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HCV NS3 ATPase/helicase单克隆抗体识别表位与功能
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作者 边奕鑫 +10 位作者 朱少美 曾劲峰 付涌水 王元占 杜鹏 张玲 李婷婷 王文敬 周元平 Jean-Pierre Allain 黎诚耀 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第S1期71-71,共1页
【正】目的制备针对HCV NS3解旋酶的单克隆抗体,分析其识别抗原表位及潜在生物学功能,为HCV诊断和治疗提供关键材料。方法制备截短型重组HCV NS3解旋酶(rNS3,aa1192-1459,1b型),免疫小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。采用ELISA和Weston B... 【正】目的制备针对HCV NS3解旋酶的单克隆抗体,分析其识别抗原表位及潜在生物学功能,为HCV诊断和治疗提供关键材料。方法制备截短型重组HCV NS3解旋酶(rNS3,aa1192-1459,1b型),免疫小鼠,按常规方法制备单克隆抗体。采用ELISA和Weston Blot筛选抗rNS3的单克隆抗体。采用29条重叠7个氨基酸的16肽和9条短肽,通过间接ELISA和竞争ELISA测定单抗识别表位。采用HCV(JFH1克隆,2a型)感染huh7.5.1细胞免疫荧光染色法,鉴定单克隆抗体对天然抗原构象的识别特性。结果以rNS3筛选,共获得29株ELISA阳性单克隆抗体,其中27株Weston Blot阳性。 展开更多
关键词 单克隆抗体识别 天然抗原 细胞免疫 Weston 识别特性 ATPASE 荧光染色法 解旋酶 截短 短肽
新型丙型病毒肝炎病毒core及NS3抗原的研发及制备
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作者 边奕鑫 +1 位作者 翁壮峰 黎诚耀 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第S1期70-70,共1页
【正】目的建立大规模生产与纯化工艺,为献血者HCV感染筛查或临床诊断提供新一代免疫测定新型抗原。方法利用聚合酶链反应(PCR)从我国HCV流行株(基因型1b)中分离core与NS3全长基因。采用重组慢病毒包装系统,构建分别表达HCV core与NS3... 【正】目的建立大规模生产与纯化工艺,为献血者HCV感染筛查或临床诊断提供新一代免疫测定新型抗原。方法利用聚合酶链反应(PCR)从我国HCV流行株(基因型1b)中分离core与NS3全长基因。采用重组慢病毒包装系统,构建分别表达HCV core与NS3的表达质粒与重组病毒。利用重组慢病毒感染293A或Huh7细胞,采用免疫荧光染色、West Blot和ELISA方法测定细胞表达的core或NS3蛋白抗原特性。结果构建了pTY-CMV-core和pTY-CMV-NS3慢病毒表达质粒,包装出了高病毒滴度的重组慢病毒。质粒转染293T细胞后,免疫荧光能检呈强阳性,Western Blot分析可见预期大小分子量的表达蛋白。 展开更多
关键词 丙型病毒肝炎 NS3 CORE 免疫荧光 免疫测定 表达质粒 临床诊断 慢病毒感染 流行株 全长基因
应用下一代测序技术进行HLA-A、HLA-B基因分型的模棱两可结果情况分析
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作者 董丽娜 +3 位作者 王芳 章伟 何吉 朱发明 《中国卫生检验杂志》 CAS 2019年第16期1924-1927,1931,共5页
目的统计分析NGS法进行HLA-A、HM-B基因分型检测的模棱两可结果的种类、比例。方法对369例浙江省脐带血库标本采用NGS法检测HLA-A、HLA-B位点,并同步对其中94例标本采用PCR-SBT测序法测定HLA-A、HL4-B位点,余下275例标本采用PCR-SS0流... 目的统计分析NGS法进行HLA-A、HM-B基因分型检测的模棱两可结果的种类、比例。方法对369例浙江省脐带血库标本采用NGS法检测HLA-A、HLA-B位点,并同步对其中94例标本采用PCR-SBT测序法测定HLA-A、HL4-B位点,余下275例标本采用PCR-SS0流式磁珠法检测。使用专业软件指定NGS法的HLA-A、HL4-B分型结果,直接计算法分析模棱两可组合比例。结果所有标本NGS法检测结果与PCR-SBT法或PCR-SSO法相符合,未发现NGS法遗漏等位基因情况。NGS法以HLA-A.HLA-B命名*后第四区域的数字作为高分辨水平统计,369例有34例标本出现模棱两可结果,占9.21%(34/369),其中只有2例标本HLA-A、HLA-B位点同时存在模棱两可结果。HLA-4位点有9例标本存在模棱两可结果,表现出8种类型;HLA-B位点有27例,25种类型,分别占标本总数的2.44%(9/369)、7.32%(27/369)。结论应用NGS技术仍有少量HLA-A、HLA-B基因分型的模棱两可组合结果。 展开更多
关键词 下一代测序法 HL4-Ⅰ类基因 模棱两可 测序分析
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