期刊文献+
共找到126篇文章
< 1 2 7 >
每页显示 20 50 100
马抗中东呼吸综合征冠状病毒特异性F(ab’)2的制备
1
作者 邱泊宁 胡星星 +8 位作者 闫飞虎 王翀 崔健男 盖微微 曹增国 王化磊 杨松涛 夏咸柱 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期173-180,共8页
目的采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab’)2。方法以经MERS-Co V病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高... 目的采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab’)2。方法以经MERS-Co V病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,原核表达的MERS-CoV刺突蛋白S受体结合域(S-receptor binding domain,S-RBD)为抗原蛋白制备免疫亲和柱,提取制备抗原特异性IgG或F(ab’)2。间接ELISA法检测各样品的活性,MERS假病毒中和试验检测样品的中和活性,BCA法测定样品的浓度,并计算收率。结果所制备的特异性IgG与特异性F(ab’)2的纯度分别为90. 1%和92. 8%,收率分别为8. 7%和3. 07%;在相同的浓度下,所制备的特异性IgG或F(ab’)2的活性和中和活性均高于对照组中的血清总Ig G或总F(ab’)2。结论成功制备了马抗MERS-CoV特异性IgG或F(ab’)2,为建立更加安全与高效的抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)2制备工艺奠定了基础。 展开更多
关键词 中东呼吸综合征 冠状病毒 病毒样颗粒 免疫亲和层析 免疫球蛋白 F(ab’)2
裂谷热研究进展
2
作者 毕津豪 闫飞虎 +2 位作者 黄培(综述) 杨松涛(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期351-356,共6页
裂谷热(Rift Valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)引起的发热性人兽共患病,该病导致反刍动物的大面积死亡及人类的致命性出血热。RVF最初仅流行于非洲东部地区,现正在逐步扩大。2016年我国确诊首例输入性病... 裂谷热(Rift Valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)引起的发热性人兽共患病,该病导致反刍动物的大面积死亡及人类的致命性出血热。RVF最初仅流行于非洲东部地区,现正在逐步扩大。2016年我国确诊首例输入性病例,提示非流行地区和国家正在面临威胁。RVF的流行不仅严重影响人类的健康及畜牧业的发展,更可能被用作潜在生物战剂,因此被世界动物卫生组织列为必须报告疫情。本文对RVF的流行病学、分子生物学、检测技术及疫苗研究进展等方面进行简要综述,为今后RVF的相关研究提供参考。 展开更多
关键词 裂谷热病毒 流行病学 分子生物学 检测技术 疫苗
河南省肾综合征出血热高发地区健康教育效果评价
3
作者 李琼 何景阳 +4 位作者 王海峰 李蓬 刘甲野 李挺 《国际病毒学杂志》 2019年第3期206-209,共4页
目的调查河南省肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)高发地区(河南省驻马店市正阳县)健康教育前后农村居民HFRS防治知识、态度和行为(knowledge,attitudes and practice,KAP)情况,并评估健康教育干预效果。方... 目的调查河南省肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)高发地区(河南省驻马店市正阳县)健康教育前后农村居民HFRS防治知识、态度和行为(knowledge,attitudes and practice,KAP)情况,并评估健康教育干预效果。方法采用分层抽样方法,根据2017年正阳县HFRS发病情况,抽取发病率高、比较高、一般和低的4个乡镇,每乡镇随机抽取3个村,每村随机抽取约50例(18~65岁)农村居民进行干预前后调查,收集并比较干预前后研究对象HFRS防治KAP等情况。结果干预前、后分别调查了597人和612人。干预后调查对象对“HFRS传染源”的知晓率由36.35%提高到68.30%;对“接触鼠排泄物可以感染”的知晓率由36.52%提高到62.09%。"愿意接种疫苗"者由58.12%提高到了77.45%。"储存粮食时加盖且不接触地面和墙面"由24.96%提高到了67.81%、"清理杂物、稻草、麦秸等时戴口罩、手套"由21.94%提高到了54.41%。结论针对性健康教育能明显改善HFRS高发地区农村居民相关KAP,但应进一步探索提高健康教育覆盖率、并促使防治行为发生转变的策略和措施。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 健康教育 知识 态度
狂犬病疫苗免疫人B细胞受体库的高通量测序分析
4
作者 谢孟泽 翁锐强 +3 位作者 杨松涛 夏咸柱 平森 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期373-380,共8页
目的对志愿者接种商业化狂犬病病毒疫苗前后的B细胞受体库进行高通量测序,探讨志愿者接种前后B细胞受体库互补决定区3表达谱的变化情况,为了解B细胞生物学作用、评估疫苗作用等提供参考。方法以商业化狂犬病病毒疫苗分别注射4个志愿者,... 目的对志愿者接种商业化狂犬病病毒疫苗前后的B细胞受体库进行高通量测序,探讨志愿者接种前后B细胞受体库互补决定区3表达谱的变化情况,为了解B细胞生物学作用、评估疫苗作用等提供参考。方法以商业化狂犬病病毒疫苗分别注射4个志愿者,分离外周血单核细胞,提取PBMC总RNA,对总RNA进行逆转录获得cDNA,以cDNA为模板进行多重PCR,后通过Illumina HiseqtmXten(novaseq)平台进行高通量测序和生物信息学分析。结果通过接种RABV疫苗,志愿者BCR的多样性改变但变化无统计学意义。V/J区基因片段的序列使用频率以及V-J基因组合改变,其中IGHJ1基因与IGHV1-3、IGHV3-20、IGVH3-7和IGHV2-26使用频率升高,免疫前后差异有统计学意义;8个V-J组合在免疫前后差异有统计学意义。鉴定了疫苗免疫诱导B细胞克隆后高频扩增(>0.4%)的CDR3氨基酸克隆序列与核苷酸克隆序列,发现同一志愿者中,接种疫苗后与接种疫苗前相比高频克隆序列的大部分频率发生变化,并且不同志愿者之间的序列不同;此外还了解高频序列和对应多肽的性质,如等电点和平均亲水性。结论通过高通量测序对狂犬病病毒疫苗免疫后的人BCR进行了定量分析,发现了狂犬病疫苗免疫人后BCR表达谱的变化情况,为了解B细胞在保护宿主免受RABV感染和改善疫苗反应的生物学作用提供实验性数据。 展开更多
关键词 狂犬病病毒疫苗 B细胞受体库 高通量测序 互补性决定区
埃博拉病毒抗体间接血凝检测方法的建立
5
作者 张颖 曹增国 +13 位作者 吴芳芳 李国华 李恩涛 焦翠翠 迟航 金宏丽 韩秋雪 张胜男 王化磊 冯娜 高玉伟 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期688-694,共7页
以纯化后的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)糖蛋白(GP)作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,进行最佳反应条件优化,建立间接血凝抗体检测方法。以EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F(ab’)_2为待检样品进行检测,并将检测结果与假病毒... 以纯化后的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)糖蛋白(GP)作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,进行最佳反应条件优化,建立间接血凝抗体检测方法。以EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F(ab’)_2为待检样品进行检测,并将检测结果与假病毒中和试验检测结果相比较。结果显示,该方法可特异性检测EBOV抗体,与马尔堡病毒、裂谷热病毒等的阳性血清均不发生反应;与假病毒中和试验测得的抗体效价增长规律相一致。结果表明,本试验成功建立了EBOV抗体间接血凝检测方法,该方法安全、简便、快捷,为EBOV疫苗免疫后的效果评价提供了又一新的检测方法。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 糖蛋白(GP) 间接血凝试验 抗体检测
埃博拉病毒病抗原反向间接血凝检测方法的建立
6
作者 张颖 王化磊 +8 位作者 曹增国 李国华 李恩涛 迟航 焦翠翠 徐胜男 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1310-1314,共5页
为建立埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)抗原快速检测方法,本研究利用纯化后的埃博拉病毒样颗粒(EBOVVLPs)免疫马匹制备阳性血清,采用饱和硫酸铵沉淀法初纯血清中的IgG,后经过Protien G柱亲和层析法精纯IgG,利用精纯后的IgG致敏醛化的绵羊... 为建立埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)抗原快速检测方法,本研究利用纯化后的埃博拉病毒样颗粒(EBOVVLPs)免疫马匹制备阳性血清,采用饱和硫酸铵沉淀法初纯血清中的IgG,后经过Protien G柱亲和层析法精纯IgG,利用精纯后的IgG致敏醛化的绵羊红细胞,建立反向间接血凝抗原检测方法,并对该方法进行最佳反应条件的优化。将该方法用于不同批次制得的已知病毒滴度埃博拉假病毒血凝效价检测,检测结果显示:病毒滴度的高低与血凝效价检测结果呈现良好的相关性。本研究成功建立埃博拉病毒抗原反向间接血凝检测方法,该方法简单、方便、快捷,无需特殊的仪器设备,1h内便可报告检测结果,在普通实验室中便可进行操作。此外,该方法也适用于埃博拉病毒感染及疫病暴发后临床样品的定性分析。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 抗体纯化 反向间接血凝(RHIV) 抗原检测
野鸟源H5N8禽流感病毒遗传变异分析与致病性评估
7
作者 张醒海 李元果 +12 位作者 王铁成 初冬 孙贺廷 孙伟洋 冯娜 谢英 何健 秦思源 彭鹏 杨松涛 高玉伟 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期646-654,共9页
本试验在野鸟禽流感病毒紧急疫情检测过程中鉴定并分离到1株H5N8高致病性禽流感病毒,利用病毒全基因组测序、系统发育及关键氨基酸位点分析解析了该野鸟源H5N8禽流感病毒分离株遗传进化情况,通过体外复制动力学试验及小鼠感染试验,评价... 本试验在野鸟禽流感病毒紧急疫情检测过程中鉴定并分离到1株H5N8高致病性禽流感病毒,利用病毒全基因组测序、系统发育及关键氨基酸位点分析解析了该野鸟源H5N8禽流感病毒分离株遗传进化情况,通过体外复制动力学试验及小鼠感染试验,评价了该野鸟源H5N8禽流感病毒分离株对哺乳动物致病性。进化分析显示,该病毒株属于Clade 2.3.4.4,可以不经适应直接感染小鼠并在呼吸系统内复制,表现出有限的组织嗜性,对小鼠呈低致病性。其在体内外复制能力较低。结果表明,本试验加深了对野生鸟携带H5N8禽流感病毒的认识和理解、对野鸟源H5N8禽流感病毒生物学特性的评价,为预测野鸟源H5N8禽流感病毒遗传进化趋势及其生物安全风险评估提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 野鸟 H5N8 禽流感病毒 遗传变异 致病性
辽宁部分地区宠物犬犬瘟热病毒分子流行病学调查与分析 被引量:1
8
作者 梓淇 宫语晨 +9 位作者 闫飞虎 黄培 刘静 王琪 焦翠翠 张醒海 高玉伟 冯娜 夏咸柱 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1287-1294,1358共9页
为了解犬瘟热病毒(CDV)遗传变异情况,先后从辽宁省沈阳、锦州、辽阳等地区的9个宠物医院收治的临床疑似犬瘟热(CD)病犬中采集了165份拭子样品及组织病料。利用CD抗原检测试纸条、RT—PCR检测方式筛选到8份阳性样品。H基因序列分析... 为了解犬瘟热病毒(CDV)遗传变异情况,先后从辽宁省沈阳、锦州、辽阳等地区的9个宠物医院收治的临床疑似犬瘟热(CD)病犬中采集了165份拭子样品及组织病料。利用CD抗原检测试纸条、RT—PCR检测方式筛选到8份阳性样品。H基因序列分析结果显示该8株CDV野毒株之间的H基因同源性为97.6%-99.9%,与疫苗(Onderstepoort)同源性为89.1%-90.9%;基因遗传进化显示,该8株毒株属于国内当前流行的Asia-1型,来源于沈阳的SY-35株与在北京发现的CDV强毒株BJ—09在同一进化分枝,其余来源于沈阳、锦州和辽阳的7株与东北地区流行的CDV在同一进化分枝;氨基酸序列比对结果显示,H蛋白在氨基酸235-245,415-425,595-605等处存在高变异,H蛋白3555位置氨基酸的非同义置换概率相对比较高;糖基化位点以及抗原表位预测分析显示该8株CDV的H基因糖基化位点和抗原表位方面均与Asia-1型CDV野毒株相似,但与疫苗株相比变异较大,特别是我们发现JZ-6株丢失了1个潜在N-糖基化位点。结果表明:辽宁地区宠物犬CD流行以Asia-1型CDV为主,不同病毒株间存在遗传多样性。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 H基因 克隆 遗传进化
苏丹型埃博拉病毒糖蛋白原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立
9
作者 吴芳芳 曹增国 +10 位作者 焦翠翠 王琪 迟航 侯朋飞 黄培 金宏丽 李忠义 王化磊 杨松涛 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期1-4,10共5页
目的 原核表达苏丹型埃博拉病毒(Sudan virus,SUDV)糖蛋白(GP),并作为包被抗原建立抗体间接ELISA检测方法。方法 PCR扩增SUDV GP基因片段,克隆至pET30a(+)表达载体,IPTG诱导表达SUDV GP,经HisNi柱纯化,SDS-PADE和Western blot鉴... 目的 原核表达苏丹型埃博拉病毒(Sudan virus,SUDV)糖蛋白(GP),并作为包被抗原建立抗体间接ELISA检测方法。方法 PCR扩增SUDV GP基因片段,克隆至pET30a(+)表达载体,IPTG诱导表达SUDV GP,经HisNi柱纯化,SDS-PADE和Western blot鉴定正确的SUDV GP作为包被抗原建立SUDV抗体间接ELISA方法,并对实验条件进行优化。结果SUDV GP在大肠杆菌中以包涵体的形式表达,建立的抗体间接ELISA检测方法最佳SUDV GP包被量为2μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶320,最佳作用时间1.5h,HRP标记羊抗鼠IgG最佳稀释度1∶10 000,TMB最佳显色时间为7min。该方法的特异性强,样品检测结果与已知血清的符合率为100%,检测SUDV阳性血清的敏感度为1∶40 960,SUDV GP批间及批内的实验结果变异系数(CV)均小于10%。结论成功表达SUDV GP并建立SUDV抗体间接ELISA检测方法,为疫苗免疫效果的评价、疫病的监测及SUDV抗体检测试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 苏丹型埃博拉病毒 原核表达 糖蛋白 ELISA
外泌体的功能及其在临床应用中的研究进展 预览
10
作者 杨金鑫 王海军 +4 位作者 裴志花 孙明洁 王开 胡桂学 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第12期3608-3613,共6页
外泌体(exosome)是通过细胞内多泡体与细胞膜融合产生的纳米级细胞外膜泡,广泛分布在血清、尿液、唾液和其他生物液体中。外泌体作为细胞间通信和遗传物质的重要转移载体,可通过受体介导的相互作用或通过各种生物活性分子(如细胞膜受体... 外泌体(exosome)是通过细胞内多泡体与细胞膜融合产生的纳米级细胞外膜泡,广泛分布在血清、尿液、唾液和其他生物液体中。外泌体作为细胞间通信和遗传物质的重要转移载体,可通过受体介导的相互作用或通过各种生物活性分子(如细胞膜受体、蛋白质、mRNA和miRNA)的转移直接刺激靶细胞,从而发挥其生物学功能。文章主要综述了外泌体内含蛋白质和miRNA的功能及外泌体在临床中的应用。外泌体内蛋白质和miRNA的功能包括生理状态下诱导机体免疫、递呈抗原、参与细胞间信号传导;病理状态下改变肿瘤微环境、促进癌细胞增殖、侵袭、加快血管生成、促进癌症发展;以及某些病毒可将其组分包装、整合到外泌体中来实现细胞间传播,或劫持外泌体,实现免疫逃避。作者主要介绍了其作为肺癌、乳腺癌、胰腺癌及结直肠癌等多种癌症早期诊断的生物性标志物,以及作为稳定性高、转运效率高、靶向性强的药物载体在临床中的应用。 展开更多
关键词 外泌体 蛋白质 MIRNA 疾病诊断 药物载体
在线阅读 下载PDF
MERS-CoV S1蛋白的表达及鉴定
11
作者 胡星星 邱泊宁 +10 位作者 迟航 王化磊 王翀 盖微微 黄培 冯娜 王铁成 高玉伟 杨松涛 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期336-340,共5页
目的真核表达具有天然构象的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)S1蛋白,并进行免疫反应性鉴定。方法以pcDNA3.1-S重组质粒为模板,PCR扩增S1基因,连接至pFastBac1质粒,构建重组质粒pFB1-S1。将pFB1-S1转化至DH10Bac感受态中,构建重组杆... 目的真核表达具有天然构象的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)S1蛋白,并进行免疫反应性鉴定。方法以pcDNA3.1-S重组质粒为模板,PCR扩增S1基因,连接至pFastBac1质粒,构建重组质粒pFB1-S1。将pFB1-S1转化至DH10Bac感受态中,构建重组杆粒BpFB1-S1,然后转染sf9细胞获得重组杆状病毒rpFB1-S1并连续传代。将第四代rpFB1-S1接种sf9细胞后悬浮培养96h,取上清,用PEG8000浓缩并进行免疫亲和层析纯化,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定其分子质量及免疫反应性;另取感染rpFB1-S1 48h的sf9细胞进行IFA鉴定。结果 S1基因PCR扩增产物大小为2 212bp,与预期相符。重组质粒pFB1-S1经酶切和测序分析鉴定构建正确。重组杆粒BpFB1-S1经PCR鉴定构建正确。IFA试验可见感染rpFB1-S1的sf9细胞出现特异性绿色荧光,即有目的蛋白表达。SDSPAGE显示纯化的重组S1为单一100×10^3(Mr)蛋白条带,Western blot检测该蛋白能被鼠抗S-RBD蛋白单克隆抗体识别。结论成功表达了具有免疫反应性的MERS-CoV S1蛋白,为MERS-CoV快速诊断方法的建立及候选疫苗的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 MERS-CoV S1蛋白 表达 纯化 鉴定
扎伊尔型埃博拉病毒糖蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:2
12
作者 吴芳芳 曹增国 +8 位作者 王琪 迟航 金宏丽 冯娜 高玉伟 王化磊 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期496-501,共6页
针对扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebolavirus,ZEBOV)的糖蛋白(GP)基因(158-368aa)设计引物,将PCR扩增产物克隆至原核表达载体pET30a(+),在宿主菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达。对诱导条件进行优化,纯化后的蛋白通过SDS-PAGE和Weste... 针对扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebolavirus,ZEBOV)的糖蛋白(GP)基因(158-368aa)设计引物,将PCR扩增产物克隆至原核表达载体pET30a(+),在宿主菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达。对诱导条件进行优化,纯化后的蛋白通过SDS-PAGE和Western blot鉴定正确后免疫BALB/c小鼠,二免后分离小鼠血清,制备多克隆抗体并进行间接免疫荧光鉴定。结果显示,埃博拉病毒GP在大肠杆菌中以包涵体的形式成功表达,蛋白最佳诱导条件为37℃,0.4mmol/L IPTG诱导6h。经间接免疫荧光鉴定多克隆抗体可以识别重组杆状病毒rBacmid-GP。本研究成功表达并纯化埃博拉病毒GP,制备鼠多克隆抗体,为建立基于ZEBOV GP的检测方法和相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 原核表达 糖蛋白(GP) 多克隆抗体
寨卡病毒致病机理和疫苗研究进展
13
作者 李政蓉 金宏丽 +7 位作者 焦翠翠 闫飞虎 高玉伟 马爱民 王化磊 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1616-1623,共8页
寨卡病毒病是一种由寨卡病毒感染引起的重要的人兽共患病,可引起胎儿小头畸形。2015年寨卡病毒病在巴西和美国等国家大规模暴发流行,此次暴发流行被世界卫生组织定为世界公众健康紧急事件,目前在中国已有输入性病例的报道。尽管全球... 寨卡病毒病是一种由寨卡病毒感染引起的重要的人兽共患病,可引起胎儿小头畸形。2015年寨卡病毒病在巴西和美国等国家大规模暴发流行,此次暴发流行被世界卫生组织定为世界公众健康紧急事件,目前在中国已有输入性病例的报道。尽管全球目前尚无批准的疫苗和治疗制剂上市,但许多研究机构相继开展了寨卡病毒疫苗和致病机理等研究,为有效防控寨卡病毒,加快对寨卡病毒新型疫苗的研究,现对近年来寨卡病毒致病机理和疫苗的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 寨卡病毒 寨卡病毒病 致病机理 疫苗
中东呼吸综合征冠状病毒量子点免疫层析试纸的制备 被引量:1
14
作者 黄培 韩秋雪 +9 位作者 胡星星 金宏丽 曹增国 迟航 冯娜 高玉伟 王化磊 杨松涛 夏咸柱 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期557-561,共5页
目的制备一种能快速检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的量子点免疫层析试纸,以期用于MERSCoV感染检测。方法采用EDC偶联法将羧基化CdTe/ZnSe量子点与抗MERS-CoV RBD的单克隆抗体(mAb/MERS-CoV)共价偶联,通过斑点免疫印迹检验... 目的制备一种能快速检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的量子点免疫层析试纸,以期用于MERSCoV感染检测。方法采用EDC偶联法将羧基化CdTe/ZnSe量子点与抗MERS-CoV RBD的单克隆抗体(mAb/MERS-CoV)共价偶联,通过斑点免疫印迹检验偶联物的活性。以CdTe/ZnSe量子点标记的mAb/MERS-CoV作为荧光标记物,采用免疫层析技术制备量子点免疫层析试纸,用于MERS-CoV检测。并对该方法进行特异性、敏感性评价。结果 CdTe/ZnSe量子点可偶联mAb/MERS-CoV,且偶联物具有良好的生物活性。以其作为荧光标记物建立的量子点免疫层析试纸可特异性检测MERS-CoV假病毒,最低检测限为2×53 TCID50/ml,其他对照病毒检测均阴性。结论制备的MERS-CoV量子点免疫层析试纸具有简便、快速、特异等优点,可用于MERS-CoV感染快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 中东呼吸综合征冠状病毒 量子点 免疫层析试纸
马尔堡病毒糖蛋白RBD基因的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
15
作者 王琪 盖微微 +15 位作者 闫飞虎 冯娜 吴芳芳 梓淇 曹增国 李岭 迟航 金宏丽 邱泊宁 崔健男 王铁成 高玉伟 王化磊 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1261-1267,共7页
原核表达并纯化马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)糖蛋白(glycoprotein,GP)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,并以此为抗原免疫家兔制备抗MARV-GP-RBD多克隆抗体。参照GenBank提供的MARV GP全基因序列,找到主要抗原表... 原核表达并纯化马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)糖蛋白(glycoprotein,GP)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,并以此为抗原免疫家兔制备抗MARV-GP-RBD多克隆抗体。参照GenBank提供的MARV GP全基因序列,找到主要抗原表位区域,设计特异性引物,采用PCR方法扩增RBD基因,扩增产物经双酶切(EcoRⅠ/XhoⅠ)后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a(+)-GP-RBD,转化BL21(DE3)感受态表达宿主菌,在不同条件下(时间、IPTG浓度、温度)诱导表达目的蛋白,并用His-Band N+柱进行亲和层析纯化;以纯化的重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过SDS-PAGE、Western blot和IFA鉴定重组蛋白的反应原性及免疫原性。结果显示:PCR扩增到长度为453bp的RBD基因片段;构建的重组质粒pET-30a(+)-GP-RBD经双酶切后得到与目的片段长度相同的特异性条带,测序结果显示没有突变;转化产物在培养7h、终浓度为0.4mmol/L IPTG和37℃条件下能够充分诱导目的蛋白表达,得到相对分子质量为25 000的重组蛋白,主要以包涵体形式存在,BCA试剂盒产量测定,每升诱导的重组菌可纯化约20mg纯度较高的目的蛋白;Western blot检测证实重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白能同时被抗His标签的单抗和兔源多抗识别并发生特异性反应,证明重组蛋白有良好的反应原性;IFA鉴定证实所制备的兔源多抗能够特异性识别表达MARV GP蛋白的重组杆状病毒rBacmid-GP-VP40,证明重组蛋白具有良好的免疫原性。结果表明:成功表达、纯化了MARV GP RBD蛋白,并完成了兔源多抗的制备,为MARV亚单位疫苗的制备和抗原、抗体检测方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 马尔堡病毒 糖蛋白受体结合域 原核表达与纯化 多克隆抗体
小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株病毒样颗粒的构建及其免疫原性 被引量:1
16
作者 闫飞虎 梓淇 +9 位作者 王化磊 邱泊宁 王建忠 王铁成 黄耕 高玉伟 冯娜 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1225-1233,共9页
为了构建具有天然构象的小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株病毒样颗粒,本试验扩增了Nigeria 75/1株M、F和H基因,并分别克隆至双启动子载体pFastBac^TM Dual中,构建含有双目的基因的重组供体质粒pFastBac^TM Dual-2M、pFastBac^TM Dual-2F和p... 为了构建具有天然构象的小反刍兽疫病毒Nigeria 75/1株病毒样颗粒,本试验扩增了Nigeria 75/1株M、F和H基因,并分别克隆至双启动子载体pFastBac^TM Dual中,构建含有双目的基因的重组供体质粒pFastBac^TM Dual-2M、pFastBac^TM Dual-2F和pFastBac^TM Dual-2H;测序正确后转化至DH10Bac^TM 感受态细胞,同源重组获得穿梭质粒rBacmid-2M、rBacmid-2F和rBacmid-2H;将其分别转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒rpFB-2M、rpFB-2F和rpFB-2H。以鼠抗M、H蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体与绵羊抗PPRV阳性血清对重组杆状病毒感染细胞进行间接免疫荧光(IFA)鉴定,可见特异性荧光;以3种重组杆状病毒共感染昆虫细胞Sf9的方式组装病毒样颗粒,放大培养后进行病毒样颗粒纯化。Western blot检测纯化后样品可见相对分子质量为38 000,59 000,68 000左右的条带,表明基质膜蛋白与2种囊膜糖蛋白成功组装出病毒样颗粒,且免疫小鼠可诱导产生保护性中和抗体。本试验为后续小反刍兽疫病毒(PPRV)病毒样颗粒疫苗的进一步研发奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 基质膜蛋白 血凝素蛋白 融合蛋白 杆状病毒-昆虫细胞表达系统
层析技术制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒F(ab’)2
17
作者 邱泊宁 王翀 +8 位作者 胡星星 王化磊 曹增国 盖微微 崔健男 闫飞虎 杨松涛 夏咸柱 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期417-423,428共8页
目的采用层析技术制备高纯度的马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrom coronavirus,MERS-CoV)F(ab’)2。方法以MERS-CoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,... 目的采用层析技术制备高纯度的马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrom coronavirus,MERS-CoV)F(ab’)2。方法以MERS-CoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,采用亲和层析技术提取血清IgG,经胃蛋白酶酶切后,通过阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析分别对F(ab’)2进行纯化;以MERS假病毒检测所制备的IgG与F(ab’)2中和活性。结果凝胶过滤层析实现了F(ab’)2的高纯度分离,最终制备的F(ab’)2收率约70%,纯度为93%以上,具有良好的中和活性,其半数抑制浓度(IC(50))为5.13μg/ml。结论制备了高纯度马抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)2,为人用抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)2生产工艺的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 中东呼吸综合征 冠状病毒 病毒样颗粒 层析 免疫球蛋白
委内瑞拉马脑炎病毒E2蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
18
作者 焦翠翠 金宏丽 +15 位作者 蒋天琪 曹增国 李岭 吴芳芳 王琪 邱泊宁 迟航 黄培 侯朋飞 冯娜 王铁成 高玉伟 王化磊 杨松涛 夏成柱 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期2114-2120,共7页
原核表达并纯化委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)E2蛋白胞外区,并以此为抗原免疫动物制备多克隆抗体。利用PCR扩增VEEVE2蛋白胞外区基因并将其插入到原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30... 原核表达并纯化委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)E2蛋白胞外区,并以此为抗原免疫动物制备多克隆抗体。利用PCR扩增VEEVE2蛋白胞外区基因并将其插入到原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-VEEV-E2,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。优化诱导条件并对目的蛋白进行亲和纯化,用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光方法检测抗体的结合能力。通过PCR扩增出约为1023bp的VEEVE2基因胞外区,成功构建重组表达质粒pET-30a(+)-VEEV—E2,在37℃,0.6mmol/L IPTG诱导3h条件下目的蛋白表达量最高且主要以包涵体形式存在;将纯化的目的蛋白免疫BALB/C小鼠成功制备了抗VEEVE2蛋白胞外区鼠源多克隆抗体,经间接免疫荧光鉴定制备的抗体能够特异性识别真核表达的VEEVE2蛋白。VEEVE2基因胞外区在大肠杆菌中获得稳定表达,且表达的目的蛋白具有良好的免疫原性,为VEEV快速诊断方法及新型疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 委内瑞拉马脑炎病毒 原核表达 纯化 多克隆抗体
寨卡病毒研究进展 被引量:3
19
作者 闫飞虎 黄培 +2 位作者 李恩涛 杨松涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期93-102,共10页
寨卡病毒病是由寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染引起的一种新病毒病。寨卡病毒为黄病毒的一种,由伊蚊属蚊子传播,对成人不会造成生命危险,但其与罕见的格林巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)及新生儿小头症有关,因此,与全世... 寨卡病毒病是由寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染引起的一种新病毒病。寨卡病毒为黄病毒的一种,由伊蚊属蚊子传播,对成人不会造成生命危险,但其与罕见的格林巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)及新生儿小头症有关,因此,与全世界的公共卫生健康息息相关。起初该病仅在非洲地区流行,1980年传入东南亚,2007年传入密克罗尼西亚,于2014年传入美国并呈现出扩大蔓延趋势,引起世界卫生组织高度重视。2016年,在我国确诊了ZIKV输入性感染病例。本文就ZIKV的分子生物学特征、传播途径、流行病学、临床症状、诊断、预防等方面作一综述,为其相关研究提供参考。 展开更多
关键词 寨卡病毒 传播 流行 格林巴利综合征 新生儿小头症 疫苗
CO_2激光辅助喉显微外科技术治疗声带息肉的疗效及安全性 预览 被引量:4
20
作者 王雪洁 王钧 《临床医药文献杂志(电子版)》 2017年第34期6607-6607,6609共2页
目的 研究分析CO_2激光辅助喉显微外科技术治疗声带息肉的疗效及安全性。方法 2015年9月~2017年3月期间,选择本院接收的声带息肉患者68例作为研究对象,随机将患者分为两组进行对比研究,分为观察组和对照组,每组分别为34例,其中,对照组... 目的 研究分析CO_2激光辅助喉显微外科技术治疗声带息肉的疗效及安全性。方法 2015年9月~2017年3月期间,选择本院接收的声带息肉患者68例作为研究对象,随机将患者分为两组进行对比研究,分为观察组和对照组,每组分别为34例,其中,对照组患者行支撑喉镜下手术,观察组和患者采用CO_2激光辅助喉显微外科技术进行治疗,对比观察组与对照组的治疗有效率。结果 观察组患者治疗有效率比对照组高,数据差异显著,有统计学意义(P〈0.05)。结论 在声带息肉治疗中,CO_2激光辅助喉显微外科技术应用效果良好且安全,临床上可推广使用。 展开更多
关键词 声带息肉 CO2激光 喉显微技术 效果
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 7 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈