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非接触式呼吸与心率信号采集系统 预览
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作者 郭健 雨行 +5 位作者 王丽荣 韦阳 郭宇 赵也明 刘丽兰 晓禾 《光学精密工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1354-1361,共8页
为实现卧床病员生命状态的无感实时监测,设计了一种非接触式呼吸率与心率监测系统。首先,根据心脏射血收缩过程的力学特性,选择灵敏度高、稳定性好的压电陶瓷传感器采集心冲击力学信号。对信号进行去噪,滤波放大等处理,通过数字化采集... 为实现卧床病员生命状态的无感实时监测,设计了一种非接触式呼吸率与心率监测系统。首先,根据心脏射血收缩过程的力学特性,选择灵敏度高、稳定性好的压电陶瓷传感器采集心冲击力学信号。对信号进行去噪,滤波放大等处理,通过数字化采集得到心冲击图(Ballistocardiogram,BCG)。其次,通过对心冲击图进行平滑滤波提取呼吸信号,利用快速傅氏变换(FFT)获取呼吸信号频率。采用带通滤波器去除BCG信号的呼吸包络以及高频干扰,获取BCG信号的单位时间J波波峰数,推算出心率值。最后,为验证系统的准确性与一致性,与BIOPAC采集的呼吸及心电图(Electrocardiogram,ECG)信号进行比对,结果表明本系统呼吸误差率小于4.5%,心率误差率小于9.7%。通过Bland-Altman分析,表明监测系统的心率测算准确度与BIOPAC具有较好的一致性。 展开更多
关键词 非接触式 心率检测 呼吸率检测 Bland-Altman分析
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腺病毒介导RNA干扰抑制核心结合因子α1表达阻断软骨细胞的肥大分化 预览
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作者 高博 幸嵘 +6 位作者 孔清泉 项舟 杨婧 蔡加琴 黄益州 李秀群 晓禾 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第2期187-191,共5页
背景:软骨细胞肥大分化是软骨内骨化启动的标志,也是软骨内骨化必不可少的步骤,它是一种级联反应,一旦启动就很难阻断,最终结果是形成骨骼结构。RNA干扰技术是一种转录后水平的基因沉默,相关研究显示采用RNA干扰技术阻断核心结合因子α... 背景:软骨细胞肥大分化是软骨内骨化启动的标志,也是软骨内骨化必不可少的步骤,它是一种级联反应,一旦启动就很难阻断,最终结果是形成骨骼结构。RNA干扰技术是一种转录后水平的基因沉默,相关研究显示采用RNA干扰技术阻断核心结合因子α1表达能够有效地抑制异位骨化形成。目的:利用RNA干扰技术抑制核心结合因子α1表达,从而阻断大鼠软骨细胞肥大分化。方法:构建沉默SD大鼠核心结合因子基因的腺病毒Ad-Cbfa1-siRNA。利用维甲酸及白细胞介素1α促进软骨细胞肥大分化,观察Ad-Cbfa1-siRNA对核心结合因子α1表达的抑制作用。利用核心结合因子α1免疫组化方法比较各组核心结合因子α1的表达从而分析软骨细胞的肥大分化情况。结果与结论:经维甲酸和白细胞介素1α诱导后,阴性对照病毒组软骨细胞出现肥大分化,核心结合因子α1的表达呈阳性反应;Ad-Cbfa1-siRNA组软骨细胞中未见核心结合因子α1明显表达。提示利用RNA干扰技术能够明显抑制核心结合因子α1的表达,从而阻断软骨细胞的肥大分化。 展开更多
关键词 组织构建 软骨组织工程 软骨细胞肥大分化 核心结合因子 RNA干扰 腺病毒 国家自然科学基金
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器官特异性转移肺癌细胞株的筛选及建立
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作者 周清华 祖玲玲 +5 位作者 李潞 晓禾 晓峰 李洋 刘红雨 孙芝琳 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期175-182,共8页
背景与目的肺癌转移是肺癌的恶性标志和特征,也是肺癌病人治疗失败和死亡的主要原因。肺癌转移具有器官特异性,最常转移的部位是淋巴结、大脑、骨、肝脏和肾上腺。本研究的目的是应用我们实验室的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981,筛... 背景与目的肺癌转移是肺癌的恶性标志和特征,也是肺癌病人治疗失败和死亡的主要原因。肺癌转移具有器官特异性,最常转移的部位是淋巴结、大脑、骨、肝脏和肾上腺。本研究的目的是应用我们实验室的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981,筛选鉴定出具有器官特异性转移的肺癌亚代细胞株,为进一步研究肺癌细胞器官特异转移提供科学可靠的细胞模型。方法通过裸鼠实验,将母系细胞株L9981一Luc皮下接种,每周一次动物活体成像观察肺癌器官转移情况,数周后构建出具有肺、脊柱、纵隔淋巴结和大脑等器官特异性转移的小鼠模型;处死裸鼠,切取肺、脊柱、纵隔淋巴结和大脑器官肺癌转移瘤进行原代培养,构建具有器官靶向特异性转移潜能的肺癌亚代细胞株;将第一代器官特异性转移肺癌细胞株接种裸鼠皮下,再次构建肺癌器官特异性转移小鼠模型;通过反复多次将肺癌器官特异性转移瘤构建肺癌细胞株,再裸鼠接种,最终获得具有肺、脊柱、纵隔淋巴结和大脑器官特异性转移的肺癌细胞株。结果经过裸鼠反复接种,动物活体成像、动物体内反复筛选鉴定,成功构建了4株分别特异性转移到肺、脊柱、纵隔淋巴结和大脑的器官特异性转移肺癌细胞株,分别命名为L9981-LuM、L9981-BoM、L9981-LnM和L9981-BrM。结论成功构建出具有肺、纵隔淋巴结、脊柱和大脑特异性转移的人大细胞肺癌细胞模型,为进一步研究肺癌器官特异转移的分子机制、信号调控途径,以及未来研究和开发抑制或/和阻断肺癌转移的分子靶向药物提供了可靠的细胞模型。 展开更多
关键词 肺肿瘤 器官特异性转移 细胞株 筛选
骨骼肌无细胞基质的制备及其生物相容性研究 被引量:4
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作者 田春祥 范雪娇 +5 位作者 晓禾 邓力 秦廷武 罗静聪 李秀群 吕青 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 749-754,共6页
目的细胞外基质是脂肪组织工程材料的研究热点之一。通过探讨骨骼肌无细胞基质的制作方法及生物相容性,为其在脂肪组织工程中的应用奠定基础。方法取健康成年小香猪新鲜骨骼肌组织,横切成厚2~3 mm的组织块,采用低渗-去垢剂法脱细胞处... 目的细胞外基质是脂肪组织工程材料的研究热点之一。通过探讨骨骼肌无细胞基质的制作方法及生物相容性,为其在脂肪组织工程中的应用奠定基础。方法取健康成年小香猪新鲜骨骼肌组织,横切成厚2~3 mm的组织块,采用低渗-去垢剂法脱细胞处理。处理后采用HE染色、Masson三色染色、免疫组织化学染色及扫描电镜检测骨骼肌无细胞基质是否有细胞成分残留,并观察其基本结构;应用MTT法检测骨骼肌无细胞基质细胞毒性。取乳腺癌患者自愿捐赠脂肪组织,分离培养人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs),从形态学、流式细胞学和成脂、成骨分化能力方面进行鉴定。将骨骼肌无细胞基质与第3代hADSCs共培养,于培养后第1、3、5、7天通过细胞活性检测材料上细胞黏附、扩散和增殖情况,了解其与细胞之间的相互作用。结果 HE、Masson、免疫组织化学染色及扫描电镜观察显示骨骼肌无细胞基质肌纤维去除完全,无细胞核残留,基质结构保留完整;大量连接成网状的胶原纤维呈多孔隙样结构,规则排列。MTT检测示骨骼肌无细胞基质细胞毒性为1级,细胞相容性好。细胞活性检测示hADSCs在骨骼肌无细胞基质上能很好地伸展,且能与周围基质黏附,进入基质内部并相互交织。结论经脱细胞处理的骨骼肌无细胞基质具有良好生物相容性,可能作为脂肪组织工程的支架材料。 展开更多
关键词 脂肪组织工程 骨骼肌 无细胞基质 人脂肪干细胞 支架材料
音猬因子调控BMSCs表达和分泌VEGF及bFGF的实验研究 被引量:3
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作者 蔡加琴 黄益洲 +3 位作者 晓禾 谢红蕾 黄永灿 邓力 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 112-116,共5页
目的音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)介导的信号参与调控血管生成的重要环节。研究不同浓度的重组Shh-N(recombinant Shh N-termitant,rShh-N)对BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF的影响。方法取健康3日龄SD大鼠骨髓分离培养BMSCs,体外扩增至... 目的音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)介导的信号参与调控血管生成的重要环节。研究不同浓度的重组Shh-N(recombinant Shh N-termitant,rShh-N)对BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF的影响。方法取健康3日龄SD大鼠骨髓分离培养BMSCs,体外扩增至第3代,分别用含0、10、100、200 ng/mL rShh-N的L-DMEM培养BMSCs,作为A、B、C、D组。培养12、24、48、72 h后行ELISA法检测各组上清液中VEGF和bFGF的浓度,实时荧光定量PCR法检测各组VEGF和bFGF mRNA的表达水平。结果在基因表达水平上,D组各时间点的VEGF和bFGF mRNA表达量均明显高于A组(P〈0.05),且在12、48 h表达量高于24、72 h(P〈0.01);C组在各时间点均促进bFGF mRNA表达(P〈0.05),在24~72 h促进VEGF mRNA表达(P〈0.05),且在72 h时表达量均最高(P〈0.01);B组在12 h抑制VEGF mRNA表达(P〈0.05),48 h和72 h表现出促进作用(P〈0.05),在12~48 h明显促进bFGF mRNA表达(P〈0.05),且在48 h时的表达量最高(P〈0.01)。在蛋白水平上,D组各时间点VEGF和bFGF分泌量均高于A组(P〈0.01);C组在24~72 h VEGF和bFGF分泌量明显多于A组(P〈0.05);B组在12 h和48 h抑制VEGF的分泌(P〈0.05),24 h增加其分泌作用(P〈0.05),而在24 h和48 h促进bFGF的分泌(P〈0.05)。各组在48 h和72 h时的VEGF和bFGF分泌量明显多于12 h和24 h(P〈0.05)。结论 rShh-N可促进BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF,为进一步探讨rShh-N和MSCs联合应用于治疗缺血性相关疾病以及促进骨修复重建的可行性提供了实验依据。 展开更多
关键词 音猬因子 BMSCS 缺血性相关疾病 骨修复 VEGF BFGF 大鼠
低氧预处理对大鼠BMSCs葡萄糖代谢的影响
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作者 朱鸿明 晓禾 邓力 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1004-1007,共4页
目的观察低氧预处理对BMSCs葡萄糖代谢的影响,探讨其潜在机制,为十细胞疗法的优化提供理论依据。方法取1~3日龄SD大鼠骨髓,采用密度梯度离心法获得BMSCs,取第4代细胞用于实验。根据处理办法不同将细胞分为4组:A组采用常氧培养24h... 目的观察低氧预处理对BMSCs葡萄糖代谢的影响,探讨其潜在机制,为十细胞疗法的优化提供理论依据。方法取1~3日龄SD大鼠骨髓,采用密度梯度离心法获得BMSCs,取第4代细胞用于实验。根据处理办法不同将细胞分为4组:A组采用常氧培养24h;B组以1%低氧浓度培养24h;C组于低氧预处理前用20μmol/L甲氧雌二醇处理24h;D组于低氧预处理前用50μmol/L缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor1,HIF-1)特异的siRNA处理12h。采用MTT法、生化分析仪及实时荧光定量PCR检测各组BMSCs活力、葡萄糖代谢以及HIF—1α mRNA及葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut-1)mRNA的表达。结果MTT检测示A、B、C、D组吸光度(A)值分别为387.67±58.92、322.50±50.60、297.00±53.00、286.00±41.00,各组间差异无统计学意义(P〉0.05)。与A组相比,B组葡萄糖摄取量和乳酸生成量显著增加(P〈0.05);C、D组略高于A组,但差异无统计学意义(P〉0.05),但显著低于B组,差异有统计学意义(P〈0.05);C、D组间比较差异无统计学意义(P〉0.05)。与A组相比,B组HIF-1αmRNA和Glut-1mRNA表达均显著上调(P〈0.05);C、D组HIF.1ctmRNA和Glut-1mRNA表达较B组大幅度降低(P〈0.05),但仍显著高于A组(P〈0.05);C、D组间差异无统计学意义(P〉0.05)。结论低氧预处理可上调大鼠BMSCs的葡萄糖摄取和代谢能力,其机制涉及HIF-1mRNA及其下游基因Glut-1mRNA的表达上调。 展开更多
关键词 BMSCS 低氧预处理 缺氧诱导因子1 葡萄糖转运蛋白1 大鼠
中小规模电力监理企业市场拓展策略刍议 预览 被引量:2
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作者 许仁来 梁金法 晓禾 《建设监理》 2011年第12期 30-31,35,共3页
中小型电力监理企业面对当前非常难得的发展机遇和严峻的挑战,应该通过努力培育自己雄厚牢固的核心骨干队伍,提升企业科技装备水平,秉持“有所为有所不为”原则,发挥比较优势,走合作化道路,确保稳定做大强本地及成熟区域、领域市... 中小型电力监理企业面对当前非常难得的发展机遇和严峻的挑战,应该通过努力培育自己雄厚牢固的核心骨干队伍,提升企业科技装备水平,秉持“有所为有所不为”原则,发挥比较优势,走合作化道路,确保稳定做大强本地及成熟区域、领域市场,不断巩固发展壮大半成熟区域、领域市场,积极稳妥开拓新区域、领域市场,加强企业经营管理,确保企业持续稳定、长足发展。 展开更多
关键词 中小电力监理企业 市场拓展策略 刍议
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低氧、无血清培养对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡的影响 预览 被引量:4
8
作者 蒋能刚 胥劲 +4 位作者 邱琳 唐莉 朱鸿明 李秀群 晓禾 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第11期 1-3,共3页
目的观察人骨髓间充质干细胞(hBM—MSCs)对低氧环境的适应能力,为其临床应用提供依据。方法体外培养hBM—MSCs,根据培养条件分为四组,常氧正常血清组培养条件为20%O2及10%FBS/HD、常氧无血清组为20%O2及0%FBS/HD,低氧正常... 目的观察人骨髓间充质干细胞(hBM—MSCs)对低氧环境的适应能力,为其临床应用提供依据。方法体外培养hBM—MSCs,根据培养条件分为四组,常氧正常血清组培养条件为20%O2及10%FBS/HD、常氧无血清组为20%O2及0%FBS/HD,低氧正常血清组为1.5%O2及10%FBS/HD,低氧无血清组为1.5%O2及0%FBS/HD,细胞培养6、12、24、48、72、96h后采用MTT法检测四组增殖状况;流式细胞术检测四组凋亡情况。结果在10%FBS培养下,48h时低氧可显著促进细胞增殖;在整个观察时间内,低氧培养不会促进hBM—MSCs凋亡;同时元血清培养时细胞增殖受抑。结论在正常的血清培养条件下,hBM—MSCs对低氧有较好的耐受性,但是无血清培养不利于hBM—MSCs增殖,hBM-MSCs可作为缺氧相关组织修复的种子细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 低氧 增殖 凋亡
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盐酸四环素缓释微球对大鼠成骨细胞活性的影响 被引量:9
9
作者 张珏 晓禾 +4 位作者 李莉 李驯虎 智伟 朱鸿明 邓力 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-3,共3页
目的观察盐酸四环素缓释微球对体外培养的成骨细胞活性的影响。方法体外分离培养SD大鼠成骨细胞并通过形态学观察、碱性磷酸酶(ALP)钙-钴法染色鉴定其细胞生物学特征;将盐酸四环素聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)微球、盐酸四环素... 目的观察盐酸四环素缓释微球对体外培养的成骨细胞活性的影响。方法体外分离培养SD大鼠成骨细胞并通过形态学观察、碱性磷酸酶(ALP)钙-钴法染色鉴定其细胞生物学特征;将盐酸四环素聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)微球、盐酸四环素分别与成骨细胞共培养,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各实验组成骨细胞的增殖情况,通过碱性磷酸酶活性测定法检测各实验组成骨细胞中ALP的活性,免疫组化Ⅰ型胶原蛋白(ColItype)染色观察各实验组成骨细胞中Ⅰ型胶原的表达情况。结果盐酸四环素-PLGA微球能显著促进SD大鼠成骨细胞的增殖,同时增强了ALP的表达,其效应持续时间高于盐酸四环素组和空白对照组,Ⅰ型胶原在3组细胞中的表达无显著差异。结论制备的盐酸四环素-PLGA微球具有缓释促进成骨细胞增殖和增加ALP活性的作用,在骨创伤的修复重建治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 盐酸四环素微球 缓释 成骨细胞 活性
应变诱导BMSCs腱向分化的实验研究 被引量:3
10
作者 廖梅旭 宁良菊 +3 位作者 晓禾 李秀群 罗静聪 秦廷武 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期817-821,共5页
目的研究大鼠BMSCs与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后,施加动态应变刺激能否使BMSCs在体外分化为肌腱细胞(tenocytes,TCs)。方法取1周龄SD大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,并用多向分化诱导法和流式... 目的研究大鼠BMSCs与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后,施加动态应变刺激能否使BMSCs在体外分化为肌腱细胞(tenocytes,TCs)。方法取1周龄SD大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,并用多向分化诱导法和流式细胞仪检测进行鉴定。用生物力学试验机行SIS的拉伸破坏实验,计算SIS的弹性应变。将分离纯化后的第2代BMSCs以2.5×105个/cm2细胞密度种植于3cm×1cm大小的SIS上,形成BMSCs-SIS复合物,固定于应变培养装置对其进行静态培养2d后,施加应变刺激(拉伸频率为0.02Hz,作用时间为15min/h、12h/d,应变幅度为5%)动态培养5d,作为实验组;BMSCs-SIS复合物持续静态培养作为对照组;采用组织块法分离培养SD大鼠鼠尾TCs,用第2代TCs与SIS复合,相同条件下静态培养作为阳性对照组。扫描电镜观察应变培养后BMSCs形态变化,ELISA法检测培养后细胞上清液中2种TCs标志蛋白Scleraxis和Tenomodulin的含量。结果分离培养的SD大鼠BMSCs经多向分化诱导后,可以分化为成骨细胞和脂肪细胞,且流式细胞仪检测示表面标志抗原CD34、CD45为阴性,CD90为阳性,符合BMSCs生物学特性。SIS拉伸破坏实验结果显示,SIS平均弹性应变为39.5%。扫描电镜观察示实验组材料上细胞具有类TCs形态;ELISA法检测示,实验组应变培养后细胞上清液中Scleraxis和Tenomodulin含量分别为(3.56±0.91)μmol/L和(4.27±1.10)μmol/L,阳性对照组分别为(14.73±2.30)μmol/L和(10.65±1.51)μmol/L,对照组分别为(0.23±0.14)μmol/L和(0.16±0.10)μmol/L;3组比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论适当的应变刺激培养可在体外诱导BMSCs向TCs方向分化,尚需进一步研究最佳的应变刺激诱导条件。 展开更多
关键词 组织工程 BMSCS 肌腱细胞 应变刺激
PKH26与BrdU体外双重标记兔BMSCs在心肌补片中的实验研究 被引量:1
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作者 张珏 智伟 +3 位作者 谭美云 晓禾 李秀群 邓力 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期828-833,共6页
目的观察PKH26与BrdU体外双重标记兔BMSCs的生物学特性,并体外构建组织工程心肌补片。方法取6月龄新西兰大白兔分离培养BMSCs,并用细胞膜荧光染料PKH26和细胞核标记物BrdU对BMSCs进行标记,通过倒置相差显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、... 目的观察PKH26与BrdU体外双重标记兔BMSCs的生物学特性,并体外构建组织工程心肌补片。方法取6月龄新西兰大白兔分离培养BMSCs,并用细胞膜荧光染料PKH26和细胞核标记物BrdU对BMSCs进行标记,通过倒置相差显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、MTT法观察细胞生长状态和荧光标记前后细胞生物学特性的变化;ALP、茜素红、油红O染色及骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白等免疫细胞化学技术检测,观察和评价标记前后BMSCs体外分化为成骨细胞和成脂细胞的能力。将标记细胞与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后共培养5~7d构建组织工程心肌补片,在倒置相差显微镜、荧光显微镜和扫描电镜下观察细胞在SIS上的生长情况,并做活体及石蜡包埋HE染色观察。结果标记后细胞生长状态良好,基本生长特性无明显改变;荧光显微镜下可见标记后细胞膜上红色荧光呈颗粒状分布;细胞表面干细胞标志性抗原表达与标记前无明显差异。标记后的BMSCs成骨诱导后,ALP、茜素红染色阳性,细胞表达骨钙素及Ⅰ型胶原蛋白;成脂诱导后,细胞胞浆内出现明显的脂滴。标记细胞与SIS共培养5~7d后,标记细胞生长状态良好,在材料上呈现出多层细胞结构。活体及石蜡包埋后HE染色可见细胞生长状态良好。结论兔BMSCs能被PKH26和BrdU稳定标记;标记的细胞在体外具有自我更新和多向分化的能力;标记的BMSCs与SIS体外复合培养可以构建组织工程心肌补片。 展开更多
关键词 BMSCS PKH26 BRDU 双重标记 组织工程心肌补片
NGF对人真皮成纤维细胞增殖、细胞周期、胶原合成及迁移影响的体外研究
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作者 甘桦丽 解慧琪 +1 位作者 晓禾 罗静聪 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1350-1354,共5页
目的研究NGF对人真皮成纤维细胞增殖、细胞周期、胶原合成和迁移的影响,探讨NGF在创伤修复中的作用。方法采用酶消化法体外分离培养人真皮成纤维细胞,取第3代细胞进行实验。分别加入0、25、50、100、200、400ng/mLNGF,培养48h采用MTT法... 目的研究NGF对人真皮成纤维细胞增殖、细胞周期、胶原合成和迁移的影响,探讨NGF在创伤修复中的作用。方法采用酶消化法体外分离培养人真皮成纤维细胞,取第3代细胞进行实验。分别加入0、25、50、100、200、400ng/mLNGF,培养48h采用MTT法检测细胞增殖;加入0、100ng/mLNGF,培养48h采用流式细胞仪分析细胞有丝分裂周期,采用羟脯氨酸法检测培养液胶原含量,实时荧光定量PCR测定细胞ColⅠ、ColⅢmRNA表达水平;建立体外细胞划痕创伤模型,加入0、50、100、200ng/mLNGF,培养24h观察细胞迁移。结果MTT法检测结果显示,各浓度组间细胞增殖的吸光度值比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。在0、100ng/mLNGF作用下,细胞周期显示两组的G0/G1期、S期、G2/M期细胞百分率差异均无统计学意义(P〉0.05),羟脯氨酸法测得两组细胞培养液胶原含量和实时荧光定量PCR测定细胞ColⅠ、ColⅢmRNA表达水平差异均无统计学意义(P〉0.05)。细胞迁移实验结果显示,培养24h后0、50、100、200ng/mLNGF浓度组细胞迁移率分别为52.12%±6.50%、80.67%±8.51%、66.33%±3.58%和61.19%±0.97%,50、100ng/mLNGF可显著促进细胞迁移(P〈0.05)。结论NGF对人真皮成纤维细胞增殖、细胞周期及ColⅠ、ColⅢmRNA表达无影响,不能促进胶原合成,但能促进人真皮成纤维细胞迁移。 展开更多
关键词 NGF 人真皮成纤维细胞 细胞增殖 细胞周期 胶原合成 细胞迁移
转录靶向性KDR启动子调控双自杀基因系统对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用 被引量:1
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作者 车国卫 刘伦旭 +6 位作者 周清华 王艳萍 朱文 付军科 孙江涛 王允 晓禾 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第6期530-534,共5页
背景与目的研究KDR启动子转录调控双自杀基因系统(CDglyTK)对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用。方法应用分子生物学技术克隆KDR基因的启动子KDRp,构建KDR启动子调控的双自杀基因(CDglyTK)真核表达质粒pcDNA3-KDRp-CdglyTK。并将其... 背景与目的研究KDR启动子转录调控双自杀基因系统(CDglyTK)对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用。方法应用分子生物学技术克隆KDR基因的启动子KDRp,构建KDR启动子调控的双自杀基因(CDglyTK)真核表达质粒pcDNA3-KDRp-CdglyTK。并将其导入L9981和人肝癌细胞HepG2中。给予不同的前药(GCV和/或5-FC)处理后,应用MTT法检测各组细胞的存活率。并应用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期和凋亡。结果成功的克隆KDR启动子和构建pcDNA3-KDRp-CdglyTK质粒。pcDNA3-KDRp-CdglyTK转染后,L9981细胞中均可检测到CD和TKmRNA,而HepG2细胞中则无。联合应用5-FC+GCV处理对转双自杀基因细胞(L9981)的杀伤作用显著高于单独应用5-FC或GCV(P〈0.05),且二者显示了良好的药物协同作用。结论KDR基因启动子调控双自杀基因系统可以靶向性杀伤人肺癌细胞。 展开更多
关键词 转录靶向性 KDR启动子 双自杀基因 基因治疗 肺癌
缺氧对hRMSCs和胎盘来源MSCs增殖的影响 被引量:3
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作者 王佳 晓禾 +3 位作者 黄永灿 李秀群 张珏 邓力 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期136-139,共4页
目的比较hBMSCs和人胎盘基蜕膜MSCs(human placental decidua basalis-MSCs,hPDB-MSCs)在化学缺氧条件下的增殖情况,为寻找组织工程新的种子细胞提供理论依据。方法采用密度梯度离心法分离培养hBMSCs与hPDB—MSCs,流式细胞仪检测... 目的比较hBMSCs和人胎盘基蜕膜MSCs(human placental decidua basalis-MSCs,hPDB-MSCs)在化学缺氧条件下的增殖情况,为寻找组织工程新的种子细胞提供理论依据。方法采用密度梯度离心法分离培养hBMSCs与hPDB—MSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物;CoCl2建立化学缺氧模型,MTT法检测两种细胞在不同CoCl2浓度(0、50、75、100、125、150、175、200gmol/L)和不同时间(6、12、24、48、72和96h)的增殖情况。结果流式细胞仪检测显示hPDB—MSCs与hBMSCs均表达CD9、CD29、CD44、CD105、CD106、人类白细胞抗原ABC(human leucocyte antigen ABC,HLA.ABC),不表达CD34、CD40L和HLA—DR;但与hBMSCs相比,hPDB-MSCs阶段特异表达的胚胎抗原1(stage—specific embryoni cantigen 1,SSEA-1)、SSEA-3、SSEA-4、肿瘤排斥抗原(tumor rejection autigen,TRA)-1-60、TRA-1—81表达更高。化学缺氧12h内,hBMSCs与hPDB—MSCs增殖均被抑制,12h后均能促进增殖;与对照组比较,hBMSCs经150umol/LCoCl2作用24h出现显著增殖(P〈0.05),hPDB-MSCs在75umol/LCoCl2作用12h后出现显著增殖(P〈0.05)。结论与hBMSCs相比,hPDB-MSCs表达更高的胚胎干细胞特有表面抗原,同时对化学缺氧所致的增殖影响更为敏感,可能成为一种新的组织工程种子细胞来源。 展开更多
关键词 组织工程 种子细胞hBMSCs 胎盘来源MSCs 化学缺氧 细胞增殖
成骨细胞条件培养液对BMSCs诱导分化作用研究 被引量:6
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作者 周昆鹏 晓禾 +4 位作者 常丽 李秀群 李驯虎 张珏 邓力 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期145-150,共6页
目的探讨大鼠成骨细胞条件培养液对同种大鼠BMSCs的成骨诱导分化作用,为骨组织工程种子细胞的获得寻找一种新方法。方法健康1周龄SD大鼠10只,雌雄不限,体重20~30g,采用贴壁法和酶消化法分别获得BMSCs和成骨细胞,并进行鉴定。无菌... 目的探讨大鼠成骨细胞条件培养液对同种大鼠BMSCs的成骨诱导分化作用,为骨组织工程种子细胞的获得寻找一种新方法。方法健康1周龄SD大鼠10只,雌雄不限,体重20~30g,采用贴壁法和酶消化法分别获得BMSCs和成骨细胞,并进行鉴定。无菌条件收集第1~5代成骨细胞培养液上清,与完全培养基1:1混合,制备成骨细胞条件培养液,与第2代BMSCs共培养为诱导组,相同代次BMSCs与完令培养液共培养为对照组。倒置市H差显微镜下观察苁培养后BMSCs形态变化,MTT法检测BMSCs生长情况,免疫组织化学染色检测共培养后BMSCs的ALP、Col I、骨钙索(osteocalcin,OCN)蛋门的表达,采用RT-PCR检测Col I、OCN mRNA的表达。结果诱导组共培养7dBMSCs体积变火,细胞山长梭形展开为扁平形和多边形,并带宵突起;9d细胞呈集落状生长。细胞生长曲线示BMSCs数量随培养时间延长而增加,对照组增殖能力较诱导组强;诱导培养4~7d,对照组细胞数量与诱导组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。诱导组培养12d,ALP染色呈阳性表达;18d出现钙结节;21dCol I和OCN旱阳性表达;对照组均呈阴性表达。RT-PCR检测示诱导组培养21d有Col I、OCN mRNA表达,对照组未见表达。结论体外大鼠成骨细胞条件培养液有明显的诱导同种大鼠BMSCs向成骨样细胞分化的作用。 展开更多
关键词 成骨细胞条件培养液 BMSCS 诱导分化 大鼠
构建椎间盘组织工程的人骨髓间充质干细胞的分离及三维培养 被引量:3
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作者 丰干钧 刘浩 +4 位作者 邓力 晓禾 李秀琼 赵献峰 梁涛 《生物医学工程学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1300-1305,共6页
椎间盘退变(Degenerative disc disease,DDD)是下腰痛的主要原因。当前临床治疗主要目的在于恢复生物力学功能和缓解症状。而椎间盘组织工程的兴起为DDD的治疗提供了新方法,其中干细胞是用于椎间盘组织工程的重要种子细胞。在本实... 椎间盘退变(Degenerative disc disease,DDD)是下腰痛的主要原因。当前临床治疗主要目的在于恢复生物力学功能和缓解症状。而椎间盘组织工程的兴起为DDD的治疗提供了新方法,其中干细胞是用于椎间盘组织工程的重要种子细胞。在本实验中,我们研究人骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离培养的细胞学特性以及在Pellet三维培养体系下构建椎间盘组织工程细胞的可行性。结果提示该方法培养的MSCs具较高的纯度,且体外培养具有较强的增殖能力,短时间内可大量扩增,达到组织工程需要的种子细胞数量要求,且细胞保持未分化状态,具有良好的生物安全性。并能表达Ⅱ型胶原和蛋白多糖等椎间盘细胞外基质,因此是椎间盘组织工程理想的种子细胞。 展开更多
关键词 间充质干细胞 分化软骨形成椎间盘组织工程
铜离子对血管内皮细胞增殖与分化的影响 被引量:2
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作者 罗堃 范兆心 +3 位作者 冯喆 李顺 晓禾 解慧琪 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期832-835,共4页
目的评价Cu^2+对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖与分化的影响。方法体外培养并传代HUVEC。将HUVEC以5×10^3个/孔密度接种于96孔板,根据向孔板中加入溶液浓度的不同将细胞随机分成3... 目的评价Cu^2+对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖与分化的影响。方法体外培养并传代HUVEC。将HUVEC以5×10^3个/孔密度接种于96孔板,根据向孔板中加入溶液浓度的不同将细胞随机分成3组,A组5μmol/L CuSO4,B组25μmol/L CuSO4,C组为空白对照,每组4个复孔,基础培养基为MCDB131,采用MTT法检测细胞增殖并绘制生长曲线。另取HUVEC以2×10^5个/孔密度接种于6孔板,分组同前,荧光定量RT-PCR检测3组HUVEC的内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因和Tie-1基因表达。结果生长曲线示前3d为指数增长期,第4天开始进入平台期。A组细胞增殖能力从第3天开始明显高于B、C组,B组在2d内高于C组,但从第4天开始显著低于C组,比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。荧光定量RT-PCR检测示作用48h后,A、B、C组eNOS基因表达分别为7.294±1.488、0.149±0.044和1.000±0.253,Tie-1基因的表达分别为1.481±0.137、1.131±0.191和1.000±0.177。A组与B、C组比较,2个基因的表达均有上调(P〈0.05);B、C组比较,eNOS基因表达下调(P〈0.05),Tie-1基因表达差异无统计学意义(P〉0.05)。结论5μmol/L Cu^2+能有效促进HUVEC的增殖与分化。 展开更多
关键词 CU^2+ 人脐静脉血管内皮细胞 细胞增殖 基因表达
hBMSCs诱导分化类髓核细胞 预览 被引量:1
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作者 丰干钧 刘浩 +3 位作者 晓禾 李秀群 赵献峰 梁涛 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期 1470-1475,共6页
目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF.瞰和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20~40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入... 目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF.瞰和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20~40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入的生长因子不同,实验分成4组,分别为加入10ng/mLTGF-β3组(A组)、200ng/mLBMP-7组(B组)、同时加入两种生长因子组(C组)以及空白对照组(D组)。于培养后21d,行组织学及免疫组织化学观察;于培养后4、21d进行PCR检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达。结果培养后21d,HE染色示A组和C组细胞呈软骨细胞样形态特征,甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色Ⅱ型胶原表达呈阳性。B组和D组细胞形态无明显改变,PCR检测示培养后21d,A、C组SOX9、蛋白多糖、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原表达较4d时明显增加(P〈0.05)。B、D组Ⅰ型胶原表达较4d时明显增加(P〈0.05),SOX9、蛋白多糖及Ⅱ型胶原较4d时无明显变化(P〉0.05)。其中仅A组X型胶原表达呈阳性。结论TGF-β3和BMP-7联合应用能促进hBMSCs分化更接近于椎间盘细胞,可能为椎间盘组织工程提供种子细胞。 展开更多
关键词 椎间盘组织工程hBMSCs 诱导分化 BMP-7 TGF-Β3 软骨形成
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犬膀胱平滑肌细胞的体外连续培养 预览 被引量:2
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作者 智伟 杨志明 +5 位作者 晓禾 李秀群 韩平 谭美云 唐耘熳 邓力 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期 1476-1480,共5页
目的通过体外培养不同代次的犬膀胱平滑肌细胞,比较其生物学特征,探讨多次传代后的平滑肌细胞作为种子细胞的可行性,为构建组织工程膀胱和尿道筛选种子细胞提供方法和依据。方法取体重10~12始的12月龄雄性犬膀胱肌层,混合酶消化法... 目的通过体外培养不同代次的犬膀胱平滑肌细胞,比较其生物学特征,探讨多次传代后的平滑肌细胞作为种子细胞的可行性,为构建组织工程膀胱和尿道筛选种子细胞提供方法和依据。方法取体重10~12始的12月龄雄性犬膀胱肌层,混合酶消化法获取平滑肌细胞,并于含10%小牛血清的培养基中培养,观察比较不同代次细胞的形态变化及生长、增殖过程,电镜下观察细胞超微结构,并通过免疫组织化学方法检测特征性蛋白的表达。结果体外培养的平滑肌细胞单层生长至亚融合状态后,倒置相差显微镜下细胞呈长梭形,并呈峰.谷样结构,可连续传至12代。生长曲线显示第7代以前的细胞具有相似的增殖特点,约每40小时为1次生长周期,透射电镜下可见平滑肌细胞特有的密体结构,平滑肌肌动蛋白免疫组织化学染色为阳性;第7代后细胞增殖逐渐迟滞,至第10代细胞内肌丝及密体结构消失。结论犬膀胱平滑肌细胞可在体外连续培养,通过适当的纯化方法可获得大量高纯度的平滑肌细胞。第7代以前的平滑肌细胞均可作为种子细胞,用于构建组织工程膀胱和尿道。 展开更多
关键词 组织工程膀胱 平滑肌细胞 细胞培养
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CYP2E1基因多态性与肺癌遗传易感性的关系 预览 被引量:9
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作者 李代蓉 周清华 +4 位作者 郭占林 袁天柱 朱文 王艳萍 晓禾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第13期 1231-1234,共4页
目的研究CYP2E1基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性。方法应用PCR-RFLP技术检测150例中国四川汉族肺癌患者和152例健康人的CYP2E1基因RsaⅠ/PstⅠ和DraⅠ多态性的分布频率,并分析了这两种基因多态性与中国四川... 目的研究CYP2E1基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性。方法应用PCR-RFLP技术检测150例中国四川汉族肺癌患者和152例健康人的CYP2E1基因RsaⅠ/PstⅠ和DraⅠ多态性的分布频率,并分析了这两种基因多态性与中国四川汉族人群肺癌遗传易感性之间的相关性,以及与吸烟在肺癌易感性中的交互作用。结果①CYP2E1基因RsaⅠ/PstⅠ和DraⅠ多态基因型分布频率在2组间比较无显著性差异(分别为Х^2=3.186,P=0.203和Х^2=1.756,P=0.416);②按照吸烟因素分层,携带c1/c1基因型的不吸烟个体较携带突变基因型的个体肺癌风险显著增加(OR=2.453,95%CI=1.140~5.276,P=0.022);③与携带至少1个突变c2基因型的个体比较,携带c1/c1基因型的个体患肺腺癌的风险显著增加(OR=2.440,95%CI=1.235~4.820,P=0.01);④没有发现DraⅠ多态性与肺癌风险之间的相关性。结论①CYP2E1的c1/c1基因型为中国四川汉族人群肺癌易感基因型;②RsaⅠ/PstⅠ多态性与中国四川汉族人群患肺腺癌的风险显著相关;③DraⅠ多态性与中国四川汉族人群肺癌风险无相关性。 展开更多
关键词 肺癌 多态性 遗传易感性 代谢酶基因 CYP2E1
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