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伊蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白促进DENV-2早期感染BHK-21细胞作用研究
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作者 徐倩 田炎珅 +4 位作者 朱亚妮 李永念 吴家红 商正玲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第5期530-533,538共5页
目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK... 目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞的粘附作用以及兔抗rAlb-34k2抗体的阻断效应。结果1)免疫荧光法检测结果显示,热灭活rAlb-34k2蛋白处理组感染比值为0.40±0.023,未灭活组0.54±0.029,差异有统计学意义(P=0.001 1)。2)Western blot和免疫荧光法检测显示rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞均可发生粘附,且与BHK-21细胞的粘附具有剂量依赖性;特异性抗体不能阻断rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2细胞的粘附效应。结论rAlb-34k2蛋白可与BHK-21等DENV多种靶细胞发生粘附作用,具有介导DENV-2吸附细胞,促进病毒入侵宿主的潜能。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 蚊唾液蛋白 宿主细胞 虫媒病毒 粘附作用
猪CD127流式单克隆抗体的研制 预览
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作者 杨溢欢 +7 位作者 潘红梅 朱丹 龙熙 涂志 张凤鸣 郭宗义 陈四清 蓝静 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期572-579,共8页
【目的】研制出猪CD127(调节因子IL-7受体α链)流式单克隆抗体,为研究分析猪淋巴细胞亚群,尤其是猪Treg细胞亚群提供流式细胞分析抗体,也为进一步探究猪抗病性状与免疫机制间的关系打下基础。【方法】克隆猪CD127基因片段,通过原核载体... 【目的】研制出猪CD127(调节因子IL-7受体α链)流式单克隆抗体,为研究分析猪淋巴细胞亚群,尤其是猪Treg细胞亚群提供流式细胞分析抗体,也为进一步探究猪抗病性状与免疫机制间的关系打下基础。【方法】克隆猪CD127基因片段,通过原核载体诱导表达出相应的融合蛋白,以纯化后的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,然后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,综合ELISA和流式细胞仪检测筛选出亚克隆抗体,并采用Westernblotting验证所得亚克隆抗体能否与猪淋巴细胞上的CD127特异性结合。【结果】猪CD127基因cDNA全长1999bp,第49~1428bp为开放阅读框(ORF),编码459个氨基酸,其中前21位氨基酸为信号肽,成熟肽N端第1~219位氨基酸为胞外蛋白,第220~242位氨基酸为跨膜蛋白,第243~459位氨基酸为胞内蛋白。以pET28a和pET32a原核载体诱导表达CD127胞外片段可获得大小介于34~43kD的融合蛋白,经Ni亲和层析柱纯化后用于免疫Balb/c小鼠,6只免疫小鼠血清中的多克隆抗体均能对猪淋巴细胞中的CD3阳性细胞(CD3+)进行共标记,其中以M2和M4两只免疫小鼠抗血清对CD3+的共标记效果较优,分群清晰;但流式细胞仪检测发现,仅2.3%的CD3+能与M2混合池培养基上清液中的分泌抗体共标记,而67.0%的CD3+能与M4混合池培养基上清液中的分泌抗体共标记,且分群清晰。从M4混合池中筛选出6株效价稳定的亚克隆细胞株(1E2、1D8、2F3、2F8、3C6和4E1),且以1D8、2F3、2F8和3C6亚克隆抗体标记的CD3+较多,其培养基上清液中的分泌抗体在猪胸腺和肌肉样品中均能检测出大小约50kD的单一目的条带。【结论】制备获得的猪CD127流式单克隆抗体可与T淋巴细胞表面的IL-7受体特异性结合,同时在流式细胞仪检测过程中可用于猪Treg细胞亚群检测。 展开更多
关键词 CD127 单克隆抗体 TREG细胞 ELISA 流式细胞仪检测
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猪EIF2S3基因克隆测序及其组织表达谱分析 预览
3
作者 龙熙 张廷焕 +5 位作者 蓝静 柴捷 郭宗义 王金勇 张亮 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期2062-2069,共8页
【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的mRNA全长序列... 【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的mRNA全长序列,在线完成各种生物信息学分析后,利用实时荧光定量PCR分析猪EIF2S3基因的组织表达特征。【结果】猪EIF2S3基因mRNA全长1813 bp,其中蛋白质编码区(CDS)长1419 bp,5'UTR区、3'UTR区分别长14和380 bp,编码472个氨基酸。EIF2S3蛋白分子量51.1 kD,理论等电点(pI)8.62,包含58个带正电的氨基酸和52个带负电的氨基酸,其前体蛋白靠近N端区域有一个强疏水区;EIF2S3蛋白的空间结构由α-螺旋、β-折叠、延伸及无规则卷曲构成。EIF2S3蛋白氨基酸序列与狗和大白鼠的相似性最高(99.6%),其次是马、猫、牛、羊和人类(99.4%),与斑马鱼的相似性最低(96.6%)。EIF2S3基因在猪的心脏、胸腺和淋巴组织中表达量较高,在脾脏和肌肉中呈中度表达,在肾脏中的表达量较低,而在肝脏中基本不表达。【结论】猪EIF2S3基因全长1813 bp,在核酸和氨基酸水平上与其他物种的EIF2S3基因高度同源,尤其与狗和大白鼠的遗传距离最近;其在猪心脏、胸腺和淋巴组织中的表达量较高,在肝脏中基本不表达,据此推测EIF2S3参与合成的蛋白更多地参与心脏泵血和免疫相关功能,基本不发挥能量代谢功能 展开更多
关键词 真核翻译起始因子2(eIF2) EIF2S3基因 克隆 序列分析 组织表达谱
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猪EIF2S3基因启动子的克隆、活性及转录调控元件分析 预览
4
作者 龙熙 柴捷 +3 位作者 蓝静 郭宗义 张廷焕 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第A01期38-44,共7页
旨在初步分析猪EIF2S3基因的启动子活性以及转录调控元件。利用生物信息学分析、PCR扩增、基因克隆、细胞转染、双荧光素酶活性分析等方法,获得了EIF2S3基因启动子区域的序列特征,构建了不同片段长度的EIF2S3基因启动子区的双荧光素酶... 旨在初步分析猪EIF2S3基因的启动子活性以及转录调控元件。利用生物信息学分析、PCR扩增、基因克隆、细胞转染、双荧光素酶活性分析等方法,获得了EIF2S3基因启动子区域的序列特征,构建了不同片段长度的EIF2S3基因启动子区的双荧光素酶报告基因载体并分析了其荧光素酶活性,进而确定了EIF2S3基因的核心启动子区域以及关键的调控区域,最后还预测了关键调控区域的转录因子及其结合位点。结果表明,EIF2S3基因候选启动子区包含3个核心启动子以及2个CpG岛;-706~+200bp为EIF2S3基因的核心启动子区域,-706~-253bp为EIF2S3基因启动子的关键调控区域,且发挥正向调节作用,而-1563~-706bp不存在任何对EIF2S3基因启动子活性有影响的调控元件;EIF2S3基因启动子的关键调控区域包含440个转录因子结合位点,且多个转录因子在此区域均有多个结合位点,如SP1、KLF4、MyoD1、MyoG、NFKB1。为进一步研究猪EIF2S3基因的表达机制奠定了基础。 展开更多
关键词 EIF2S3 启动子 转录活性 转录因子
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猪舍不同降温的特点 预览
5
作者 龙熙 郭宗义 《畜禽业》 2017年第8期57-58,共2页
夏季气温明显升高,猪只易出现掉膘、生长滞慢、中暑等症状,有效降低猪舍内的温度对猪场生产成绩以及经济效益的稳定至关重要。因此,合理使用防暑降温设备是关键。常用的降温设备包括风扇通风、滴水降温与喷雾降温、湿帘风机降温、湿... 夏季气温明显升高,猪只易出现掉膘、生长滞慢、中暑等症状,有效降低猪舍内的温度对猪场生产成绩以及经济效益的稳定至关重要。因此,合理使用防暑降温设备是关键。常用的降温设备包括风扇通风、滴水降温与喷雾降温、湿帘风机降温、湿帘冷风机降温和冷空调降温等。主要就目前猪舍常用的不同降温设备及其特点进行讨论,以期为适当选择降温设备提供一些依据。 展开更多
关键词 猪舍 降温措施 特点
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荣昌猪胸腺素β15A(TMSB15A)cDNA全长克隆、序列信息及组织表达分析 预览 被引量:1
6
作者 龙熙 蓝静 +2 位作者 郭宗义 王金勇 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1602-1610,共9页
旨在克隆荣昌猪TMSB15A基因全长,检测该基因在荣昌猪各组织中的表达特征,并对其基因的结构与功能进行分析。本研究利用RCAE(Rapid—amplificationofcDNAends)-PCR以及RT-PCR(Real-time quantitativePCR)技术克隆荣昌猪TMSB15A基因... 旨在克隆荣昌猪TMSB15A基因全长,检测该基因在荣昌猪各组织中的表达特征,并对其基因的结构与功能进行分析。本研究利用RCAE(Rapid—amplificationofcDNAends)-PCR以及RT-PCR(Real-time quantitativePCR)技术克隆荣昌猪TMSB15A基因mRNA全长序列以及检测该基因在荣昌猪各组织中的表达特征。结果表明,荣昌猪TMSB15A基因全长654bp,其中CDS区长138bp,编码45个氨基酸,5’uTR和3’UTR分别长86和430bp。生物信息学分析表明,TMSB15A蛋白的理论分子量为5.2ku,有10个带负电的氨基酸,9个带正电的氨基酸,蛋白理论等电点为5.3;预测TMSB15A蛋白无疏水区、信号肽结构、跨膜结构域,其主要在细胞质中发挥生理功能;TMSB15A蛋白的三级结构由”螺旋和无规则卷曲构成。TMSB15A基因编码的氨基酸序列与人、长臂猿以及黑猩猩的同源性最高,为97.8%,其次是骆驼和兔,为93.3%,与马的同源性最低,为11.1%。TMSB15A在荣昌猪免疫相关组织脾和胸腺中表达量最高(P〈0.01),在淋巴结和肺中呈中等丰度表达,在心、肝、肾和肌肉中表达量较低。本试验为研究TMSB15A基因的功能奠定了基础,也为荣昌猪抗病育种研究提供了理论支撑。 展开更多
关键词 昌猪 TMSB15A RACE 基因克隆 序列分析 组织表达
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新城疫疫苗载体研究进展 预览
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作者 杨溢欢 +2 位作者 张素辉 付利芝 孙裕光 《畜禽业》 2017年第11期1-3,共3页
新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种禽类急性、热性、败血性和高度接触性传染病。新城疫病毒属禽副黏病毒I型,为不分节段单股负链病毒,能有效诱导机体产生强大的免疫应答,部分毒... 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种禽类急性、热性、败血性和高度接触性传染病。新城疫病毒属禽副黏病毒I型,为不分节段单股负链病毒,能有效诱导机体产生强大的免疫应答,部分毒株对鸡有强烈的致病性。新城疫病毒由于其病毒属性,可利用反向遗传学方法对其进行改造,构建疫苗载体。主要对NDV的基因组及利用NDV来构建疫苗载体的方法进行概述,对利用反向遗传学构建NDV疫苗载体,重组NDV病毒的研究进展进行了综合讨论。 展开更多
关键词 新城疫病毒 疫苗载体 分子生物学 反向遗传学 重组病毒
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初中英语文化教学实验研究 预览 被引量:1
8
作者 童修文 吴延生 《遵义师范学院学报》 2017年第4期136-138,142共4页
虽然专家学者和英语课程标准都要求在初中英语教学中开展文化教学,但文化教学在一线教学中却很难落到实处。作者通过文化教学实验发现,在当前的命题方式下,除填空题以外,文化教学对学生其他题型的得分不会产生显著影响。要改变当前... 虽然专家学者和英语课程标准都要求在初中英语教学中开展文化教学,但文化教学在一线教学中却很难落到实处。作者通过文化教学实验发现,在当前的命题方式下,除填空题以外,文化教学对学生其他题型的得分不会产生显著影响。要改变当前文化教学的现状,必须在课程标准中明确规定文化教学的具体内容和教学与评测的方法,并且在中考英语试卷中将文化意识设为考点,从而促进初中英语的文化教学。 展开更多
关键词 初中英语 文化教学 文化测试
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FK506结合蛋白51(FKBP51)的研究进展 预览
9
作者 龙熙 郭宗义 《畜禽业》 2016年第6期18-20,共3页
FK506结合蛋白51(FKBP51)是一种具有多种结构域,多种生物学功能的免疫大分子,在机体免疫、类固醇激素的调节、癌症的发生和治疗以及抑郁症中发挥着重要作用,同时在畜禽研究中发现该基因是免疫性状的重要候选基因。文章对FKBP51基因的... FK506结合蛋白51(FKBP51)是一种具有多种结构域,多种生物学功能的免疫大分子,在机体免疫、类固醇激素的调节、癌症的发生和治疗以及抑郁症中发挥着重要作用,同时在畜禽研究中发现该基因是免疫性状的重要候选基因。文章对FKBP51基因的结构、分布及功能等方面进行了综述。 展开更多
关键词 FK506结合蛋白51 结构 分布 功能 研究进展
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比较等级典型正误例析
10
作者 《初中生辅导》 2013年第11期35-36,共2页
她的手表比我的新。【误】Her watch is newer than I
关键词 正误例析 比较等级 WATCH THAN
Look短语透析
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作者 《初中生辅导》 2013年第19期65-67,共3页
一、look译为“瞧、看、望”常用来引起别人的注意;还可以译为“看起来”,常作连系动词,后接形容词构成系表结构。如:
关键词 Look 透析 短语 look 连系动词 系表结构 形容词
由一道中考题谈 another,other,theother 和 else 用法
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作者 《初中生辅导》 2013年第27期44-47,共4页
2011年广州市初中毕业生学业考试英语试题第16题:
关键词 ANOTHER else 中考题 用法 初中毕业生 英语试题 学业考试 广州市
工地印象
13
作者 《黄金时代》 2013年第6期75-79,共5页
公路、钱轨、摩天大楼、商场、大桥,都是城市的代名词,每天在上面行走和生活,已经习以为常。但是看着它们时,你是否会想到其他的,更远的一些东西?比如,它是怎么建成的?建成它需要多长时间?有多少工人在上面工作过?他们都是从... 公路、钱轨、摩天大楼、商场、大桥,都是城市的代名词,每天在上面行走和生活,已经习以为常。但是看着它们时,你是否会想到其他的,更远的一些东西?比如,它是怎么建成的?建成它需要多长时间?有多少工人在上面工作过?他们都是从哪来的?他们现在怎么样…… 展开更多
关键词 印象 工地 摩天大楼 代名词
走进砖窑
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作者 《黄金时代:上半月》 2013年第12期75-79,共5页
普通粘土砖的生产和使用,在我国已有3000多年的历史。现今,建设工程中使用的墙体材料中,普通粘土砖仍占主导地位。虽然普通粘土砖存在诸多不足,但由于价格低廉、工艺简单、设计和施工技术成熟以及人们的使用惯性等原因,普通粘土砖... 普通粘土砖的生产和使用,在我国已有3000多年的历史。现今,建设工程中使用的墙体材料中,普通粘土砖仍占主导地位。虽然普通粘土砖存在诸多不足,但由于价格低廉、工艺简单、设计和施工技术成熟以及人们的使用惯性等原因,普通粘土砖仍是农村主要的墙体材料之一。 展开更多
关键词 粘土砖 墙体材料 建设工程 施工技术
重庆地区某规模化猪场猪圆环病毒2型的PCR检测 被引量:4
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作者 田家伟 吴霞 +8 位作者 张亮 谌秀 潘红梅 张凤鸣 刘文 郭宗义 蓝静 蒋曹德 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期89-91,共3页
为了研究重庆地区某规模化猪场猪圆环病毒2型(PCV-2)的感染现状和不同猪种、不同生长阶段猪群的感染情况,试验采用PCR技术对来自重庆地区某规模化猪场的430份猪血清进行检测。结果表明:PCV-2总阳性率为4.65%(20/430);长白猪PC... 为了研究重庆地区某规模化猪场猪圆环病毒2型(PCV-2)的感染现状和不同猪种、不同生长阶段猪群的感染情况,试验采用PCR技术对来自重庆地区某规模化猪场的430份猪血清进行检测。结果表明:PCV-2总阳性率为4.65%(20/430);长白猪PCV-2的感染率为12.50%(4/32),明显高于总阳性率(4.65%);初生猪PCV-2的感染率为0(0/67),明显低于总阳性率。说明此规模化猪场存在PCV-2的感染且在不同猪种和不同阶段猪群有较大差异。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 PCR检测 重庆 规模化猪场
点击and,but,or用法
16
作者 《初中生辅导》 2013年第13期28-31,共4页
同学们,你们知道and,but,or的具体用法吗?现笔者对其用法进行讲解,以飨读者。
关键词 具体用法 BUT or 同学
Turn短语透析
17
作者 《初中生辅导》 2013年第8期34-36,共3页
一、turn译为“使某物转动、旋转”;作连系动词时译为“成为,变成”,其后常接形容词构成系表结构。如:Thehandsofaclockturnveryslowly.时钟的指针走得很慢。InSpringtreesturngreen.树在春天变绿了。二、turnon译为“打开(电灯... 一、turn译为“使某物转动、旋转”;作连系动词时译为“成为,变成”,其后常接形容词构成系表结构。如:Thehandsofaclockturnveryslowly.时钟的指针走得很慢。InSpringtreesturngreen.树在春天变绿了。二、turnon译为“打开(电灯、电视等),其后接人称代词时应把人称代词放在turnon之间。如: 展开更多
关键词 中学 英语 课外阅读 阅读材料
后置定语归纳
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作者 《初中生辅导》 2013年第20期52-53,共2页
2011年烟台市初中学生学业考试英语试题第37小题: A ning. M A C foreign visitor is coming to visit our y mother will offer him to eat. anything delicious B something real new house this eve- Chinese something Japanese ... 2011年烟台市初中学生学业考试英语试题第37小题: A ning. M A C foreign visitor is coming to visit our y mother will offer him to eat. anything delicious B something real new house this eve- Chinese something Japanese food D delicious something 展开更多
关键词 SOMETHING 后置定语 归纳 this OFFER HOUSE 英语试题 学业考试
LOOK短语透析
19
作者 《初中生辅导》 2012年第28期22-24,共3页
look 译为“瞧、看、望”常用来引起别人的注意;还可以译为“看起来”,常作连系动词,后接形容词构成系表结构。
关键词 LOOK 透析 短语 look 连系动词 系表结构 形容词
直击动词不定式
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作者 《初中生辅导》 2012年第20期 62-66,共5页
动词不定式——不可以充当句中谓语的动词,即非谓语动词。其标志(todo)。它们不受主语限制,无时态语与语态变化,可作主语、宾语、表语、定语、状语和宾语补足语。
关键词 动词不定式 非谓语动词 宾语补足语 主语 语态 时态 表语 定语
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