采用了光学显微镜观察、半数组织感染量(TCID50)测定、RT-PCR检测等方法对细胞培养物进行了研究。结果表明:ARV S1133毒株在Vero细胞中能有效增殖,并出现细胞破碎、萎缩、抱团、脱落、边缘模糊、胞体变大,甚至死亡等典型的细胞病变(CPE);RT-PCR检测成功扩增出一条大小为1 248 bp的条带;ARV在感染Vero细胞后会经历三个时期,即潜伏期、快速增长期、稳定期,并在稳定期病毒效价达到峰值,TCID50为1×10-8.46/0.1 m L。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒(ARV) 绿猴肾(Vero)细胞 细胞病变(CPE) 半数组织感染量(TCID50) 反转录 增殖特性
电网基建工程项目可研经济性评价方法研究 预览
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作者 厉理 孙秋洁 +1 位作者 张青云 《价值工程》 2018年第27期68-70,共3页
电网工程项目的可研经济性评价是近年来国网公司推行项目预算闭环管理的重要一环。本文以220k V输变电工程基建项目为例,从成本经济性、技术经济性、财务经济性三个维度出发,建立了三级综合评价指标体系。在此基础上,构建其可研经济性... 电网工程项目的可研经济性评价是近年来国网公司推行项目预算闭环管理的重要一环。本文以220k V输变电工程基建项目为例,从成本经济性、技术经济性、财务经济性三个维度出发,建立了三级综合评价指标体系。在此基础上,构建其可研经济性评价模型,确定各项指标的权重和评分标准,对每个项目形成评价分数。根据得分情况对项目经济效益进行排序,评价其可研经济性,使项目评审有据可依,从而提高了项目可研评审效率,增强了投资精准度,优化了项目投资效益,进一步前移财务管控关口。 展开更多
关键词 主成分分析 因子分析 电网基建工程项目 可研经济性评价
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H6N1亚型禽流感病毒GeXP检测方法的建立 被引量:1
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作者 罗思思 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 邓显文 黄娇玲 张艳芳 王盛 曾婷婷 张民秀 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第11期101-105,共5页
根据基因库中H6亚型禽流感病毒(AIV) HA基因、N1亚型AIV NA基因和所有亚型AIV M基因序列,分别设计筛选出3对特异性引物,优化反应条件,建立了H6N1亚型AIV GeXP检测方法。该法对H6亚型AIV的检测出现194 bp (H6)、164 bp (AIV通用检测... 根据基因库中H6亚型禽流感病毒(AIV) HA基因、N1亚型AIV NA基因和所有亚型AIV M基因序列,分别设计筛选出3对特异性引物,优化反应条件,建立了H6N1亚型AIV GeXP检测方法。该法对H6亚型AIV的检测出现194 bp (H6)、164 bp (AIV通用检测) 2个目的峰,对N1亚型AIV的检测出现249 bp (N1)、164 bp 2个目的峰,对H6N1亚型AIV的检测出现194 bp、249 bp和164 bp 3个目的峰,对其他亚型AIV的检测只出现164 bp通用检测目的峰,对常见禽病病原体均未出现任何检测峰;该法对H6亚型和N1亚型AIV检测下限为102拷贝/μL。本研究建立的H6亚型和N1亚型AIV高通量GeXP检测方法特异性强、灵敏度高,可同时快速鉴别检测H6亚型、N1亚型和所有亚型AIV,为H6N1亚型AIV的检测提供了一种简便、快速和有效的方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H6N1亚型 GeXP检测方法
禽呼肠病毒在鸡胚成纤维细胞系中的增殖规律 预览
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作者 沈文康 谢芝勋 +10 位作者 王盛 黄莉 谢丽基 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 张民秀 罗思思 谢志勤 邓显文 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期30-33,共4页
为研究禽呼肠病毒(ARV)在鸡胚成纤维细胞(DF1)上的增殖规律,将ARV S1133株接种至DF1细胞,连续传代3次后观察细胞病变(CPE),RT-PCR检测病毒核酸。结果显示,ARV S1133株对DF1细胞有很好的亲嗜性,并出现典型的CPE。按照Reed-Meunch方法测量... 为研究禽呼肠病毒(ARV)在鸡胚成纤维细胞(DF1)上的增殖规律,将ARV S1133株接种至DF1细胞,连续传代3次后观察细胞病变(CPE),RT-PCR检测病毒核酸。结果显示,ARV S1133株对DF1细胞有很好的亲嗜性,并出现典型的CPE。按照Reed-Meunch方法测量7个时间点的TCID 50,并绘制生长曲线。结果显示,ARV感染DF1细胞后的0 h~12 h为静止期,12 h~48 h为快速增长期,并在48 h达到最大的病毒效价,TCID 50为10-8.9/0.1 mL,为进一步研究ARV的致病机理,以及在DF1上研制禽呼肠病毒细胞灭活苗提供参考。 展开更多
关键词 禽呼肠病毒 鸡胚成纤维细胞 病毒效价 一步生长曲线
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2017年广西地区活禽市场新城疫病原学监测与遗传进化分析 预览
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作者 谢丽基 谢芝勋 +9 位作者 罗思思 邓显文 谢志勤 王盛 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 黄莉 张民秀 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期747-750,共4页
为研究新城疫病毒(NDV)在广西活禽市场的感染情况,本研究随机从广西地区10个活禽市场采集家禽口咽、泄殖腔拭子共1352份,通过病毒分离、RT-PCR和序列测定,对广西NDV的感染情况和其F基因分子特征进行了分析。结果显示,2017年共分离到17... 为研究新城疫病毒(NDV)在广西活禽市场的感染情况,本研究随机从广西地区10个活禽市场采集家禽口咽、泄殖腔拭子共1352份,通过病毒分离、RT-PCR和序列测定,对广西NDV的感染情况和其F基因分子特征进行了分析。结果显示,2017年共分离到17株NDV (分离率为1.26%),其中,11株分离自鸭,6株分离自鸡,鹅和鸽子未分离到该病毒;17个NDV分离株的蛋白裂解位点氨基酸组成为^(112)G/E-K/R-Q-G/E-R-L^(117),符合NDV弱毒株的典型特征;遗传进化分析显示所分离的17株病毒,10株为Ⅰ类NDV基因3型,7株为Ⅱ类NDV基因I型。本研究为科学防控广西地区新城疫提供了参考数据。 展开更多
关键词 新城疫病毒 监测 遗传进化分析
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