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5A分子筛络合低含量正构烷烃湖泊沉积物的方法优化 认领
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作者 杨柳 刘斯文 谢曼曼 《地球科学前沿(汉斯)》 2020年第3期226-231,共6页
传统5A分子筛吸附混合溶剂洗脱正构烷烃的方法适用于正构烷烃含量中–高水平的湖泊沉积物样品,而沙漠湖泊岩芯样品中正构烷烃含量远低于一般湖泊沉积物。此类样品用传统的5A分子筛方法络合洗脱,正构烷烃的回收率仅为0%~32.86%。本文对... 传统5A分子筛吸附混合溶剂洗脱正构烷烃的方法适用于正构烷烃含量中–高水平的湖泊沉积物样品,而沙漠湖泊岩芯样品中正构烷烃含量远低于一般湖泊沉积物。此类样品用传统的5A分子筛方法络合洗脱,正构烷烃的回收率仅为0%~32.86%。本文对已有的5A分子筛吸附混合溶剂洗脱方法进行优化,具体为:将低含量母液和对应量分子筛加入可密封玻璃瓶中后用环己烷对正构烷烃进行络合,可密封玻璃瓶中的液面高度由原先的2 cm降低至1 cm。优化后的方法可获得93.96%~100%的络合回收率。 展开更多
关键词 正构烷烃5A分子筛络合法 湖泊沉积物正构烷烃 沙漠湖泊沉积物
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文章速递应用近红外光谱法研究泻湖湿地沉积物重金属活动态特征及生态风险评价 认领
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作者 尚文郁 谢曼曼 +2 位作者 王淑贤 孙青 岑况 《岩矿测试》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期597-608,共12页
沉积物中的重金属元素经自然作用下可以活动态进行迁移,具有潜在生物可利用性及潜在的区域生态风险。利用近红外光谱(NIRS)技术开展不同基体类型样品响应机理研究,可为评估重金属活动态提供无损、快速的分析方法,为生态风险研究提供依... 沉积物中的重金属元素经自然作用下可以活动态进行迁移,具有潜在生物可利用性及潜在的区域生态风险。利用近红外光谱(NIRS)技术开展不同基体类型样品响应机理研究,可为评估重金属活动态提供无损、快速的分析方法,为生态风险研究提供依据。天津七里海泻湖湿地沉积物具有低有机质-高黏土含量的特征,本文基于近红外光谱分析技术,建立了沉积物中Co、Ni、Cu、Zn、Cd、Pb重金属活动态组分含量近红外光谱-偏最小二乘回归预测模型。实验结果表明:样品在7290~6390cm^-1和4683~4000cm^-1波段存在的双羟基O—H伸缩振动、AlAl—OH及Al(Mg)—OH弯曲振动特征吸收,间接指示了重金属元素活动态含量。光谱预测结果显示,近百年来七里海沉积物中Co、Ni、Cu、Zn、Cd、Pb活动态组分的变化特征对应了当地1934—1948年、1956—1963年、1976年至今三次较明显的升温过程,也对应了1980年七里海水库建设等大型人为扰动。本研究样品中Co、Ni、Cu、Zn、Cd、Pb总量及活动态均低于国家标准中规定的生态风险阈值,七里海内村镇及周边农田来自湿地释放的重金属生态风险极低。 展开更多
关键词 泻湖沉积物 黏土沉积物 重金属活动态 近红外光谱法 偏最小二乘回归 生态风险
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纳米颗粒在侧流免疫层析技术中的应用研究进展 认领
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作者 田亚晨 王淑娟 +10 位作者 马兰 谢曼曼 许东坡 刘程 丁承超 郭亮 方水琴 王翔 邱景璇 董庆利 刘箐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第17期348-356,共9页
侧流免疫层析技术(lateral flow immunoassay,LFIA)有效地结合了色谱分析卓越的分离能力和免疫分析的高度特异性,加之其便携性,使其为需要灵敏、定量的现场检测提供了一个理想的平台。LFIA中,标记物是影响其灵敏度的关键因素之一。目前,... 侧流免疫层析技术(lateral flow immunoassay,LFIA)有效地结合了色谱分析卓越的分离能力和免疫分析的高度特异性,加之其便携性,使其为需要灵敏、定量的现场检测提供了一个理想的平台。LFIA中,标记物是影响其灵敏度的关键因素之一。目前,LFIA的检测性能主要通过使用纳米颗粒标记物来改善。纳米颗粒标记物按材料可分为有色纳米颗粒、发光纳米颗粒以及磁性纳米颗粒等。本文旨在归纳总结纳米颗粒作为标记物在LFIA中的最新研究进展,详尽解析了各类纳米颗粒对试纸条分析性能的改善情况,以期为研究者在设计试纸条时对适宜纳米颗粒的选择提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 纳米颗粒 标记物 侧流免疫层析技术
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茄科劳尔氏菌单克隆抗体的制备及其特性鉴定 认领
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作者 马兰 曾海娟 +9 位作者 谢曼曼 胡谦 丁承超 王淑娟 翟绪昭 孙静娟 李杰 王艳 董庆利 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期95-100,共6页
茄科劳尔氏菌( Ralstonia solanacearum ,RS)是番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科蔬菜青枯病害的致病菌。为实现对RS的快速高效检测,以茄科劳尔氏菌株1.76免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后利用间接酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbe... 茄科劳尔氏菌( Ralstonia solanacearum ,RS)是番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科蔬菜青枯病害的致病菌。为实现对RS的快速高效检测,以茄科劳尔氏菌株1.76免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后利用间接酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)筛选出3株能稳定分泌抗茄科劳尔氏菌株1.76的单克隆杂交瘤细胞株1C1、1B3和9D7。然后利用小鼠体内诱生腹水,1C1、1B3和9D7效价分别为11 024 000、 1 64 000、1 256 000。采用饱和硫酸铵沉淀及Protein-G亲和层析法纯化腹水,经SDS-PAGE鉴定显示纯化后的单克隆抗体(Monoclonal Antibodies,mAb)纯度较高。纯化后单克隆抗体(2 mg/mL)效价分别为1 17 529、1 35 819、1 50 000,抗体亚型均为IgG1。对3株抗体进行特异性检测结果显示,1C1和9D7均不能与RS-5结合,1B3不能结合1.74和RS-5。此外,检测结果还表明3株单克隆抗体与桑肠杆菌JX-6、苏云金芽胞杆菌SYJ及实验室现有11株燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种、燕麦嗜酸菌西瓜亚种、玉米细菌性条斑菌、嗜酸菌魔芋亚种,梨火疫病菌QB0809、 XL-4,玉米细菌性枯萎病菌QB0241、QB0242,水稻细菌性谷枯病菌QB0017、QB0753、QB0755均无交叉情况。此次茄科劳尔氏菌抗体的制备,为后期青枯病菌的快速检测提供参考。 展开更多
关键词 茄科劳尔氏菌 ELISA 单克隆抗体
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基于核心素养的课程转化述评 认领 被引量:1
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作者 崔健 谢曼曼 《黑龙江生态工程职业学院学报》 2019年第2期86-88,共3页
近年来国内研究者对核心素养课程转化进行了激烈的讨论。基于此,对核心素养的界定,核心素养课程转化的国际经验学习及思考,基于核心素养的课程实践三个方面的相关研究进行整合与分析,认为,核心素养课程转化在本土融入、教育公平、学科... 近年来国内研究者对核心素养课程转化进行了激烈的讨论。基于此,对核心素养的界定,核心素养课程转化的国际经验学习及思考,基于核心素养的课程实践三个方面的相关研究进行整合与分析,认为,核心素养课程转化在本土融入、教育公平、学科核心素养等方面需要进一步深入研究。 展开更多
关键词 核心素养 课程发展 研究综述
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保温护理干预对全麻患者应激情况的应用研究 认领
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作者 谢曼曼 《全科口腔医学电子杂志》 2019年第30期95-95,97共2页
目的探讨了保温护理对全麻患者应激情况的应用研究。方法选取2018年6月~2019年6月在我院接受全麻手术的100例患者,使用随机数余数分组方法分为对照组、干预组各50例,对照组给予常规护理,干预组在常规护理基础上实施保温护理,比较两组患... 目的探讨了保温护理对全麻患者应激情况的应用研究。方法选取2018年6月~2019年6月在我院接受全麻手术的100例患者,使用随机数余数分组方法分为对照组、干预组各50例,对照组给予常规护理,干预组在常规护理基础上实施保温护理,比较两组患者应激情况。结果干预组的术后肾上腺素等水平均低于对照组(P<0.05)。结论对全麻患者实施规范的保温护理,能够有效降低患者的应激状况,避免患者紧张、躁动等情况的发生,可在临床上推广应用。 展开更多
关键词 保温护理 全麻苏醒期 应激情况
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我国教师课程权力研究:回顾与反思 认领
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作者 谢曼曼 崔健 《太原城市职业技术学院学报》 2019年第1期59-60,共2页
教师能否拥有课程权力以及拥有哪些课程权力,对这些问题的回答影响着课程的品质,也影响着学生的发展。随着新一轮基础教育课程改革的不断推进,教师课程权力问题成为关注的焦点。通过对2001-2017年间教师课程权力研究成果的回顾,发现研... 教师能否拥有课程权力以及拥有哪些课程权力,对这些问题的回答影响着课程的品质,也影响着学生的发展。随着新一轮基础教育课程改革的不断推进,教师课程权力问题成为关注的焦点。通过对2001-2017年间教师课程权力研究成果的回顾,发现研究主要涉及教师课程权力的概念、来源、价值、存在的问题和优化策略等方面,加深了人们对教师课程权力的理解。但也存在一些问题:研究内容过于宽泛,缺乏高质量的实证研究,研究视角单一。今后的研究要顺应主题精细化的趋势,加大实证研究的力度,确立多学科的研究视角。 展开更多
关键词 教师课程权力 回顾 反思
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基因dat对单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性影响 认领
8
作者 曾海娟 谢曼曼 +3 位作者 丁承超 刘武康 董庆利 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期9-15,共7页
单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的食源性致病菌,其基因dat编码D-丙氨酸氨基转移酶,可将D-谷氨酸转变为D-丙氨酸,后者是细菌细胞壁肽聚糖的组成成分。在Lm野生株EGDe actA及inlB双基因缺失株(EGDeΔact... 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的食源性致病菌,其基因dat编码D-丙氨酸氨基转移酶,可将D-谷氨酸转变为D-丙氨酸,后者是细菌细胞壁肽聚糖的组成成分。在Lm野生株EGDe actA及inlB双基因缺失株(EGDeΔactAΔinlB)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失基因dat的菌株(EGDeΔactAΔinlBΔdat),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、细胞侵袭及生物被膜的形成量等基本生物学特性进行研究,运用Real Time-PCR(RT-PCR)测定Lm毒力基因的相对表达量。结果表明,基因的缺失对突变菌株的生长能力以及生物被膜形成有重要的调控作用,并导致毒力基因srt A、plc A表达量下调,VIP、inlA表达量上调,对Coca-2细胞的侵袭无影响。此缺失株的构建为进一步研究基因dat的功能提供了材料。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 基因敲除 生长能力 RT-PCR 细胞侵袭 生物被膜
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活载体疫苗的研究进展 认领 被引量:2
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作者 马俊飞 丁承超 +4 位作者 谢曼曼 曾海娟 郭亮 汪冠豪 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期91-97,共7页
免疫学与生物工程等领域取得的巨大进步,为发展基因工程疫苗提供了更多的理论和技术支持。活载体疫苗(Live Vector Vaccine,LVV),是以细菌或病毒作为外源抗原和治疗因子的载体系统,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一。不同疫苗载... 免疫学与生物工程等领域取得的巨大进步,为发展基因工程疫苗提供了更多的理论和技术支持。活载体疫苗(Live Vector Vaccine,LVV),是以细菌或病毒作为外源抗原和治疗因子的载体系统,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一。不同疫苗载体、抗原呈递方式和对宿主细胞免疫系统启动机制等研究的深入,开拓了活载体疫苗的实用价值。对国际上相关研究予以重点综述,以期为深入开展该领域研究提供依据。 展开更多
关键词 活载体疫苗 细菌 病毒 抗原呈递
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侧流层析技术研究进展 认领 被引量:2
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作者 马兰 王淑娟 +8 位作者 曾海娟 谢曼曼 丁承超 翟绪昭 郭亮 孙静娟 李杰 胡谦 刘箐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第15期333-342,共10页
在毛细管层析作用下,基于抗原抗体特异性结合或核酸探针和靶向核酸杂交反应来检测样品中的目标物质的侧流层析技术与传统检测方法相比,以其成本低、特异性强、稳定性高、节省时间、不需专业人员、可现场检验、结果肉眼可见等优势,广泛... 在毛细管层析作用下,基于抗原抗体特异性结合或核酸探针和靶向核酸杂交反应来检测样品中的目标物质的侧流层析技术与传统检测方法相比,以其成本低、特异性强、稳定性高、节省时间、不需专业人员、可现场检验、结果肉眼可见等优势,广泛运用在人体临床医学、动植物医学、食品安全、环境监测等领域。本文重点介绍了侧流层析技术的背景、原理、设计以及国内外应用现状、发展前景等,以期为侧流层析技术的发展提供参考。 展开更多
关键词 侧流层析技术 临床医学 食品安全 环境监测
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prfA基因缺失影响单增李斯特菌诱导细胞凋亡的能力 认领
11
作者 郭亮 陈国薇 +4 位作者 谢曼曼 丁承超 刘武康 董庆利 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期90-95,共6页
单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)入侵宿主细胞并带来危害,包含3个关键性环节,即宿主细胞的黏附和侵袭、细胞内增殖和运动、细胞间传播。每个环节的实现均需要不同毒力因子的调控,不同血清型Lm毒力的强弱取决于其... 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)入侵宿主细胞并带来危害,包含3个关键性环节,即宿主细胞的黏附和侵袭、细胞内增殖和运动、细胞间传播。每个环节的实现均需要不同毒力因子的调控,不同血清型Lm毒力的强弱取决于其毒力因子的活性,prfA基因作为Lm毒力的调控基因起到至关重要的作用。本研究使用单增李斯特菌野生株EGDe及其prfA基因缺失株EGDe-ΔprfA,以人结肠癌腺细胞Caco-2和人肝癌上皮细胞HepG2为研究对象,通过细胞侵袭实验和诱导凋亡能力探究prfA基因缺失对EGDe毒力的影响。溶血实验结果表明prfA基因的缺失并不会明显改变EGDe的溶血能力;侵袭实验表明突变株与EGDe野生株相比对Caco-2细胞和HepG2细胞侵袭能力分别下降了40%和30%;EGDe-ΔprfA处理组与EGDe处理组相比较,Caco-2细胞和HepG2细胞平均凋亡比例分别下降了35.8%和43.7%,说明prfA基因敲除后会降低细胞凋亡。本研究初步证实了prfA基因对EGDe毒力的调控作用,prfA基因缺失降低EGDe侵袭过程中的细胞凋亡,这对于了解EGDe的致病机理及进行相关研究有重要作用。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特氏菌 prfA 毒力 侵袭 凋亡
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细菌nox基因研究进展 认领
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作者 王艳 丁承超 +3 位作者 邱景璇 陈国薇 谢曼曼 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期112-120,共9页
细菌 nox 基因编码合成一种含核黄素的NADH氧化酶,NADH氧化酶可催化双原子氧还原为H 2O 2或H 2O,同时将NADH氧化为NAD +。该反应发生在多种代谢途径中,从而对细菌的氧化应激、菌膜形成、毒力调控及代谢产物生成等生理生化过程产生... 细菌 nox 基因编码合成一种含核黄素的NADH氧化酶,NADH氧化酶可催化双原子氧还原为H 2O 2或H 2O,同时将NADH氧化为NAD +。该反应发生在多种代谢途径中,从而对细菌的氧化应激、菌膜形成、毒力调控及代谢产物生成等生理生化过程产生一系列影响。目前对高等动植物体中的 nox 基因及其编码的NADH氧化酶已有较深入的研究,但近年来一些研究表明,细菌 nox 基因的功能及作用通路与动植物体存在较大差异,因此,有必要详细了解细菌中 nox 基因和NADH氧化酶的具体作用机制及其对细胞产生的影响。综合分析近年来细菌 nox 基因及NADH氧化酶的研究成果,结合我们的研究,对目前存在的问题和未来的发展进行综述。 展开更多
关键词 细菌 nox 基因 NADH氧化酶 氧化应激 菌膜 毒力
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解决实兵自主对抗演习中军民纠纷问题的主要路径 认领
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作者 张晗 谢曼曼 《基层政治工作研究》 2018年第11期55-56,共2页
随着近年来对军事斗争准备的要求越来越高,军队任务使命不断拓展,跨区机动演习日益增多,演习强度与力度增大,给群众带来了更大影响。一方面,当前演习实战化程度高,实弹实爆较以往相比更多,参演部队对集结地域不熟悉,更容易对周... 随着近年来对军事斗争准备的要求越来越高,军队任务使命不断拓展,跨区机动演习日益增多,演习强度与力度增大,给群众带来了更大影响。一方面,当前演习实战化程度高,实弹实爆较以往相比更多,参演部队对集结地域不熟悉,更容易对周围的农田、道路、房屋等造成损害,与当地群众的纠纷更多;另一方面,演习中使用武器装备越来越先进,其毁伤性更强,调查中有群众反映,演习实弹射击中还会出现实弹实爆引发森林火灾、实弹射击评估不准误伤家禽牲畜的问题等。少数百姓在利益受到损害之后夸大个人损失、索要高额赔偿,造成军民纠纷问题矛盾更加突出。 展开更多
关键词 对抗演习 纠纷 路径 中军 自主 军事斗争准备 实弹射击 武器装备
新疆天山黄土GDGTs重建的全新世温度逐步升高及其可能意义 认领
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作者 段炎武 孙青 +4 位作者 谢曼曼 侯居峙 梁洁 李国强 陈发虎 《干旱区地理》 CSCD 北大核心 2018年第3期528-535,共8页
全新世温度变化是理解现代变暖和预测未来温度变化的重要依据,但目前根据地质记录重建的温度变化趋势与气候模拟重建的温度变化趋势存在显著矛盾。依据已经建立了可靠年代的新疆天山北麓鹿角湾全新世黄土一古土壤序列(LJW10剖面),选... 全新世温度变化是理解现代变暖和预测未来温度变化的重要依据,但目前根据地质记录重建的温度变化趋势与气候模拟重建的温度变化趋势存在显著矛盾。依据已经建立了可靠年代的新疆天山北麓鹿角湾全新世黄土一古土壤序列(LJW10剖面),选取4个重要时段的黄土一古土壤样品,开展支链GDGTs(br-GDGTs)测量,采用国际上新提出的GDGTs分析方法和MBT'5ME指标,重建了该剖面全新世以来年均温度变化的初步框架。结果发现,采用新的MBT'5ME指标重建的表层样品的温度更接近现代气象记录的实际温度,利用国际新的GDGTs分析及计算方法重建的全新世温度自早全新世以来逐步升高,与已有气候模拟重建的全新世温度变化趋势一致。应当指出的是,本文只是使用新GDGTs分析方法和MBT'5ME指标重建全新世温度变化的初步探讨,今后不但需要开展研究方法的进一步探讨,而且需要开展更高时间分辨率和不同区域黄土一古土壤记录的GDGTs温度重建研究。 展开更多
关键词 新疆黄土 br—GDGTs 全新世 温度变化
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单核细胞性李斯特菌基因dal的敲除及其生物学特性初步分析 认领
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作者 曾海娟 刘武康 +3 位作者 谢曼曼 丁承超 董庆利 刘箐 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第22期48-53,共6页
在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe act A及inl B双基因缺失株(EGDeΔact AΔinl B)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe Δact AΔinl BΔdal),并对该缺失菌株生长状态、... 在单核细胞性李斯特菌(Listeria monocytogenes)野生株EGDe act A及inl B双基因缺失株(EGDeΔact AΔinl B)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失营养基因dal的菌株(EGDe Δact AΔinl BΔdal),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、生物被膜的形成量及细胞侵袭等方面作进一步分析。结果显示,37℃摇床培养6 h后,缺失株的菌浓度显著低于EGDe Δact AΔinl B(P〈0.001),培养基中补充D-丙氨酸的缺失株生长速率与亲本株相比无显著差异;实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,缺失株的sig B基因表达水平变化最明显(P〈0.01),约下调90%;缺失株生物被膜形成量显著增加(P〈0.05),培养基补充D-丙氨酸后缺失株生物被膜的生成量与亲本株相比无差异;对Coca-2细胞的侵袭无影响,表明该基因对细菌生长能力及生物被膜形成具有重要的调控作用,并不影响菌株对细胞的侵袭力。此缺失株的构建为进一步研究基因dal的功能提供了理论支持。 展开更多
关键词 单核细胞性李斯特菌 基因敲除 生长能力 细胞侵袭 生物被膜
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肠道菌群功能与影响因素研究进展 认领 被引量:7
16
作者 郭亮 陈国薇 +4 位作者 谢曼曼 丁承超 刘武康 董庆利 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期108-114,共7页
人体肠道作为一种营养丰富的天然环境有多达100兆个微生物,其中绝大多数存于结肠内,密度接近10^11-10^12/mL。人类肠道内的微生物多样性是微生物菌落和宿主共同进化的结果,自然选择和进化使肠道菌群与宿主处于一种动态平衡且稳定的... 人体肠道作为一种营养丰富的天然环境有多达100兆个微生物,其中绝大多数存于结肠内,密度接近10^11-10^12/mL。人类肠道内的微生物多样性是微生物菌落和宿主共同进化的结果,自然选择和进化使肠道菌群与宿主处于一种动态平衡且稳定的关系。文章综述了肠道菌群对宿主可能产生的影响以及引起肠道菌群发生改变的某些因素,肠道微生物影响宿主的代谢、营养吸收、免疫功能以及神经功能调节,而饮食及其他条件又能引起肠道菌群的改变。深入分析肠道菌群的具体结构、探索不同微生物在宿主体内究竟发挥着怎样的作用以及如何充分利用微生物的不同特性改善人类健康应成为今后研究的重点方向。 展开更多
关键词 肠道 微生物 宿主 因素
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单增李斯特菌prfA基因缺失菌株的构建及其生物学特性鉴定 认领 被引量:3
17
作者 郭亮 陈国薇 +5 位作者 谢曼曼 刘武康 丁承超 王淑娟 罗勤 刘箐 《食品科学》 EI CSCD 北大核心 2017年第10期12-17,共6页
单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种风险较高的食源性致病菌,其绝大多数毒力基因的表达均受到由prfA基因编码的PrfA(positive regulatory factorA)蛋白全部或部分调控。使用同源重组的方法敲除Lm野生菌株EGDe... 单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种风险较高的食源性致病菌,其绝大多数毒力基因的表达均受到由prfA基因编码的PrfA(positive regulatory factorA)蛋白全部或部分调控。使用同源重组的方法敲除Lm野生菌株EGDe的prfA基因,并通过测定生长曲线、毒力基因表达和侵袭Caco-2细胞能力等探讨单缺失菌株EGDe-ΔprfA生物学特性。通过测定生长曲线显示prfA敲除株和野生型EGDe二者生长状态无差异;运用实时定量荧光聚合酶链式反应检测EGDe-ΔprfA的主要毒力基因表达,结果显示plcA、plcB毒力基因的表达量分别上升至原来的2.5倍和2倍,inlA、inlB、inlC、actA、vip等均呈下降趋势,prfA基因表达量趋向于零;侵袭Caco-2细胞结果显示EGDe-ΔprfA侵袭数为野生株的1/5。该基因缺失菌株的构建及生物学特性研究对食源性致病菌EGDe致病机理研究具有重要意义并且提供了重要材料。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 prfA 基因敲除 生物学特性
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基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株构建 认领
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作者 丁承超 陈国薇 +4 位作者 谢曼曼 郭亮 李杰 孙静娟 刘箐 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期1281-1285,1290共6页
目的:利用减毒单增李斯特菌作为疫苗载体的优势,拟构建基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株。方法:使用单增李斯特菌表达载体p ERL3过表达弧菌中共同的靶标抗原Ompk;利用PCR和RT-PCR技术分别对过表达菌株鉴定和抗原基因的检测。... 目的:利用减毒单增李斯特菌作为疫苗载体的优势,拟构建基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株。方法:使用单增李斯特菌表达载体p ERL3过表达弧菌中共同的靶标抗原Ompk;利用PCR和RT-PCR技术分别对过表达菌株鉴定和抗原基因的检测。结果:PCR结果显示成功构建3株Ompk过表达菌株Lm-Ompk(L-O)、Lm-Lmo0576-Ompk(L-L-O)和Lm-P-Ompk(L-P-O);测序结果显示过表达菌株中外源基因的序列与NCBI结果相似性为100%;RT-PCR结果显示Ompk基因在3株过表达菌株中的转录水平均极为显著(P〈0.001);在抗生素条件下,Ompk基因在各过表达菌株中的表达水平显著高于在非抗性条件下的转录水平(P〈0.05)。结论:成功构建了3株基于载体减毒单增李斯特菌的弧菌疫苗菌株,弧菌中共同的靶标抗原Ompk在3株重组菌株中均可以稳定表达。 展开更多
关键词 减毒单增李斯特菌 疫苗载体 弧菌疫苗 Ompk 抗原基因
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毒力因子InlA和InlB缺失影响单增李斯特菌侵袭宿主细胞和诱导凋亡的能力 认领
19
作者 刘武康 陈国薇 +4 位作者 谢曼曼 郭亮 王淑娟 董庆利 刘箐 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第19期49-54,共6页
单核细胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,LM)是一种毒力较强、人畜共患的食源性致病菌,其具有穿透宿主屏障、胞内寄生的特点,因而致死率较高,被其污染的食品容易引发严重的食品安全问题。本研究使用前期构建的LM重要的毒... 单核细胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,LM)是一种毒力较强、人畜共患的食源性致病菌,其具有穿透宿主屏障、胞内寄生的特点,因而致死率较高,被其污染的食品容易引发严重的食品安全问题。本研究使用前期构建的LM重要的毒力因子内化素A(internalinA,InlA)和InlB基因缺失菌株,以人结肠癌腺细胞Caco-2和人肝癌上皮细胞HepG2为研究对象,探究InlA和InlB缺失对LM侵袭宿主细胞和诱导细胞凋亡的影响。实验结果表明,InlA和InlB的缺失使LM侵袭宿主细胞的能力明显降低(P<0.05),与野生株相比侵袭量下降超过50%,同时也降低了其诱导宿主细胞凋亡的能力(P<0.05),与野生株相比凋亡细胞的比例下降幅度达到30%~50%。本实验确定了InlA和InlB在LM侵袭宿主细胞和诱导细胞凋亡的过程中具有重要的作用,有助于对LM的致病机理以及引起宿主相关免疫反应、诱导细胞凋亡相关分子机制的深入研究。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 毒力因子 内化素蛋白 细胞侵袭 细胞凋亡
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单核增生性李斯特菌hly缺失菌株的构建及生物特性的初步鉴定 认领 被引量:1
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作者 谢曼曼 刘武康 +5 位作者 丁承超 董庆利 陈国薇 曾海娟 郭亮 刘箐 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第16期17-22,共6页
为研究单核增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)hly基因对毒力的影响,利用同源重组原理,使用穿梭载体,构建单核细胞增生性李斯特菌野生菌株EGD-e的hly基因缺失菌株EGD-eΔhly。细菌活性实验证明缺失菌株生长状态与亲本无差... 为研究单核增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)hly基因对毒力的影响,利用同源重组原理,使用穿梭载体,构建单核细胞增生性李斯特菌野生菌株EGD-e的hly基因缺失菌株EGD-eΔhly。细菌活性实验证明缺失菌株生长状态与亲本无差异,但EGD-eΔhly丧失溶血活性,细胞侵袭能力降低约90%,在107cells/mL腹腔注射条件下不表现动物毒性。在转录水平上EGD-eΔhly的毒力基因inlC、prfA的表达量分别下降了81%和76%,actA、plcB的表达量分别提高了2.7倍和1.8倍。hly缺失菌株的成功构建及生物特性的初步研究结果为研究Lm致病机理提供依据。 展开更多
关键词 单核增生性李斯特菌 hly基因 同源重组 生物特性
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