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全自动血型分析仪在无偿献血者不规则抗体筛查中的应用价值 预览
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作者 吕豪 吴少云 +5 位作者 郑建勋 王峰 刘珍珍 王月霞 余占娟 《中国乡村医药》 2018年第20期45-46,共2页
目的全自动血型分析仪在无偿献血者的不规则抗体筛选中的应用价值。方法2016年1—6月利用全自动血型分析仪筛查献血者5792人不规则抗体,对阳性或可疑标本行抗体鉴定。结果血型仪抗体筛选标本中抗筛阳性33例(0.6%),其中试管法抗体鉴... 目的全自动血型分析仪在无偿献血者的不规则抗体筛选中的应用价值。方法2016年1—6月利用全自动血型分析仪筛查献血者5792人不规则抗体,对阳性或可疑标本行抗体鉴定。结果血型仪抗体筛选标本中抗筛阳性33例(0.6%),其中试管法抗体鉴定中含同种抗体25人(75.8%,IgM类16人,IgG类7人,IgM类+IgG类2人,抗体效价1~32),复查阴性4人(12.1%),血浆蛋白干扰或单纯的冷凝集4人(12.1%)。结论全自动血型分析仪能检出IgM和IgG类抗体,灵敏度高,结果可保存和追溯,能增强输血安全性。 展开更多
关键词 全自动血型分析 不规则抗体 抗体筛选 输血反应
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一例B糖基转移酶基因缺失导致Bel变异型的分子机制
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作者 应燕玲 洪小珍 +5 位作者 陈舒 马开荣 蓝小飞 何吉 朱发明 《中华医学遗传学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期423-426,共4页
目的探讨1例ABO血型Bel变异型的分子机制。方法血清学方法检测样本的红细胞和血清;用PCR扩增其ABO基因的全部外显子及侧翼的内含子序列,并进行双向测序。通过克隆进行单体型分析,并模建分析其糖基转移酶的三维结构。结果吸收放散实... 目的探讨1例ABO血型Bel变异型的分子机制。方法血清学方法检测样本的红细胞和血清;用PCR扩增其ABO基因的全部外显子及侧翼的内含子序列,并进行双向测序。通过克隆进行单体型分析,并模建分析其糖基转移酶的三维结构。结果吸收放散实验检出样本红细胞上有表达极弱的B抗原,血清学表现为Bel。直接测序分析发现ABO基因第6外显子261del/G杂合,第7外显子297A/G、484del/G、526c/G、657C/T、703G/A、796C/A、803G/C、930G/A杂合。单倍型克隆测序发现有1个O01等位基因和1个新的B等位基因。与B101参考序列相比,新的B等位基因序列中存在484delG,并被红细胞血型抗原基因突变数据库(dRBC NCBI)命名为B120。484delG可导致B糖基转移酶阅读框发生改变而提前终止,三维结构分析显示其蛋白仅保留部分N端结构区域,为不完整的转移酶蛋白。结论B转移酶基因第484位缺失G可引起酶活性缺失或显著减弱,从而导致Bel表型。 展开更多
关键词 Bel变异型 ABO基因 缺失突变
血小板抗原与抗体的研究及其应用
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作者 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2016年第6期466-470,共5页
血小板抗原与抗体的研究,在各类免疫性血小板减少症的诊断和治疗中具有重要作用。与红细胞血型遗传和免疫血液学技术相比,血小板抗原、抗体的基础研究和免疫检测技术相对落后,尤其是国内,在新的种族特异性血小板抗原的发现、血小板... 血小板抗原与抗体的研究,在各类免疫性血小板减少症的诊断和治疗中具有重要作用。与红细胞血型遗传和免疫血液学技术相比,血小板抗原、抗体的基础研究和免疫检测技术相对落后,尤其是国内,在新的种族特异性血小板抗原的发现、血小板抗体特异性鉴定、血小板输注同种免疫问题等方面,亟需加大研究力度,以推动我国血小板免疫学研究和临床应用的发展。 展开更多
关键词 抗原 人血小板 抗体 输血
一例ABO血型系统Aw43亚型的基因突变研究
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作者 邓丹菲 卢根杰 +3 位作者 洪小珍 何吉 朱发明 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期833-836,共4页
目的研究1例AB0血型A亚型的分子机制。方法先证者及其家系成员(父母和姐姐)的AB0血型正反定型采用标准血清学技术。用PCR扩增先证者及其家系成员ABO基因的全部编码序列并进行双向测序分析。结果先证者红细胞与抗A呈现混合视野凝集,与... 目的研究1例AB0血型A亚型的分子机制。方法先证者及其家系成员(父母和姐姐)的AB0血型正反定型采用标准血清学技术。用PCR扩增先证者及其家系成员ABO基因的全部编码序列并进行双向测序分析。结果先证者红细胞与抗A呈现混合视野凝集,与抗B不凝集;其血清与A、0细胞均不凝集,与B细胞呈现凝集,血清学特性可定义为Aw亚型。ABO基因测序分析显示先证者1A/G、106G/T、188A/G、189C/T、220C/T、261G/del、297A/G、467C/T、646A/T、681A/G杂合。家系调查显示其母亲血清学表型特性和测序结果与先证者完全一致,其父亲基因型为B10I/002、姐姐为002/002。结合家系成员结果,可推断先证者AB0基因型中一个等位基因为002,另一个等位基因为新等位基因;它与A102相比存在1A>G,导致起始密码子改变,已被红细胞血型基因数据库正式命名为Aw43。结论发现1例Aw43亚型,其α-1,3-N-乙酰半乳糖胺转移酶基因存在1A>G和467C>T变异。 展开更多
关键词 ABO血型系统 Aw亚型 α-1 3-N-乙酰半乳糖胺转移酶 ABO基因型
人血小板膜糖蛋白ITGB3基因终止突变C.1476G〉A的体外表达研究
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作者 刘瑛 +5 位作者 陈舒 洪小珍 陶苏丹 何吉 朱发明 吕杭军 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期17-21,共5页
目的对ITGB3基因新的终止突变c.1476G〉A进行体外表达研究,以阐明其功能。方法应用体外定点诱变技术构建突变型ITGB3e.1476G〉AcDNA的真核表达载体,转化感受态细胞,提取质粒后测序验证。采用非脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢... 目的对ITGB3基因新的终止突变c.1476G〉A进行体外表达研究,以阐明其功能。方法应用体外定点诱变技术构建突变型ITGB3e.1476G〉AcDNA的真核表达载体,转化感受态细胞,提取质粒后测序验证。采用非脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢癌细胞株(Chinesehamsterovariancancer,CHO)细胞,经G418筛选获取稳定表达细胞株。采用实时荧光定量PCR、Western印迹和流式细胞术分别检测CHO稳定表达株ITGB3基因的mRNA表达和血小板膜糖蛋白llIa(glycoproteinIIIa,GPⅢa)糖蛋白水平。结果成功构建野生型和突变型ITGB3cDNA的真核表达载体,转染筛选后分别获得了稳定表达的CHO细胞株。突变型细胞株中CD61抗原表达量仅为野生型的37%,而ITGB3mRNA转录水平为野生型的6%。Western印迹结果显示,野生型细胞株稳定表达完整的GPⅢa蛋白,而突变型CHO细胞株无完整的GPⅢa蛋白表达。结论ITGB3c.1476G〉A终止突变可导致ITGB3基因的转录水平降低,影响GPⅢa蛋白合成及CD61抗原的表达水平。 展开更多
关键词 ITGB3基因 血小板膜糖蛋白HIa 终止突变 体外表达
PIPk血型系统中一例罕见P表型的分子遗传机制研究
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作者 马开荣 蓝小飞 +7 位作者 洪小珍 陈舒 刘瑛 应燕玲 何吉 朱发明 吕杭军 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期250-253,共4页
目的分析P1Pk血型系统中1例罕见P表型的分子遗传机制。方法采用血清学方法鉴定先证者及其5个容系成员红细胞血型抗原和血清中的抗体。PCR扩增编码P1Pk的a1,4半乳糖基转移酶基因(a1,4-galactosyltransferase,A4GALD编码区及侧翼非翻... 目的分析P1Pk血型系统中1例罕见P表型的分子遗传机制。方法采用血清学方法鉴定先证者及其5个容系成员红细胞血型抗原和血清中的抗体。PCR扩增编码P1Pk的a1,4半乳糖基转移酶基因(a1,4-galactosyltransferase,A4GALD编码区及侧翼非翻译区后进行测序分析,并通过克隆测序法鉴定先证者父母A4GALT基因单体型。结果血清学实验证实先证者为罕见的P表型,其血清中含有抗-Tja抗体,而家系成员为常见的P2表型。DNA测序显示,先证者的A4GALT基因编码区存在1026-1029insC纯合突变,该处C碱基的插入可引起多肽链的移码突变,导致变异型a1,4半乳糖基转移酶比野生型多92个氨基酸残基;而其他家系成员在A4GALT基因该位点均为杂合性插入或野生型。结论在中国人群中发现因A4GALT基因1026-1029insC导致的P表型,该表型携带有抗-Tja抗体。 展开更多
关键词 P1Pk血型系统 p表型 AL 4半乳糖基转移酶 A4GALT基因
2-Me处理IgM抗体后IgG抗体效价检测的室内质控初步研究 预览 被引量:2
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作者 吴敏慧 刘衍春 +7 位作者 刘毅 郑凌 向东 王健莲 刘曦 何吉 洪小珍 《临床输血与检验》 CAS 2015年第6期526-528,共3页
目的研究一种室内质控的方法,观察2-Me处理Ig M抗体后Ig G抗体检测的效果。方法将86例O型Rh D阳性孕妇的每份标本分为2份,分成实验组(加质控品)和对照组(不加质控品),在实验组中每份加入10%自制的含一定比例的Ig M和Ig G抗-D;对照... 目的研究一种室内质控的方法,观察2-Me处理Ig M抗体后Ig G抗体检测的效果。方法将86例O型Rh D阳性孕妇的每份标本分为2份,分成实验组(加质控品)和对照组(不加质控品),在实验组中每份加入10%自制的含一定比例的Ig M和Ig G抗-D;对照组即为常规待检标本,两组标本经2-Me处理Ig M抗体后,用抗人球的方法,分别检测Ig G抗-A或抗-B效价以及Ig G抗-D效价。结果实验组的Ig G抗-D效价在1∶2(弱阳性)。实验组Ig G抗-A或/B效价检测结果的差异无统计学意义(P〉0.05)。结论在实验组的待检标本中加入10%质控品试剂,检测Ig G抗-A或抗-B效价中,增加检测Ig G抗-D效价,可以直接指示2-Me处理Ig M抗体后的效果,且不影响Ig G抗-A或抗-B抗体效价检测的效果。 展开更多
关键词 抗体效价 2-ME 室内质控
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重组表达糖蛋白GPIIIa片段偶联荧光微球分析人血小板抗原-1系统同种抗体 预览 被引量:2
8
作者 刘瑛 +7 位作者 陈舒 洪小珍 陶苏丹 马开荣 蓝小飞 何吉 朱发明 吕杭军 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1386-1390,共5页
目的:应用偶联血小板GPIIIa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体。方法:以倍比稀释成12个浓度(原液~1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度。以8份抗HPA-1a/b... 目的:应用偶联血小板GPIIIa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体。方法:以倍比稀释成12个浓度(原液~1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度。以8份抗HPA-1a/b阴、阳性对照,36份WHO血小板抗体质控盲样,评估流式荧光微球技术检测抗HPA-1a和-1b的特异性。结果:MAIPA检测抗HPA-1a的灵敏度为滴度1/64(抗体浓度1.56 IU/ml),流式荧光微球检测的灵敏度远高于滴度1/2048(抗体浓度0.049 IU/ml)。微球分析法能特异性鉴别抗HPA-1a和-1b阴、阳性对照。36份盲样中,有1份样本,在高浓度对偶抗体的影响下,产生抗HPA-1b假阳性结果。其余样本的微球分析结果与预期结果相符,能准确检出抗HPA-1a和-1b抗体,而且与HLA和ABO抗体以及其它的血小板抗体(包括抗HPA-3b、-5b、-15b、-GPIb/IX和非HPA-1特异性的抗-GPIIb/IIIa)未发生交叉反应。结论:基于重组偶联血小板GPIIIa的流式荧光微球技术可灵敏、特异性检测血小板HPA-1系统抗体,适合于临床免疫性血小板减少症患者的抗体特异性鉴定。 展开更多
关键词 人类血小板抗原 同种抗体 GPIIIa片段 MAIPA 荧光微球技术
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β-1,3-N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因433C>T突变导致罕见Pk表型
9
作者 蓝小飞 洪小珍 +6 位作者 陈舒 马开荣 刘瑛 何吉 朱发明 吕杭军 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期381-384,共4页
目的 探讨P1Pk血型系统中1例罕见Pk表型的血清学特征和分子机制.方法 应用血清学技术鉴定先证者血型,应用聚合酶链反应测序技术对Pk表型相关的β-1,3-N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因(B3GALANT1)编码区及侧翼内含子区进行序列分析.结果 ... 目的 探讨P1Pk血型系统中1例罕见Pk表型的血清学特征和分子机制.方法 应用血清学技术鉴定先证者血型,应用聚合酶链反应测序技术对Pk表型相关的β-1,3-N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因(B3GALANT1)编码区及侧翼内含子区进行序列分析.结果 先证者确认为罕见的Pk表型,血清中含有抗-P抗体,其女儿、丈夫为P2表型.测序结果显示:其丈夫、2个随机样本的B3GALANT1基因序列与对照参考序列(GenBank AB050855)完全一致,而先证者的B3GALANT1基因第433位存在C>T纯合突变,这导致在第145位氨基酸处提前形成终止密码而表达不成熟蛋白,从而可能降低或抑制1,3-N-乙酰氨基半乳糖转移酶的活性.其女儿B3GALANT1基因第433位为C/T杂合.结论 由B3GALANT1基因433位核苷酸C>T突变导致的Pk表型在中国人群中尚未见报道. 展开更多
关键词 P1Pk血型系统 Pk表型 β-1 3-N-乙酰氨基半乳糖转移酶 分子机制
外周血非动员干细胞体外培养分析红系特异性表达血型基因
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作者 刘瑛 +7 位作者 应燕玲 洪小珍 马开荣 蓝小飞 陈舒 何吉 朱发明 吕杭军 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期487-490,共4页
目的通过外周血非动员干细胞液培养获得红系有核细胞,以分析红系特异性表达的血型基因。方法外周血经离心分离和免疫磁珠分选获得CD34^+造血干细胞,体外液体定向培养生成红系有核细胞。分别取不同培养期的细胞进行免疫荧光和染色分... 目的通过外周血非动员干细胞液培养获得红系有核细胞,以分析红系特异性表达的血型基因。方法外周血经离心分离和免疫磁珠分选获得CD34^+造血干细胞,体外液体定向培养生成红系有核细胞。分别取不同培养期的细胞进行免疫荧光和染色分析,并取培养+12d的细胞进行Rh和ABO血型基因RNA转录分析。结果从约50mL外周血中分离到CD34^+细胞(3.19±0.13)×10^4个(总回收率为67.3%±2.7%)。经红系定向培养,大约+9d时细胞数爆增至平台期(7.57±0.78)×10^6个,扩增约237.1±15.5倍。在培养过程中,标志细胞干性的CD34抗原逐渐下降,红系特异性标志CD235a和CD240D逐渐上升。培养+12d细胞提取的RNA,均能扩增出RHD/CE和ABO基因,DNA序列分析表明其基因型符合血清学表型。结论建立了一种源于外周血非动员干细胞体外培养分析红系血型基因表达情况的方法,该技术可用于各种红系特异性表达基因的研究。 展开更多
关键词 血型 基因表达 细胞培养 红细胞
α-1,2岩藻糖基转移酶基因682A〉G和547_552delAG突变对酶功能活性的影响 被引量:1
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作者 陶苏丹 和艳敏 +4 位作者 洪小珍 何吉 朱发明 吕杭军 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期591-594,共4页
目的研究α-1,2岩藻糖基转移酶基因(α-1,2fucosyltransferase,FUT1)682A〉G和547_552delAG突变对FUT1转录和表达蛋白功能活性的影响。方法构建FUT1682A〉G和FUT1547_552delAG真核重组表达质粒,并转染COS7细胞进行稳定表达细胞株... 目的研究α-1,2岩藻糖基转移酶基因(α-1,2fucosyltransferase,FUT1)682A〉G和547_552delAG突变对FUT1转录和表达蛋白功能活性的影响。方法构建FUT1682A〉G和FUT1547_552delAG真核重组表达质粒,并转染COS7细胞进行稳定表达细胞株筛选。实时荧光定量PCR检测FUT1mRNA表达量,高效液相色谱检测FUT1酶的活性。结果获得稳定表达FUT1682A〉G、FUT1547—552delAG和FUT1野生型基因的COS7细胞,FUT1682A〉G和547_552delAG重组体mRNA含量分别为野生型的101.69%和102.79%。聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹检测显示Fun682A〉G重组体细胞表达相对分子质量约为46000的目的蛋白片段,而FUT1547_552delAG重组体细胞未见同分子量大小的目的蛋白片段。酶活性分析显示FUT1682A〉G重组体蛋白酶活性为野生型的61.06%,而547_552delAG重组体蛋白完全失去酶活性。结论FUT1 682A〉G和547_552delAG突变不影响FUT1 mRNA转录,但不同FUT1突变点对酶活性影响存在明显差异。 展开更多
关键词 α-1 2岩藻糖基转移酶基因 突变 转录分析 酶活性
应用双通道Taqman-MGB探针技术进行Kidd血型基因分型 预览
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作者 秦斐 何吉 +5 位作者 洪小珍 刘瑛 陈舒 朱发明 吕杭军 《医学研究杂志》 2013年第2期81-84,共4页
目的探讨利用双通道Taqman-MGB探针检测Kidd血型系统JK^a、JK^b等位基因的可行性。方法基于JK^a、JK^b等位基因在SLCl4A1基因838G〉A的差异,设计引物和Taqman-MGB探针建立JK^a、JK^b等位基因分型方法,并将基因分型与血清学分型结果进... 目的探讨利用双通道Taqman-MGB探针检测Kidd血型系统JK^a、JK^b等位基因的可行性。方法基于JK^a、JK^b等位基因在SLCl4A1基因838G〉A的差异,设计引物和Taqman-MGB探针建立JK^a、JK^b等位基因分型方法,并将基因分型与血清学分型结果进行比较。结果双通道TaqMan-MGB探针实时荧光PCR方法能有效检测JK^a、JK^b等位基因。在198例随机样本中,JK^a等位基因频率为0.427,JK^b为0.573,基因分型结果与血清学分型结果完全一致。结论建立了同步检测JK^a、JK^b等位基因的双通道实时荧光PCR方法。 展开更多
关键词 KIDD血型 基因分型 实时荧光PCR
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RhD阴性女性妊娠期意外抗体筛选的回顾性研究 预览
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作者 陈舒 洪小珍 +5 位作者 蓝小飞 马开荣 刘瑛 何吉 吕杭军 《浙江医学》 CAS 2013年第3期183-185,共3页
目的分析RhD阴性女性妊娠期的意外抗体筛选情况。方法利用盐水介质法、聚凝胺法和抗人球蛋白法对376例Rh阴性妊娠期女性进行了意外抗体筛查和抗体效价的测定,并对结果进行回顾性分析。结果33例检出意外抗体,检出率为88%(33/376)... 目的分析RhD阴性女性妊娠期的意外抗体筛选情况。方法利用盐水介质法、聚凝胺法和抗人球蛋白法对376例Rh阴性妊娠期女性进行了意外抗体筛查和抗体效价的测定,并对结果进行回顾性分析。结果33例检出意外抗体,检出率为88%(33/376)。检出抗体为抗D24例(72_7%),抗D+C2例(6.1%),抗E2例(61%),抗Fyb1例(3.0%),抗M1例(3.O%)和抗P11例(3.0%),2例未能鉴定出抗体特性。376例Rh阴性受检者中78例筛查2次以上,其中10例第1次筛查阳性而在随后定期检测抗体滴度呈现变化.包括8例呈现上升趋势和2例下降趋势;4例保持不变;3例第1次筛查阴性而在随后的定期检测呈阳性。61例第1次筛查阴性而在随后的检测中未发现意外抗体。结论RhD阴性妊娠期女性中存在一定比例的意外抗体。定期筛查抗体有助于指导临床及时采用干预措施。 展开更多
关键词 RHD阴性 妊娠期女性 意外抗体筛查
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人血小板表面CD36糖蛋白检测方法的建立及初步应用 预览 被引量:2
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作者 刘瑛 +6 位作者 蓝小飞 马开荣 陈舒 洪小珍 何吉 朱发明 吕杭军 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期1042-1045,共4页
个体血小板表面CD36抗原缺乏在随机输注时有产生抗-CD36免疫反应的风险,是血小板输注无效的原因之一。本研究应用流式细胞术检测杭州地区单采血小板供者的血小板表面CD36抗原表达情况,并分析个体血小板上CD36缺失表型的频率。留取献血... 个体血小板表面CD36抗原缺乏在随机输注时有产生抗-CD36免疫反应的风险,是血小板输注无效的原因之一。本研究应用流式细胞术检测杭州地区单采血小板供者的血小板表面CD36抗原表达情况,并分析个体血小板上CD36缺失表型的频率。留取献血者新鲜抗凝血样,经离心获取富血小板血浆,洗涤并调整血小板计数至1×10^6。采用CD36-FITC、CD41-PE单克隆抗体和血小板孵育反应,然后用流式细胞仪检测和分析血小板表面糖蛋白CD36抗原表达情况。对于血小板表面CD36抗原阴性的标本,进一步筛查其单核细胞表面CD36的表达情况。结果表明:192例无偿献血者筛查出7例血小板表面CD36抗原阴性,CD36缺失型频率为3.6%,均为Ⅱ型缺失。人群中个体CD36抗原表达强度存在差异,参照CD36几何平均荧光强度数值大小,59例为低表达,126例为高表达。结论:人群中存在CD36Ⅱ型缺失表型,这些数据将为研究CD36抗原分布提供参考,有助于解决血小板输注无效问题。 展开更多
关键词 血小板糖蛋白IV CD36缺失 血小板
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α1,4半乳糖基转移酶基因26个碱基缺失导致的罕见p表型 被引量:4
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作者 洪小珍 +6 位作者 马开荣 蓝小飞 陈舒 刘瑛 应燕玲 朱发明 吕杭军 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期309-312,共4页
目的研究中国人个体PIPk血型系统中罕见P表型的血清学特征及其分子遗传背景。方法对1例血清中含有疑难抗体的先证者及其8位家系成员样本,应用特异性血型抗体和谱细胞进行血型血清学鉴定。对P表型相关的a1,4半乳糖基转移酶(a-1,4-gal... 目的研究中国人个体PIPk血型系统中罕见P表型的血清学特征及其分子遗传背景。方法对1例血清中含有疑难抗体的先证者及其8位家系成员样本,应用特异性血型抗体和谱细胞进行血型血清学鉴定。对P表型相关的a1,4半乳糖基转移酶(a-1,4-galactosyltransferase,A4GALT)编码基因A4GALT编码区及侧翼内含子区进行聚合酶链反应和DNA序列分析,并进一步通过克隆测序法鉴定A4GALT等位基因组合。结果先证者为罕见的P表型,其血清中含有能与所有非P表型红细胞凝集反应并致其溶血的抗-Tja抗体,其他家系成员为正常的P1或P2表型。DNA直接测序和克隆测序分析发现,先证者的A4GALT基因编码区存在972~997位26bp纯合缺失,该26bp缺失可引起多肽链的移码突变,导致变异型a1,4半乳糖基转移酶比野生型多83个氨基酸残基;而其他家系成员在该位点均为缺失杂合子或未缺失。结论在中国人群中发现因A4GALT基因972~997位26bp缺失导致的P表型。 展开更多
关键词 P1Pk血型系统 P表型 P血型 A1 4半乳糖基转移酶 遗传学基础
搁板温度对人血小板冻干保存的影响 预览 被引量:2
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作者 王波 周正 +3 位作者 徐梦洁 张绍志 陈光明 《上海理工大学学报》 CAS 北大核心 2013年第2期187-192,共6页
一次干燥温度位的高低直接影响一次干燥所需时间.实验研究了干燥箱搁板温度对血小板冷冻干燥保存的影响,检测了冻干血小板复水后的数值恢复率、细胞形态和结构、血小板凋亡和活化等指标,与新鲜组进行了对照分析.结果显示:当搁板温... 一次干燥温度位的高低直接影响一次干燥所需时间.实验研究了干燥箱搁板温度对血小板冷冻干燥保存的影响,检测了冻干血小板复水后的数值恢复率、细胞形态和结构、血小板凋亡和活化等指标,与新鲜组进行了对照分析.结果显示:当搁板温度为-30℃时,血小板冻干复水后的数值恢复率为(89.0±3.2)%;血小板平均体积(MPV)和分布宽度(PDW)值分别为(12.4±1.5)fL和(18.3±1.5)%,在可以接受的范围之内;未凋亡率为(87.5±2.6)%,非活化率为(80.4±2.6)%. 展开更多
关键词 血小板 冷冻干燥保存 一次干燥 搁板温度 恢复率
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RHD基因不同转录子表达载体的构建 预览 被引量:1
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作者 谢俊杰 应燕玲 +2 位作者 朱发明 邵超鹏 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 173-177,共5页
RHD基因存在多种不同的另路剪接的转录子,本研究分别构建正常mRNA及DEL9和DEL89转录子的表达载体。从Rh(D)阳性新生儿脐血网织红细胞中提取总RNA,分别采用一步法和两步法RT-PCR获取完整目的转录子片段,然后分别克隆至pCR4 TOPO测序载... RHD基因存在多种不同的另路剪接的转录子,本研究分别构建正常mRNA及DEL9和DEL89转录子的表达载体。从Rh(D)阳性新生儿脐血网织红细胞中提取总RNA,分别采用一步法和两步法RT-PCR获取完整目的转录子片段,然后分别克隆至pCR4 TOPO测序载体并测序验证和筛选。用正常RHD cDNA筛选质粒为模板,PCR扩增全长目的基因,然后亚克隆至pcDNA3.1/V5-His TOPO表达载体;DEL9和DEL89转录子直接克隆至表达载体,通过测序验证目的基因序列及插入方向。结果表明,序列分析证实了不同目的基因片段序列和方向正确,表明3种不同RHD转录子的表达载体构建成功。结论:RHD不同转录子表达载体已成功构建,为进一步研究Rh(D)抗原膜表达机理奠定了基础。 展开更多
关键词 RHD基因 转录子 序列分析 表达载体
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利用红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR法监测个体嵌合状态 预览
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作者 陈舒 +4 位作者 刘瑛 洪小珍 朱发明 吕杭军 严力行 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期676-678,共3页
本研究建立红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术以监测个体嵌合状态。根据红细胞Kidd血型等位基因的差异设计TaqMan MGB探针和特异性引物,进行实时荧光定量PCR检测个体嵌合状态,利用倍比稀释的方法模拟个体DNA嵌合状态并... 本研究建立红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术以监测个体嵌合状态。根据红细胞Kidd血型等位基因的差异设计TaqMan MGB探针和特异性引物,进行实时荧光定量PCR检测个体嵌合状态,利用倍比稀释的方法模拟个体DNA嵌合状态并进行敏感性分析。结果表明,实时荧光定量PCR法可有效区分JK*A和JK*B等位基因。人工嵌合JK*A和JK*B的DNA标本实测值与理论值无显著差异(P〉0.05)。在104个嵌合型细胞中存在156个供者型细胞时,该方法可有效检出供者型细胞。结论:建立的红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR法检测嵌合体具有可行性,可以在一定范围内用于定量监测嵌合样本。 展开更多
关键词 红细胞 Kidd血型基因 实时荧光定量PCR 嵌合体
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1种用于分析疾病相关ABO抗原丢失的染色体杂合性缺失方法
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作者 应燕玲 +5 位作者 洪小珍 蓝小飞 马开荣 陈舒 朱发明 吕杭军 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1046-1049,共4页
目的建立1种9号染色体杂合性缺失(LOH)的分析方法,以解释因ABO基因附近染色体的LOH导致的疾病相关ABO抗原丢失现象。方法在9号染色体长臂和短臂上共选取13个微卫星位点,其中10个位点(D9S1677、D9S289、D9S1776、D9.s1682、D9S290... 目的建立1种9号染色体杂合性缺失(LOH)的分析方法,以解释因ABO基因附近染色体的LOH导致的疾病相关ABO抗原丢失现象。方法在9号染色体长臂和短臂上共选取13个微卫星位点,其中10个位点(D9S1677、D9S289、D9S1776、D9.s1682、D9S290、D9S164、.D9|s1818、D9S1826、D9S158、D9S1838)位于ABO血型基因近端,平均间距5.52eM;另3个位点(D9S1858、D9S171、D9S1843)位于ABO基因远端,平均间距39.3eM。分别设计合成FAM和HEX荧光标记引物,优化PCR扩增后,以聚丙烯酰胺凝胶毛细管电泳,通过GeneMapper软件分析微卫星不稳定性,观察染色体LOH发生情况。结果13个微卫星位点均得到了较好的PCR扩增效果,PER产物长度在75—273bp之间,各位点均有较高的杂合度,适合于微卫星片段长度分析。13个位点可在2个泳道中进行双荧光同步分析,各位点不同等位基因间互不干扰。分别对1例正常血型标本和2例血液病相关的ABO抗原变异标本(包括口腔黏膜DNA和外周血DNA)进行微卫星分析,正常血型标本的口腔DNA和外周血DNA未发现染色体LOH现象。而2例ABO抗原变异标本,与口腔黏膜DNA相比,外周血DNA均存在不同程度的LOH现象,表明ABO抗原丢失可能源于血液系统疾病相关的9号染色体LOH现象。结论建立了1种基于微卫星不稳定分析的9号染色体LOH方法,可用于血液系统疾病相关的ABO抗原丢失标本分子机制的研究。 展开更多
关键词 ABO血型 血液病 染色体 杂合性缺失
应用血清学和分子生物学方法筛选浙江汉族人群中部分稀有血型 预览 被引量:2
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作者 祝宏 刘瑛 +6 位作者 洪小珍 兰小飞 马开荣 何吉 朱发明 吕杭军 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期749-752,共4页
本研究探讨浙江汉族人群部分红细胞血型系统稀有表型的分布情况。利用血清学技术或分子生物学方法分别筛选H系统H-、MNS系统GPA-和s-、Rh系统Rhnull、Rhmod、D--、CCDEE和CCdEE、Gerbich系统GPC-、I系统i+、Lutheran系统Lub-、Kell系... 本研究探讨浙江汉族人群部分红细胞血型系统稀有表型的分布情况。利用血清学技术或分子生物学方法分别筛选H系统H-、MNS系统GPA-和s-、Rh系统Rhnull、Rhmod、D--、CCDEE和CCdEE、Gerbich系统GPC-、I系统i+、Lutheran系统Lub-、Kell系统k-和Jsb-、Duffy系统Fya-、Ok系统Oka-、Diego系统Dib-。利用尿素溶血试验筛选Kidd系统Jk(a-b-)表型。结果表明:1 618例献血者中检出1例Di(a+b-),1 007例献血者检出3例Fy(a-b+),633例Rh阴性献血者检出1例CCdEE。大规模筛选中未发现Jk(a-b-)、H-、GPA-、s-、GPC-、成人i+、Lub-、k-、Jsb-、Lub-和Oka-稀有血型。结论:在献血人群中发现Di(a+b-)、Fy(a-b+)、CCdEE稀有表型,提供了浙江汉族人群部分红细胞稀有血型的分布数据。 展开更多
关键词 红细胞稀有血型 血清学技术 分子生物学方法 浙江汉族
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