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基于16S rRNA高通量测序技术分析小鼠实验性结肠炎肠道菌群结构特征
1
作者 汪婷婷 郑乃盛 +1 位作者 沈立松 《诊断学理论与实践》 2019年第3期263-270,共8页
目的:明确溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)与肠道菌群间的相互关系,为寻找简单、安全的UC治疗方法提供实验基础。方法:通过3%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导建立小鼠溃疡性结肠炎模型,观察检测体重变化、肠道病理改... 目的:明确溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)与肠道菌群间的相互关系,为寻找简单、安全的UC治疗方法提供实验基础。方法:通过3%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导建立小鼠溃疡性结肠炎模型,观察检测体重变化、肠道病理改变,采用16S rRNA高通量测序技术,检测小鼠粪便中的肠道菌群,并分析比较结肠炎小鼠与正常小鼠间肠道菌群的多样性及丰度。同时,利用已有数据库,预估肠道菌群内的功能基因构成,分析2组间的菌群基因功能差异。结果:溃疡性结肠炎小鼠体重明显减轻,且肠道上皮完整性被破坏,同时肠道菌群多样性明显降低,溃疡性肠炎组小鼠肠道内双歧杆菌属降至0.2%明显低于正常组小鼠(P<0.05),而乳酸杆菌属平均丰度也显著降低至2.9%(P<0.05),提示可能是通过影响机体代谢从而造成溃疡性结肠炎的发生、发展。结论:溃疡性结肠炎小鼠的肠道菌群多样性降低,菌群分布均发生显著改变。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 肠道菌群 16S rRNA高通量测序
肿瘤免疫检查点抑制剂的临床不良反应及处理策略
2
作者 汪婷婷 罗琴 +1 位作者 沈立松 《肿瘤》 CSCD 北大核心 2018年第2期164-172,共9页
以细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)和免疫检查点程序性死亡分子1(programmed death-1,PD-1)/程序性死亡分子配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)抗体为代表的免疫检查点抑... 以细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)和免疫检查点程序性死亡分子1(programmed death-1,PD-1)/程序性死亡分子配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)抗体为代表的免疫检查点抑制剂(immune checkpoint blockade,ICB)作为一种新型恶性肿瘤治疗药物,在临床上对多种肿瘤都具有良好的治疗效果。然而,这些药物也可产生广泛的免疫相关性不良反应,迫使患者中止治疗,甚至影响患者生存。因此,随着ICB在临床上的广泛应用,临床医生需要充分认识肿瘤ICB治疗可能产生的不良反应以及适当的治疗策略,以提高ICB治疗患者的生存率和治疗效果。 展开更多
关键词 肿瘤 肿瘤治疗方案 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 程序性死亡分子1 药物相关性副作用及不良反应
基于NCBI基因表达综合数据库筛查胃癌关键基因和信号通路的分析 预览
3
作者 张鹏 罗琴 +2 位作者 汪婷婷 沈立松 《检验医学》 CAS 2018年第3期242-247,共6页
目的利用生物信息学方法筛选胃癌相关的关键基因以及参与的信号通路,初步探索胃癌发生、发展的相关指标。方法以美国国立生物技术信息中心(NCBI)基因表达综合数据库(GEO)的胃癌相关芯片数据,利用GEO2R分析平台筛选出胃癌组织和对照组织... 目的利用生物信息学方法筛选胃癌相关的关键基因以及参与的信号通路,初步探索胃癌发生、发展的相关指标。方法以美国国立生物技术信息中心(NCBI)基因表达综合数据库(GEO)的胃癌相关芯片数据,利用GEO2R分析平台筛选出胃癌组织和对照组织表达有显著差异的基因。对这些差异基因进行基因本体(GO)生物过程分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。利用卡普兰—迈尔—绘图仪(KM-Plotter)分析关键基因对胃癌患者生存时间的影响。结果在3个胃癌数据集中共筛选出1 480个差异基因,其中上调基因879个,下调基因601个。对表达有差异的基因进行信号通路和生物功能分析,鉴定发现主要集中于细胞色素P450家族、葡萄糖醛酸转移酶家族等基因簇。进一步分析这些关键基因,新发现ALDH3A1、NEUROD1等基因与胃癌的发生、发展密切相关。根据这些关键基因表达水平的高低对胃癌患者进行分组,2个组患者生存时间差异有统计学意义(P<0.05)。结论建立的整合基因组学分析方法筛选出了新的胃癌发生、发展关键基因,该方法为胃癌研究提供了有价值的信息,为进一步的功能研究提供了依据。 展开更多
关键词 基因表达综合数据库 生物信息学分析 信号通路 胃癌
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白细胞CD35和CD11b表达在诊断细菌感染中的价值 预览
4
作者 王维维 郝军 +5 位作者 章黎华 郑培明 费奇力 奚迪 沈立松 《检验医学》 CAS 2018年第10期894-898,共5页
目的 评估白细胞表达补体受体(CR)1(CD35)和CR3(CD11b)作为诊断细菌感染指标的可能性。方法 采用流式细胞仪检测39例细菌感染患者及23名体检健康者(正常对照组)外周血白细胞(淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞)CD35和CD11b的平... 目的 评估白细胞表达补体受体(CR)1(CD35)和CR3(CD11b)作为诊断细菌感染指标的可能性。方法 采用流式细胞仪检测39例细菌感染患者及23名体检健康者(正常对照组)外周血白细胞(淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞)CD35和CD11b的平均荧光强度(MFI),分别计算各组中性粒细胞CD35 MFI/淋巴细胞CD35 MFI比值(简称CD35比值)、中性粒细胞CD11b MFI/淋巴细胞CD11b MFI比值(简称CD11b比值),并按公式[感染指数=中性粒细胞MFI2/(淋巴细胞MFI×单核细胞MFI)]计算CD35感染指数和CD11b感染指数,同时检测CD64 MFI并计算CD64比值及CD64感染指数。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标诊断细菌感染的价值。结果 细菌感染组淋巴细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI均低于正常对照组(P<0.000 1、P<0.01、P<0.000 1),而中性粒细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI均高于正常对照组(P<0.000 1、P<0.000 1、P<0.01);细菌感染组单核细胞CD11b MFI和CD64 MFI高于正常对照组(P<0.000 1、P<0.001),而2个组之间单核细胞CD35 MFI差异无统计学意义(P>0.05)。细菌感染组CD35比值、CD35感染指数、CD11b比值、CD11b感染指数、CD64比值及CD64感染指数均明显高于正常对照组(P<0.000 1)。ROC曲线分析显示,CD35比值、CD11b比值和CD64比值诊断细菌感染的曲线下面积(AUC)差异无统计学意义(P>0.05);CD11b感染指数诊断细菌感染的AUC大于CD64感染指数(P<0.05),而CD35感染指数与CD64感染指数之间AUC差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CD35和CD11b可作为诊断细菌感染的新指标。 展开更多
关键词 补体受体 CD35 CD11B CD64 感染 白细胞 流式细胞术
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我国临床流式细胞术的应用现状和展望 被引量:7
5
作者 沈立松 王维维 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期329-331,共3页
目前流式细胞术(VCM)是先进的细胞定量分析技术之一,FCM在医学及其他科学领域有着广泛和深入的应用,涵盖了从基础研究到临床诊断的多个方面。随着科学技术的快速发展,近年来我国FCM的临床研究与应用取得了显著进展。
关键词 流式细胞术 免疫学 血液学 质量管理
不同流式细胞分析仪检测淋巴细胞亚群的比较研究 被引量:4
6
作者 王维维 奚迪 +1 位作者 沈立松 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期361-365,共5页
目的通过对淋巴细胞亚群百分比及绝对计数的检测,对比3种流式细胞仪(BriCyteE6、BDFACSCantoⅡ、Beckman Coulter FC500)在淋巴细胞亚群检测中的一致性和精密度。方法按照方法学对比的要求,将BriCyteE6与2种临床常用的流式细胞仪进... 目的通过对淋巴细胞亚群百分比及绝对计数的检测,对比3种流式细胞仪(BriCyteE6、BDFACSCantoⅡ、Beckman Coulter FC500)在淋巴细胞亚群检测中的一致性和精密度。方法按照方法学对比的要求,将BriCyteE6与2种临床常用的流式细胞仪进行比对。2015年7月连续5d随机收集上海交通大学医学院附属新华医院检验科抽取的新鲜肝素抗凝外周全血标本73份,其中来自男性40例,女性33例,4h内荧光抗体染色分析各淋巴细胞亚群的百分比及绝对计数值。结果在进行淋巴细胞亚群百分比(%)检测时,3种仪器之间均具有较好的一致性(R2〉0.95,R2值0.9695~0.9924);在进行淋巴细胞亚群绝对计数(#)检测时,3种仪器之间亦均具有较好的一致性(R2〉0.95,R。值0.9691—0.9933);评估精密度时发现,在CD8%、T#、CIM+T#和CD8+T#检测时,BriCyteE6的CV%更小,与BD FACSCantoⅡ和Beckman Coulter FC500进行比较,差异有统计学意义(Friedman统计值分别为16.720、11.840、15.760、15.430,相应的P值分别为0.0002、0.027、0.0004、0.0004),而在检测T%、CIM%、NK%、B%、NK#、B#时,在3种仪器间CV%差异无统计学意义(Friedman统计值分别为4.242、3.916、0.852、2.595、1.855、0.578,P值分别为0.1199、0.1412、0.6532、0.2733、0.3996、0.7490),精密度具有一致性。结论3种仪器在淋巴细胞亚群检测时具有较好的一致性,BriCyteE6流式细胞仪或许可以作为现有流式细胞仪的替代或补充。 展开更多
关键词 流式细胞术 对比研究 淋巴细胞亚群 诊断设备
流式细胞术快速测定红细胞渗透脆性的应用 预览 被引量:2
7
作者 王维维 +1 位作者 费奇力 沈立松 《检验医学》 CAS 2016年第10期911-916,共6页
目的建立流式细胞术快速检测红细胞渗透脆性的方法,评估流式细胞仪测定红细胞渗透脆性的可能性。方法收集30例抗凝外周血,每例标本均一分为二,1份在采集2 h内检测(正常对照组),另1份经37℃孵育24 h(阳性对照组);另收集3例临床确诊... 目的建立流式细胞术快速检测红细胞渗透脆性的方法,评估流式细胞仪测定红细胞渗透脆性的可能性。方法收集30例抗凝外周血,每例标本均一分为二,1份在采集2 h内检测(正常对照组),另1份经37℃孵育24 h(阳性对照组);另收集3例临床确诊的遗传性球形红细胞增多症患者作为疾病组。分别使用流式细胞术检测各组红细胞渗透脆性。通过流式细胞术测定红细胞残留百分比确定生理盐水和无菌水最佳体积比,确定乙二胺四乙酸(EDTA)和肝素2种抗凝剂对其的影响。另收集14例肝素抗凝标本,同时采用改良Sanford法和流式细胞术测定红细胞残留百分比,对比评价流式细胞术和改良Sanford法测定红细胞渗透脆性的特点。结果采用流式细胞术检测正常对照组的红细胞残留百分比为72.03%±5.68%,明显高于阳性对照组(46.47%±15.83%,P〈0.05);疾病组红细胞残留百分比为5.76%±3.54%,明显低于正常对照组(P〈0.001)。当生理盐水和无菌水体积比为1.2∶0.8时,正常对照组和阳性对照组红细胞残留百分比差异最大(P〈0.05);与EDTA抗凝剂比较,肝素抗凝的外周血更适合于红细胞渗透脆性检测。流式细胞术与改良Sanford法测定红细胞渗透脆性有较好的一致性,但流式细胞术敏感性更高。结论流式细胞术测定红细胞渗透脆性具有操作简便、敏感性更好等特点,有实际应用的可行性。 展开更多
关键词 红细胞渗透脆性 流式细胞术 Sanford法
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112例恶性实体肿瘤患儿的淋巴细胞谱及化疗后改变分析 预览 被引量:1
8
作者 谈珍 晓军 +3 位作者 张勤 盛琦 何珂骏 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期728-732,共5页
目的探讨恶性实体肿瘤患儿的总淋巴细胞、淋巴细胞亚群绝对计数及相对比例,并观察化疗对其影响。方法回顾性分析112例初诊恶性实体肿瘤患儿资料,在首次及第二轮化疗开始前采集患儿外周静脉血,检测血常规、免疫球蛋白、淋巴细胞亚群分型... 目的探讨恶性实体肿瘤患儿的总淋巴细胞、淋巴细胞亚群绝对计数及相对比例,并观察化疗对其影响。方法回顾性分析112例初诊恶性实体肿瘤患儿资料,在首次及第二轮化疗开始前采集患儿外周静脉血,检测血常规、免疫球蛋白、淋巴细胞亚群分型及绝对数量。结果实体瘤患儿初发时出现各种类型的淋巴细胞低下,最多的表现为CD8+T淋巴细胞数量低下(36.3%),其次是CD4+淋巴细胞减少(31.1%);在不同种类实体瘤患儿之间进行比较,差异无统计学意义(P=0.08)。与淋巴数值正常的患儿比较,初始淋巴细胞下降的儿童化疗后易于发生严重感染(19.1%与5.9%,P〈0.01),主要是神经母细胞瘤患儿中差异显著(23.9%与6.4%,P〈0.01)。实体瘤患儿化疗后淋巴细胞数目显著降低,尤其是CD4+及CD19+淋巴细胞(P〈0.01),CD4/CD8比值下降显著(P〈0.01)。结论与健康儿童相比,实体瘤患儿淋巴细胞低下的比例较高;第一轮化疗即可导致患儿淋巴细胞计数显著下降,化疗对B淋巴细胞及CD4+淋巴细胞杀伤明显,对体液免疫的影响较早出现。重视辅助淋巴细胞增殖和体液免疫的补充可能有助于减少化疗后感染。 展开更多
关键词 化疗 儿童 恶性实体瘤 免疫功能
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乙型肝炎患者外周血各淋巴细胞亚群绝对值的变化及临床意义 预览 被引量:2
9
作者 王维维 陈惠 +7 位作者 王娟娟 费奇力 陈谨 刘宏景 荣婷婷 李美星 沈立松 《检验医学与临床》 CAS 2015年第6期723-726,共4页
目的分析乙型肝炎患者外周血各淋巴细胞亚群的绝对值的变化,以评估乙型肝炎患者机体的免疫水平。方法选取2012年6月至2014年8月在上海交通大学医学院附属新华医院就诊的109例乙型肝炎肝患者作为乙型肝炎组,另选取20例同期体检健康者作... 目的分析乙型肝炎患者外周血各淋巴细胞亚群的绝对值的变化,以评估乙型肝炎患者机体的免疫水平。方法选取2012年6月至2014年8月在上海交通大学医学院附属新华医院就诊的109例乙型肝炎肝患者作为乙型肝炎组,另选取20例同期体检健康者作为健康对照组。采集所有研究对象的促凝和肝素抗凝外周血,临床检测乙型肝炎病毒(HBV)抗原抗体免疫指标,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测HBV-DNA载量,采用流式细胞术检测其外周血各淋巴细胞亚群的百分比与绝对值。并根据乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达水平及HBVDNA载量将患者分为HBeAg阳性组与阴性组,以及HBV-DNA阳性组与阴性组,比较外周血各淋巴细胞亚群绝对值。结果乙型肝炎患者外周血CD3^+T细胞、CD4^+T辅助细胞(CD4^+Th细胞)、CD8^+杀伤性T细胞(CD8^+Tc细胞)、CD19^+B细胞绝对数均低于健康对照组(P〈0.05),组间CD3-CD16^+CD56^+自然杀伤性细胞(NK细胞)绝对数比较差异无统计学意义(P〉0.05)。HBeAg阴性患者外周血CD3^+T、CD4^+Th、CD8^+Tc及CD19^+B细胞绝对值均低于HBeAg阳性患者(P〈0.05),但CD3-CD16^+CD56^+NK细胞绝对值比较差异无统计学意义(P〉0.05);HBV-DNA阳性患者CD4^+Th细胞绝对值低于HBV-DNA阴性患者(P〈0.01),其余各淋巴细胞亚群的绝对值比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论乙型肝炎患者外周血淋巴细胞绝对数量的变化可提示其免疫功能的紊乱。 展开更多
关键词 乙型肝炎 淋巴细胞亚群绝对数 细胞免疫 流式细胞术
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标本前处理因素对流式细胞术检测淋巴细胞亚群的影响 被引量:3
10
作者 费奇力 王维维 +1 位作者 张良 《诊断学理论与实践》 2014年第3期325-328,共4页
目的:探讨抗凝剂、保存时间和保存温度等分析前因素对流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的影响。方法:随机采集健康人全血10份,分别用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)和肝素钠2种抗凝剂抗凝,4℃及室温(18℃-22℃)保存,在不同时间点(〈... 目的:探讨抗凝剂、保存时间和保存温度等分析前因素对流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的影响。方法:随机采集健康人全血10份,分别用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)和肝素钠2种抗凝剂抗凝,4℃及室温(18℃-22℃)保存,在不同时间点(〈4 h、24 h及48 h)分别使用荧光抗体标记,用流式细胞术检测CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+辅助性T细胞、CD3+CD8+杀伤性T细胞、CD19+B淋巴细胞及CD16+CD56+NK细胞占淋巴细胞的百分比,并采用荧光微球进行各淋巴细胞亚群的绝对计数。结果:与2种抗凝剂各自的室温条件下4 h内检测结果相比较,在肝素抗凝剂组中4℃保存至48 h,CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞的绝对计数显著降低(P〈0.05);肝素抗凝血与EDTA-K2抗凝血间在4℃及室温保存至24 h及48 h的淋巴细胞亚群百分比差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论:在检测总淋巴细胞亚群比例及绝对计数时,肝素钠抗凝的全血标本应保存在室温下,并在48 h内完成检测;EDTA-K2抗凝全血标本则可在4℃及室温下保存,在48 h内完成检测。 展开更多
关键词 流式细胞术 淋巴细胞亚群 分析前因素 抗凝剂
急性心肌梗死患者不同血清白介素6水平对心肌损伤的预测价值 预览 被引量:2
11
作者 马妍慧 邓琳 +4 位作者 徐苓 李莉 沈立松 徐伟平 《中华临床实验室管理电子杂志》 2014年第2期36-41,共6页
目的探讨急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者不同血清白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平对心肌损伤的预测作用。方法采用临床病例对照诊断研究设计。收集2012年11月至2013年5月在上海新华医院急诊科或心内科就诊... 目的探讨急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者不同血清白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平对心肌损伤的预测作用。方法采用临床病例对照诊断研究设计。收集2012年11月至2013年5月在上海新华医院急诊科或心内科就诊的AMI患者54例,健康体检者20名。采用ELISA检测AMI患者发病24 h内血清IL-6和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)含量,采用流式细胞术检测健康人和AMI患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和Th17比例。随机选取AMI患者中IL-6+(IL-6≥10 ng/L)和IL-6-(IL-6〈10 ng/L)的各10例患者血清标本,应用Luminex方法检测19种细胞因子,同时分析临床生化指标。采用F检验验证数据方差齐性,正态分布数据组间比较采用t检验或方差分析,非正态分布数据采用秩和检验。结果与健康对照组相比,高敏C反应蛋白(high sensitivity C reactive protein,hs-CRP)和肌酸激脢(creatine kinase-MB,CK-MB)在两组AMI中均增高,差异有统计学意义,并且IL-6+组显著高于IL-6组[hs-CRP:8.43(1.28-10.75)μg/L vs 0.55(0.15-1.35)μg/L,Z=27.3,P〈0.05;CK-MB:25.0(14.0-66.0)μg/L vs11.5(8.8-17.0)μg/L,U=217,P〈0.05]。IL-17、TGF-β、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和Th17细胞比例在IL-6+和IL-6-AMI两组中均高于健康对照组,但差异无统计学意义。IL-6+和IL-6-AMI患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例均低于健康对照组,两组间比较无统计学差异。结论 IL-6+AMI患者表现出更严重的心肌损伤(以TNI为指标)和炎症反应(hs-CRP、IL-10和IL-8为指标),IL-6或许可用于AMI风险分层。 展开更多
关键词 急性心肌梗死 白细胞介素6 细胞因子
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实验性肝纤维化大鼠脂联素及其受体2的表达 预览 被引量:1
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作者 沈晟晖 殷于磊 《临床和实验医学杂志》 2012年第13期999-1001,共3页
目的探讨血清脂联素蛋白(APN)及肝脏脂联素受体2 mRNA的表达在实验性大鼠肝纤维化形成和发展中的作用。方法将SD大鼠随机分为对照组与模型组,两组大鼠腹部皮下分别注射100%橄榄油和40%CCl4-橄榄油溶液,每周2次,共10周,于第2、6、10周... 目的探讨血清脂联素蛋白(APN)及肝脏脂联素受体2 mRNA的表达在实验性大鼠肝纤维化形成和发展中的作用。方法将SD大鼠随机分为对照组与模型组,两组大鼠腹部皮下分别注射100%橄榄油和40%CCl4-橄榄油溶液,每周2次,共10周,于第2、6、10周末分批取材,分别抽取各大鼠的血液及切取各实验大鼠的肝脏标本,以ELISA法测定大鼠APN蛋白表达情况,RT-PCR法检测肝中脂联素受体2 mRNA的表达,常规石蜡切片HE染色观察各实验大鼠肝脏形态学改变。结果模型组大鼠APN水平随造模时间延长逐步降低,同时脂联素受体2 mRNA表达同步下降,各时间点模型组与正常对照组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 APN水平及肝脏脂联素受体表达异常可能在肝纤维化的形成和发展中起一定作用。 展开更多
关键词 肝纤维化 脂联素 脂联素受体2
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脂多糖对人胃癌细胞环氧化酶-2基因启动子活性的影响 预览 被引量:1
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作者 徐苓 马妍慧 +1 位作者 沈立松 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 283-287,335,共6页
目的研究炎症状态下人胃癌细胞中环氧化酶-2(COX-2)基因启动子活性。方法采用免疫组织化学染色方法观察人胃癌组织中COX-2的表达情况。构建人COX-2基因启动子重组质粒pGL3-COX-2-promoter,采用脂质体介导转染法将重组质粒和内参质粒pR... 目的研究炎症状态下人胃癌细胞中环氧化酶-2(COX-2)基因启动子活性。方法采用免疫组织化学染色方法观察人胃癌组织中COX-2的表达情况。构建人COX-2基因启动子重组质粒pGL3-COX-2-promoter,采用脂质体介导转染法将重组质粒和内参质粒pRL-TK共转染胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823。以不同质量浓度的脂多糖(LPS)工作液刺激细胞,于干预后不同时间点收集细胞,利用双荧光报告系统进行双荧光素酶报告基因活性检测,Western blotting检测COX-2蛋白的表达。结果免疫组织化学染色观察发现,胃癌癌细胞胞质及癌旁黏膜上皮细胞的胞质中均有COX-2蛋白表达。在相同时间点,SGC-7901和BGC-823内COX-2基因启动子活性随LPS质量浓度的上升而增高(P〈0.05);高浓度(10μg/mL)LPS刺激6 h后COX-2基因启动子活性达到峰值,随后逐渐降低(P〈0.05)。Western blotting检测结果显示:在10μg/mL LPS干预下,SGC-7901和BGC-823内COX-2蛋白表达随LPS干预时间的延长而呈现上升趋势。结论炎症刺激可激活人胃癌细胞COX-2基因启动子的表达活性。 展开更多
关键词 胃癌 环氧化酶-2 启动子 双荧光素酶报告基因 脂多糖
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凝溶胶蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义 预览 被引量:2
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作者 李俊华 沈立松 《实用癌症杂志》 2012年第6期551-554,558共5页
目的探讨凝溶胶蛋白(gelsolin,GSN)在胃癌和癌旁组织中的表达及与其临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法,检测28例胃癌组织中GSN表达情况。采用蛋白印迹法,检测12例胃癌组织及其对应癌旁组织中GSN表达情况。结果 GSN表达与胃癌肿... 目的探讨凝溶胶蛋白(gelsolin,GSN)在胃癌和癌旁组织中的表达及与其临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法,检测28例胃癌组织中GSN表达情况。采用蛋白印迹法,检测12例胃癌组织及其对应癌旁组织中GSN表达情况。结果 GSN表达与胃癌肿瘤分化程度、TNM分期、浸润程度、淋巴结有无转移密切相关(P〈0.05)。中低分化肿瘤GSN表达水平明显低于高分化肿瘤,晚期胃癌(Ⅲ+Ⅳ)中GSN表达水平明显低于早期胃癌(Ⅰ+Ⅱ),淋巴结转移患者GSN表达水平明显低于无淋巴结转移患者。结论胃癌组织中GSN表达水平明显下降,并随肿瘤进展及分化程度降低而下降,GSN在胃癌发生发展中可能起抑制作用。 展开更多
关键词 胃癌 凝溶胶蛋白 抑癌基因
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叉头蛋白3在不同分期胃癌组织中的表达
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作者 赵燕 马妍慧 +3 位作者 李美星 谢国化 沈立松 《内科理论与实践》 2011年第3期221-224,共4页
目的:探讨叉头蛋白3(FoxP3)在胃癌患者病理组织切片中的表达模式。方法:用免疫组化方法对56例不同TNM分期的胃癌患者病理组织进行染色,同时取其中30例患者的正常胃组织作阴性对照,观察FoxP3在胃癌组织中的表达情况,并探讨其表达与... 目的:探讨叉头蛋白3(FoxP3)在胃癌患者病理组织切片中的表达模式。方法:用免疫组化方法对56例不同TNM分期的胃癌患者病理组织进行染色,同时取其中30例患者的正常胃组织作阴性对照,观察FoxP3在胃癌组织中的表达情况,并探讨其表达与患者的性别、年龄、肿瘤TNM分期和转移的关系。结果:胃癌细胞表达FoxP3蛋白,并且主要分布于胃癌细胞的细胞核,少数分布于胞浆区;FoxP3蛋白在胃癌患者中的阳性表达率为68%(38/56),明显高于正常胃组织的23%(7/30),差异具有统计学意义(P〈0.05);在有淋巴结转移和无淋巴结转移患者的阳性表达率分别是90%(28/31)和40%(10/25),两者的差异具有统计学意义(P〈0.05);FoxP3蛋白表达的阳性率与年龄、性别无关,差异无统计学意义(P〉0.05);Ⅲ期、Ⅳ期患者FoxP3表达阳性率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期,同时表达量随着TNM分期增高表达逐渐增多,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论:高表达的FoxP3可能导致胃癌细胞免疫逃逸参与胃癌的发生、发展过程。 展开更多
关键词 叉头蛋白3 调节性T细胞 免疫逃逸 胃癌
胃癌患者腹水中CEA、CD44的含量测定及临床意义 预览 被引量:2
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作者 陈磊 陶怡菁 +3 位作者 吕文杰 刘颖斌 毕建威 《浙江临床医学》 2011年第8期 856-858,共3页
目的 通过检测胃癌患者腹水中CEA、CD44的表达量,分析其与预后的关系。方法收集107例胃癌根治术患者的腹水标本,经real—timePCR定量测定CEA、CD40基因的表达情况,数据采用2-△△CT法处理。结果经过9~55个月随访,107例胃癌患者中1... 目的 通过检测胃癌患者腹水中CEA、CD44的表达量,分析其与预后的关系。方法收集107例胃癌根治术患者的腹水标本,经real—timePCR定量测定CEA、CD40基因的表达情况,数据采用2-△△CT法处理。结果经过9~55个月随访,107例胃癌患者中19例发生了不同程度的远处转移。CD44基因的表达含量与术后远处转移密切相关(P〈0.01),而CEA基因的表达与肿瘤的分期密切相关(F=0.83,P〈0.01)。结论胃癌腹水中CEA的含量能够证实肿瘤分期,而CD44的含量能够预测肿瘤的转移可能性,因此胃癌患者腹水中CEA、CD44的表达对肿瘤的预后有预测作用。 展开更多
关键词 胃癌 腹水 real—time PCR预后
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CD3高表达T淋巴细胞的表型特征及其在胃癌中的临床意义 被引量:2
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作者 张通通 沈立松 《诊断学理论与实践》 2011年第3期239-242,共4页
目的:通过分析CD3高表达(CD3bright)T淋巴细胞(T细胞)群的表型特征,研究其在胃癌患者外周血中的数量变化,并探讨其在胃癌中的临床意义。方法:应用多参数流式细胞仪检测30例胃癌患者与35名健康对照者(健康对照组)外周血CD3、CD4... 目的:通过分析CD3高表达(CD3bright)T淋巴细胞(T细胞)群的表型特征,研究其在胃癌患者外周血中的数量变化,并探讨其在胃癌中的临床意义。方法:应用多参数流式细胞仪检测30例胃癌患者与35名健康对照者(健康对照组)外周血CD3、CD4、CD8、T淋巴细胞抗原受体αβ(TCRαβ)、T淋巴细胞抗原受体γδ(TCRγδ)的表达特征,检测CD3brightT细胞占T细胞的百分率,分析其与TCRγδ+T淋巴细胞间的关系。结果:临床检验中发现一群CD3brightT细胞,将其定义为CD3bright T细胞。该群细胞主要表达TCRγδ,且表型以CD4-CD8-为主,少部分表型为CD4-CD8+;CD3bright T细胞数与TCRγδ+T细胞数间显著相关(r=0.912,P〈0.05)。胃癌患者的CD3bright T细胞占T细胞百分率[(3.46±1.65)%]低于健康对照组[(6.01±3.70)%],差异有统计学意义(P〈0.05)。胃癌晚期(TNMⅣ期)患者外周血中CD3brightT细胞占T细胞百分率为(3.23±1.13)%(n=12),有低于TNMⅠ~Ⅲ期胃癌患者[(3.98±1.74)%(n=18)]的趋势,但差异尚无统计学意义(P〉0.05)。结论:CD3brightT细胞主要为TCRγδ+T细胞,且其在胃癌患者外周血中占T细胞百分率降低,可能参与了胃癌的发生、发展。 展开更多
关键词 胃癌 CD3brightT淋巴细胞 表型 机制
胃癌微环境Treg发挥免疫抑制作用机制的初步研究 被引量:3
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作者 张通通 +4 位作者 李美星 马妍慧 谢国化 赵燕 沈立松 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期403-407,共5页
初步探讨胃癌中异常增高的调节性T细胞(Treg)发挥免疫抑制的作用机制。利用多参数流式细胞术检测胃癌肿瘤局部CD4+CD25+Foxp3+Treg的Foxp3和环氧合酶2(COX-2)表达强度。CFSE增殖实验检测不同Foxp3表达强度的Treg对效应性T细胞的... 初步探讨胃癌中异常增高的调节性T细胞(Treg)发挥免疫抑制的作用机制。利用多参数流式细胞术检测胃癌肿瘤局部CD4+CD25+Foxp3+Treg的Foxp3和环氧合酶2(COX-2)表达强度。CFSE增殖实验检测不同Foxp3表达强度的Treg对效应性T细胞的增殖抑制作用。在Treg与效应性T细胞共培养体系中加入COX-2抑制剂和前列腺素E2(PGE2)拮抗剂,观察PGE2的分泌水平以及Treg其对效应性T细胞的增殖抑制。结果发现,癌旁淋巴结和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中Treg的Foxp3表达强度显著高于外周血(P〈0.05);高表达Foxp3的Treg具有更强的抑制活性(P〈0.05)。胃癌微环境中TregCOX-2表达强度与Foxp3表达强度显著相关(r=0.675,P〈0.05)。应用COX抑制剂处理发现能阻断Treg分泌PGE2,COX抑制剂和PGE2拮抗剂均能降低Treg对效应T细胞增殖的抑制作用(P〈0.05)。这表明胃癌局部高表达Foxp3的Treg具有较强的免疫抑制活性,COX-2-PGE2-EP2/EP4通路可能为胃癌微环境中Treg抑制效应T细胞增殖的机制之一。 展开更多
关键词 TREG 胃癌 FOXP3 免疫抑制
CD4^+Foxp3^+T淋巴细胞新功能亚群在系统性红斑狼疮中的分布和意义 预览 被引量:1
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作者 潘秀军 +2 位作者 单剑萍 林芙君 沈立松 《诊断学理论与实践》 2010年第4期 311-315,共5页
目的:检测人外周血CD4+Foxp3+T淋巴细胞新的功能亚群,并分析其与系统性红斑狼疮(SLE)的关系。方法:以Foxp3-FITC、CD45RA-PE、CD3-ECD、CD4-PC7、CD25-PC5抗体组合采用五色流式细胞仪检测21例活动期SLE患者和22例健康体检者(正... 目的:检测人外周血CD4+Foxp3+T淋巴细胞新的功能亚群,并分析其与系统性红斑狼疮(SLE)的关系。方法:以Foxp3-FITC、CD45RA-PE、CD3-ECD、CD4-PC7、CD25-PC5抗体组合采用五色流式细胞仪检测21例活动期SLE患者和22例健康体检者(正常对照组)外周血CD4+Foxp3+T淋巴细胞亚群。根据CD45RA和Foxp3的不同表达强度将CD4+Foxp3+T淋巴细胞亚群划分为3个不同的细胞亚群,并统计分析其在SLE中的分布情况。结果:根据Foxp3表达强度和CD45RA的表达差异可将CD4+Foxp3+T淋巴细胞分成3个亚群,CD45RA+Foxp3low(Ⅰ区)、CD45RA-Foxp3high(Ⅱ区)和CD45RA-Foxp3low(Ⅲ区)。SLE患者CD4+Foxp3+T淋巴细胞占CD4+T细胞的百分率为(9.805±5.331)%,高于正常对照组(5.717±2.689)%(P〈0.01),其中主要是CD45RA-Foxp3low(Ⅲ区)细胞较正常对照组增多[(6.848±4.625)%比(4.013±2.246)%,P〈0.05],而CD45RA+Foxp3low(Ⅰ区)和CD45RA-Foxp3high(Ⅱ区)细胞与正常对照组比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。SLE患者Foxp3mRNA水平较正常对照组有轻度升高趋势,但差异无统计学意义(P〉0.05)。用CD45RA+Foxp3low(Ⅰ区)和CD45RA-Foxp3high(Ⅱ区)细胞来界定SLE患者的Treg细胞,其比率与对照组比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:人外周血CD4+Foxp3+T细胞具有异质性,利用流式细胞仪结合CD45RA和Foxp3的不同表达强度,能清晰区分CD4+Foxp3+T细胞的3个不同表型的功能亚群。对CD4+Foxp3+T细胞的准确划分对于评价SLE等疾病中Treg细胞的分化、功能具有重要意义。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 T淋巴细胞 CD45RA
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HPLC法测定血清甲氨蝶呤浓度的方法建立及其与荧光偏振法的比较 预览 被引量:11
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作者 许耘川 沈立松 《检验医学》 CAS 北大核心 2010年第9期 701-704,共4页
目的建立测定血清甲氨蝶呤(MTX)浓度的高效液相色谱(HPLC)法,并与荧光偏振法(FPIA)作比较,评价其临床实用性。方法血清样本经20%高氯酸沉淀蛋白质,吸取上清液进行HPLC分析。以MTX标准品外标法建立标准曲线,检测62例用药后患者血清... 目的建立测定血清甲氨蝶呤(MTX)浓度的高效液相色谱(HPLC)法,并与荧光偏振法(FPIA)作比较,评价其临床实用性。方法血清样本经20%高氯酸沉淀蛋白质,吸取上清液进行HPLC分析。以MTX标准品外标法建立标准曲线,检测62例用药后患者血清MTX浓度,同时以FPIA测定。结果 HPLC法在0.049~25 ng/L内线性关系良好,日内及日间相对标准偏差(RSD)均〈6%,最低检测浓度为0.025 ng/L。HPLC法和FPIA具有良好的相关性(r=0.973,P〈0.01),2种方法测定值的差异无统计学意义(P=0.705)。结论 HPLC法具有便捷、准确、成本低等特点,与FPIA相关性良好,适用于临床MTX的血药浓度监测。 展开更多
关键词 甲氨蝶呤 高效液相色谱法 荧光偏振法 治疗药物浓度监测
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