期刊文献+
共找到33篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
袋鼠疱疹病毒1型实时荧光PCR方法的建立 预览
1
作者 王建华 王玉玲 +4 位作者 柴铭骏 张俊哲 赵丹 王乃福 《中国动物检疫》 CAS 2019年第1期76-79,共4页
为实现袋鼠临床样本中疱疹病毒1型(Macropodid herpesvirus 1,MaHV-1)的出入境快速检测,基于MaHV-1的gB基因序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种MaHV-1荧光PCR检测方法。试验结果显示,该方法只对MaHV-1gB基因呈现特异性扩增,与禽... 为实现袋鼠临床样本中疱疹病毒1型(Macropodid herpesvirus 1,MaHV-1)的出入境快速检测,基于MaHV-1的gB基因序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种MaHV-1荧光PCR检测方法。试验结果显示,该方法只对MaHV-1gB基因呈现特异性扩增,与禽传染性喉气管炎病毒、伪狂犬病毒和牛传染性鼻气管炎病毒不发生交叉反应,对阳性标准质粒对照(pCR-MaHV-1-gB)的最低检测限为8个拷贝数/反应。该方法的组内和组间试验的Ct值变异系数介于0.17%~0.96%之间,具有良好的重现性。试验结果表明,本研究建立的实时荧光PCR方法可用于袋鼠MaHV-1的病原学检测。 展开更多
关键词 袋鼠疱疹病毒1型 GB基因 荧光PCR方法
在线阅读 下载PDF
山羊关节炎-脑炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:1
2
作者 王建华 孙越辉 +7 位作者 小金 王玉玲 肖妍 王乃福 董志珍 赵祥平 黄金海 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第5期563-568,共6页
为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,采用PCR方法扩增山羊关节炎-脑炎病毒CA蛋白编码基因序列,然后克隆至原核表达载体pET-28a(+),诱导含有重组载体pET-28a(+)-CA的大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白rH... 为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,采用PCR方法扩增山羊关节炎-脑炎病毒CA蛋白编码基因序列,然后克隆至原核表达载体pET-28a(+),诱导含有重组载体pET-28a(+)-CA的大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白rHis-CA。采用Ni柱亲和层析方法纯化重组蛋白rHisCA,并以纯化的rHis-CA为包被抗原建立检测山羊关节炎-脑炎血清抗体的间接ELISA方法。结果表明重组蛋白rHis-CA以包涵体形式表达,具有良好的反应原性。所建立的rHis-CA间接ELISA方法的最适抗原包被质量浓度和血清稀释度分别为0.4 μg/mL和1∶100,血清阴阳性的D450临界值为0.45。该方法仅与山羊关节炎-脑炎病毒阳性血清发生特异性反应,不与山羊痘病毒、蓝舌病病毒和口蹄疫病毒阳性血清发生交叉反应。对来自陕西地区的48份山羊血清进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA和琼脂凝胶免疫扩散试验的阳性检出率分别为35.41%(17/48)和31.25%(15/48)。对来自天津地区2个山羊场的240份山羊血清样本进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA方法和琼脂凝胶免疫扩散试验的检测结果均为阴性。 展开更多
关键词 山羊关节炎-脑炎 重组CA蛋白 间接酶联免疫吸附试验
基因3型猪戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
3
作者 小金 董志珍 +7 位作者 赵祥平 王建华 刘洋 王玉玲 肖妍 王乃福 张俊哲 《中国动物检疫》 CAS 2016年第7期72-77,共6页
对GenBank中基因3型猪戊型肝炎病毒(HEV)代表毒株基因进行序列分析,最终选定ORF3基因的部分序列为目的基因,运用生物信息学软件设计特异性引物和探针,扩增获得目的片段,并构建重组载体p UC-19-ORF3。梯度稀释重组质粒制备标准品,初步... 对GenBank中基因3型猪戊型肝炎病毒(HEV)代表毒株基因进行序列分析,最终选定ORF3基因的部分序列为目的基因,运用生物信息学软件设计特异性引物和探针,扩增获得目的片段,并构建重组载体p UC-19-ORF3。梯度稀释重组质粒制备标准品,初步建立检测基因3型HEV的实时荧光定量PCR方法。对建立的检测方法进行特异性、敏感性和重复性验证。结果表明,标准品浓度在108~102 copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.996。特异性试验结果显示,其它几种常见猪病病原体(猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒)未见典型扩增曲线。敏感性试验证实本方法的最低检测下限为101 copies/μL。重复性试验表明该方法对3个标准品检测结果的批内和批间变异系数低于2%。用该方法抽检59份进境猪肉样品,同时用普通RT-PCR方法对这些样品进行符合性试验,结果均为阴性。本研究所建立的检测方法不仅适用于进境猪肉样品中基因3型HEV的监控检测,而且还可用于基因3型HEV的早期临床诊断及分子流行病学调查。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR
在线阅读 下载PDF
尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立 预览 被引量:2
4
作者 王建华 赵祥平 +7 位作者 董志珍 肖妍 王玉玲 张俊哲 小金 王乃福 赵丹 《动物医学进展》 北大核心 2016年第1期11-16,共6页
根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。... 根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)和SIV M基因的RNA标准对照(SIV-M-RNA),定量线性范围分别为4.6×101copies/μL~4.6×108 copies/μL和5.8×101copies/μL~5.8×108 copies/μL,检出限分别为46个拷贝和58个拷贝。该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1.6%,显示其良好的可重复性。该方法仅对NiV-M-RNA和SIV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和伪狂犬病病毒(PRV)发生交叉反应。用该方法对236份猪的鼻拭子样品进行NiV和SIV的同时检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,有1份样本的SIV检测结果为阳性。本研究建立的方法可为猪临床样本中NiV和SIV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多
关键词 尼帕病毒 猪流感病毒 TAQMAN-MGB探针 双重荧光定量RT-PCR
在线阅读 下载PDF
一种鉴别非洲猪瘟病毒和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
5
作者 王建华 赵祥平 +7 位作者 董志珍 王玉玲 赵丹 肖妍 张俊哲 小金 王乃福 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期19-25,共7页
为建立一种快速、敏感和特异的鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的方法,以ASFV CP530R基因和HP-PRRSV NSP2基因为靶序列分别设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种二重... 为建立一种快速、敏感和特异的鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的方法,以ASFV CP530R基因和HP-PRRSV NSP2基因为靶序列分别设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种二重荧光RT-PCR检测方法,对该方法的特异性、定量线性范围、敏感性和重复性进行了评价及初步应用。结果显示,该方法对ASFV和HP-PRRSV呈现特异性扩增,不与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒和猪流感病毒发生交叉反应。该方法对含有ASFV CP530R靶序列的质粒标准对照(pCR2.1-ASFV-CP530R)定量检测的线性范围为6.1×101~6.1×108 copies/μL,对含有HP-PRRSV NSP2基因靶序列的RNA标准对照(HPPRRSV-NSP2-RNA)的定量线性范围为4.1×101~4.1×108 copies/μL,最低检出限分别为61copies/μL和41copies/μL。对3个浓度的pCR2.1-ASFV-CP530R和PRRSV-NSP2-RNA进行组内和组间重复性试验,Ct值的变异系数均小于1.60%,表明该方法具有良好的重现性。用该方法对276份实际样品进行ASFV和HP-PRRSV同时检测,全部样本的ASFV检测结果为阴性,有8份样本的HP-PRRSV检测结果为阳性,其余样本HP-PRRSV检测结果为阴性。上述结果表明,本研究建立的方法可为实际样本中ASFV和HP-PRRSV的同时鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重荧光RT-PCR
一种基于CP204L基因的非洲猪瘟病毒Taq Man-MGB实时荧光PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
6
作者 王建华 赵丹 +7 位作者 张俊哲 董志珍 赵祥平 王玉玲 肖妍 王乃福 小金 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第10期23-25,共3页
基于非洲猪瘟病毒(ASFV)CP204L基因序列设计1对特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种检测ASFV的TaqMan-MGB实时荧光PCR方法。结果显示,该方法仅对ASFVDNA呈现特异性扩增,不与猪的其他常见病毒发生交叉反应,具有良... 基于非洲猪瘟病毒(ASFV)CP204L基因序列设计1对特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种检测ASFV的TaqMan-MGB实时荧光PCR方法。结果显示,该方法仅对ASFVDNA呈现特异性扩增,不与猪的其他常见病毒发生交叉反应,具有良好的特异性。该方法对标准对照质粒(PCR2.1-CP204L)的线性检测范围为4.2×10~1~4.2×10~9copies/μL,标准曲线方程为Y=-3.452 3X+39.014,相关系数(R~2)为0.998 8,检测下线为4.2个拷贝。对5个不同浓度(4.2×10~3~4.2×10~7copies/μL)的质粒标准品进行4次双份样品的重复检测,Ct值变异系数均小于1.5%,表明该方法具有良好的重现性。用该方法对总计164份的进口猪临床样品和生猪肌肉样品进行ASFV检测,结果均为阴性。该方法的建立为活猪临床样品和生猪肌肉样品中ASFV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CP204L序列 TAQMAN-MGB探针 实时荧光PCR
在线阅读 下载PDF
H1和H3亚型猪流感病毒二重TaqMan-MGB探针荧光RT-PCR检测方法的建立 预览
7
作者 王建华 小金 +8 位作者 张俊哲 王玉玲 肖妍 赵丹 谭旭菲 王乃福 董志珍 赵祥平 《中国动物检疫》 CAS 2016年第10期90-94,共5页
根据H1和H3亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)编码基因的保守序列,分别设计合成特异性引物和Taq Man-MGB探针,建立了一种检测H1和H3亚型SIV的二重荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法仅对H1和H3亚型SIV呈特异性扩增,对H9亚型SIV、猪繁殖... 根据H1和H3亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)编码基因的保守序列,分别设计合成特异性引物和Taq Man-MGB探针,建立了一种检测H1和H3亚型SIV的二重荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法仅对H1和H3亚型SIV呈特异性扩增,对H9亚型SIV、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(SFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)无交叉扩增反应;用该方法检测H1和H3亚型SIV的HA基因的RNA标准对照(SIV-H1-RNA,SIV-H3-RNA),最适线性检测范围分别为3.7×10~1~3.7×10~8拷贝数/反应和3.4×10~0~3.4×10~8拷贝数/反应,最低检出限分别为38和34个拷贝数;该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示其具有良好的可重复性。用该方法对520份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪鼻拭子样本进行SIV检测发现,进口猪鼻拭子样本的SIV检测结果均为阴性,12份国内猪鼻拭子样本的H1亚型SIV检测结果为阳性,5份国内猪鼻拭子样本的H3亚型SIV检测结果为阳性。本方法的建立为H1和H3亚型SIV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多
关键词 猪流感病毒 H1亚型 H3亚型 TaqMan探针 荧光RT-PCR
在线阅读 下载PDF
A型猪流感病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立 预览
8
作者 王建华 小金 +8 位作者 肖妍 王玉玲 谭旭菲 赵丹 张俊哲 王乃福 董志珍 赵祥平 《中国动物检疫》 CAS 2016年第12期85-88,共4页
根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综... 根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应;该方法对M基因RNA对照(SIV-M-RNA)的最适线性检测范围为3.8×101-3.8×108拷贝数/反应,标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091,相关系数(R2)为0.9998,最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度(3.8×103-3.8×105 copies/μL)的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验,每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测,结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性,17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。 展开更多
关键词 A型猪流感病毒 TAQMAN探针 荧光RT-PCR
在线阅读 下载PDF
一种基于CP530R序列非洲猪瘟病毒TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:2
9
作者 王建华 董志珍 +7 位作者 赵丹 王玉玲 肖妍 张俊哲 小金 王乃福 赵祥平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期22-26,共5页
为了建立一种快速、敏感和特异地检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,试验根据ASFV CP530R基因序列设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测ASFV的TaqMan—MGB探针实时荧光PCR方法,并对... 为了建立一种快速、敏感和特异地检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,试验根据ASFV CP530R基因序列设计1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测ASFV的TaqMan—MGB探针实时荧光PCR方法,并对该方法进行了特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验评价。结果表明:该方法仅对ASFV发生特异性扩增反应,不与伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)、经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪流感病毒(SIV)发生交叉反应,具有良好的特异性。用该方法检测质粒标准对照(PCR2.1-ASFV—CP530R)的线性范围为6.1×10^2-6.1×10^9copies/μL,标准曲线方程为Y=-3.449x+38.10,相关系数(R^2)为0.999,最低可检测到61个拷贝的质粒标准对照分子;对5个不同浓度(6.1×10^3-6.1×10^7copies/μL)的质粒标准对照进行双份样品的4次重复检测,每个浓度质粒标准对照的D值变异系数均小于2.0%,具有良好的重现性;用该方法对126份进口猪的血液样品和38份猪肉样品进行ASFV检测,结果均为阴性。说明本方法可用于活猪临床样品和生猪样品中ASFV的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CP530R序列 TAQMAN-MGB探针 实时荧光PCR 方法 建立
活体动物中大环内脂类残留检测微生物抑制法的建立 预览 被引量:2
10
作者 黄晨 +1 位作者 王乃福 李卫华 《中国动物检疫》 CAS 2016年第2期29-33,共5页
[目的]建立活体动物中大环内酯类残留的检测方法。[方法]采用微生物抑制方法,对藤黄微球菌CMCC28001的选择性和特异性、样品提取方法、平板制备条件、方法检出限等技术参数进行研究。[结果]建立的方法可用于活体动物中红霉素、泰乐菌... [目的]建立活体动物中大环内酯类残留的检测方法。[方法]采用微生物抑制方法,对藤黄微球菌CMCC28001的选择性和特异性、样品提取方法、平板制备条件、方法检出限等技术参数进行研究。[结果]建立的方法可用于活体动物中红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、林可霉素、吉他霉素和克林霉素等6种大环内脂类药物的残留检测。当菌悬液添加浓度为10。倍稀释液(5.5×10^6CFU/mL)以及培养基PH值为7.5且培养温度为30℃时,可产生直径最大,边缘光滑、完整、清晰的抑菌圈。[结论]该方法具有良好的敏感性和重复性,成本低,操作简便,是色谱分析、免疫分析等其它方法的有益补充。 展开更多
关键词 微生物抑制法 藤黄微球菌 大环内脂 残留 活体动物 抗生素
在线阅读 下载PDF
高尾水作用下厂房混凝土结构的防裂抗渗研究 预览 被引量:1
11
作者 慕洪友 湛正刚 《红水河》 2016年第4期28-31,共4页
总结分析已建水电站厂房的渗漏原因,通过混凝土材料性能分析和材料试验,提出适合高尾水作用下防裂、抗渗混凝土设计指标和混凝土材料,研究细化了止水设计和混凝土的浇筑分层分块,有效解决了厂房混凝土结构的防裂、抗渗技术问题,研究成... 总结分析已建水电站厂房的渗漏原因,通过混凝土材料性能分析和材料试验,提出适合高尾水作用下防裂、抗渗混凝土设计指标和混凝土材料,研究细化了止水设计和混凝土的浇筑分层分块,有效解决了厂房混凝土结构的防裂、抗渗技术问题,研究成果已在董箐和沙沱水电站厂房成功应用. 展开更多
关键词 高尾水 防裂 抗渗 厂房 混凝土结构
在线阅读 下载PDF
一种基于M基因的尼帕病毒TaqMan-MGB荧光RT-PCR检测方法的建立
12
作者 王建华 柴明骏 +8 位作者 赵祥平 张俊哲 董志珍 王乃福 肖妍 王玉玲 赵丹 小金 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1277-1282,共6页
为建立一种快速、敏感和特异地检测尼帕病毒(Nipah virus,NiV)的方法,根据NiV M基因序列保守区设计了1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测NiV的TaqMan-MGB实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性、定量线性范围、... 为建立一种快速、敏感和特异地检测尼帕病毒(Nipah virus,NiV)的方法,根据NiV M基因序列保守区设计了1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测NiV的TaqMan-MGB实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验。结果显示,该方法仅对NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)发生特异性扩增反应,对猪的其他常见病毒,包括经典猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪流感病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型均不发生交叉反应。该方法对NiV-M-RNA的最适线性检测范围为4.6×101~4.6×107 copies/μL,标准曲线方程为y=-3.418x+37.57,线性相关系数(r2)为0.999,检测下限为4.6copies/μL。对5个不同浓度(4.6×103~4.6×107 copies/μL)的NiV-M-RNA进行双份样品的4次重复检测,每个浓度重复试验的Ct值的变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对368份临床样品进行NiV检测,结果均为阴性。本方法的建立为活猪临床样品中NiV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多
关键词 尼帕病毒 M基因 TAQMAN-MGB探针 实时荧光RT-PCR
七种鞣质类中药提取物的抗菌作用 被引量:4
13
作者 王万骞 黄晨 《食品安全质量检测学报》 2015年第2期457-465,共9页
目的研究五倍子、石榴皮、虎杖、大黄、黄芩、生地榆、柯子等7种中药材提取物对从养殖病鳗中分离得到的12株常见病原菌的抑菌作用。方法采用索氏提取法和超声提取法,以水和乙醇为提取溶剂分别萃取7种中药的有效组分,采用平板稀释法对12... 目的研究五倍子、石榴皮、虎杖、大黄、黄芩、生地榆、柯子等7种中药材提取物对从养殖病鳗中分离得到的12株常见病原菌的抑菌作用。方法采用索氏提取法和超声提取法,以水和乙醇为提取溶剂分别萃取7种中药的有效组分,采用平板稀释法对12种菌株开展药物敏感实验,测定各种中药提取物对12种致病菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果 7种中药提取物对12种菌都有不同程度的抑制作用。对于五倍子、石榴皮、大黄、虎杖4种药,索氏提取效果比超声提取效果好;对于生地榆和柯子,超声提取效果比索氏提取效果好。超声醇提五倍子抑菌效果最好。结论 7种中药提取物单用对病原菌均有不同程度的抑制作用,不同乙醇体积分数,提取中药与溶剂的比例对抑菌效果影响显著。 展开更多
关键词 鞣质 中药 病原菌 抑菌作用
口蹄疫、水泡性口炎和猪水泡病多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
14
作者 王乃福 黄晨 +3 位作者 吴冬雪 赵祥平 董志珍 《食品安全质量检测学报》 2015年第2期466-471,共6页
目的建立同时检测口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒的多重荧光RT-PCR检测方法。方法根据口蹄疫病毒3D蛋白编码基因、水泡性口炎病毒N蛋白编码基因和猪水泡病病毒VP1蛋白编码基因的高保守区设计特异性引物和探针,对3种动物病毒... 目的建立同时检测口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒的多重荧光RT-PCR检测方法。方法根据口蹄疫病毒3D蛋白编码基因、水泡性口炎病毒N蛋白编码基因和猪水泡病病毒VP1蛋白编码基因的高保守区设计特异性引物和探针,对3种动物病毒进行多重荧光定量RT-PCR扩增。结果经过扩增,可以同时检测口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒,而其他参试病原均无扩增信号,显示其良好的特异性。对口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒、猪水泡病病毒的最低检测限分别达到101、102、102个质粒拷贝浓度。结论本方法灵敏度高,特异性良好,可实现多种病毒混合感染的同时检测。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 水泡型口炎病毒 猪水泡病病毒 多重荧光定量RT-PCR
鉴别猪瘟病毒强毒和疫苗弱毒的RT-PCR检测方法的建立 预览 被引量:4
15
作者 张立怀 +1 位作者 王建华 王乃福 《中国动物检疫》 CAS 2013年第11期71-74,共4页
根据Genbank上发表的猪瘟病毒(CSFV)全基因组序列,选择猪瘟强毒株和兔化弱毒疫苗株序列存在的差异区域,分别设计合成两条特异性的上游引物,一条只针对强毒毒株,一条只针对兔化弱毒疫苗株;同时选择高保守区域序列,设计合成了一... 根据Genbank上发表的猪瘟病毒(CSFV)全基因组序列,选择猪瘟强毒株和兔化弱毒疫苗株序列存在的差异区域,分别设计合成两条特异性的上游引物,一条只针对强毒毒株,一条只针对兔化弱毒疫苗株;同时选择高保守区域序列,设计合成了一条强毒和兔化弱毒共用的下游引物,成功建立了一种能够区分猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。应用该方法从猪瘟强毒株和兔化弱毒株中扩增出了大小分别为680bp和785bp的特异性片段。该方法对PRRSV、BVDV、PRV、PCV等病毒基因组扩增,结果均为阴性;该方法可以检测出最低为0.5pg的猪瘟病毒RNA,具有高度的特异性和敏感性。本方法的建立为猪瘟的实验室检测和流行病学调查奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 强弱毒鉴别 RT-PCR
在线阅读 下载PDF
沙沱水电站引水发电建筑物优化和动态设计 预览
16
作者 王强 +2 位作者 覃丽钠 慕洪友 罗玉霞 《贵州水力发电》 2012年第1期 37-39,53,共4页
通过全面分析沙沱水电站压力钢管结构形式、厂房布置及结构形式、进厂交通方式、开关站布置位置,结合开挖揭露的地质条件和现场施工情况,在招标及施工图阶段,设计对引水发电建筑物布置和结构形式进行了一系列的优化和动态设计。经过... 通过全面分析沙沱水电站压力钢管结构形式、厂房布置及结构形式、进厂交通方式、开关站布置位置,结合开挖揭露的地质条件和现场施工情况,在招标及施工图阶段,设计对引水发电建筑物布置和结构形式进行了一系列的优化和动态设计。经过优化调整,使得引水发电建筑物在布置上更加合理,结构上更加安全可靠,出线设备运行更加稳定,同时降低了施工难度,简化了施工程序,加快了施工进度,节省了工程投资。 展开更多
关键词 水工结构 引水发电建筑物 优化 动态设计 沙沱水电站
在线阅读 下载PDF
我国部分地区传染性羊痒病基因型的分布情况调查 预览 被引量:1
17
作者 肖妍 董志珍 +1 位作者 栾慎顺 《中国动物检疫》 CAS 2011年第12期 45-47,71,共4页
引起羊瘁病的病原朊蛋白是一种正常的唾液酸糖蛋白(PrPc)在三级结构发生改变后形成的异常蛋白(PrPsc)。该病的发生与绵羊朊蛋白编码基因PRNP遗传多样性密切相关,主要表现在PRNP第136、154和171位密码子组成的PRNP基因型与绵羊对痒... 引起羊瘁病的病原朊蛋白是一种正常的唾液酸糖蛋白(PrPc)在三级结构发生改变后形成的异常蛋白(PrPsc)。该病的发生与绵羊朊蛋白编码基因PRNP遗传多样性密切相关,主要表现在PRNP第136、154和171位密码子组成的PRNP基因型与绵羊对痒病的抗病性的联系。根据已建立的一种利用荧光定量PCR扩增反应对羊瘁病抗性基因进行筛选的方法,对我国部分地区的无角多赛特绵羊羊痒病基因分布情况进行调查,从而从品种选育水平上杜绝羊痒痛的发生。 展开更多
关键词 羊痒病 传染性海绵状脑病 PRNP 羊痒病抗性基因分型
在线阅读 下载PDF
出入境口蹄疫检测方法的比较 预览 被引量:2
18
作者 王玉玲 赵祥平 +4 位作者 王国柱 刘红梅 柴铭骏 杨新梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期 67-69,共3页
2009年4月,我国首次从乌拉圭进口种牛,依据双边签订的检疫和卫生要求议定书,须进行口蹄疫的检疫。议定书中规定,在农场检疫和隔离检疫期间对动物逐头进行口蹄疫非结构蛋白检测,若在口蹄疫的非结构蛋白检测中发现有阳性动物,则立... 2009年4月,我国首次从乌拉圭进口种牛,依据双边签订的检疫和卫生要求议定书,须进行口蹄疫的检疫。议定书中规定,在农场检疫和隔离检疫期间对动物逐头进行口蹄疫非结构蛋白检测,若在口蹄疫的非结构蛋白检测中发现有阳性动物,则立即从牛群中剔除,并对这些阳性动物进行病毒分离试验,如仍为阳性,则立即停止向中国出口活牛。 展开更多
关键词 口蹄疫 检测 出入境 非结构蛋白 检疫期 卫生要求 分离试验 议定书
在线阅读 下载PDF
猪伪狂犬病PCR检测方法的建立 预览 被引量:1
19
作者 张立怀 +1 位作者 王建华 侯艳梅 《中国医药生物技术》 2009年第4期 310-311,共2页
伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)引起的多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的一种重要传染病,其中该病对猪的危害最大,每年给世界养猪业造成巨大的损失。目前在世... 伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)引起的多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的一种重要传染病,其中该病对猪的危害最大,每年给世界养猪业造成巨大的损失。目前在世界许多国家和地区屡见发病报道。我国近几年来随着规模化和集约化养猪业的快速发展,从国外引进的种猪日渐增多,伪狂犬病也在我国不断的蔓延和扩大,危害越来越严重。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 PCR检测方法 养猪业 野生动物 脑脊髓炎 传染病 集约化 规模化
在线阅读 下载PDF
非洲猪瘟病毒P54基因原核表达载体的构建与表达 预览 被引量:3
20
作者 侯艳梅 董志珍 +6 位作者 赵祥平 李琳 肖妍 蔡国瑞 栾慎顺 王建华 《中国兽医科学》 CAS 北大核心 2009年第4期 316-320,共5页
根据GenBank中非洲猪瘟病毒(ASFV)P54基因序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法从ASFVDNA中分别扩增出了P54基因片段和经过改造的跨膜信号肽缺失的P54基因,将其克隆到表达载体pET28b中,构建了重组质粒pET-P54和pET-P54q,测序验证... 根据GenBank中非洲猪瘟病毒(ASFV)P54基因序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法从ASFVDNA中分别扩增出了P54基因片段和经过改造的跨膜信号肽缺失的P54基因,将其克隆到表达载体pET28b中,构建了重组质粒pET-P54和pET-P54q,测序验证后转化入表达宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,表达产物经SDS—PAGE,Western-blotting检测。结果显示,经过改造的信号肽缺失的重组菌pET—P54q可表达出分子质量约24.5ku的重组融合蛋白,表达的蛋白以可溶形式存在于菌体中,经镍柱亲和层析纯化可获得纯度较高的目的蛋白。纯化的蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,证实,表达的蛋白具有较好的反应原性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 P54基因 原核表达
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈