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慢病毒介导HIF-1α 沉默对缺氧肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响
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作者 李国平 刘丽璇 +3 位作者 胡敏敏 黄聪武 吴灵飞 《武汉大学学报:医学版》 CAS 2019年第1期27-32,104共7页
目的:构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的HIF-1α基因沉默对体外模拟缺氧条件下的肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法:设计合成1条针对HIF-1α基因的shRNA干扰序列,构建于慢病... 目的:构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的HIF-1α基因沉默对体外模拟缺氧条件下的肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法:设计合成1条针对HIF-1α基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒GV248中,转染293T细胞包装产生慢病毒,转染人肝癌细胞株HepG2细胞,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。将HepG2细胞分为正常对照组、干扰对照组(转染NC-shRNA)、干扰组(转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/LCoCl2)模拟肿瘤细胞缺氧微环境,应用WesternBlot检测HepG2细胞中HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,CCK-8检测沉默HIF-1α基因对HepG2细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测沉默HIF-1α基因对细胞凋亡的影响。WesternBlot检测HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleavedcaspase-3、Cleavedcaspase-9和细胞质细胞色素C(Cyt-C)表达的变化。结果:①成功构建HIF1α-shRNA慢病毒载体并转染HepG2细胞,缺氧培养细胞24h后,与正常对照组及干扰对照组相比,干扰组细胞内HIF-1α蛋白表达明显降低(P<0.01),证实慢病毒载体能够有效沉默HIF-1α基因。②沉默HIF-1α基因后缺氧培养的HepG2细胞增殖率下降(P<0.05),而细胞凋亡比例升高(P<0.01)。③WesternBlot结果显示,与正常对照组及干扰对照组相比,沉默HIF-1α基因后细胞内凋亡相关蛋白Bax、Cleavedcaspase-3、Cleavedcaspase-9和细胞质Cyt-C表达上调(P<0.05或P<0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P<0.01),Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高。结论:通过shRNA慢病毒载体途径可有效沉默缺氧HepG2肝癌细胞HIF-1α基因,HIF-1α沉默能显著抑制缺氧HepG2细胞增殖活性,促进细胞凋亡,其凋亡途径可能与激活内源性线粒体凋亡通路有关。 展开更多
关键词 慢病毒 SHRNA RNA干扰 HEPG2细胞 HIF-1Α
腺苷对肝癌细胞自噬和增殖的作用 预览
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作者 周小涛 +6 位作者 李国平 詹浩炼 郭益添 项梦琦 刘丽璇 谭辉 吴灵飞 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2018年第4期508-512,共5页
目的研究腺苷对肝癌细胞增殖和自噬的作用。方法腺苷作用于HepG2细胞,CCK-8法观察细胞增殖的变化,Western blot研究LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量。结果腺苷(1.0~4.0 mmol·L-1)作用于HepG2细胞,在12、24、... 目的研究腺苷对肝癌细胞增殖和自噬的作用。方法腺苷作用于HepG2细胞,CCK-8法观察细胞增殖的变化,Western blot研究LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量。结果腺苷(1.0~4.0 mmol·L-1)作用于HepG2细胞,在12、24、48 h可明显抑制细胞增殖(P<0.01)。低浓度腺苷(0.2、0.5、1.0 mmol·L-1)处理细胞24 h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ明显降低,腺苷(1.0 mmol·L-1)对HepG2细胞自噬抑制作用最强(P<0.01),高浓度腺苷(4 mmol·L-1)反而增强HepG2细胞内自噬(P<0.05)。腺苷(1.0 mmol·L-1)作用细胞24 h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值在6、12、24 h检测点明显降低,MDC染色显示自噬体减少,在12 h检测点发现LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ最低(P<0.01),自噬体基本消失。结论腺苷抑制肝癌细胞增殖,低浓度腺苷抑制细胞自噬,高浓度腺苷促进细胞自噬,对提高肝癌药物的治疗效果有重要意义。 展开更多
关键词 腺苷 自噬 多药耐药 肝癌 细胞增殖 肿瘤治疗
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MEG3和腺苷对HepG2细胞自噬和增殖的影响
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作者 李国平 +6 位作者 詹浩炼 周小涛 郭益添 项梦琦 刘丽璇 谭辉 吴灵飞 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期1706-1710,共5页
目的:研究母系表达基因3(MEG3)过表达和腺苷对人肝细胞癌HepG2细胞自噬和增殖的影响,并探讨MEG3和腺苷影响HepG2细胞自噬的可能机制和抑制细胞增殖的效果。方法:常规培养HepG2细胞,分为对照组、MEG3组(MEG3慢病毒转染)、腺苷组(1 mmol/... 目的:研究母系表达基因3(MEG3)过表达和腺苷对人肝细胞癌HepG2细胞自噬和增殖的影响,并探讨MEG3和腺苷影响HepG2细胞自噬的可能机制和抑制细胞增殖的效果。方法:常规培养HepG2细胞,分为对照组、MEG3组(MEG3慢病毒转染)、腺苷组(1 mmol/L腺苷处理)和MEG3+腺苷组(腺苷组中加入MEG3慢病毒转染)。Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)等蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量,CCK-8法观察细胞的活力,细胞计数仪检测活细胞数量。结果:与对照组比较,MEG3组和腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,mTOR表达增加,HepG2细胞的活力降低(P<0.05),自噬体减少。与MEG3组和腺苷组比较,MEG3+腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值进一步降低,mTOR表达进一步增加,HepG2细胞的活力进一步降低,自噬体减少更加显著(P<0.05或P<0.01)。MEG3组和腺苷组中HepG2活细胞数在24~72 h较对照组均明显降低(P<0.01),在MEG3+腺苷组中降低更为明显(P<0.01)。结论:MEG3过表达和低浓度腺苷可激活mTOR通路,抑制HepG2细胞自噬和增殖。MEG3增强了腺苷对HepG2细胞的作用。 展开更多
关键词 母系表达基因3 腺苷 自噬 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 肝细胞癌
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KDM5C基因shRNA重组慢病毒载体的构建及其对肝癌HepG2细胞的增殖和迁移的影响
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作者 胡敏敏 詹浩炼 +4 位作者 刘丽璇 项梦琦 李国平 吴灵飞 《世界华人消化杂志》 CAS 2017年第8期691-701,共11页
目的制备干扰KDM5C基因重组慢病毒载体,观察干扰人KDM5C基因后对肝癌Hep G2细胞增殖、迁移及长链非编码RNA GAS5表达的影响.方法设计3对针对KDM5C基因短发夹型RNA干扰序列(short hairpin RNA,sh RNA)和1对阴性对照序列,退火后连接到p ... 目的制备干扰KDM5C基因重组慢病毒载体,观察干扰人KDM5C基因后对肝癌Hep G2细胞增殖、迁移及长链非编码RNA GAS5表达的影响.方法设计3对针对KDM5C基因短发夹型RNA干扰序列(short hairpin RNA,sh RNA)和1对阴性对照序列,退火后连接到p LKD载体上,经转化PCR阳性克隆筛选及测序鉴定.使用四质粒包装系统共转染293FT细胞包装重组慢病毒,慢病毒包装后用孔稀释法进行滴度测定.将慢病毒感染Hep G2细胞,q RT-PCR和Western blotting检测Hep G2细胞KDM5C的m RNA和蛋白表达.MTT法及细胞划痕实验检测转染Lv-sh KDM5C后细胞增殖及迁移能力,同时观察lnc RNA GAS5 m RNA的表达水平变化.结果P C R扩增和测序结果证明,成功构建L vsh KDM5C慢病毒载体.经包装产生的3组慢病毒载体滴度:Lv-sh KDM5C-1是4.95×10^8TU/m L,Lv-sh KDM5C-2是3.46×10^8 TU/m L,L v-s h K D M5C-3是3.08×10^8 T U/m L.与正常肝细胞相比,肝癌Hep G2细胞KDM5C表达明显增加.与未转染组及阴性对照组相比,3组Lv-sh KDM5C病毒感染Hep G2细胞后KDM5C的m RNA及蛋白表达量均显著下降(P〈0.05);其中Lv-sh KDM5C-3组下降最为明显(P〈0.05),因此选取Lv-sh KDM5C-3进行后续实验.MTT结果显示Lv-sh KDM5C-3转染肝癌Hep G2细胞后48 h和72 h细胞生长增殖均受到抑制(P〈0.05).细胞划痕实验结果显示Lv-sh KDM5C-3中细胞迁移率明显低于阴性对照组(P〈0.05).q RT-PCR结果表明干扰KDM5C后lnc RNA GAS5 m RNA表达显著升高(P〈0.05).结论本研究成功构建了特异性沉默人KDM5C基因的sh RNA慢病毒载体.将其转染肝癌Hep G2后可有效抑制细胞增殖和迁移.我们首次发现干扰KDM5C还可增加长链非编码RNA GAS5的表达. 展开更多
关键词 HEPG2细胞 Lv-shKDM5C GAS5 细胞增殖 细胞迁移
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丹参酮IIA对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α、VEGF和野生型P53蛋白表达的关系 被引量:13
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作者 刘丽璇 吴灵飞 +6 位作者 邓巍 周小涛 陈锐沛 项梦琦 郭益添 李国平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2155-2160,共6页
目的:探讨低氧条件下丹参酮IIA(Tan IIA)对人肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:用氯化钴(Co Cl2)创建低氧模型,实验分为常氧对照组、低氧对照组和低氧+Tan IIA处理组。不同浓度的Tan IIA分别作用于低氧下人肝癌... 目的:探讨低氧条件下丹参酮IIA(Tan IIA)对人肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:用氯化钴(Co Cl2)创建低氧模型,实验分为常氧对照组、低氧对照组和低氧+Tan IIA处理组。不同浓度的Tan IIA分别作用于低氧下人肝癌Hep G2细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT法测定Tan IIA对低氧下Hep G2细胞增殖的抑制作用。不同浓度的Tan IIA分别作用于低氧条件下Hep G2细胞24 h和48 h后,Hoechst 33258染色法检测细胞核的形态学变化并计算凋亡率。不同浓度的Tan IIA作用于低氧条件下人肝癌Hep G2细胞48 h后,Western blotting检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和野生型P53的蛋白表达情况。结果:低氧条件下Tan IIA以时间和剂量依赖方式抑制Hep G2细胞的生长和增殖。Tan IIA作用于低氧下的Hep G2细胞后,可见典型的凋亡细胞形态学特征,细胞凋亡率呈时间、剂量依赖性的增加。Western blotting免疫印迹法显示常氧对照组的HIF-1α和VEGF表达较低,而低氧对照组的HIF-1α、VEGF蛋白表达较常氧组升高,低氧下随着Tan IIA浓度的升高,HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显降低,野生型P53蛋白的表达随着Tan IIA浓度的升高而升高。结论:低氧条件下,Tan IIA能抑制肝癌Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制HIF-1α和VEGF蛋白表达,上调P53蛋白表达有关。 展开更多
关键词 丹参酮IIA 低氧 HEP G2细胞 细胞凋亡
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去甲基化机制在腺苷及同型半胱氨酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用 预览 被引量:4
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作者 项梦琦 刘丽璇 +6 位作者 邓巍 周小涛 陈沛锐 郭益添 叶艳清 吴灵飞 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期973-979,共7页
目的:探索去甲基化机制在腺苷(ADO)及同型半胱氨酸(HCY)诱导肝癌 HepG2细胞凋亡中的作用。方法CCK8法检测不同浓度腺苷(1.0、2.0、4.0 mol·L-1)单独或者联合同型半胱氨酸作用肝癌HepG2细胞不同时间(6、12、24 h)后细胞存... 目的:探索去甲基化机制在腺苷(ADO)及同型半胱氨酸(HCY)诱导肝癌 HepG2细胞凋亡中的作用。方法CCK8法检测不同浓度腺苷(1.0、2.0、4.0 mol·L-1)单独或者联合同型半胱氨酸作用肝癌HepG2细胞不同时间(6、12、24 h)后细胞存活率;亦使用DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR观察其对细胞生长的影响。AnnexinV-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位:实时荧光定量PCR及Western免疫印迹法分别检测caspase-3、caspase-8、caspase-9、MDM-2、p53、Cytochrome C、DNMT1、DN-MT3a、DNMT3b等因子的表达量。结果 ADO联合HCY明显抑制 HepG2细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度ADO联合HCY(1.0、2.0、4.0 mol·L-1)作用HepG2细胞24 h,细胞凋亡率分别为(18.63±1.25)%,(29.42±2.37)%,(42.47±3.09)%,均明显高于阴性对照组(1.30±0.82)%, P<0.01;联合用药组线粒体膜电位明显下降,分别从空白对照组(674.15±82.8)%下降为(428.38±54.5)%、(297.78±30.5)%、(74.45±5.73)%,P<0.01;ADO联合HCY导致caspase-3、caspase-8、caspase-9、p53、Cytochrome C 表达上调,MDM-2表达下调。ADO 联合 HCY 或5-Aza-CdR 处理HepG2细胞均可抑制DNA(甲基化酶DNMT1、DNMT3a、DN-MT3b)mRNA表达量。结论 ADO与HCY联合作用引起了细胞内甲基化改变,低甲基化作用激活了p53及线粒体等凋亡通路,最终导致肝癌HepG2细胞凋亡。 展开更多
关键词 腺苷 同型半胱氨酸 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 甲基化 细胞凋亡 DNA甲基化酶 线粒体膜电位
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细胞内钙稳态失调在腺苷致肝癌 HepG2 细胞凋亡的作用 被引量:1
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作者 张庆华 项梦琦 +4 位作者 郭益添 叶艳清 冯家琳 吴灵飞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期941-947,共7页
目的 探讨腺苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其与Ca2+相关的机制。方法 CCK8法测定腺苷1.0,2.0,4.0和6.0 mmol·L-1分别作用24,36和48 h后对HepG2细胞存活的抑制率。腺苷1.0,2.0和4.0 mmol·L-1作用24 h后,AnnexinⅤ-FITC/P... 目的 探讨腺苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其与Ca2+相关的机制。方法 CCK8法测定腺苷1.0,2.0,4.0和6.0 mmol·L-1分别作用24,36和48 h后对HepG2细胞存活的抑制率。腺苷1.0,2.0和4.0 mmol·L-1作用24 h后,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,双波长荧光分光光度法和激光共聚焦检测细胞内游离Ca2+浓度,流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位,实时荧光定量PCR及Western蛋白质印迹法分别检测m-钙蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3基因和蛋白的表达。结果 腺苷可显著抑制HepG2细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性;随腺苷浓度由1.0,2.0增加到4.0 mmol·L-1,细胞凋亡率分别由(20.30±1.23)%和(28.50±2.32)%增至(38.10±4.09)%,并伴有细胞内游离Ca2+浓度增加1.17±0.02,1.28±0.03和(1.49±0.04)倍,以及线粒体膜电位下降,由703± 53分别降至504±34,315±27和124±10(P〈0.01),同时m-钙蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3 mRNA及蛋白表达水平明显增高(P〈0.05)。结论 腺苷可通过提高细胞游离Ca2+水平,激活钙依赖蛋白,并激活内源性内质网应激胱天蛋白酶4信号转导途径而诱导HepG2细胞凋亡。 展开更多
关键词 腺苷 肝癌 HepG2细胞 细胞凋亡 钙离子 线粒体膜电位
靶向GRP78的miRNA表达载体对人食管癌EC109细胞增殖的抑制作用 被引量:3
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作者 李洪标 郭益添 +3 位作者 黄官友 冯家琳 吴灵飞 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期75-81,共7页
目的:探讨靶向葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78 )基因的miRNA真核表达质粒,对人食管癌EC109细胞增殖的影响。 方法: 设计合成4对针对 GRP78 的特异性miRNA干扰序列和1对阴性对照序列,定向克隆至pcDNATM6.2... 目的:探讨靶向葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78 )基因的miRNA真核表达质粒,对人食管癌EC109细胞增殖的影响。 方法: 设计合成4对针对 GRP78 的特异性miRNA干扰序列和1对阴性对照序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,构建靶向 GRP78 的miRNA重组质粒:pcDNATM6.2-miR78-1、pcDNATM6.2-miR78-2、pcDNATM6.2-miR78-3、pcDNATM6.2-miR78-4,并通过脂质体法转染至HEK293细胞;杀稻瘟菌素筛选2周形成稳定转染细胞系;荧光显微镜检测转染效率。将筛选出的最佳干扰质粒转染至EC109细胞,采用RT-PCR法检测 GRP78 mRNA的表达,CCK8法检测其对EC109细胞增殖的影响。 结果: 测序结果表明成功构建4种靶向 GRP78 的miRNA重组质粒,经转染和筛选,所有转染后HEK293细胞均有GFP的表达;与未转染组及阴性对照组(pcDNATM6.2-Ctrl)相比,4种干扰质粒组HEK293细胞中 GRP78 mRNA的表达均下降(P〈0.05);干扰效率以转染pcDNATM6.2-miR78-1为最高。pcDNATM6.2-miR78-1转染EC109细胞,与未转染组、pcDNATM6.2-Ctrl组相比,EC109细胞中 GRP78 mRNA的表达明显下降/[(0.38±0.02) vs (1.03±004)、(1.00±0.03),均P〈0.05/]。CCK8法检测结果显示,转染 pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒12、24、48、72 h后,EC109细胞的增殖被显著抑制/[(0.028±0.001) vs (0.086±0.010),(0.035±0.003) vs (0.155±0.011),(0.112±0.009) vs (0389±0.008)、(0.169±0.013) vs (0.433±0.009);均P〈0.05/]。 结论: 4对靶向 GRP78 的miRNA表达载体构建成功,其中pcDNATM6.2-miR78-1干扰质粒沉默效果最佳,能有效抑制EC109细胞的增殖。 展开更多
关键词 食管癌 EC109细胞 葡萄糖调节蛋白78(GRP78) MIRNA RNA干扰 HEK293细胞
腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制 被引量:3
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作者 韦碧柳 李国平 +4 位作者 黄官友 冯家琳 叶艳清 吴灵飞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期 532-537,共6页
目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24~72 h或腺苷0.5~4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋... 目的探讨内质网应激途径在腺苷诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用。方法腺苷2 mmol.L-1作用于EC109细胞24~72 h或腺苷0.5~4 mmol.L-1作用于EC109细胞36 h,MTT法观察腺苷对EC109细胞存活率的时效和量效关系;免疫荧光法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3,转录因子CHOP和核因子κB(NF-κB)的表达及亚细胞定位;原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测内质网应激相关蛋白表达。结果腺苷对EC109细胞生长具有明显的抑制作用。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用24,36,48和72 h,细胞存活率分别为(57.7±15.0)%,(56.5±11.1)%,(43.8±5.7)%和(28.8±4.1)%,呈时间依赖性下降(r=0.9192,P〈0.01);腺苷0.5,1,2和4 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,随药物浓度增加,细胞存活率依次为(83.1±11.2)%,(67.9±6.7)%,(55.3±5.0)%和(45.4±5.4)%,呈浓度依赖性降低(r=0.8252,P〈0.01)。腺苷0.5~4mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,细胞凋亡率分别为(15.5±1.1)%,(28.2±0.8)%,(40.1±2.2)%和(50.6±1.3)%,与对照组(2.1±0.3)%相比均明显增加(P〈0.05)。腺苷2 mmol.L-1与EC109细胞作用36 h,与正常对照组相比,GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3和CHOP表达明显增强(P〈0.05,P〈0.01),胱天蛋白酶4,胱天蛋白酶3和CHOP发生核易位。GRP78、胱天蛋白酶4、胱天蛋白酶3、CHOP和NF-κB表达呈浓度依赖性增加(rGRP78=0.9471,r胱天蛋白酶4=0.8977,r胱天蛋白酶3=0.968,rCHOP=0.9762,rNF-κB=0.9471,P〈0.05)。结论腺苷可诱导人食管癌EC109细胞凋亡,其分子机制可能与内质网应激凋亡途径的启动有关。 展开更多
关键词 腺苷 细胞凋亡 内质网 应激 EC109细胞
血必净联合硫酸镁治疗急性胰腺炎疗效比较研究 预览 被引量:6
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作者 李国平 吴灵飞 《吉林医学》 CAS 2010年第35期 6448-6450,共3页
目的:研究血必净联合硫酸镁在急性重症胰腺炎中的治疗效果。方法:对入选的85例急性重症胰腺炎患者分为治疗组(在常规治疗基础上加用血必净联合硫酸镁)及对照组常规治疗。观察治疗后腹痛、腹胀、血淀粉酶、血脂肪酶变化;ELISA法检测... 目的:研究血必净联合硫酸镁在急性重症胰腺炎中的治疗效果。方法:对入选的85例急性重症胰腺炎患者分为治疗组(在常规治疗基础上加用血必净联合硫酸镁)及对照组常规治疗。观察治疗后腹痛、腹胀、血淀粉酶、血脂肪酶变化;ELISA法检测患者血清ICAM-1水平。结果:与对照组比较,治疗组平均腹痛消失时间、淀粉酶及脂肪酶恢复正常时间均明显缩短,血清ICAM-1水平较对照组低,两组间差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:联合运用血必净和硫酸镁可以有效缓解急性重症胰腺炎临床症状,减轻炎性反应,缩短住院时间。 展开更多
关键词 血必净 硫酸镁 急性胰腺炎
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奥沙拉嗪联合蒙脱石散灌肠治疗溃疡性结肠炎疗效观察 被引量:6
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作者 李国平 +1 位作者 吴灵飞 郑宗茂 《河北医学》 CAS 2010年第5期 529-532,共4页
目的:研究奥沙拉嗪联合蒙脱石散灌肠治疗活动期溃疡性结肠炎疗效。方法:将74例活动期左半溃疡性结肠炎患者分成联合灌肠组与对照组,每组均给予2.0g奥沙拉嗪,联合灌肠组灌肠液中加入1.0g蒙脱石散。每2周复查并记录大便性状、血生化检... 目的:研究奥沙拉嗪联合蒙脱石散灌肠治疗活动期溃疡性结肠炎疗效。方法:将74例活动期左半溃疡性结肠炎患者分成联合灌肠组与对照组,每组均给予2.0g奥沙拉嗪,联合灌肠组灌肠液中加入1.0g蒙脱石散。每2周复查并记录大便性状、血生化检查、腹部体征以及症状变化,每4周复查结肠镜及病理组织学检查。结果:治疗8周后联合灌肠组30例显效(81.1%),对照组22例显效(59.5%),两组中未见无效病例。结论:奥沙拉嗪联合蒙脱石散灌肠治疗活动期左半溃疡性结肠炎疗效显著,增加了患者的依从性。 展开更多
关键词 奥沙拉嗪 蒙脱石散 溃疡性结肠炎
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腺苷通过内质网应激途径诱导HepG2细胞凋亡的研究 预览 被引量:7
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作者 叶艳清 李国平 +4 位作者 黄官友 冯家琳 韦碧柳 吴灵飞 《中国药理学通报》 CAS 北大核心 2010年第5期 596-601,共6页
目的探讨腺苷(ADO)诱导人类肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。方法将不同浓度的ADO(0~6mmol·L^-1)作用于HepG2细胞36h,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖效应。将HepG2细胞暴露于不同浓度的ADO(0~4mmol·L^-1)作用36h或2mmol&... 目的探讨腺苷(ADO)诱导人类肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。方法将不同浓度的ADO(0~6mmol·L^-1)作用于HepG2细胞36h,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖效应。将HepG2细胞暴露于不同浓度的ADO(0~4mmol·L^-1)作用36h或2mmol·L^-1ADO作用不同时间(0~48h),观察细胞核的形态学改变;观察2mmol·L^-1ADO处理12h和24h后细胞周期的变化;观察2mmol·L^-1ADO作用前后Caspase-3和CHOP的亚细胞定位的变化;用West-ernblot检测不同浓度ADO作用后HepG2细胞Caspase-3,Caspase-4,CHOP,JNK的蛋白表达变化。结果ADO对HepG2细胞生长有明显的抑制作用,不同浓度ADO(0.5,1,2,4,6mmol·L^-1)处理HepG2细胞36h后,与对照组相比,相对细胞存活数分别下降13.48%±0.12%,27.92%±0.25%,35.21%±0.42%,51.46%±0.24%,71.42%±0.58%,呈现剂量依赖性;不同浓度ADO作用36h或2mmol·L^-1ADO作用不同时间(0~48h)后,随着ADO浓度的增加或作用时间的延长,HepG2细胞核发生典型核固缩、核碎裂、核分解等凋亡形态学改变;2mmol·L^-1ADO作用12h或24h后,细胞周期分析出现亚二倍体峰,提示细胞发生凋亡,对照组、ADD处理12h及24h组细胞凋亡率分别为1.55%±0.12%、10.96%±0.07%和21.04%±0.26%;2mmol·L^-1ADO诱导Caspase-3和CHOP表达增加,并从胞质易位进入胞核内;随着ADO浓度的升高,Caspase-4,Caspase-3,CHOP的表达均升高,均呈现剂量依赖性;而JNK的表达则没有变化。结论腺苷诱导HepG2细胞凋亡与内质网应激途径有关。 展开更多
关键词 腺苷 细胞凋亡 内质网应激 HEPG2细胞 Caspase-3、4 CHOP
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NF—κB、Caspase-3在腺苷诱导人HepG2细胞凋亡中的作用 被引量:1
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作者 吴灵飞 李国平 +2 位作者 苏剑东 冯家琳 《中华肝胆外科杂志》 CAS 北大核心 2009年第2期121-125,共5页
目的研究NF—κB、Caspase-3在腺苷(AD0)体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法将不同浓度的ADO(0.1~5mmol/L)作用于HepG2细胞,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖的时间效应和剂量效应。2.0mmol/LADO单用或联合NF-κB抑制剂... 目的研究NF—κB、Caspase-3在腺苷(AD0)体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法将不同浓度的ADO(0.1~5mmol/L)作用于HepG2细胞,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖的时间效应和剂量效应。2.0mmol/LADO单用或联合NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC,100μmol/L)作用HepG2细胞12h、24h,采用Hoechst33342荧光染色法及流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡及细胞周期,Western blot技术检测NF—κB蛋白表达;荧光比色法测定Caspase-3酶活性。结果ADO对HepG2细胞生长具有显著抑制作用,并呈一定的量效和时效关系。药物作用24h、48h的IC50分别为2.52mmol/L和1.89mmol/L。ADO单独处理HepG2细胞12h和24h或联合PDTC处理后,细胞凋亡率分别为8.30%、22.32%;20.18%、30.89%,均显著高于对照组(0.81%,P〈0.001);ADO作用HepG2细胞后荧光显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变,FCM分析药物处理组显示典型特征性的亚二倍体凋亡峰(sub—G1),细胞生长周期阻滞于G0/G1期;同时伴有Caspase-3活性显著升高(P〈0.05)。ADO处理后显著增加了NF-κB蛋白表达(P〈O.05);PDTC有效抑制了NF-κB表达,同时增加了Caspase-3活性及ADO的细胞毒作用(P〈0.05)。结论ADO诱导了HepG2细胞凋亡并活化Caspase-3。抑制NF-κB活性可通过Caspase-3途径增强AD0的细胞毒作用。 展开更多
关键词 肝细胞 腺苷 细胞凋亡 NF-ΚB CASPASE-3
泛素表达和蛋白酶体活性在胃癌及癌旁组织中的研究 被引量:1
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作者 李国平 +1 位作者 冯家琳 吴灵飞 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2009年第11期共3页
目的研究26S蛋白酶体水解活性及泛素在胃癌、癌旁组织与正常胃黏膜组织中的差异。方法对75例胃癌患者分别在胃癌、癌旁及远端正常黏膜组织取样进行研究。采用免疫印迹方法分析泛素表达,免疫荧光方法分析26S蛋白酶体活性。结果泛素表达及... 目的研究26S蛋白酶体水解活性及泛素在胃癌、癌旁组织与正常胃黏膜组织中的差异。方法对75例胃癌患者分别在胃癌、癌旁及远端正常黏膜组织取样进行研究。采用免疫印迹方法分析泛素表达,免疫荧光方法分析26S蛋白酶体活性。结果泛素表达及26S蛋白酶体活性在胃癌及癌旁组织中增强,均高于正常胃黏膜组织。胃癌中泛素水平(4.24vs3.27)及26S蛋白酶体活性(628.3vs431.8)均高于癌旁组织,差异有统计学意义。结论胃癌中泛素-蛋白酶体系统被异常活化,与胃癌的发生与进展有关。 展开更多
关键词 胃癌 泛素 蛋白酶体
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腺苷体外对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其作用机制 预览 被引量:6
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作者 吴灵飞 苏剑东 +2 位作者 李国平 冯家琳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期 205-211,共7页
目的研究腺苷及其代谢途径对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将腺苷2.0mmol·L^-1作用于HepG2细胞24和48h,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期及凋亡率;观察腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫、腺苷脱氨酶抑制剂红-9-(2... 目的研究腺苷及其代谢途径对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将腺苷2.0mmol·L^-1作用于HepG2细胞24和48h,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期及凋亡率;观察腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫、腺苷脱氨酶抑制剂红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)和腺苷激酶抑制剂5’-氨基5’-脱氧腺苷(AMDA)对腺苷抑制细胞存活的影响,应用MTT法测定细胞存活率;应用Western蛋白印迹法检测P53和Bcl-2蛋白的表达。结果腺苷与HepG2细胞作用24和48h,HepG2细胞出现特征性的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡百分率分别由对照组的(1.2±0.4)%和(4.1±1.6)%增加到(24.3±4.8)%和(38.6±7.4)%,细胞周期阻滞于G0/G1期。腺苷与HepG2细胞作用24h明显抑制细胞存活,P53表达明显增强,Bcl-2表达降低。预先分别给予双嘧达莫,AMDA和AMDA+双嘧达莫处理后,各处理组HepG2细胞存活率较腺苷组升高,细胞凋亡百分率和P53表达降低,Bcl-2表达无明显变化;EHNA预处理组细胞存活率、细胞凋亡百分率、P53和Bcl-2表达与腺苷组比较均无明显变化。结论腺苷可诱导HepG2细胞凋亡,腺苷在胞内可能通过腺苷激酶而不是通过转氨酶的代谢途径参与诱导细胞凋亡的过程。腺苷对HepG2细胞凋亡的诱导作用还可能与其增加P53蛋白表达有关。 展开更多
关键词 腺苷 细胞凋亡 细胞周期 细胞 HepG2
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中西医结合根除幽门螺杆菌对萎缩性胃炎核因子-κB表达的影响
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作者 吴灵飞 +3 位作者 苏剑东 冯家琳 李国平 王炳周 《中国中西医结合消化杂志》 CAS 2008年第6期377-380,共4页
[目的]观察以胃舒散为主的三联疗法(胃舒散、呋喃唑酮和克拉霉素)治疗幽门螺杆菌(Hp)阳性慢性萎缩性胃炎(CAG)的临床效果及其对核因子-κB(NF-κB)表达的影响。[方法]41例Hp阳性CAG患者服用胃舒散2.0g,呋喃唑酮0.1g,各3次/... [目的]观察以胃舒散为主的三联疗法(胃舒散、呋喃唑酮和克拉霉素)治疗幽门螺杆菌(Hp)阳性慢性萎缩性胃炎(CAG)的临床效果及其对核因子-κB(NF-κB)表达的影响。[方法]41例Hp阳性CAG患者服用胃舒散2.0g,呋喃唑酮0.1g,各3次/d,克拉霉素0.25g,2次/d,1周后再继服胃舒散4周。治疗前及治疗结束1年后行内镜及病理组织学检查,取活检观察病理组织学改变及NF-κB表达变化,采用银染色法、^14C-尿素呼气试验或快速尿素酶试验检测Hp。[结果]三联疗法结束1年后,Hp根除率为85.4%;根除Hp能显著减轻患者胃窦部慢性炎症(P〈0.05)和活动程度(P〈0.01),下调NF-κB表达(P〈0.01),但胃炎的萎缩和肠化生等病理无明显改变。[结论]以胃舒散为主的三联疗法对Hp有较高根除率。根除Hp可抑制NF-κB的表达,减轻活动性炎症,但近期观察对萎缩、肠化生等病理改变无明显作用。 展开更多
关键词 胃炎 萎缩性 幽门螺杆菌 核因子-ΚB
氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究 被引量:9
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作者 李国平 吴灵飞 《中国病理生理杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期 105-111,共7页
目的:直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡,本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法:暴露细胞于2mmoL/L过氧化氢产生氧化应激,用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化,Western blottin... 目的:直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡,本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法:暴露细胞于2mmoL/L过氧化氢产生氧化应激,用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化,Western blotting检测细胞浆中细胞色素c变化,fluorometric assay kit检测caspase活性变化。结果:氧化应激作用于HepG2细胞后12h开始发生凋亡;氧化应激作用后4h,细胞线粒体膜电位明显下降;胞浆中细胞色素c浓度呈时间依赖性增高;氧化应激作用8h、12h后细胞内caspase-3、caspase-9活性分别升高6.7及3.6倍,但caspase-8活性无变化。结论:氧化应激能诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡,其途径与线粒体通路及caspase激活有关。 展开更多
关键词 细胞凋亡 HepG2细胞 线粒体 细胞色素C 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 氧化性应激
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胃癌IκBα与核因子κB表达的研究
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作者 张小燕 +2 位作者 冯家琳 李国平 吴灵飞 《汕头大学医学院学报》 2008年第2期 90-92,共3页
目的:研究IκBα&与核因子κB(NF-κB)在胃癌组织中的表达,了解细胞内IκBα&水平的变化对NF-κB活性的影响。方法:62例胃癌患者术后切取胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织,用免疫印迹法对胃癌组织及正常胃黏膜组织中IκBα&与阻I... 目的:研究IκBα&与核因子κB(NF-κB)在胃癌组织中的表达,了解细胞内IκBα&水平的变化对NF-κB活性的影响。方法:62例胃癌患者术后切取胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织,用免疫印迹法对胃癌组织及正常胃黏膜组织中IκBα&与阻IκBα表达进行配对研究。结果:59例胃癌组织中细胞浆IκBα水平表达下降,伴随细胞核NF-κB活性增强(P〈0.01),3例胃癌组织中IκBα及NF-κB活性与正常胃黏膜组织中无统计学意义。结论:胃癌组织细胞浆内IκBα水平下降有利于NF-κB异常活化。 展开更多
关键词 胃癌 IΚBΑ 核因子ΚB
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胃舒散对大鼠慢性胃炎的治疗作用 被引量:4
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作者 吴灵飞 冯家琳 +2 位作者 苏剑东 李国平 《中国中西医结合消化杂志》 CAS 2007年第2期85-89,共5页
[目的]研究胃舒散对大鼠慢性胃炎的治疗作用,并探讨其机制。[方法]用2%水杨酸钠结合饥饱失常等综合因素诱发大鼠实验性慢性胃炎模型,观察不同剂量胃舒散对其治疗作用。采用光镜和扫描电镜观察胃的组织学改变,用滴定法测定胃液游离... [目的]研究胃舒散对大鼠慢性胃炎的治疗作用,并探讨其机制。[方法]用2%水杨酸钠结合饥饱失常等综合因素诱发大鼠实验性慢性胃炎模型,观察不同剂量胃舒散对其治疗作用。采用光镜和扫描电镜观察胃的组织学改变,用滴定法测定胃液游离胃酸,化学发光法测定胃组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。[结果]胃舒散(3.0g/kg,1.5g/kg)明显减轻了大鼠慢性胃炎程度,降低胃黏膜炎症指数并增加上皮层厚度,提高胃组织SOD活性,降低MDA水平(P〈0.05),但对游离胃酸无明显作用。[结论]胃舒散对大鼠实验性慢性胃炎有治疗作用,其机制与抗氧化、保护胃黏膜细胞有关,但与胃酸分泌无关。 展开更多
关键词 胃炎 慢性 胃舒散 大鼠 扫描电镜 超氧化物歧化酶
慢性萎缩性胃炎动物模型的实验研究 被引量:13
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作者 苏剑东 吴灵飞 《汕头大学医学院学报》 2007年第2期 88-89,99,F0004,共4页
目的:通过多因素刺激大鼠胃黏膜,建立稳定、实用、价廉的慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变的大鼠模型,在光镜及扫描电镜下观察其效果。方法:模型组(20只)用50℃脱氧胆酸钠(20 mmol/L),体积分数60%的乙醇空腹灌胃及体积分数0.05%的... 目的:通过多因素刺激大鼠胃黏膜,建立稳定、实用、价廉的慢性萎缩性胃炎(CAG)癌前病变的大鼠模型,在光镜及扫描电镜下观察其效果。方法:模型组(20只)用50℃脱氧胆酸钠(20 mmol/L),体积分数60%的乙醇空腹灌胃及体积分数0.05%的氨水自由饮用刺激胃黏膜6个月,对照组(10只)正常饲养。结果:与对照组比,模型组一般情况差、体重增加减慢,腺体萎缩,炎性细胞浸润;造模结束时8只伴有明显的肠上皮化生,4只伴有不典型增生,造模成功率90.0%。结论:多因素刺激大鼠6个月可成功建立CAG模型,且部分出现癌前病变,这种稳定的造模方法为今后相关的研究打下了基础。 展开更多
关键词 慢性萎缩性胃炎 癌前病变 大鼠 扫描电镜
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