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纳豆激酶液体发酵条件的优化 被引量:55
1
作者 郭勇 《华南理工大学学报:自然科学版》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第5期 127-131,共5页
纳豆激酶是从日本传统食品内豆中提取出来的一种具有溶血栓功能的酶。笔者从市售纳豆中分离出一株能产纳豆激酶的菌株,并对之进行液体培养,发现在pH7.0,接种量为2%,种龄24h,装液量10mL/100mL,碳源为木糖,浓... 纳豆激酶是从日本传统食品内豆中提取出来的一种具有溶血栓功能的酶。笔者从市售纳豆中分离出一株能产纳豆激酶的菌株,并对之进行液体培养,发现在pH7.0,接种量为2%,种龄24h,装液量10mL/100mL,碳源为木糖,浓度为2%,氮源为大豆蛋白胨,浓度为3%的条件下,接种后第四天为产酶高峰期,最高产酶量可达到787.1尿激酶单位/mL发酵液。 展开更多
关键词 纳豆激酶 液体发酵 药理 激酶
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纳豆——一种多功能食品 被引量:54
2
作者 郭勇 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期 71-72,共2页
纳豆是日本的一种传统性食品,最近的研究发现,纳豆及其周围的粘稠物质中含有多种成分,使之成为具有抗肿瘤、抗氧化性、降血压、溶血栓、防止骨质疏松、促凝血等多种功能的食品,尤其适合老年人食用。
关键词 纳豆 功能性食品
纳豆激酶活性测定方法 预览 被引量:39
3
作者 林剑 《广东药学》 CAS 2000年第6期 8-10,共3页
对先后建立的纤维平板法等几种测定纳豆激酶活性的方法进行概括总结介绍。
关键词 纳豆激酶 溶血栓活性 纤维蛋白平板法 血清板法
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表皮生长因子受体EGFR及其信号传导 预览 被引量:30
4
作者 吴健虹 +1 位作者 陈小佳 洪岸 《生命科学》 CSCD 2006年第2期 116-122,共7页
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是ErbB家族成员之一,具有酪氨酸激酶活性,是一种重要的跨膜受体。EGFR被配体激活后启动胞内信号传导,经过细胞质中衔接蛋白、酶的级联反应,调节转录因子激活基凼的转录... 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是ErbB家族成员之一,具有酪氨酸激酶活性,是一种重要的跨膜受体。EGFR被配体激活后启动胞内信号传导,经过细胞质中衔接蛋白、酶的级联反应,调节转录因子激活基凼的转录,指导细胞迁移、黏附、增殖、分化、凋亡,且与肿瘤的形成和恶化密切相关。本文对EGFR的结构特性、几种重要的信号通路及各个信号通路之间的交联,以及信号的衰减等方面的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 信号传导
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外源基因在大肠杆菌中的高效表达 预览 被引量:17
5
作者 廖美德 《生命科学》 CSCD 2002年第5期 283-287,共5页
为了提高外源蛋白在大杨杆菌中的表达量,人们对大肠杆菌表达系统进行了许多研究。作者综述了有关外源基因在大肠杆菌中高效表达的研究进展。
关键词 外源基因 大肠杆菌 高效表达 质粒
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一种潜在的溶血栓药物——纳豆激酶 预览 被引量:26
6
作者 林剑 郭勇 《药物生物技术》 CAS CSCD 2001年第1期 51-53,共3页
纳豆中提取出纳豆激酶(Nattokinase,简称NK)具有溶栓作用还兼具促进体内组织纤溶酶型激活剂(tPA)合成的功效。NK是一个分子量小的单链肽,可利用枯草杆菌进行液体发酵生产,因此有望成为新一代的口服溶血栓药物。
关键词 纳豆激酶 溶血栓药物 纤溶酶型激活剂 枯草杆菌 单链肽
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纳豆激酶原基因的克隆及表达 被引量:16
7
作者 孙奋勇 +2 位作者 廖美德 汪炬 《华南理工大学学报:自然科学版》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期 19-21,共3页
从纳豆菌中克隆具有溶血栓性质的纳豆激酶原的基因,与质粒PBV220连接,转化大肠杆菌E.coli DH5α.挑取阳性克隆用EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切鉴定得到一条约1000 bp的条带.阳性克隆经温度诱导表达,用SDS-PAGE电泳鉴定,在38 kD处有一条明显的带,... 从纳豆菌中克隆具有溶血栓性质的纳豆激酶原的基因,与质粒PBV220连接,转化大肠杆菌E.coli DH5α.挑取阳性克隆用EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切鉴定得到一条约1000 bp的条带.阳性克隆经温度诱导表达,用SDS-PAGE电泳鉴定,在38 kD处有一条明显的带,占菌体蛋白的20%左右,同时还表明该蛋白以包涵体的形式蛋白分子量为存在.包涵体经收集、蛋白变性及复性后显示溶血栓活性. 展开更多
关键词 纳豆激酶原 基因克隆 基因表达
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桃仁红花煎治疗无症状性高脂血症的作用研究 被引量:15
8
作者 陈孝银 章群 +3 位作者 杨钦河 沈强 徐云生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期 1529-1531,共3页
目的:探讨活血化淤理气通络经典方剂'桃仁红花煎'对无症状性高脂血症的治疗作用.方法:使用Shimadiu CL-7200型自动生化分析仪检测各组治疗前后患者血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、载... 目的:探讨活血化淤理气通络经典方剂'桃仁红花煎'对无症状性高脂血症的治疗作用.方法:使用Shimadiu CL-7200型自动生化分析仪检测各组治疗前后患者血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白A(APoA)、载脂蛋白B(APoB)水平,使用Griess法检测治疗前后患者血浆一氧化氮(NO)水平,使用邻苯三酚法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,使用巴比妥法检测血清丙二醛(MDA)含量.结果:治疗后,治疗组患者血浆TC、TG、LDL、MDA水平明显降低(P<0.05),而ApoA、HDL、NO水平,及SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),APoB治疗前后无明显变化(P>0.05);对照组给予洛伐它丁治疗后,TC、TG、LDL水平明显降低(P<0.05),ApoA、HDL水平明显升高(P<0.05),而MDA、NO、ApoB含量及SOD活性无明显变化.结论:活血化淤理气通络中药可以降低血脂,并有可能防治高脂血症对血管造成损害. 展开更多
关键词 桃仁红花煎 高脂血症 中草药 中医药疗法
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纳豆激酶酶原基因和纳豆激酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达 预览 被引量:6
9
作者 余榕捷 汪炬 +1 位作者 洪岸 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第3期 2-4,共3页
目的:构建可高效生产有活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌.方法:将纳豆激酶酶原(pro-nattokinase,pro-NK)基因和纳豆激酶(natokinase,NK)基因,并分别克隆到表达融合蛋白的高效表达载体pJN上,构建出表达质粒pJNK1和pJNK2,并转化大肠杆菌BL2... 目的:构建可高效生产有活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌.方法:将纳豆激酶酶原(pro-nattokinase,pro-NK)基因和纳豆激酶(natokinase,NK)基因,并分别克隆到表达融合蛋白的高效表达载体pJN上,构建出表达质粒pJNK1和pJNK2,并转化大肠杆菌BL21(DE3).结果:IPTG诱导下,两个融合蛋白的表达量均达到30%.活性检测显示表达纳豆激酶酶原融合蛋白的菌株pJNK-1(BL)诱导后菌体破碎上清的溶栓活性比表达纳豆激酶融合蛋白的菌株pJNK(-2(BL)高2-3倍.结论:纳豆激酶酶原融合蛋白部分自减切产生纳豆激酶成熟肽. 展开更多
关键词 纳豆激酶酶原 纳豆激酶基因 克隆 大肠杆菌 表达 溶栓活性
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诱导剂对植物细胞培养生产次生代谢物的作用 预览 被引量:10
10
作者 郭勇 《生物工程进展》 CAS CSCD 1998年第4期 50-52,57,共4页
诱导剂可以诱导植物产生植物抗毒素,因此成为植物细胞培养次生代谢物生产中提高产量的一种手段。本文介绍了有关诱导剂在植物细胞生产次生代谢物方面的研究概况,重点介绍了诱导剂作用机理及第二信使的研究成果。
关键词 诱导剂 植物细胞培养 次级代谢物
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重组类胰岛素样生长因子-Ⅰ的纯化与复性 预览 被引量:13
11
作者 刘侃 汪炬 +2 位作者 李志英 洪岸 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期 29-33,共5页
目的:获得高纯度和高活性的胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF-1);方法:构建好的BL21大肠杆菌工程菌经IPTG诱导,以融合一段截短型半乳糖苷酶及His—tag形式表达IGF-1融合蛋白(约15kDa),超声破碎,提取包涵体... 目的:获得高纯度和高活性的胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF-1);方法:构建好的BL21大肠杆菌工程菌经IPTG诱导,以融合一段截短型半乳糖苷酶及His—tag形式表达IGF-1融合蛋白(约15kDa),超声破碎,提取包涵体经镍柱亲和层析后,用羟氨切割纯化的融合蛋白,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及GSH/GSSG的存在下复性。结果:经Ni^2+枉亲和层析,IGF-1纯度达90%以上,复性后得到有较高生物活性的IGF-1。结论:IGF-1发酵及纯化和复性方法的建立为大量生产IGF—l打下了基础。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-1(IGF-1) 纯化复性
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盐酸氨基葡萄糖胺诱导黑素瘤细胞分化的形态学观察 被引量:9
12
作者 戴云 +4 位作者 孙奋勇 林剑 陈孝银 张美英 陈小佳 《安徽中医学院学报》 CAS 2002年第3期 42-44,共3页
目的:研究盐酸氨基葡萄糖(GAH)对黑素瘤细胞分化的诱导作用.方法:用GAH处理体外培养的黑素瘤细胞,观察细胞生长和形态的变化.结果:细胞生长受到抑制,细胞形态发生改变,细胞由圆形变为梭形,核质比减小,核仁减少或消失,有些细胞胞内出现空... 目的:研究盐酸氨基葡萄糖(GAH)对黑素瘤细胞分化的诱导作用.方法:用GAH处理体外培养的黑素瘤细胞,观察细胞生长和形态的变化.结果:细胞生长受到抑制,细胞形态发生改变,细胞由圆形变为梭形,核质比减小,核仁减少或消失,有些细胞胞内出现空泡;Giemsa染色显示实验组处于分裂期的细胞数远远少于对照组.结论:黑素瘤细胞经GAH作用后有向正常细胞转化的趋势,GAH是一种潜在的肿瘤细胞分化诱导剂. 展开更多
关键词 细胞分化 形态学 盐酸氨基葡萄糖 黑素瘤细胞
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诱导剂对植物细胞生产次生代谢物的作用 预览 被引量:3
13
作者 郭勇 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 1998年第10期 7-9,共3页
诱导剂可以诱导植物产生植物抗毒素,因此厉为提高植物细胞次生代谢物产量的一种手段。本文介绍了有关诱导剂在植物细胞生产次生代谢物方面的研究概况,诱导剂的作用机理及第二信使的研究成果。
关键词 诱导剂 植物细胞培养 次生代谢物 抗毒素
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杆状病毒表达系统在疫苗研究中的应用 预览 被引量:8
14
作者 +3 位作者 洪岸 陈小佳 孙奋勇 林剑 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 367-369,共3页
目前使用的体外基因表达系统有多种,各有其优缺点.常用的大肠杆菌原核表达系统操作方便,表达稳定,但表达基因的分子量有限,不能对表达产物进行翻译后修饰.动物细胞表达具有良好的翻译后修饰功能,但成本高,操作复杂.杆状病毒表达系统是... 目前使用的体外基因表达系统有多种,各有其优缺点.常用的大肠杆菌原核表达系统操作方便,表达稳定,但表达基因的分子量有限,不能对表达产物进行翻译后修饰.动物细胞表达具有良好的翻译后修饰功能,但成本高,操作复杂.杆状病毒表达系统是近年来日益受到重视的又一个重要的表达系统.现介绍如下. 展开更多
关键词 杆状病毒 基因表达系统 疫苗 恶性肿瘤 ELISA法
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纳豆激酶的合成机制 被引量:3
15
作者 郭勇 +2 位作者 林剑 戴云 蒲含林 《暨南大学学报:自然科学与医学版》 CAS CSCD 2001年第3期 110-114,共5页
目的:探讨NK(纳豆溶酶)合成机制,以提高NK产量. 方法:通过液体发酵的方法比较不同氮源对NK合成的影响,并研究大豆提取物对NK合成的诱导作用. 结果:NK是一个胞外酶,大豆蛋白胨是NK合成的最佳氮源;大豆沉淀蛋白所得上清液对NK合成... 目的:探讨NK(纳豆溶酶)合成机制,以提高NK产量. 方法:通过液体发酵的方法比较不同氮源对NK合成的影响,并研究大豆提取物对NK合成的诱导作用. 结果:NK是一个胞外酶,大豆蛋白胨是NK合成的最佳氮源;大豆沉淀蛋白所得上清液对NK合成有诱导作用. 结论:大豆蛋白分解后所得的小分子物质对NK的合成有诱导作用,NK是一个诱导酶. 展开更多
关键词 纳豆溶酶 酶合成 诱导 阻遏 合成机制 诱导酶 液体发酵
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产纳豆激酶之菌种的分离与培养 被引量:7
16
作者 郭勇 《中南林学院学报》 CAS CSCD 1999年第4期 50-52,共3页
纳豆激酶(Nattokinase)晃从日本传统食品纳豆中提取出来的一种具有溶血栓功能的酶。从市售纳豆中分离出一株能产NK的菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,其液体培养生长曲线呈S形,6~4... 纳豆激酶(Nattokinase)晃从日本传统食品纳豆中提取出来的一种具有溶血栓功能的酶。从市售纳豆中分离出一株能产NK的菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,其液体培养生长曲线呈S形,6~48h为指数生长期,48~96h为稳定生长期;产酶高峰期为稳定性长前期;大豆渣、豆浆、大豆蛋白胨及胰蛋白胨4种氮源中以大豆蛋白胨的产酶量最高,最高产酶量为610.7尿激酶单位/mL发酵液 展开更多
关键词 纳豆激酶 枯草杆菌 菌种分离 菌种鉴定 菌种培养
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纳豆激酶酶原基因的克隆、融合表达及活性测定 被引量:5
17
作者 余榕捷 +2 位作者 洪岸 汪炬 孙奋勇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期 757-761,共5页
目的:利用基因工程技术,构建表达具溶栓活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌.方法:利用PCR方法扩增纳豆激酶酶原(pro-NK)基因,并克隆到表达载体pET3c上,构建表达pro-NK和载体上22氨基酸短肽的融合蛋白的表达质粒pENK;表达质粒pENK分别转化... 目的:利用基因工程技术,构建表达具溶栓活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌.方法:利用PCR方法扩增纳豆激酶酶原(pro-NK)基因,并克隆到表达载体pET3c上,构建表达pro-NK和载体上22氨基酸短肽的融合蛋白的表达质粒pENK;表达质粒pENK分别转化溶源化宿主菌BL21(DE3)pLysS-和BL21(DE3)pLysS+,获得表达菌pENK-(DE3)pLysS-和pENK-(DE3)pLysS+.利用SDS-PAGE和纤维蛋白平板法检测目的蛋白的表达及活性.结果:SDS-PAGE显示两株菌株均表达42 kD的目的蛋白.纤维蛋白平板法显示表达产物具溶栓的活性.在pENK-(DE3)pLysS-中融合蛋白不需异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导就有基础表达,融合蛋白的表达使表达菌细胞溶解,菌落中空,表明表达产物具细胞毒作用.结论:本研究成功实现了在大肠杆菌表达具有溶栓活性的pro-NK融合蛋白,为开发纳豆激酶成为新一代溶栓药物的研究奠定基础. 展开更多
关键词 纳豆激酶 溶源性 基因表达
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长角豆胶复合涂膜保鲜剂常温保鲜荔枝的研究 预览 被引量:10
18
作者 郭守军 杨永利 +3 位作者 袁丹霞 黄荣城 蔡镇钊 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期 615-618,共4页
本实验以长角豆胶与黄原胶复配胶为涂膜基质,CMC-Na、柠檬酸和吐温80等为成膜助剂,配以丁香、艾叶和大黄等具有抗菌作用的中草药制剂,配制成中草药复合涂膜保鲜剂,研究了常温(均温30.50℃)下该复合涂膜保鲜剂对荔枝品质变化的影... 本实验以长角豆胶与黄原胶复配胶为涂膜基质,CMC-Na、柠檬酸和吐温80等为成膜助剂,配以丁香、艾叶和大黄等具有抗菌作用的中草药制剂,配制成中草药复合涂膜保鲜剂,研究了常温(均温30.50℃)下该复合涂膜保鲜剂对荔枝品质变化的影响。结果表明:常温下经该保鲜剂涂膜保鲜的荔枝与对照组相比,果实腐烂率、失重率明显降低,呼吸强度、PPO活性及营养成分的消耗被抑制,延缓了果实的衰老过程。 展开更多
关键词 长角豆胶 复合涂膜保鲜剂 荔枝 保鲜 常温
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中国仓鼠卵巢细胞表达系统在疫苗研制中的应用 预览 被引量:5
19
作者 陈小佳 +3 位作者 戴云 汪炬 洪岸 林剑 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期 873-874,共2页
分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位.在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中,最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamster Ovary,CHO).它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞.本文就... 分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位.在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中,最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamster Ovary,CHO).它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞.本文就CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述. 展开更多
关键词 中国 仓鼠 卵巢细胞表达系统 疫苗 CHO 基因工程 疫苗
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一种有效提高纳豆激酶表达量的方法 预览 被引量:3
20
作者 +3 位作者 洪岸 蒲含林 刘翠兰 廖美德 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期 59-63,共5页
为提高纳豆激酶在大肠杆菌中的表达量,在不改变蛋白质序列的前提下,对纳豆激酶氨基端编码前20个氨基酸的序列进行改造,以降低此区域的GC含量及稀有密码子数量,其中有3个位点直接采用T,另有4个位点采取不确定突变的方式,产生16种组合,由... 为提高纳豆激酶在大肠杆菌中的表达量,在不改变蛋白质序列的前提下,对纳豆激酶氨基端编码前20个氨基酸的序列进行改造,以降低此区域的GC含量及稀有密码子数量,其中有3个位点直接采用T,另有4个位点采取不确定突变的方式,产生16种组合,由此而得16条序列,利用生物信息软件DNASIS v2.5对这些序列的二级结构进行模拟,取得自由能绝对值最低的6条序列设计引物,克隆至表达载体pET-3c,导人大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,其中有3株菌形成明显高效表达. 展开更多
关键词 纳豆激酶 表达量 翻译起始区 密码子偏好性
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