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ASP2215联合SAHA对FLT3-ITD突变细胞株体外协同机制研究
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作者 朱庆锋 胡晓丽 +3 位作者 朱坚轶 郎雯竞 济华 陈芳源 《诊断学理论与实践》 2018年第5期538-546,共9页
目的:探究FLl、3急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemh AML)抑制剂ASP2215联合组蛋白去乙酰化酶(histone deacetvlase inhibitor,HDAC)抑制剂SAHA,对伴FLT3一ITD突变的细胞株MV4—11的协同作用及其作用机制。方法:用不同浓度的ASP2... 目的:探究FLl、3急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemh AML)抑制剂ASP2215联合组蛋白去乙酰化酶(histone deacetvlase inhibitor,HDAC)抑制剂SAHA,对伴FLT3一ITD突变的细胞株MV4—11的协同作用及其作用机制。方法:用不同浓度的ASP2215、SAHA单药或两药联合处理白血病细胞株MV4—11,观察细胞形态变化.采用CCK一8试剂盒检测其细胞活力.用流式细胞仪检测细胞凋亡率.蛋白免疫印迹检测FLfT3及下游信号分子S’rAT5的磷酸化,分析凋亡调控蛋白Mcl一1、Bcl—xL、Bcl一2、Bax和caspase一9、caspase一3的蛋白含量。结果:①相较于FLIT3野生型细胞株THP一1,ASP2215能够特异性地抑制FLIT3一ITD突变AML细胞株MV4—11细胞的增殖。②ASP2215和SA—HA单药处理均能抑制MV4—11细胞的活性.这种抑制作用呈浓度和时间依赖性.且两药联合使用时能够协同抑制Mv4一11细胞株的活性,不同药物浓度联合的联合指数(combination index,cI)值皆小于1。③AsP2215和SAHA呈浓度和时间依赖性诱导MV4—11细胞凋亡,两者联合能够进一步增加MV4-11细胞凋亡。MV4-11细胞凋亡的过程中,伴caspase.3和caspase一9蛋白剪切活化,且活化程度随细胞凋亡增加而上升。相较于单药作用,两药联合能够引起更多的caspase一3和caspase一9剪切活化。形态学上,细胞凋亡和坏死改变随着药物浓度增加依次增多,且两药物联合能够引起细胞更明显的凋亡和坏死改变。④FLT3抑制剂ASP2215能够降低FLT3受体及下游分子STAT5的磷酸化水平,SAHA对n耶及下游STAT5分子磷酸化也有轻度抑制作用。ASP2215和SAHA都能引起Mcl一1和Bcl—xL抗凋亡蛋白水平的降低,轻度下调Bcl一2蛋白和轻度上调Bax蛋白表达水平。两药联合相较于单药能够进一步下调Mcl—1、Bcl。xL的蛋白表达水平和Bcl一2/Bax蛋白比例。结论:ASP2215联合SAHA能够协同抑制伴FLIT3一ITD突变MV4—11细胞株增殖,促进细胞凋亡,其机制涉及两药� 展开更多
关键词 MV4—11细胞株 FLT3抑制剂ASP2215 HDAC抑制剂SAHA 细胞抑制 凋亡
三氧化二砷影响EVI1基因调控造血转录因子的体外研究
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作者 朱坚轶 郎雯竞 +3 位作者 陈芳源 徐卓然 沈莉菁 济华 《诊断学理论与实践》 2017年第1期42-47,共6页
目的:观察三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)在体外影响反转录病毒整合位点1基因(ecotropic viral integration site-1,EVI1)基因对造血转录因子的调控作用。方法:实验选取EVI1高表达的急性髓系白血病细胞株THP-1,利用健康成人外... 目的:观察三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)在体外影响反转录病毒整合位点1基因(ecotropic viral integration site-1,EVI1)基因对造血转录因子的调控作用。方法:实验选取EVI1高表达的急性髓系白血病细胞株THP-1,利用健康成人外周血单个核细胞作为对照,通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RFQ-PCR),检测EVI1基因及造血转录因子GATA1、GATA2、RUNX1、MPO、LMO2、CMYB、PU.1和SCL的m RNA相对表达量。分别以1μmol/L、3μmol/L、5μmol/L的ATO溶液处理THP-1细胞株后,再通过反转录RFQ-PCR检测EVI1基因及造血转录因子的m RNA相对表达量。结果:通过反转录RFQ-PCR检测证实,存在EVI1基因的THP-1细胞中GATA2和CMYB基因的表达上调,而GATA1、RUNX1、MPO、LMO2、PU.1及SCL基因的表达水平下调。ATO对EVI1基因的下调作用具有浓度与时间依赖性,并对其他造血转录因子进行调控。结论:通过体外研究发现,高表达EVI1基因的THP-1细胞有GATA2基因的表达上调,同时存在其他造血转录因子的表达异常,与促进原始细胞增殖及髓系、红系的分化成熟受抑密切相关。ATO可特异性地下调EVI1基因的表达,并抑制GATA2转录因子的激活。 展开更多
关键词 反转录病毒整合位点1基因 三氧化二砷 造血转录因子 急性髓系白血病
利用基因表达谱芯片技术研究ALA-PDT对白血病细胞株HL-60的作用机制
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作者 韩晓凤 倪蓓文 +1 位作者 济华 陈芳源 《应用激光》 CSCD 北大核心 2016年第2期233-238,共6页
目的:研究探讨5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)对白血病细胞株HL-60的作用机制。方法:以白血病细胞株HL-60为实验模型。实验分为2组,对照组(未处理组)及ALA+PDT组。利用人全基因组基因表达谱芯片技术研究ALA-PDT后HL-6... 目的:研究探讨5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)对白血病细胞株HL-60的作用机制。方法:以白血病细胞株HL-60为实验模型。实验分为2组,对照组(未处理组)及ALA+PDT组。利用人全基因组基因表达谱芯片技术研究ALA-PDT后HL-60细胞基因改变情况。结果:人全基因组芯片共检测了48 000个基因,用RT-PCR的方法验证了数据的可靠性,对芯片结果产生的数据分析发现:ALA-PDT影响了细胞的多种生命进程,如转录调控,抑制翻译过程;促进一系列应激反应;上调促凋亡基因的表达,抑制抗凋亡基因的表达,促进凋亡的发生。结论:ALA-PDT通过诱导凋亡的方式杀伤HL-60细胞。多种调控机制参与凋亡的发生:c-Abl和PML基因是上调基因网络中的主导基因,共同参与了凋亡的发生。线粒体途径和TNF途径激活,DEDD2及CDC2L2介导的凋亡通路也占了一定的地位。ERN1、Bcl2、及c-Jun等基因参与其中促进凋亡的发生。 展开更多
关键词 5-氨基乙酰丙酸 光动力学治疗 HL-60 细胞凋亡 基因表达谱芯片技术
硼替佐米联合有氧氧化抑制剂寡霉素靶向Burkitt淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用及机制 被引量:4
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作者 邵霞 蔡佳翌 +3 位作者 许壁榆 济华 陈芳源 王婷 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期127-139,共13页
目的 :研究硼替佐米(bortezomib,BTZ)联合寡霉素(oligomycin,OM)对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法:采用不同浓度的BTZ(0、5、10、15、20、25和30 nmol/L)单药或联合OM(0.05μg/m L)作用于... 目的 :研究硼替佐米(bortezomib,BTZ)联合寡霉素(oligomycin,OM)对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法:采用不同浓度的BTZ(0、5、10、15、20、25和30 nmol/L)单药或联合OM(0.05μg/m L)作用于Raji细胞,CCK-8法检测对细胞增殖抑制率的影响;实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测原癌基因C-myc、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及其靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和葡萄糖转运体1(glucose transporter 1,GLUT1)m RNA及蛋白的表达,以及代谢途径中关键酶己糖激酶Ⅱ(hexokinaseⅡ,HKⅡ)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDHA)和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDHA)m RNA及蛋白表达水平的变化;葡萄糖检测试剂盒[己糖激酶(hexokinase,HK)法]和乳酸检测试剂盒分别检测Raji细胞培养液中葡萄糖和乳酸浓度的改变;FCM法检测细胞周期分布及细胞凋亡的改变。结果 :不同浓度的BTZ单药作用于Raji细胞后,可明显抑制Raji细胞的增殖且呈剂量依赖性(P值均〈0.01)。BTZ(5、10、15和20 nmol/L)联合OM对Raji细胞的增殖抑制率显著高于BTZ单药组(P值均〈0.01)。BTZ单药作用于Raji细胞后,可不同程度抑制细胞中C-myc、HIF-1α、VEGF、GLUT1、HKⅡ、LDHA及SDHA m RNA及蛋白的表达;联合OM处理Raji细胞后,代谢相关基因m RNA及蛋白的表达水平进一步下调(P值均〈0.05)。联合用药组抑制葡萄糖消耗及糖酵解代谢产物乳酸生成的能力明显高于BTZ单药组(P值均〈0.05)。BTZ单药组能明显促进Raji细胞的凋亡且呈剂量依赖性,BTZ浓度为25 nmol/L时,Raji细胞主要被阻滞于G2/M期;而联合用药组能进一步提高细胞的凋亡率,BTZ浓度为5和15 nmol/L时,Raji细胞主要被阻滞于G0/G1期。结论 :BTZ可抑制Raji细胞的糖酵解通路,联合OM可协同增强这一抑制作用,这种� 展开更多
关键词 淋巴瘤 非霍奇金 硼替佐米 寡霉素类 糖酵解 有氧氧化
阿霉素对斑马鱼心脏毒性的评估及机制探索 被引量:2
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作者 徐卓然 陈芳源 +3 位作者 沈莉菁 济华 郎雯竞 邵霞 《诊断学理论与实践》 2016年第1期30-36,共7页
目的 :通过观测阿霉素致斑马鱼胚胎产生心脏毒性的表型,及联用右丙亚胺保护剂,建立实验室心脏毒性药物评价及研究的模型。方法:选择受精后24 h的AB系野生型斑马鱼胚胎,分别暴露于不同浓度的阿霉素中后,选择心脏毒性表型最明显的阿霉... 目的 :通过观测阿霉素致斑马鱼胚胎产生心脏毒性的表型,及联用右丙亚胺保护剂,建立实验室心脏毒性药物评价及研究的模型。方法:选择受精后24 h的AB系野生型斑马鱼胚胎,分别暴露于不同浓度的阿霉素中后,选择心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度,将其分别联用或不联用右丙亚胺作用48 h。在斑马鱼胚胎发育至受精后72 h时,在显微镜下观察其心血管系统的形态学改变,记录心率变化,并分别抽提斑马鱼胚胎RNA,检测心脏发育相关基因及氧化、抗氧化相关指标。结果:随着阿霉素浓度的升高,斑马鱼出现了如胚胎发育畸形、心包水肿等改变,且死亡率升高,心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度为64.40μmol/L,而联用右丙亚胺(130.47μmol/L、260.93μmol/L)则可有效挽救阿霉素对斑马鱼心脏的毒性作用,并可分别将其胚胎生存率由35%显著提升至90%和88.3%(P〈0.001)。通过反转录聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测斑马鱼心脏发育相关基因NK2转录因子相关基因5、心肌肌球蛋白轻链2、心房肌球蛋白重链、心室肌球蛋白重链,均未发现显著改变。检测氧化抗氧化指标后发现,64.40μmol/L的阿霉素可致斑马鱼胚胎丙二醛含量显著上升(P〈0.001),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性则明显下降(P〈0.001),而右丙亚胺可有效清除丙二醛并恢复SOD活性。结论:成功建立了斑马鱼评价心脏毒药物的模型。阿霉素对斑马鱼胚胎的心脏毒性呈浓度依赖性增加,且与斑马鱼胚胎死亡率亦呈正相关,而右丙亚胺则可有效挽救阿霉素致斑马鱼胚胎的心脏毒性,并降低其死亡率,且此作用与斑马鱼心脏发育相关基因无关,但与氧化及抗氧化通路有明显的相关性。 展开更多
关键词 斑马鱼模型 阿霉素 右丙亚胺 心脏毒性
粒细胞集落刺激因子和AMD3100增加白血病细胞对化疗敏感性的机制研究 被引量:1
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作者 盛贤福 +2 位作者 万海霞 济华 陈芳源 《诊断学理论与实践》 2015年第2期120-125,共6页
目的:探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)和AMD3100增加白血病细胞对化疗敏感性的作用及其机制。方法:用G-CSF、AMD3100单药或联合处理HL-60细胞株后,与HS-5上清或HS-5细胞共培养,采用CCK-8法检... 目的:探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)和AMD3100增加白血病细胞对化疗敏感性的作用及其机制。方法:用G-CSF、AMD3100单药或联合处理HL-60细胞株后,与HS-5上清或HS-5细胞共培养,采用CCK-8法检测细胞活力,用AnnexinⅤ试剂盒检测细胞凋亡,流式细胞术和蛋白印迹法分别检测膜表面CXCR4蛋白、总CXCR4蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测mRNA表达情况。结果:HS-5上清或细胞能够保护HL-60细胞免于自发或药物诱导的凋亡,而G-CSF和AMD3100均能够部分逆转这种保护作用,两药联合时更明显;G-CSF能够降低细胞膜表面和细胞质内总CXCR4蛋白及CXCR4 mRNA的表达,同时上调micro RNA-146a(miR-146a)表达;AMD3100只能降低膜表面CXCR4表达,对细胞质内总CXCR4蛋白、CXCR4 mRNA和miR-146a表达无影响。结论:G-CSF和AMD3100通过不同机制降低白血病细胞的CXCR4表达而阻断CXCR4/CXCL12信号轴,从而打破骨髓微环境-白血病细胞间的相互作用,直接增强化疗药物杀伤作用。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 AMD3100 CXCR4/CXCL12信号轴 化疗耐药 骨髓微环境
G-CSF通过miR-146a/Smad4信号通路对HL-60白血病细胞增殖的调控作用 预览
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作者 李昕 盛贤福 +5 位作者 蔡佳翌 徐岚 沈莉菁 济华 陈芳源 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1779-1784,共6页
目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对白血病细胞株HL-60中mi R-146a/Smad4表达水平和白血病细胞增殖活性的影响。方法采用G-CSF(50 ng/m L)提前48 h处理人白血病HL-60细胞株,另设G-CSF未处理组作为对照。采用CCK8法检测细胞增殖情... 目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对白血病细胞株HL-60中mi R-146a/Smad4表达水平和白血病细胞增殖活性的影响。方法采用G-CSF(50 ng/m L)提前48 h处理人白血病HL-60细胞株,另设G-CSF未处理组作为对照。采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化,实时荧光定量PCR检测mi R-146a及Smad4 m RNA表达情况,Western blotting检测总Smad4蛋白表达。结果 G-CSF升高白血病细胞mi R-146a表达,同时降低细胞Smad4 m RNA和总Smad4蛋白的表达,提高白血病细胞的增殖活性。转染了mi R-146a过表达质粒后的白血病细胞Smad4 m RNA和总Smad4蛋白表达均降低,而用G-CSF处理转染后的细胞,其mi R-146a表达升高及Smad4表达降低得更为明显。结论 G-CSF通过调控mi R-146a/Smad4信号轴,影响Smad4表达水平,刺激处于静止状态的白血病细胞进入细胞增殖阶段。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 mi R-146a/Smad4表达 细胞增殖活性
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三氧化二砷对Molt-4细胞株Notch信号通路作用机制的研究 被引量:1
8
作者 刘海艳 沈莉菁 +4 位作者 陈芳源 万海霞 济华 王婷 《内科理论与实践》 2015年第1期35-40,共6页
目的 :探讨三氧化二砷(As2O3)对急性淋巴细胞白血病细胞株Molt-4中Notch1基因的作用机制。方法 :采用反转录(RT)-PCR检测正常人外周血淋巴细胞与急性淋巴细胞白血病细胞株A3和Molt-4中Notch1基因m RNA的相对表达量,选取Notch1 m ... 目的 :探讨三氧化二砷(As2O3)对急性淋巴细胞白血病细胞株Molt-4中Notch1基因的作用机制。方法 :采用反转录(RT)-PCR检测正常人外周血淋巴细胞与急性淋巴细胞白血病细胞株A3和Molt-4中Notch1基因m RNA的相对表达量,选取Notch1 m RNA表达量较高的Molt-4细胞,分别经浓度0、2、4μmol/L As2O3处理细胞后,应用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活力,显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Notch1 m RNA表达率,蛋白质印迹法检测细胞内Notch1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及胱天蛋白酶3(caspase-3)凋亡蛋白的表达情况。结果:As2O3能下调Molt-4细胞中Notch1基因及蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax蛋白比例,并促进凋亡蛋白胱天蛋白酶3的活化,2μmol/L As2O3处理后,随作用时间延长,Molt-4细胞的凋亡率逐渐增高(r=0.989,P〈0.05)。Molt-4细胞分别经2μmol/L和4μmol/L As2O3处理72 h后,流式结果显示,随As2O3浓度升高,Molt-4细胞凋亡率升高(r=1.000,P〈0.05)。As2O3以时间和浓度依赖的方式诱导Molt-4细胞凋亡。结论:As2O3通过抑制Molt-4细胞株Notch1信号通路的表达,抑制其增殖并诱导凋亡。 展开更多
关键词 NOTCH 1基因 三氧化二砷 MOLT-4细胞
5-ALA介导的光动力治疗在耐药白血病中的作用机制研究
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作者 韩晓凤 黄洪晖 +3 位作者 倪蓓文 济华 陈芳源 《应用激光》 CSCD 北大核心 2014年第1期76-80,共5页
目的:本研究观察了5-氨基乙酰丙酸介导的光动力治疗(ALA—PDT)对耐药自血病细胞株HL-60/ADR的杀伤作用及对耐药白血病原代细胞存活率的影响。方法:以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型,同时在11例白血病患者原代细胞中进行检... 目的:本研究观察了5-氨基乙酰丙酸介导的光动力治疗(ALA—PDT)对耐药自血病细胞株HL-60/ADR的杀伤作用及对耐药白血病原代细胞存活率的影响。方法:以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型,同时在11例白血病患者原代细胞中进行检测。实验分为4组,对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA+PDT组。用MTT法测定细胞的存活率,采用阳离子脂质荧光探针JC-1检测线粒体跨膜电位,用RealtimePCR检测PDT前后HL-60/ADR细胞株中bcl-2基因及多药耐药基因MRP的表达变化。结果:ALA—PDT后HL-60/ADR细胞株线粒体跨膜电位出现快速下降,0,2,4h时线粒体跨膜电位崩塌的细胞比例分别升高至55.91%±2.60%、64.27%±1.08%、82.17%±0.43%,与对照组相比皆有显著差异(P〈0.05),呈时间依赖性。而单纯ALA组和单纯光照组则无明显变化。HL-60/ADR细胞株在ALA—PDT后Bcl-2和MRP基因均呈明显下降趋势。在初发和复发难治急性白血病原代细胞中ALA+PDT组均显示较强的光动力效应。结论:ALA—PDT诱导的HL-60/ADR细胞的杀伤可能与其影响线粒体跨膜电位有关,即通过影响线粒体功能促进细胞凋亡。同时表明ALA介导的光动力作用部分是通过在基因转录水平下调抗凋亡基因Bcl-2而促进凋亡的发生,另一方面通过下调耐药基因MRP的表达而部分逆转耐药。同时ALA-PDT对原代白血病细胞同样有较大的抑制作用。 展开更多
关键词 5-氨基乙酰丙酸 光动力学治疗 HL-60 ADR 细胞凋亡 线粒体 bcl- 2 多药耐药蛋白
黄酮联合阿霉素协同诱导HL60/ADR细胞凋亡机制的研究 被引量:1
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作者 陈芳源 张旻玥 +3 位作者 蔡佳翌 沈莉菁 济华 曹兰芳 《诊断学理论与实践》 2014年第2期159-165,共7页
目的:探究黄酮在体外对多药耐药细胞系HL60/ADR的影响及联合阿霉素后对细胞生长抑制和凋亡的作用机制,探讨中药在白血病化疗中扶正、增效的可能性。方法:用CCK-8法检测黄酮和阿霉素对HL60/ADR细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪检测药... 目的:探究黄酮在体外对多药耐药细胞系HL60/ADR的影响及联合阿霉素后对细胞生长抑制和凋亡的作用机制,探讨中药在白血病化疗中扶正、增效的可能性。方法:用CCK-8法检测黄酮和阿霉素对HL60/ADR细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡率,并在光镜下观察细胞形态变化;蛋白印迹法检测药物作用后凋亡信号通路蛋白表达的情况;流式细胞仪检测药物作用后HL60/ADR线粒体跨膜电位的变化。结果:黄酮能显著抑制HL60/ADR细胞的增殖,且其抑制细胞增殖效应呈现浓度-时间依赖性;不同浓度的黄酮及联合阿霉素1.5μg/mL(20%抑制浓度即IC20值)后对细胞的抑制作用更明显,具有协同和相加作用。75μg/mL和100μg/mL黄酮能促进HL60/ADR细胞凋亡,而黄酮联合阿霉素的促凋亡作用更显著。蛋白信号通路研究显示,单药黄酮及两药联合能使HL60/ADR细胞线粒体膜电位下降,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL表达明显下调,促凋亡蛋白Bim、Bad、Bax明显增加,激活caspase途径;同时磷酸化的P-JNK蛋白表达水平升高,而P-ERK明显下降。结论:黄酮联合阿霉素可通过线粒体跨膜电位的下降,依赖caspase活化调控Bcl-2家族中Bim、Bad和Bax蛋白表达,下调ERK细胞保护通路并上调JNK应激相关通路,最终协同抑制HL60/ADR细胞增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 黄酮 阿霉素 凋亡 HL60 ADR细胞
三氧化二砷对白血病细胞EVI-1基因作用的研究 被引量:1
11
作者 周凌云 陈芳源 +3 位作者 沈莉菁 万海霞 济华 蔡佳翌 《诊断学理论与实践》 2014年第1期54-60,共7页
目的:探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As203)对白血病细胞中EVI.1基因的作用。方法:采用1μmol/L的As2O3处理1例高表达EVI.1基因的急性单核细胞白血病患者的原代细胞,并用反转录聚合酶链反应(reveYsetranscription-polyITIer... 目的:探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As203)对白血病细胞中EVI.1基因的作用。方法:采用1μmol/L的As2O3处理1例高表达EVI.1基因的急性单核细胞白血病患者的原代细胞,并用反转录聚合酶链反应(reveYsetranscription-polyITIerasechajnreaction.RT-PCR)检测细胞的EVI-1mRNA表达率;同时采用RT—PCR检测人白血病细胞株K562、HL-60、U937和THP-1中EVI-1mRNA基因的相对表达量。选取EVI-1mRNA表达量最高的THP-1细胞株作为研究对象.经多位点PCR测序确认其包含EVI-1基因全长片段后,分别以1、3、5μmol/L的As2O3处理THP-1细胞株。观察细胞形态变化,CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测EVI-1mRNA表达率,蛋白质印迹法检测细胞内EVI-1蛋白的表达情况。结果:As2O3能下调原代细胞中EVI-1mRNA,抑制THP-1细胞株增殖、诱导其凋亡,且呈剂量、时间依赖性;As2O3能下调THP-1细胞株EVI-1mRNA、EVI-1蛋白的表达。结论:As2O3通过抑制白血病细胞EVI-1mRNA、EVI-1蛋白的表达,从而促进其凋亡。 展开更多
关键词 三氧化二砷 EVI-1基因 凋亡 THP-1细胞株
转Notch1基因T淋巴细胞白血病双荧光示踪斑马鱼模型的建立及鉴定 预览 被引量:3
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作者 卿恺 陈芳源 +3 位作者 沈莉菁 林文洁 孙瑞林 济华 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期257-262,279共7页
目的在血管内皮增强型绿色荧光蛋白标记的斑马鱼系(flil-EGFP)中,转入Rag2启动子驱动的人源性截短型Notchl基因(ICNl),从中筛选并鉴定发生急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的斑马鱼,建立稳定传代的红绿双色示踪的T-ALL斑马鱼疾病模... 目的在血管内皮增强型绿色荧光蛋白标记的斑马鱼系(flil-EGFP)中,转入Rag2启动子驱动的人源性截短型Notchl基因(ICNl),从中筛选并鉴定发生急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的斑马鱼,建立稳定传代的红绿双色示踪的T-ALL斑马鱼疾病模型。方法构建Rag2-ICNl-EGFP质粒,显微注射到斑马鱼胚胎的单细胞期,利用荧光体视显微镜筛选F0代,并建立稳定传代的转基因鱼系。通过荧光体视显微镜、RT-PCR、Westernblotting验证ICNlmRNA和蛋白的表达,并利用流式细胞术、外周血涂片方法鉴定T-ALL斑马鱼模型的表型。结果在867条显微注射重组质粒的斑马鱼中,鉴定发现有20条(2.3%)转基因阳性斑马鱼,为F0代转基因斑马鱼,其中雄鱼9条,雌鱼11条。在已性成熟的F0代成鱼之间采取一对一形式交配,产下F1代,通过荧光体视显微镜、RT-PCR、Westernblotting在大体观、mRNA以及蛋白水平验证了ICNl的表达;流式细胞术和外周血涂片结果显示,转基因¨代斑马鱼与flil-EGFP斑马鱼相比,红细胞比例显著降低,淋巴细胞比例明显增高。结论成功构建转Notchl基因红绿双色示踪的T-ALL斑马鱼模型,为深入探讨Notch在促进T-ALL发生中的调控机制以及利用这种疾病模型进行高通量的活体药物筛选提供了研究平台。 展开更多
关键词 NOTCH1 急性T淋巴细胞白血病 斑马鱼 双荧光示踪
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AML1-EVI1转基因斑马鱼模型的建立及对造血转录因子的调控 被引量:1
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作者 林文洁 沈莉菁 +3 位作者 陈芳源 孙瑞林 济华 《内科理论与实践》 2013年第3期192-196,共5页
目的:通过建立表达急性髓系白血病(AML)1-同向性病毒整合位点(EVI)1融合基因斑马鱼模型,研究AML1-EVI1融合基因对造血转录因子的影响。方法:构建携带绿色荧光蛋白的AML1-EVI1质粒,显微注射到斑马鱼胚胎单细胞期,建立生殖系稳... 目的:通过建立表达急性髓系白血病(AML)1-同向性病毒整合位点(EVI)1融合基因斑马鱼模型,研究AML1-EVI1融合基因对造血转录因子的影响。方法:构建携带绿色荧光蛋白的AML1-EVI1质粒,显微注射到斑马鱼胚胎单细胞期,建立生殖系稳定转染的转基因模型.常规养殖到F2代。以F2代转基因斑马鱼作为实验对象,运用反转录(RT)-PCR验证AML1-EVI1融合基因的表达.外周血涂片、肾细胞涂片检测血细胞形态学改变,全胚胎原位杂交及荧光实时定量PCR(RFQ-PCR)检测融合基因对造血转录因子[GATA结合蛋白1(GATA1)、髓过氧化物酶(MPO)1的影响。结果:在性成熟146条嵌合表达的F0代斑马鱼中鉴定得到3条(2.1%)转基因阳性斑马鱼,其中雄鱼2条.雌鱼1条。外周血涂片及肾细胞涂片显示转基因斑马鱼出现造血细胞分化障碍,幼稚细胞增多,全胚胎原位杂交及RFQ—PCR均显示.与野生型相比.转基因型斑马鱼造血转录因子MPO基因表达量无论造血细胞发育早期还是晚期都明显下降.转录因子GATA1则在发育早期上调.晚期呈现明显下调。结论:AML1-EVI1融合基因通过调节转录因子抑制髓系分化,红系发育,促进原始细胞增殖。 展开更多
关键词 AML1-EVI1 斑马鱼模型 造血转录因子
经典Wnt信号通路在非霍奇金淋巴瘤细胞株中作用的初步研究 被引量:5
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作者 曲琦 黄洪晖 +3 位作者 陈芳源 王婷 济华 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期144-149,共6页
目的:通过检测经典Wnt信号通路在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma,NHL)细胞株中是否存在异常激活,以探讨其与NHL发病的相关性。方法:选取人NHL细胞株SUDHL-4、Raji和Namalwa(以正常人淋巴细胞作为对照),采用蛋白质印迹... 目的:通过检测经典Wnt信号通路在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma,NHL)细胞株中是否存在异常激活,以探讨其与NHL发病的相关性。方法:选取人NHL细胞株SUDHL-4、Raji和Namalwa(以正常人淋巴细胞作为对照),采用蛋白质印迹法检测各细胞株中β-链蛋白(3-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(glycogensynthasekinase-3β,GSK-3β)及其失活形式Ser9被磷酸化的GSK-3β[phospho-glycogensynthasekinase-3β(Ser9),p-GSK-3β(Ser9)]蛋白的表达情况;应用实时荧光定量-PCR技术检测β-catenin编码基因CTNNB1、经典Wnt通路上游相关调控因子低密度脂蛋白受体相关蛋白5(10wdensitylipoproteinreceptorrelatedprotein5,LRP5)基因及靶基因c-Myc的转录表达水平。结果:与正常对照组淋巴细胞相比较,3株NHL细胞中总蛋白及细胞核内β-catenin蛋白的表达水平明显上调;p-GSK-3β(Ser9)蛋白较正常对照也存在不同水平表达上调的现象,而GSK-3β蛋白的表达在各组间差异无统计学意义。NHL细胞中CTNNB1、LRP5及c-MycmRNA表达水平与正常对照相比,均有明显提高。结论:β-catenin作为经典Wnt信号通路重要的激活标志,其在NHL中的高表达及经典Wnt通路其他相关分子异常,说明经典Wnt信号通路可能是导致NHL的分子作用机制之-。 展开更多
关键词 淋巴瘤 非霍奇金 WNT信号通路 Β-CATENIN 糖原合成酶激酶3
2-脱氧-D-葡萄糖对非霍奇金淋巴瘤细胞株Namalwa和SU-DHL-4糖酵解通路的干预研究 被引量:1
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作者 庞淯阳 王婷 +2 位作者 陈芳源 济华 《诊断学理论与实践》 2012年第2期 116-120,共5页
目的:研究糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)对人类非霍奇金淋巴瘤细胞株Namalwa、SU-DHL-4的作用效应及机制。方法:采用锥虫蓝拒染法检测细胞增殖,D-葡萄糖[HK法]检测试剂盒检测葡萄糖浓度,乳酸测试盒检测糖酵... 目的:研究糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)对人类非霍奇金淋巴瘤细胞株Namalwa、SU-DHL-4的作用效应及机制。方法:采用锥虫蓝拒染法检测细胞增殖,D-葡萄糖[HK法]检测试剂盒检测葡萄糖浓度,乳酸测试盒检测糖酵解途径终产物乳酸含量,反转录实时定量PCR(RTQ-PCR)检测糖酵解途径关键酶基因的转录水平,流式细胞术检测细胞周期。以健康人外周血梯度离心法分离所得的淋巴细胞为正常对照组。结果:淋巴瘤细胞株Namalwa和SU-DHL-4中糖酵解相关基因HK1、LDHA、GLUT1、HIF-1α在转录水平明显高于正常对照。2-DG能抑制淋巴瘤细胞株葡萄糖消耗,减少乳酸生成,将细胞周期阻滞于G0/G1期,致使细胞增殖受抑。结论:淋巴瘤细胞株Namalwa、SU-DHL-4存在糖酵解异常,2-DG通过抑制淋巴瘤细胞株糖酵解通路,可干扰细胞能量代谢,阻断细胞周期,使细胞增殖受抑,从而发挥抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 非霍奇金淋巴瘤 糖酵解 2-deoxy-D-glucose Namalwa SU-DHL-4
5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法诱导HL-60细胞线粒体介导的凋亡 预览 被引量:1
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作者 韩晓凤 陈芳源 +1 位作者 济华 欧阳仁荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 73-77,共5页
本研究探讨5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)作用于白血病细胞株HL-60后线粒体膜电位改变及凋亡相关基因Bcl-2表达的变化。以白血病细胞株HL-60为实验模型,实验分为4组:对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA+PDT组。采用阳... 本研究探讨5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)作用于白血病细胞株HL-60后线粒体膜电位改变及凋亡相关基因Bcl-2表达的变化。以白血病细胞株HL-60为实验模型,实验分为4组:对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA+PDT组。采用阳离子脂质荧光探针JC-1检测线粒体跨膜电位,RT-PCR及实时定量PCR方法检测PDT前后Bcl-2基因表达变化。结果表明,ALA-PDT后线粒体膜电位出现快速下降,0 h时线粒体跨膜电位崩塌的细胞比例升高至(58.28±0.92)%,与对照组相比有显著差异(P〈0.05)。随着时间延长,这种细胞比例逐步增多,而单纯ALA组和单纯光照组则无明显变化;ALA-PDT后2 h Bcl-2基因表达显著下降,4 h进一步下降达到谷底,24 h时仍呈低表达,并通过实时定量PCR进一步得到了证实。结论:ALA-PDT诱导的HL-60细胞凋亡过程与其影响线粒体跨膜电位有关,即通过影响线粒体功能促进细胞凋亡;ALA介导的光动力作用部分是通过在基因转录水平下调抗凋亡基因Bcl-2而促进凋亡的。 展开更多
关键词 5-氨基乙酰丙酸 光动力学治疗 HL-60细胞 细胞凋亡 线粒体 BCL-2
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CCK法检测紫草素及衍生物对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用 预览 被引量:2
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作者 济华 成玲剑 +4 位作者 周文 张义炜 黄洪晖 陈芳源 《中国实验诊断学》 2012年第8期1366-1369,共4页
目的以常用血液肿瘤细胞株为研究对象,体外加入紫草素(代号SK01)、β-羟基-异戊酰紫草素(代号SK17)及其16种人工半合成的紫草素衍生物,研究对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用,从中筛选出低毒高效的紫草素类化合物。方法 CCK-8法检测... 目的以常用血液肿瘤细胞株为研究对象,体外加入紫草素(代号SK01)、β-羟基-异戊酰紫草素(代号SK17)及其16种人工半合成的紫草素衍生物,研究对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用,从中筛选出低毒高效的紫草素类化合物。方法 CCK-8法检测紫草素及其衍生物对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用即药物半数抑制浓度。结果紫草素-二甲醚衍生物(代号SK36)对多种血液肿瘤细胞株均有很强的细胞毒作用,但对正常细胞株的毒性作用则明显低于SK01和SK17,表现出较好选择性。实验中我们还发现大部分母核Ⅰ紫草素衍生物药物活性强于相对应的母核Ⅱ衍生物。结论 SK36能有效抑制多种血液肿瘤细胞株增殖,而对正常细胞株毒性较小,有较强的选择性,值得进一步开展基础及临床研究。 展开更多
关键词 CCK-8 紫草素 紫草素衍生物 细胞增殖 细胞株
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三氧化二砷抑制淋巴瘤细胞株血管内皮生长因子表达的研究 被引量:1
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作者 徐菲 +3 位作者 王海嵘 济华 陈芳源 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2011年第5期272-274,共3页
目的探讨三氧化二砷(ATO)对人类淋巴瘤细胞株内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法应用实时荧光定量聚合酶链(Real-timePCR)技术及酶联免疫吸附(ELISA)法检测ATO作用前后淋巴瘤细胞株Raji及Jurkat内VEGF基因及其蛋白表达... 目的探讨三氧化二砷(ATO)对人类淋巴瘤细胞株内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法应用实时荧光定量聚合酶链(Real-timePCR)技术及酶联免疫吸附(ELISA)法检测ATO作用前后淋巴瘤细胞株Raji及Jurkat内VEGF基因及其蛋白表达量的变化。结果在ATO诱导淋巴瘤细胞株凋亡过程中,两种细胞未经ATO处理前均高表达VEGF mRNA(Raji加药2Ixmol/L12hAACt值0.754±0.15,Jurkat加药3.5[xmol/L72h△△Ct值1.674±0.13)及VEGF蛋白(加药12h,Raji198.384±4.37;Jurkat 563.114±3.81),且Jurkat细胞较Raji细胞的VEGF蛋白的表达量高;经ATO作用24、48、72h后VEGF的mRNA表达量均较加药前明显减少(加药72h△ACt值,Raji:8.954±0.38;Jurkat:9.094±0.16),差异有统计学意义(t=3.54,P〈0.01;t=3.65,P〈0.01);同时蛋白表达量也较加药前明显减少(加药72h,Raji:23.554±2.06;Jurkat:57.11±3.88),差异有统计学意义(t=2.48,P〈0.05;t=2.59,P〈0.05),且两者与药物作用时间明显相关,各时间点之间蛋白表达量差异均有统计学意义(F=2.47,P〈0.05;F=2.50,P〈0.05)。结论ATO通过阻断淋巴瘤细胞生长所需的血管条件,从而抑制淋巴瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 淋巴瘤 肿瘤 实验性 三氧化二砷 血管内皮生长因子类 聚合酶链反应
磷酸氯喹对白血病细胞株的影响 预览 被引量:1
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作者 刘佳 陈芳源 +4 位作者 王海嵘 济华 王利民 欧阳仁荣 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第4期 571-575,共5页
目的本实验以药物磷酸氯喹干预白血病细胞株,观察其对白血病细胞生长凋亡的影响,同时研究用药后凋亡相关蛋白Pnas-2的变化,以探寻磷酸氯喹作用白血病细胞株机制。方法 MTT法检测药物干预后白血病细胞增长情况;AnnexinⅤ/sytox标记细胞... 目的本实验以药物磷酸氯喹干预白血病细胞株,观察其对白血病细胞生长凋亡的影响,同时研究用药后凋亡相关蛋白Pnas-2的变化,以探寻磷酸氯喹作用白血病细胞株机制。方法 MTT法检测药物干预后白血病细胞增长情况;AnnexinⅤ/sytox标记细胞以流式细胞仪检测药物干预前后细胞凋亡情况的差别;激光共聚焦观察蛋白Pnas-2的亚细胞定位,蛋白印迹实验检测药物作用前后,Pnas-2表达量的变化。结果 50μg/mL的磷酸氯喹能够诱导白血病细胞株凋亡。并发现凋亡相关蛋白Pnas-2在白血病细胞株中存在异常定位和过量表达。磷酸氯喹能够使白血病细胞株中Pnas-2蛋白的表达量及亚细胞定位发生变化。结论磷酸氯喹能够抑制白血病细胞株生长,诱导凋亡,机制可能是恢复了Pnas-2蛋白的异常定位及表达。 展开更多
关键词 磷酸氯喹 白血病细胞株 PNAS-2 凋亡
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MYCN转基因斑马鱼对造血调控因子的影响 被引量:1
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作者 沈莉菁 +4 位作者 陈芳源 张勇 匡颖 济华 《诊断学理论与实践》 2011年第2期122-127,共6页
目的:通过热激活启动子条件性过表达鼠源性MYCN基因,建立生殖系稳定转染的斑马鱼系,以研究MYCN基因对造血调控因子转录的影响。方法:构建携绿色荧光蛋白"报告基因"的MYCN质粒,显微注射到斑马鱼胚胎单细胞期,通过荧光筛选出F0代,继... 目的:通过热激活启动子条件性过表达鼠源性MYCN基因,建立生殖系稳定转染的斑马鱼系,以研究MYCN基因对造血调控因子转录的影响。方法:构建携绿色荧光蛋白"报告基因"的MYCN质粒,显微注射到斑马鱼胚胎单细胞期,通过荧光筛选出F0代,继而建立生殖系稳定转染的转基因鱼系。通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)及血涂片论证MYCN基因的过表达及其对造血调控因子的影响。结果:在256条嵌合表达的性成熟F0代斑马鱼中,鉴定发现有18条(7.0%)显示转基因阳性,其中雄鱼8条,雌鱼10条。同时,RFQ-PCR及外周血涂片均显示,转基因斑马鱼F1和F2代均发生明显的造血分化障碍,造血关键调控因子scl、mpo、gata1基因表达量明显下降。结论:斑马鱼在基因研究中具有直观及规模化优势,特别适用于单一基因的研究,MYCN基因产物可显著抑制红系生成和造血分化。 展开更多
关键词 斑马鱼 MYCN基因 造血调控因子
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