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酪蛋白激酶2相互作用蛋白1基因沉默对胶质瘤U87-MG细胞增殖的影响
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作者 程世翔 张谦 +4 位作者 泰龙 朱雷 徐浩祥 郗艳国 张文彬 《中华行为医学与脑科学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期588-592,共5页
目的探讨酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(Casein kinase 2-interacting protein-1,CKIP-1)基因沉默对人胶质瘤U87-MG细胞增殖的影响。方法构建CKIP-1 siRNA慢病毒干扰载体并感染U87-MG细胞,分别采用qRT—PCR和Westernblot检测CKIP-1 siRN... 目的探讨酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(Casein kinase 2-interacting protein-1,CKIP-1)基因沉默对人胶质瘤U87-MG细胞增殖的影响。方法构建CKIP-1 siRNA慢病毒干扰载体并感染U87-MG细胞,分别采用qRT—PCR和Westernblot检测CKIP-1 siRNA在U87-MG细胞中的敲减作用,采用流式细胞术检测细胞周期,细胞计数仪进行细胞计数,MTT和BrdU检测细胞增殖变化,克隆形成实验评价细胞生长能力的变化。结果与Ctrl组比较,CKIP-1siRNA能显著下调U87-MG细胞CKIP-1mRNA[Ctrl组(1.01±0.13),CKIP-1siRNA组(0.23+0.02),P〈0.01]和蛋白表达水平。与Ctrl组比较,CKIP-1siRNA组G0/G1期细胞比例下降[Ctrl组(69.64±0.79)%,CKIP-1siRNA组(62.64±0.66)%,P〈0.01],G2/M期细胞比例上升[Ctd组(8.36±0.52)%,CKIP一1siRNA组(13.87±2.90)%,P〈0.05],细胞增殖能力和克隆形成能力受到明显抑制[细胞集落数:Ctd组(25±2)个/孔,CKIP-1siRNA组(2±1)个/孔,P〈0.01]。结论沉默U87-MG细胞中CKIP-1表达能显著抑制细胞增殖,表明CKIP-1蛋白可能参与胶质瘤的发生发展并促进胶质瘤细胞增殖。 展开更多
关键词 酪蛋白激酶2相互作用蛋白1 神经胶质瘤 基因沉默 细胞增殖
数字全息显微镜观察哇巴因对人胶质瘤U87-MG细胞的影响 预览
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作者 杨小飒 余东堃 +4 位作者 泰龙 徐忠伟 李杰 涂悦 程世翔 《肿瘤药学》 CAS 2017年第1期12-16,共5页
目的 应用数字全息显微镜观察哇巴因(ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞的影响。方法 不同浓度ouabain(0.05、0.5、2.5、25μM)干预U87-MG细胞,24 h后使用光学显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞活力,数字全息显微镜观察ouabain作... 目的 应用数字全息显微镜观察哇巴因(ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞的影响。方法 不同浓度ouabain(0.05、0.5、2.5、25μM)干预U87-MG细胞,24 h后使用光学显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞活力,数字全息显微镜观察ouabain作用后细胞的动态变化和运动能力改变。结果 与Control组比较,ouabain明显减低细胞活力[0.05μM(75.92±3.21)%,0.5μM(49.61±3.95)%,2.5μM(42.74±3.21)%,25μM(32.86±2.00)%vs.Control(100±0.01)%;P〈0.01],减少细胞数量[0.05μM(170.7±4.7),0.5μM(162.3±4.4),2.5μM(142.0±2.6),25μM(110.3±1.2)vs.Control(193.7±2.6);P〈0.05或P〈0.01],并降低细胞运动能力[0.05μM(809.0±19.8)μm,0.5μM(626.9±23.5)μm,2.5μM(476.7±22.9)μm,25μM(386.5±19.6)μm vs.Control(959.7±18.9)μm;P〈0.01],且呈浓度依赖性。结论 ouabain可抑制人胶质瘤U87-MG细胞的生长、降低肿瘤细胞运动能力并最终引起细胞死亡,数字全息显微镜可起到良好的评价作用。 展开更多
关键词 数字全息显微镜 哇巴因 人胶质瘤U87-MG细胞 运动能力
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难治性癫痫诊断与治疗的研究新进展 被引量:2
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作者 国树超 李建国 +3 位作者 程世翔 刘宝虎 泰龙 梁晋 《中国综合临床》 2017年第8期765-768,共4页
难治性癫痫主要是指使用了2种正确选择的可以耐受的抗癫痫药,经过足剂量、足疗程的单药或联合治疗后,仍不能达到无发作的癫痫.难治性癫痫发病机制较复杂,目前国内外尚无统一定论.近期,人们越来越关注氧化应激损伤导致的线粒体功能障碍... 难治性癫痫主要是指使用了2种正确选择的可以耐受的抗癫痫药,经过足剂量、足疗程的单药或联合治疗后,仍不能达到无发作的癫痫.难治性癫痫发病机制较复杂,目前国内外尚无统一定论.近期,人们越来越关注氧化应激损伤导致的线粒体功能障碍与难治性癫痫的相关性.我们在总结目前难治性癫痫常见治疗方案的基础上,通过检索国内外的相关文献,进一步探讨难治性癫痫诊疗理论,以期为难治性癫痫提供新的诊疗策略. 展开更多
关键词 难治性癫痫 氧化应激 线粒体功能障碍 诊疗策略
哇巴因调控Akt/mTOR信号通路诱导U87-MG细胞死亡的机制研究 预览
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作者 杨小飒 李培炎 +4 位作者 李杰 泰龙 徐忠伟 涂悦 程世翔 《中国医药导报》 CAS 2017年第3期4-7,共4页
目的 探讨哇巴因(ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞死亡的影响及具体机制。方法 将培养的U87-MG细胞随机分为正常对照(Control)组和ouabain组,分别加入常规培养基和不同浓度ouabain(0.05、0.5、2.5、25μmol/L)干预24 h,光学显微镜观... 目的 探讨哇巴因(ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞死亡的影响及具体机制。方法 将培养的U87-MG细胞随机分为正常对照(Control)组和ouabain组,分别加入常规培养基和不同浓度ouabain(0.05、0.5、2.5、25μmol/L)干预24 h,光学显微镜观察ouabain干预后24 h细胞的形态改变,MTT实验检测细胞活力,免疫印迹法(Western blot)检测Akt、p-Akt、m TOR和p-m TOR的表达变化。结果 与Control组比较,ouabain显著降低U87-MG细胞活力(均P〈0.01),且呈现浓度依赖性;高浓度ouabain(2.5、25μmol/L)与Control组相比能够降低U87-MG细胞中p-Akt、m TOR和p-m TOR的表达(均P〈0.01)。结论 高浓度ouabain可能通过抑制胞内Akt/m TOR信号通路,降低肿瘤细胞活力并最终引起细胞死亡。 展开更多
关键词 哇巴因 胶质瘤 人胶质瘤U87-MG细胞 Akt/mTOR信号通路
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哇巴因对人胶质瘤U87-MG细胞增殖及HIF-1α表达的影响 预览
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作者 杨小飒 刘冬莹 +3 位作者 李杰 泰龙 涂悦 程世翔 《遵义医学院学报》 2017年第1期64-67,共4页
目的探索哇巴因(Ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞增殖和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法Ouabain(0.05、0.5、2.5、25μmol/L)作用于U87-MG细胞24 h,MTT法检测吸光度值和细胞活力,Western Blot检测HIF-1α表达量。结果不... 目的探索哇巴因(Ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞增殖和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法Ouabain(0.05、0.5、2.5、25μmol/L)作用于U87-MG细胞24 h,MTT法检测吸光度值和细胞活力,Western Blot检测HIF-1α表达量。结果不同浓度Ouabain干预24 h后U87-MG细胞吸光度值(OD490)与Control组相比,均明显降低(P均〈0.01),细胞活力显著下降(P〈0.01);与Control组比较,0.05μmol/L Ouabain组HIF-1α蛋白表达量上升(1.27±0.05vs.1.00±0.05,P〈0.05),当Ouabain浓度升高至2.5、25μmol/L,HIF-1α表达显著降低(0.28±0.04,0.20±0.03 vs.1.00±0.05,P均〈0.01)。结论较高浓度Ouabain可通过抑制HIF-1α表达,促进人胶质瘤U87-MG细胞凋亡。 展开更多
关键词 哇巴因 人胶质瘤U87-MG细胞 缺氧诱导因子-1Α 凋亡
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不同干预因素对糖氧剥夺诱导海马神经元HT-22细胞损伤的影响
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作者 杨小飒 泰龙 +4 位作者 张赛 于泽奇 徐忠伟 涂悦 程世翔 《中国医药》 2017年第1期62-67,共6页
目的 探究胰岛素、雌激素、脯氨酸羟化酶2(PHD-2)抑制剂IOX2和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂2-甲氧基雌二醇(2-MeOE2)对糖氧剥夺诱导海马神经元HT-22细 胞损伤的影响。 方法 选取小鼠海马神经元HT-22细胞建立糖氧剥夺模... 目的 探究胰岛素、雌激素、脯氨酸羟化酶2(PHD-2)抑制剂IOX2和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂2-甲氧基雌二醇(2-MeOE2)对糖氧剥夺诱导海马神经元HT-22细 胞损伤的影响。 方法 选取小鼠海马神经元HT-22细胞建立糖氧剥夺模型,并采用噻唑蓝(MTT)法确定糖氧剥夺和复糖、复氧时间。将细胞分为正常对照组、糖氧剥夺组、胰 岛素组(0.004、0.02、0.1、0.5 μmol/L)、雌激素组(0.1、1、10、100 μmol/L)、IOX2组(0.001、0.01、0.1、1 μmol/L)和2-MeOE2组(0.05、0.5、5、50 μmol/L)。 糖氧剥夺组进行糖氧剥夺处理和0.1%二甲基亚砜干预;其他实验组进行糖氧剥夺处理,在复糖、复氧阶段,将不同浓度胰岛素、雌激素、IOX2和2-MeOE2作用于经糖氧剥夺处理的 HT-22细胞进行干预,MTT法检测不同干预因素对HT-22细胞损伤的作用。 结果 与正常对照组比较,糖氧剥夺组14 h后细胞缺糖缺氧效果最佳,细胞存活率降至(41.3±0.6)% 。糖氧剥夺组复糖、复氧后0~3、3~6和6~9 h的细胞倍增时间均长于正常对照组[(16.8±0.7)h比(6.0±1.0)h、(14.4±1.8)h比(7.8±2.0)h、(14.2±1.1)h比(7.2 ±0.6)h](均P<0.01),而9~12 h时间段2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果表明,0.004、0.02、0.1、0.5 μmol/L胰岛素组细胞活力均明显高于糖氧剥夺组(P <0.01或P<0.05);0.1、1 μmol/L雌激素组细胞活力明显高于糖氧剥夺组(P<0.01或P<0.05),10、100 μmol/L雌激素组细胞活力与糖氧剥夺组比较,差异无统计学意义(均P >0.05);0.001、0.01、0.1、1 μmol/L IOX2组细胞活力与糖氧剥夺组差异均无统计学意义(均P>0.05);0.05、0.5、5、50 μmol/L 2-MeOE2组细胞活力均明显低于糖氧剥夺 组(均P<0.01)。 结论 14 h是糖氧剥夺模型缺糖缺氧的最佳时间,复糖、复氧阶段药物干预的适宜时 展开更多
关键词 缺血性脑卒中 糖氧剥夺 HT-22细胞
右美托咪定联合靶向温度管理对颅脑创伤小鼠脑水肿的保护作用 被引量:2
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作者 黄红洁 丁丽景 +8 位作者 张娜娜 杨程 泰龙 闫诺 高洁 李辉 国树超 张赛 程世翔 《中华行为医学与脑科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期311-315,共5页
目的探讨右美托咪定(Dex)联合靶向温度管理(TTM)对颅脑创伤(TBI)小鼠脑水肿的保护作用。方法成年雄性7周龄C57BL/6小鼠132只,按随机数字表顺序分为6组:正常(Normal)、假手术(Sham)、颅脑创伤(TBI)、靶向温度管理(TTM)... 目的探讨右美托咪定(Dex)联合靶向温度管理(TTM)对颅脑创伤(TBI)小鼠脑水肿的保护作用。方法成年雄性7周龄C57BL/6小鼠132只,按随机数字表顺序分为6组:正常(Normal)、假手术(Sham)、颅脑创伤(TBI)、靶向温度管理(TTM)、右美托咪定(Dex)、Dex联合TFM(DT),每组22只。建立电子皮质撞击致TBI模型后即刻采用TrM干预(温度32±1℃)持续6h,或伤后0、2、4h腹腔注射DEX(20μg/kg)。分别采用改良神经功能缺陷评分(mNSS)和Morris水迷宫法(MWM)观察神经功能和学习记忆能力改变。伤后24h处死小鼠并取脑组织行HE染色,分别采用干湿比重法测定脑组织含水量变化,免疫印迹(Western blot)法检测水通道蛋白4(AQP4)表达水平。结果与Sham组比较,TBI小鼠神经功能受损[(13.2±3.0)分,(0.5±0.7)分](P〈0.01),学习记忆能力下降[(2.9±1.0)次,(7.4±1.3)次](P〈0.05),脑组织含水量增加[(79.81±0.80)%,(75.98±0.62)%](P〈0.01),AQP4蛋白表达升高[(1.60±0.07),(0.73±0.03)](P〈0.01);而Dex和TTM均可改善TBI小鼠的神经功能受损程度[Dex:(10.3±2.8)分,TTM:(10.0±2.9)分],改善学习记忆能力[Dex:(4.2±1.5)次;TTM:(4.5±1.4)次],降低脑含水量[Dex:(78.50±0.40)%,TTM:(78.10±0.45)%],显著降低AQP4表达水平[Dex:(1.40±0.04),TTM:(1.15±0.12)](均P〈0.05),其中Dex联合TTM组改善效果尤为显著[(9.2±2.5)分,(5.4±1.8)次,(77.67±0.30)%,(0.93±0.09)](P〈0.01)。结论Dex联合TTM对TBI小鼠有脑保护作用,可显著改善小鼠受损的神经功能,降低损伤后脑水肿,其机制可能与下调AQP4表达有关。 展开更多
关键词 创伤性脑损伤 右美托咪定 靶向温度管理 脑水肿
基于转录组学的创伤性颅脑损伤基因表达变化
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作者 廖吉连 程世翔 +4 位作者 泰龙 孙洪涛 徐忠伟 涂悦 张赛 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期72-77,共6页
目的探讨创伤性颅脑损伤后基因表达变化及颅脑损伤后的神经保护机制。方法应用细胞损伤仪(CICⅡ)建立细胞牵张损伤模型,各项参数分别设定为:脉冲时间为50ms、计量阀门压力为0.165MPa,使气体脉冲压为(O.021±0.001)MPa。采... 目的探讨创伤性颅脑损伤后基因表达变化及颅脑损伤后的神经保护机制。方法应用细胞损伤仪(CICⅡ)建立细胞牵张损伤模型,各项参数分别设定为:脉冲时间为50ms、计量阀门压力为0.165MPa,使气体脉冲压为(O.021±0.001)MPa。采用Trizol法提取损伤组和对照组的细胞RNA,进行mRNA测序,并对差异表达基因进行基因本体分析和生物信息分析软件(IPA)进行信号通路分析,并通过实时荧光定量PCR(qPCR)对定量结果进行验证。结果在2个样本中,分别得到1431万个和1551万个读段,鉴定出15018个基因在2个样本中均有表达。差异表达基因有1424个,相较于对照组,损伤组上调1198个基因,下调226个基因(P〈0.01)。与对照组相比,损伤组缺氧诱导因子10[抗体(HIF-1α)及ZFP36表达均下调,并发现了TBI后13个差异表达基因,构成了以HIF-1α和ZFP36为中心的调控网络。在该网络中,HIF-1α受EGLN2和ZFP36的调控,并与PER1相互作用,同时调控多个下游基因的表达,如H2AFX、ABCF2和SLC39A7。结论颅脑损伤12h,HIF-1α在mRNA水平分别受到ZFP36、HNRNPD和EGLN2的调控而下调,并进一步调节H2AFX的表达,进而阻止神经细胞凋亡,促进了神经细胞的损伤修复。 展开更多
关键词 颅脑损伤 转录组 基因表达 RNA测序 缺氧诱导因子-1Α
RIP3介导的坏死性凋亡在C57BL/6小鼠颅脑创伤模型中的作用 预览
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作者 于泽奇 泰龙 +5 位作者 涂悦 杨小飒 江继鹏 董晓煜 张赛 程世翔 《中华神经创伤外科电子杂志》 2017年第5期277-283,共7页
目的探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)介导的坏死性凋亡在C57BL/6小鼠颅脑创伤(TBI)模型中的作用及其机制。方法采用电子控制性皮质撞击仪(CCI),设定打击参数(速度5m/s、时间120 ms、深度1 mm),对小鼠顶叶大脑皮质进行精确撞击,建... 目的探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)介导的坏死性凋亡在C57BL/6小鼠颅脑创伤(TBI)模型中的作用及其机制。方法采用电子控制性皮质撞击仪(CCI),设定打击参数(速度5m/s、时间120 ms、深度1 mm),对小鼠顶叶大脑皮质进行精确撞击,建立颅脑创伤模型。将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,每组20只:Ctrl组不予处理,Sham组仅开骨窗,TBI组CCI打击后原位注射4μl的DMSO,GSK’872组CCI打击后原位注射4μl的GSK’872。再采用改良型神经功能缺损评分(mNSS)量表评估小鼠颅脑创伤后损伤程度,脑干湿比重法检测颅脑创伤后脑水肿程度,HE染色法检测小鼠脑皮层及海马区损伤程度,以创伤后觉醒时间评价损伤后恢复情况,Western blot法检测RIP3/RIP1/混合连接激酶结构域样蛋白(MLKL)、Akt/p-Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p-m TOR、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶8(Caspase-8)/X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、Caspase-1/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达变化。结果与TBI组相比,GSK’872可明显降低m NSS评分[1 d:(11.95±1.50)vs(13.05±1.82),t=2.084,P〈0.05;3 d:(8.95±1.39)vs(11.00±2.10),t=3.634,P〈0.01;5 d:(6.75±1.33)vs(8.90±1.52),t=4.759,P〈0.01;7 d:(4.00±1.08)vs(7.15±1.09),t=9.200,P〈0.01],同时可明显减轻脑水肿程度[(77.91±0.84)%vs(80.34±0.94)%,t=8.692,P〈0.01],减轻皮层及海马区损伤程度,并促进创伤后觉醒[(4.08±0.63)h vs(5.11±0.74)h,t=4.717,P〈0.01]。Western blot结果显示,与TBI组相比,应用GSK’872后能降低RIP3[(0.70±0.03)vs(1.04±0.04),t=13.051,P〈0.01]、RIP1[(0.93±0.02)vs(1.16±0.03),t=11.203,P〈0.01]、MLKL[(0.75±0.04)vs(1.03±0.03),t=9.873,P〈0.01]、Akt[(0.55±0.04)vs(0.77±0.05),t=6.278,P〈0.01]、p-Akt[(0.80±0.04)vs(0.99±0.04),t=6.217,P〈0.01]、m TOR[(0.48±0.05)vs(0.90±0.05),t=10.608 展开更多
关键词 受体相互作用蛋白3 颅脑创伤 坏死性凋亡
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不同剂量右美托咪定对创伤性脑损伤小鼠急性期脑水肿的影响 被引量:2
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作者 张娜娜 程世翔 +3 位作者 泰龙 黄红洁 张赛 杨程 《临床麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1202-1206,共5页
目的探讨不同剂量右美托咪定对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠急性期脑水肿的影响。方法健康成年雄性C57BL/6J小鼠132只,随机分为六组:正常对照组(C组)、假手术组(Sham组)、创伤性脑损伤组(TBI组)、右美托咪定2... 目的探讨不同剂量右美托咪定对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠急性期脑水肿的影响。方法健康成年雄性C57BL/6J小鼠132只,随机分为六组:正常对照组(C组)、假手术组(Sham组)、创伤性脑损伤组(TBI组)、右美托咪定20μg/kg组(D20组)、40μg/kg组(D40组)、60μg/kg组(D60组),每组22只。应用电子控制性脑皮质撞击仪(eCCI)建立TBI小鼠模型,即刻经腹腔注射不同剂量右美托咪定(20、40、60μg/kg),每隔2小时给药1次,共3次。伤后24h分别采用干/湿重法测定脑含水量,HE染色法观察损伤侧皮质细胞形态变化,Western blot法检测损伤侧脑组织中水通道蛋白4(AQP4)和核转录因子κB(NF-κB)的蛋白含量。并于伤后第1、2、3、7天采用改良神经功能缺陷评分(mNSS)评价其神经功能受损程度,伤后第4、5、6、7天应用Morris水迷宫实验观察其行为学改变。结果与Sham组比较,TBI组不同时点mNSS评分明显升高,逃避潜伏期明显延长,脑含水量明显升高,损伤侧皮质损伤严重,AQP4和NF-κB蛋白含量明显升高(P〈0.01)。与TBI组比较,右美托咪定各剂量组mNSS评分明显降低,逃避潜伏期明显缩短,脑含水量明显降低,损伤侧皮质细胞空泡变性和炎症反应有所改善,AQP4和NF-κB蛋白含量明显降低(P〈0.05或P〈0.01);D60组上述指标改变较D20组更为明显(P〈0.05或P〈0.01)。结论右美托咪定20-60μg/kg可以减轻TBI后急性脑水肿和认知功能障碍,随着剂量的增高,此作用更为明显,这可能与降低TBI后AQP4和NF-κB表达密切相关。 展开更多
关键词 右美托咪定 创伤性脑损伤 脑水肿 水通道蛋白4 核因子-ΚB
坏死性凋亡相关蛋白在脑缺血再灌注小鼠脑损伤中的作用 被引量:2
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作者 杨小飒 程世翔 +4 位作者 泰龙 徐忠伟 于泽奇 张赛 涂悦 《中华行为医学与脑科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期917-921,共5页
目的探究坏死性凋亡相关蛋白大脑中动脉栓塞(MCAO)在脑组织缺血再灌注小鼠脑损伤中的作用及其机制。方法通过大脑中动脉栓塞(MCAO)构建C57BL/6小鼠缺血再灌注损伤模型,分别使用凋亡抑制剂z-VAD.fmk(zVAD,1.1g/kg)、受体相... 目的探究坏死性凋亡相关蛋白大脑中动脉栓塞(MCAO)在脑组织缺血再灌注小鼠脑损伤中的作用及其机制。方法通过大脑中动脉栓塞(MCAO)构建C57BL/6小鼠缺血再灌注损伤模型,分别使用凋亡抑制剂z-VAD.fmk(zVAD,1.1g/kg)、受体相互作用蛋白3(RIP3)抑制剂GSK’872(0,7g/kg)以及二者联合进行干预,采用mNSS评估神经功能缺损状况,TTC染色检测脑组织梗死体积,免疫印迹(WesternBlot)和免疫荧光法分析受体相互作用蛋白1(RIPl)、RIP3和混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)表达变化和定位情况。结果MCAO小鼠发生明显的神经功能缺损和脑组织梗死,与MCAO组比较,zVAD、GSK’872及二者联合均能缓解神经功能缺损,降低脑组织梗死体积(P〈0.05或P〈0.01)。MCAO引起RIP1、RIP3和MLKL蛋白水平升高,而GSK’872以及联合干预能够明显下调上述蛋白表达[RIP1(GSK’872:0.64±0.02,MCAO:1.28±0.02,P〈0.01);RIP3(GSK’872:1.08±0.02,MCAO:1.45±0.02,P〈0.01);MLKL(GSK’872:0.54±0.01,MCAO:1.00±0.01,P〈0.01)],但是zVAD除导致MLKL轻度降低外(P〈0.05),并未引起RIP1和RIP3表达变化(P〉0.05)。结论坏死性凋亡相关蛋白RIP1、RIP3与MLKL参与介导坏死胜凋亡的发生,促进脑组织缺血再灌注损伤的病理进展。 展开更多
关键词 坏死性凋亡 缺血再灌注 受体相互作用蛋白 混合连接激酶结构域样蛋白 小鼠
基于双向电泳的应激性抑郁症模型大鼠蛋白质组学研究 预览 被引量:1
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作者 泰龙 涂悦 +4 位作者 张赛 文立 孙洪涛 杨程 程世翔 《天津医药》 CAS 2017年第8期825-829,共5页
目的筛选应激性抑郁症(STRID)模型大鼠海马组织中的差异表达蛋白,初步探讨STRID的发病机制。方法将20只成年SD大鼠随机分为对照组和STRID组,每组10只。STRID组给予慢性温和不可预知应激(CUMS)干预(包括禁食水、电刺激足底、颠倒... 目的筛选应激性抑郁症(STRID)模型大鼠海马组织中的差异表达蛋白,初步探讨STRID的发病机制。方法将20只成年SD大鼠随机分为对照组和STRID组,每组10只。STRID组给予慢性温和不可预知应激(CUMS)干预(包括禁食水、电刺激足底、颠倒昼夜、冰水游泳、倾斜鼠笼、惊吓刺激、夹尾等方法)连续不重复刺激28d建模,对照组在此期间正常喂养。在STRID模型建立完成后提取2组大鼠海马组织进行蛋白双向电泳,筛选出差异表达蛋白点后进行质谱鉴定和蛋白功能分析。结果2组共鉴定出34个差异表达蛋白,其中STRID组较对照组表达上调18个、下调16个。差异表达蛋白主要集中于细胞质、线粒体、细胞外泌体和髓鞘中,主要参与代谢信号通路、氧化磷酸化信号通路,以及阿尔茨海默症、帕金森病和亨廷顿症信号通路。结论STRID大鼠海马组织存在蛋白的异常表达和神经信号传导异常,过度的氧化磷酸化可能是其致病机制之一。 展开更多
关键词 抑郁症 蛋白质组学 电泳 凝胶 双向 质谱分析法 大鼠 Sprague-Dawley 慢性温和不可预知应激 应激性抑郁症
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RIP3介导的坏死性凋亡在HT-22细胞牵张损伤模型中的作用 预览
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作者 于泽奇 泰龙 +5 位作者 涂悦 杨小飒 江继鹏 董晓煜 张赛 程世翔 《中华神经创伤外科电子杂志》 2017年第3期159-165,共7页
目的 探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)介导的坏死性凋亡在HT-22细胞牵张损伤模型中的作用及其机制。方法 将HT-22细胞接种在Bioflex培养板,采用细胞损伤控制仪(CIC),设定损伤参数(阀门压力30 PSI、气体脉冲压力3.5~4.5 PSI、气体脉冲... 目的 探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)介导的坏死性凋亡在HT-22细胞牵张损伤模型中的作用及其机制。方法 将HT-22细胞接种在Bioflex培养板,采用细胞损伤控制仪(CIC),设定损伤参数(阀门压力30 PSI、气体脉冲压力3.5~4.5 PSI、气体脉冲时间50 ms),建立HT-22细胞牵张损伤模型。分别采用数字全息显微镜(DHM)、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、流式细胞术、western blot法检测牵张损伤后6 h Ctrl组、CIC组、GSK’872组间细胞形态差异,LDH浓度变化,细胞周期分布,RIP3/受体相互作用蛋白1(RIP1)/混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)、Akt/p-Akt/m TOR/p-m TOR、Caspase-8/X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)蛋白表达变化。结果 与CIC组相比,应用GSK’872后细胞平均数量[(244.67±11.68)vs(190.67±15.28),t=4.865,P〈0.01]、细胞平均面积[(260.14±16.81)μm2vs(175.91±15.00)μm2,t=6.476,P〈0.01]有所增加,细胞平均厚度有所减小[(6.12±0.47)μm vs(8.04±0.48)μm,t=4.942,P〈0.01];LDH浓度有所下降[(222.74±11.06)ng/l vs(275.93±12.26)ng/l,t=5.581,P〈0.01];细胞周期有所恢复[Sub-G1:(0.33±0.15)%vs(6.51±0.63)%,t=16.530,P〈0.01;G0/G1:(46.67±2.96)%vs(33.04±7.07)%,t=3.085,P〈0.05];能够降低RIP3[(0.73±0.04)vs(1.09±0.09),t=6.239,P〈0.01]、RIP1[(0.75±0.05)vs(0.91±0.05),t=4.211,P〈0.05]、MLKL[(0.56±0.03)vs(0.70±0.04),t=4.785,P〈0.01]、Akt[(0.49±0.05)vs(0.77±0.05),t=6.763,P〈0.01]、p-Akt[(0.88±0.05)vs(1.06±0.05),t=4.509,P〈0.05]、m TOR[(0.81±0.02)vs(0.90±0.05),t=2.813,P〈0.05]、p-m TOR[(0.65±0.05)vs(1.00±0.05),t=8.413,P〈0.01]、XIAP[(0.50±0.05)vs(0.73±0.05),t=5.814,P〈0.01]蛋白表达,并可促进Caspase-8蛋白表达持续升高[(0.96±0.05)vs(0.75±0.05),t=5.351,P〈0.01],差异具有统计学意义。结论 RIP3介导的坏死性凋亡在HT-22细胞牵张损伤模型中起到重要作用,应用G 展开更多
关键词 颅脑创伤 牵张损伤 坏死性凋亡 受体相互作用蛋白3 GSK’872 HT-22细胞
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受体相互作用蛋白3对神经胶质瘤U251细胞增殖的影响 预览
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作者 于泽奇 武慧丽 +4 位作者 涂悦 泰龙 杨小飒 张赛 程世翔 《中国医药导报》 CAS 2017年第10期4-7,共4页
目的 探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)在神经胶质瘤细胞中的表达及其对U251细胞增殖的影响。方法 采用实时定量PCR(real-time RT-PCR)法分别检测神经胶质瘤A172、U251、U373和U87细胞中RIP3的表达水平,随后应用U251稳定过表达RIP3(U25... 目的 探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)在神经胶质瘤细胞中的表达及其对U251细胞增殖的影响。方法 采用实时定量PCR(real-time RT-PCR)法分别检测神经胶质瘤A172、U251、U373和U87细胞中RIP3的表达水平,随后应用U251稳定过表达RIP3(U251-RIP3)细胞模型,分别采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪评价细胞周期变化。结果 RIP3 m RNA在4株胶质瘤细胞(A172、U251、U373、U87)中均有表达,并在U251细胞中表达最低。real-time RT-PCR结果表明U251-RIP3细胞中稳定过表达RIP3,与阴性对照(空载)(NC)相比,RIP3过表达能够抑制U251细胞增殖能力;能够降低U251细胞克隆形成能力,培养11 d后细胞集落数目(67±2)较NC(75±3)减少(P〈0.05);能够延缓细胞周期进程,U251-RIP3细胞的S期比例较NC组(16.0±0.4)%升至(18.2±1.0)%(P〈0.05),同时G0/G1期比例较NC组(55.7±0.5)%降至(57.4±0.4)%(P〈0.01)。结论 RIP3过表达后可抑制神经胶质瘤U251细胞增殖,有望成为靶向控制胶质瘤细胞增殖的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 受体相互作用蛋白3 胶质瘤 细胞增殖 可控性坏死
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应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型的实验研究
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作者 于泽奇 泰龙 +4 位作者 涂悦 杨小飒 徐忠伟 张赛 程世翔 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期398-402,共5页
目的应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型。方法采用Bioflex细胞培养板接种HT-22细胞,应用FX-5000TFL细胞应力加载系统进行牵张损伤(形变率为13.4%、频率为5.0Hz)。并按照时间的长短分为对照组和6、12、24h组。应用数字全... 目的应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型。方法采用Bioflex细胞培养板接种HT-22细胞,应用FX-5000TFL细胞应力加载系统进行牵张损伤(形变率为13.4%、频率为5.0Hz)。并按照时间的长短分为对照组和6、12、24h组。应用数字全息显微镜(DHM)动态检测细胞平均面积和平均厚度值,采用锥虫蓝染色法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞存活率和LDH的释放情况,并通过流式细胞术检测细胞周期和Sub-G1期峰的变化。结果(1)DHM检测结果显示:与对照组比较,损伤6h后HT-22细胞面积由(603.9±28.5)μm2降至(182.9±4.5)μm2(t=21.93,P〈0.01),细胞厚度由(4.0±0.2)μm升至(8.3±0.3)μm(t=16.65,P〈0.01)。(2)细胞存活率结果显示:对照组细胞存活率为(95.0±1.6)%,而损伤后6h[(59.7±4.5)%]较对照组显著下降(t=10.44,P〈0.01)。损伤后12h和24h的细胞存活率[分别为(77.0±2.9)%、(85.0±3.3)%]虽较6h组上升(分别为t=4.56,P〈0.05;t=6.45,P〈0.01),但仍低于对照组(分别为t=7.56,P〈0.01;t=3.873,P〈0.05)。(3)LDH检测结果显示:细胞应力加载损伤后6h,LDH的释放水平[(273.9±4.6)ng/L]显著高于对照组[(51.7±5.8)ng/L,t=42.48,P〈0.01],而12h组和24h组LDH的释放水平[分别为(255.2±4.4)ng/L、(240.2±6.0)ng/L]均低于6h组(分别为t=4.14,P〈0.05;t=6.28,P〈0.01)。(4)流式细胞术检测结果显示:与对照组[(0.6±0.3)%]相比,损伤6h组Sub—G1凋亡峰比例[(6.5±0.6)%]显著上升(t=14.90,P〈0.01),而细胞死亡比例随时间的延长而减少,尤以损伤24h后[(2.1±0.5)%]的峰值较6h组降低最为显著(t=9.61,P〈0.01)。结论应用细胞应力加载系统成功建立HT-22体外细胞损伤模型, 展开更多
关键词 颅脑损伤 模型 动物 应力加载系统 HT-22细胞 细胞损伤模型
SH-SY5Y细胞中过表达RIPK3对ZFP36基因转录的影响 预览
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作者 张国禄 程世翔 +4 位作者 徐忠伟 泰龙 廖吉连 涂悦 张赛 《天津医药》 CAS 2016年第4期418-422,共5页
目的探讨SH-SY5Y细胞中受体相互作用蛋白激酶-3(RIPK3)下游信号通路及其中的关键信号分子的作用。方法通过质粒转染的方式在实验组SH-SY5Y细胞内表达外源性RIPK3蛋白,将转染空载质粒载体SH-SY5Y细胞作为对照组。通过观察质粒所携带的... 目的探讨SH-SY5Y细胞中受体相互作用蛋白激酶-3(RIPK3)下游信号通路及其中的关键信号分子的作用。方法通过质粒转染的方式在实验组SH-SY5Y细胞内表达外源性RIPK3蛋白,将转染空载质粒载体SH-SY5Y细胞作为对照组。通过观察质粒所携带的绿色荧光蛋白(GFP)在细胞中的表达情况以验证转染结果,Westernblot对外源性RIPK3表达进行验证。MTT法检测细胞增殖活性,观察过表达RIPK3对细胞活性的影响,以确认其在细胞内是否具有生物活性。运用转录组测序技术(RNAseq)分别检测2组细胞内基因转录丰度并应用IngenuityPathway Analysis(IPA)数据库进行分析,获得RIPK3下游信号通路及关键分子。通过微滴式数字化PCR(dd PCR)对部分RNAseq结果进行验证。结果外源性RIPK3在细胞内具有生物活性,能够抑制SH-SY5Y细胞的增殖。RNAseq数据经IPA分析后得出锌指蛋白36(ZFP36)为RIPK3下游效应分子,其相关效应分子包括血管内皮生长因子(VEGF)、人脱帽酶2(DCP2)、脑源性神经营养因子(BDNF)、肿瘤坏死因子(TNF)的转录丰度也发生了相应的变化。结论 RIPK3能够参与对ZFP36以及与其相关效应分子的转录调控,进而在神经系统的发育、炎症和肿瘤发生等生理、病理过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 细胞系 肿瘤 锌指 基因表达调控 血管内皮生长因子类 脑源性神经营养因子 肿瘤坏死因子类 受体相互作用蛋白激酶-3 锌指蛋白36 人脱帽酶2
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缺氧诱导因子-1α在创伤性脑损伤中的作用 预览
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作者 杨小飒 泰龙 +2 位作者 于泽奇 程世翔 涂悦 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2016年第8期108-111,共4页
创伤性脑损伤(TBI)是近几十年来全球范围内致死率和致残率最高的疾病之一。TBI导致损伤区的脑血流量下降,使损伤区神经元发生缺血缺氧性改变,从而激活缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)。HIF-1α作为一种氧敏感性转录调控因子,通过调节其... 创伤性脑损伤(TBI)是近几十年来全球范围内致死率和致残率最高的疾病之一。TBI导致损伤区的脑血流量下降,使损伤区神经元发生缺血缺氧性改变,从而激活缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)。HIF-1α作为一种氧敏感性转录调控因子,通过调节其下游一系列蛋白的表达,在TBI的发生发展过程中发挥关键作用。然而,关于HIF-1α在TBI中的作用在目前研究中仍存在争议。本篇综述主要围绕HIF-1α的作用机制、在TBI中的作用以及与TBI的关系展开讨论。 展开更多
关键词 脑损伤 缺氧 缺氧诱导因子1 Α亚基
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受体相互作用蛋白3在炎症中的作用 预览 被引量:3
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作者 于泽奇 泰龙 +4 位作者 程世翔 杨小飒 王婧怡 涂悦 张赛 《医学综述》 2016年第16期3121-3124,共4页
疾病的发生往往伴随着炎症反应,并进一步加剧病情,因此炎症研究对疾病的控制和治疗有重要意义。受体相互作用蛋白3(RIP3)是炎症反应的关键分子,在炎症的发生、发展过程中起到重要作用。其中,一种形式是RIP3在肿瘤坏死因子、干扰素、... 疾病的发生往往伴随着炎症反应,并进一步加剧病情,因此炎症研究对疾病的控制和治疗有重要意义。受体相互作用蛋白3(RIP3)是炎症反应的关键分子,在炎症的发生、发展过程中起到重要作用。其中,一种形式是RIP3在肿瘤坏死因子、干扰素、脂多糖或病原微生物的刺激下,通过诱导坏死性凋亡介导炎症反应;另一种是RIP3促炎因子产生而引起的炎症反应。 展开更多
关键词 受体相互作用蛋白3 炎症 坏死性凋亡 炎性因子
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RIPK3过表达对mTOR及其相关基因转录的调控作用 预览 被引量:1
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作者 张国禄 程世翔 +3 位作者 徐忠伟 泰龙 涂悦 张赛 《河北医科大学学报》 CAS 2016年第4期377-381,共5页
目的探索受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)的下游信号通路。方法向实验组SH-SY5Y细胞内转染pCMV6-RIPK3质粒上调细胞内RIPK3的表达水平,对照组细胞转染相应的空载质粒。通过Western blot检测细胞... 目的探索受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)的下游信号通路。方法向实验组SH-SY5Y细胞内转染pCMV6-RIPK3质粒上调细胞内RIPK3的表达水平,对照组细胞转染相应的空载质粒。通过Western blot检测细胞内RIPK3的表达水平。3-(4,5-二甲基噻唑)[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl),MTT]实验获得2组细胞增殖曲线确定外源性RIPK3在细胞内具有的生物学活性。通过RNAseq检测2组细胞基因转录差异,并在生物通路分析(ingenuity pathway analysis,IPA)数据库中进行数据分析,获得RIPK3的下游信号通路及其中的关键分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)。采用微滴式数字化PCR(droplet digital PCR,ddPCR)对mTOR转录水平的差异进行验证。结果质粒DNA整合到细胞基因组内,Western blot提示外源性RIPK3在实验组细胞内稳定表达,MTT结果证明其在细胞内能够抑制细胞增殖。RNAseq及IPA分析结果提示过表达RIPK3能够导致mTOR转录水平发生上调,并对其下游的基因,包括固醇反应结合蛋白(sterol-response binding proteins,SREBPs)、p70核糖体S6蛋白激酶(p70ribosomal S6protein kinases,S6K)、真核生物起始因子4E结合蛋白(eukaryotic initiation factor 4E-binding proteins,4E-BPs)和ULK(unc-51-like kinase)激酶复合体的转录具有明显的调节作用。ddPCR实验结果中mTOR表达改变趋势与RNAseq基本一致。结论 RIPK3能够调控mTOR及其下游信号通路中SREBPs、S6K、4E-BPs和ULK基因转录水平,进而在神经系统生长发育和疾病进展中发挥重要作用。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 受体相互作用蛋白激酶-3 基因表达调控
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受体相互作用蛋白3介导的可控性坏死信号通路在创伤性脑损伤中的作用 被引量:1
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作者 于泽奇 泰龙 +4 位作者 涂悦 杨小飒 徐忠伟 张赛 程世翔 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期882-886,共5页
目的探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)介导的可控性坏死信号通路在创伤性脑损伤(TBI)中的作用机制。方法采用Bioflex细胞培养板接种小鼠海马神经元HT-22细胞,应用细胞损伤控制仪建立TBI细胞模型(阀门压力30PSI、气体脉冲压力3.5-4.5... 目的探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)介导的可控性坏死信号通路在创伤性脑损伤(TBI)中的作用机制。方法采用Bioflex细胞培养板接种小鼠海马神经元HT-22细胞,应用细胞损伤控制仪建立TBI细胞模型(阀门压力30PSI、气体脉冲压力3.5-4.5PSI、气体脉冲时间50ms)。分别采用数字全息显微镜和免疫印迹技术检测细胞损伤后6h、12h和24h细胞形态改变及RIP3、MLKL、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达变化。应用电子控制性皮质撞击仪(eCCI)建立小鼠TBI模型,对顶叶大脑皮质进行精确撞击(速率5m/s、时间150ms、深度1mm),假手术组仅开骨窗不行撞击。采用免疫组织化学法检测伤后12h脑组织中上述蛋白的表达变化。结果体外实验结果表明,与对照组比较,CIC损伤6h后HT-22细胞平均面积由[(603.63±26.13)μm^2]降至[(193.87±10.51)μm^2](P〈0.01),平均厚度由[(3.90±0.24)μm]升至[(7.50±0.27)μm](P〈0.01);损伤6-12h后RIP3、MLKL和Akt表达显著升高[RIP3:(1.08±0.05);MLKL:(0.99±0.03);Akt:(0.97±0.02),均P〈0.01]并持续较高水平,损伤24h后降低;p-Akt表达水平持续升高,至24h后达到峰值[(1.07±0.03),P〈0.01];损伤6h后mTOR和p-mTOR表达明显升高[mTOR:(0.78±0.02);p-mTOR:(0.95±0.02),均P〈0.01]。体内实验结果证实,CCI小鼠脑皮质区上述蛋白阳性细胞数明显高于Sham组[RIP3:(497±16)vs(324±11);MLKL:(403±12)vs(200±8);Akt:(367±10)vs(302±14);p-Akt:(376±10)vs(287±17);mTOR:(144±9)vs(57±11);p-mTOR:(203±7)ws(27±8),均P〈0.01],与细胞水平的WB检测结果一致。结论RIP3介导的可控性坏死信号通路可能在TBI后的继发性脑损害中起重要作用,RIP3有可能成为临床TBI靶向药物治疗的潜在生物标志物。 展开更多
关键词 受体相互作用蛋白3 创伤性脑损伤 可控性坏死
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