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鸭腺病毒3型PCR检测方法的建立
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作者 万春和 +6 位作者 施少华 程龙飞 傅光华 刘荣昌 红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2019年第2期20-23,共4页
鸭3型腺病毒(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。为建立特异性的检测DAdV-3的PCR方法,研究通过分析鸭群中鸭腺病毒A型(DAdV-A)、鸭源禽腺病毒4型(FAdV-4)、鸭... 鸭3型腺病毒(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。为建立特异性的检测DAdV-3的PCR方法,研究通过分析鸭群中鸭腺病毒A型(DAdV-A)、鸭源禽腺病毒4型(FAdV-4)、鸭2型腺病毒(DAdV-2)和DAdV-3的Fiber 2基因特征,建立特异性检测DAdV-3的PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为54℃,对DAdV-3扩增片段大小为548 bp;敏感性强,最低检测限为36.4 pg;特异性好,对DAdV-A、FAdV-4、鸭病毒性肠炎(DEV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸭圆环病毒(DuCV)和鹅多瘤病毒(GHPV)均无特异性扩增。表明该方法可有效用于开展新发DAdV-3的流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭3型腺病毒 FIBER 2基因 PCR
鸭腺病毒3型MGB TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 +3 位作者 朱春华 蔡国漳 刘斌琼 黄瑜 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期564-570,共7页
鸭(Anas platyrhynchos domestica)腺病毒3型(Duck adenovirus type 3, DAdV-3)是近年来我国新发现的鸭源腺病毒。本研究根据NCBI数据库中DAdV-3代表株(CH-GD-12-2014株, GenBank No. KR135164)的22K基因特征,设计特异性引物和探针,建... 鸭(Anas platyrhynchos domestica)腺病毒3型(Duck adenovirus type 3, DAdV-3)是近年来我国新发现的鸭源腺病毒。本研究根据NCBI数据库中DAdV-3代表株(CH-GD-12-2014株, GenBank No. KR135164)的22K基因特征,设计特异性引物和探针,建立检测DAdV-3的MGB TaqMan探针qRT-PCR方法。结果表明,建立的qRT-PCR方法具有如下特性:灵敏度高,最低检测限为55拷贝/μL;特异性强,和鸭群常见传染病病原均无交叉反应;重复性好,组内和组间重复实验变异系数分别为0.44%~2.10%和0.64%~2.37%。利用建立的qRT-PCR方法对临床送检的61份鸭源病料进行检测,检出DAdV-3阳性15份,阳性率为24.6%。本研究为后续开展DAdV-3感染的实验室快速诊断和流行病学调查奠定了初步基础。 展开更多
关键词 鸭腺病毒3型(DAdV-3) 22K基因 MGB TAQ Man探针 实时荧光定量PCR
樱桃谷鸭源鹅出血性多瘤病毒(GHPV)全基因组克隆与分析
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作者 万春和 +6 位作者 刘荣昌 程龙飞 施少华 傅光华 红梅 傅秋玲 黄瑜 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1410-1418,共9页
鹅出血性多瘤病毒(Goose hemorrhagic polyomavirus, GHPV)为近年来我国鸭群新发病原。为明确我国鸭源GHPV基因组特征,本研究利用分段PCR扩增技术克隆获得樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domestica)源GHPV(FJ201601株)全基因组序... 鹅出血性多瘤病毒(Goose hemorrhagic polyomavirus, GHPV)为近年来我国鸭群新发病原。为明确我国鸭源GHPV基因组特征,本研究利用分段PCR扩增技术克隆获得樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domestica)源GHPV(FJ201601株)全基因组序列,并对其进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析。结果表明,克隆的GHPV(FJ201601株)全基因组序列长为5 254 bp(GenBank登录号MG544856),(G+C)%含量为48.01%,编码的6个主要功能基因(ORF-X, VP2, VP3, VP1, Large T和Small T)长度分别为510、981、654、1 062、1 911和483 bp。核苷酸同源性分析表明,FJ201601株和其他不同地区、不同宿主来源GHPV相互之间基因组核苷酸同源性较高(99.7%以上);其6个主要功能基因和其他不同地区、不同宿主来源GHPV相应基因的核苷酸(99.4%以上)和氨基酸同源性(98.2%以上)均极高。从全基因组及其编码的6个主要功能基因遗传进化关系可见,GHPV各分离株在基因组上亲缘关系较近,6个主要功能基因在遗传进化上差异不大,但北京鸭源GHPV和樱桃谷鸭源GHPV在遗传进化上仍存在细微差别,且不同宿主(多品种鸭和鹅)源GHPV在遗传进化上不存在宿主特异性。本研究丰富了GHPV分子流行病学数据,明确了GHPV基因组分子特征,为后续开展GHPV相关研究提供参考。 展开更多
关键词 鹅出血性多瘤病毒(GHPV) 樱桃谷鸭源 基因组 序列分析 遗传进化
鸭肠炎病毒强毒和疫苗弱毒鉴别诊断PCR方法的建立 预览
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作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 程龙飞 傅光华 施少华 红梅 傅秋玲 黄瑜 《福建农业学报》 北大核心 2018年第3期219-224,共6页
为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7... 为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7.0,设计一组可对DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因进行编码区全长扩增的特异性引物,经条件优化后建立DEV强毒和疫苗弱毒鉴别诊断的PCR方法。结果表明,DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上存在528bp的连续核苷酸序列缺失。优化后的PCR方法最佳退火温度为55℃,对DEV强毒和疫苗弱毒扩增片段大小分别为1 019bp和491bp;敏感性强,最低检测限为15.3pg;特异性好,对鸭源常见传染病(如番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)均无特异性扩增。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 强毒 疫苗弱毒 UL2基因 PCR 鉴别诊断
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鸭瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立 预览
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作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 程龙飞 施少华 傅光华 红梅 傅秋玲 黄瑜 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第6期722-728,共7页
根据鸭瘟病毒(DEV)gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10^1-1.0×10^6拷贝·μL^-1时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性... 根据鸭瘟病毒(DEV)gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10^1-1.0×10^6拷贝·μL^-1时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性扩增,其标准曲线方程为:y=-3.480x+37.955,扩增相关系数为0.999,敏感性强,最低检测限为10拷贝·μL^-1,特异性好,仅对DEV强毒株和弱毒活疫苗株检测到阳性扩增信号,对鸭源其他传染病病原(番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、禽1型副粘病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性,重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%-1.14%和0.69%-2.40%.对临床送检疑似DEV感染的14份样品进行检测,并与常规PCR方法、病毒分离鉴定进行比较,阳性率分别为85.71%(12/14)、71.43%(10/14)和57.14%(8/14),且与常规PCR方法、病毒分离鉴定的阳性符合率均为100%.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,可用于开发DEV快速诊断试剂盒,用于开展DEV流行病学调查. 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 GE基因 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR方法
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我国部分地区鸭1型甲肝病毒流行株遗传变异分析 预览
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作者 傅光华 +7 位作者 温名根 施少华 红梅 万春和 傅秋玲 程龙飞 刘荣昌 黄瑜 《福建农业学报》 北大核心 2018年第2期109-113,共5页
为了解鸭群中鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)的流行及其分子变异情况,对2015-2016年福建、广东、浙江及江西鸭群采集的327份临床样品进行检测、病毒分离鉴定、序列测定与分析。结果表明,自327份临床样品中检出DHAV-1阳性样品35份,阳性率10.7%;... 为了解鸭群中鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)的流行及其分子变异情况,对2015-2016年福建、广东、浙江及江西鸭群采集的327份临床样品进行检测、病毒分离鉴定、序列测定与分析。结果表明,自327份临床样品中检出DHAV-1阳性样品35份,阳性率10.7%;从阳性样品中分离获得23株DHAV-1,主要来自30日龄以内的麻鸭和半番鸭。对DHAV-1的VP1基因分子特征及遗传变异分析,表明23株病毒VP1基因核苷酸序列同源性介于93.3%~99.9%,分属2个病毒亚群,两亚群间的遗传距离为0.06。23株临床分离株中有18株与引起雏鸭胰腺泛黄的毒株(MPZJ1206株)处于同一亚群,为目前流行的优势毒株,与国内外疫苗株核苷酸同源性在91.3%~96.2%,存在较大差异。由此可见,我国福建省及周边地区鸭群中不同DHAV-1流行株之间及流行毒株与疫苗株间均存在不同程度的差异。 展开更多
关键词 鸭1型甲肝病毒 VP1基因 变异分析
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同时检测水禽3种常见病原菌的环介导间接PCR方法的建立 被引量:2
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作者 程龙飞 傅光华 +7 位作者 林群群 刘荣昌 傅秋玲 万春和 施少华 红梅 黄瑜 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期96-99,共4页
为建立同时检测大肠杆菌、禽源多杀性巴氏杆菌和鸭疫里默氏菌等水禽常见病原菌的环介导间接PCR方法,根据大肠杆菌的gapA基因、禽源多杀性巴氏杆菌的KMTl基因、鸭疫里默氏菌的OmpA基因序列,分别设计引物、标记于猪线粒体基因片段的两... 为建立同时检测大肠杆菌、禽源多杀性巴氏杆菌和鸭疫里默氏菌等水禽常见病原菌的环介导间接PCR方法,根据大肠杆菌的gapA基因、禽源多杀性巴氏杆菌的KMTl基因、鸭疫里默氏菌的OmpA基因序列,分别设计引物、标记于猪线粒体基因片段的两端,制备不同细菌的捕获探针;将捕获探针与待检测菌的基因组杂交、补平缺口、环化。采用1对引物反向扩增捕获探针,建立检测水禽3种常见病原菌的环介导间接PCR方法,扩增片段大小分别为328,422和504bp。沙门菌、金黄色葡萄球菌、小鹅瘟病毒的检测结果为阴性。该方法能检测出100Pg的细菌基因组DNA,与常规PCR的符合性为]00%。该方法可用于水禽3种常见病原菌的同时检测,是一种特异性好、灵敏度高的快速病原学诊断方法。 展开更多
关键词 大肠杆菌 多杀性巴氏杆菌 鸭疫里默氏菌 环介导间接PCR
多重基因重组型H9N2亚型AIV福建分离株全基因组的分子特征
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作者 万春和 +3 位作者 傅光华 朱春华 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2018年第5期17-23,共7页
为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组... 为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组扩增、克隆、测序,并对所获得的全序列与参考株进行了8个基因片段的同源性比较和遗传进化分析。结果显示:该分离株的HA基因与鸡源病毒A/ehieken/Zhejiang/SIC40/2015(H9N2)的核苷酸同源性最高,裂解位点处氨基酸序列为一PSRSSR↓GLF-,符合低致病性裂解位点序列特征,其226位氨基酸为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特性;NA基因颈部63、64和65位点氨基酸有缺失,与鸡源病毒A/ehieken/Zhejiang/SIC32/2014(H9N2)的核苷酸同源性最高;M2基因的31位氨基酸为N,表明该病毒已经对金刚烷胺类药物产生耐药性;分离株的基因组由3个亚系的基因重组产生,其中HA和NA基因来源于BJ/94亚系,PB2和肘基因来源于G1亚系,PBI、PA、NP和NS基因来源于F98亚系;该分离株的6个内部基因PB2、PB1、NP、M、NS与H7N9、H10N8、H5N6亚型禽流感病毒的内部基因存在复杂的交叉重组现象。因此需加强对H9N2亚型禽流感病毒的流行病学监测。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 遗传进化分析 基因重组
红毛鸭胚源鹅细小病毒江西株的分离鉴定与NS基因的分析 预览
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作者 傅秋玲 傅光华 +9 位作者 万春和 韦启鹏 红梅 黄江南 程龙飞 施少华 刘荣昌 李海琴 黄瑜 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第12期6-9,共4页
自死亡的红毛鸭胚中分离获得1株病毒株(命名为JX-JA-2017株),经胶体金试纸条检测呈鹅细小病毒(GPV)阳性,经中和试验测定可被GPV阳性血清特异性中和,表明该毒株为GPV。对其进行非结构基因(NS)特征分析发现,其NS基因与GenBank登入的13株... 自死亡的红毛鸭胚中分离获得1株病毒株(命名为JX-JA-2017株),经胶体金试纸条检测呈鹅细小病毒(GPV)阳性,经中和试验测定可被GPV阳性血清特异性中和,表明该毒株为GPV。对其进行非结构基因(NS)特征分析发现,其NS基因与GenBank登入的13株鹅细小病毒核苷酸序列同源性为94%-99.6%,氨基酸同源性为94.8%-99.5%;经分子进化分析发现,该株病毒与亚洲型GPV分离株共处于一个进化分支。以上结果揭示,红毛鸭胚存在GPV感染,且其JX-JA-2017株病毒与经典的GPV具有共同的遗传起源,丰富了GPV的流行病学与分子生态学内涵,为加强我国鹅细小病毒病的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 红毛鸭胚 鹅细小病毒 胶体金试纸条 NS 基因分析
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禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的克隆表达及抗原性鉴定 预览
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作者 程龙飞 +5 位作者 刘荣昌 万春和 傅光华 朱春华 黄瑜 《福建农业学报》 北大核心 2018年第5期451-455,共5页
为了对禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白H(Omp H)的免疫学活性进行鉴定,本研究根据已发表的多杀性巴氏杆菌X-73株(U50907.1)设计了两对引物,用PCR方法扩增了禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株的Omp H,扩增片段为1 348bp(ORF为1 056bp)... 为了对禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白H(Omp H)的免疫学活性进行鉴定,本研究根据已发表的多杀性巴氏杆菌X-73株(U50907.1)设计了两对引物,用PCR方法扩增了禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株的Omp H,扩增片段为1 348bp(ORF为1 056bp)。扩增的Omp H与GenBank中登录号为AE004439.1(Pm70株)、EF635422.1(C44-1株)、EU016232.1(P52株)、JQ082510.1(XJ121株)、U50907.1(X-73株)、U52200.1(P-1059株)的序列比对分析结果表明,其核苷酸同源性范围在80.2%-98.4%,氨基酸同源性范围在79.6%-98.5%。扩增了去信号肽的Omp H基因,构建原核重组表达质粒pET-Omp H,转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果表明,表达蛋白约为56ku,与预期分子量的大小相符;蛋白免疫印迹试验结果表明,该蛋白具有良好的免疫学活性,为建立禽Pm血清学检测方法以及禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白H基因 原核表达
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鸭瘟病毒新近分离毒株部分基因变异分析 预览
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作者 傅光华 +10 位作者 刘荣昌 卢立志 施少华 江斌 傅秋玲 程龙飞 沈军达 田勇 万春和 红梅 黄瑜 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期2215-2222,共8页
旨在研究鸭群中新流行的鸭瘟病毒(duck plaque virus,DPV)感染状况及其分子特征。本研究对2016—2017年福建不同地区疑似感染DPV的发病鸭组织样品进行了检测、病毒分离和部分基因的序列分析。从临床样品中分离获得24株DPV,发现确诊感染... 旨在研究鸭群中新流行的鸭瘟病毒(duck plaque virus,DPV)感染状况及其分子特征。本研究对2016—2017年福建不同地区疑似感染DPV的发病鸭组织样品进行了检测、病毒分离和部分基因的序列分析。从临床样品中分离获得24株DPV,发现确诊感染DPV鸭的日龄存在品种差异性,其中半番鸭和番鸭感染DPV的日龄中位值分别为90和88 d,而麻鸭感染DPV的日龄中位值为287 d。对DPV UL 56/LORF 5基因、TK/gH基因及UL 2区域的序列分析表明,分离毒株均未出现基因片段缺失,与我国DPV参考强毒株的序列相似性均在99%以上,但在UL 56/LORF 5基因及TK基因上存在有规律性的核苷酸变异。经分子系统进化分析发现,新近流行的DPV毒株与我国参考强毒株(GroupⅠ)处于不同进化分支,为GroupⅡ进化分支,且可进一步细分为两个不同的亚分支(GroupⅡa、GroupⅡb)。以上结果揭示,新近流行的DPV毒株感染不同品种鸭存在日龄差异性,与我国DPV参考强毒株相比已出现不同程度的变异,应加强对该病毒的分子流行病学监测,实时了解其流行变异情况,为新流行鸭瘟的快速准确诊断和防控提供科学依据。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 分离鉴定 分子特征
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鹅多瘤病毒VP1基因的克隆及EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立
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作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 程龙飞 施少华 傅光华 红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2289-2295,共7页
针对鹅多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)VP1基因核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从1株樱桃谷鸭源GHPV(命名为FJ201601株)扩增获得VP1基因核苷酸序列全长,并进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其VP1基因分子特... 针对鹅多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)VP1基因核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从1株樱桃谷鸭源GHPV(命名为FJ201601株)扩增获得VP1基因核苷酸序列全长,并进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其VP1基因分子特征。基于GHPV各分离株VP1基因特点,设计特异性的实时荧光定量PCR引物,建立基于EvaGreen实时荧光定量PCR检测GHPV方法。结果显示,克隆的FJ201601株VP1基因全长为1 062bp,与GHPV各参考分离株核苷酸同源性为99.7%~100.0%;在遗传进化上可将GHPV分为2个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2),FJ201601株属于Clade 2分支。建立的EvaGreen检测GHPV实时荧光定量PCR检测方法,其标准曲线方程y轴截距为39.12,斜率为-3.489,扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.7%;敏感性强,最低检测限为88.0拷贝/μL;特异性好,扩增产物的溶解曲线分析只出现单一的特异峰,Tm值为(82.18±0.22)℃,无引物二聚体,对水禽常见病原检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%~1.76%和0.92%~2.44%。用建立的检测方法对80份多品种生长不良鸭进行检测发现4份阳性(樱桃谷鸭2份、麻鸭2份),阳性率为5%(4/80)。本研究证实麻鸭中存在GHPV感染,为丰富GHPV感染宿主谱和开展GHPV感染流行病学调查和致病机理研究提供检测手段。 展开更多
关键词 鹅多瘤病毒 VP1基因 EvaGreen实时荧光定量PCR方法 樱桃谷鸭 麻鸭
鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定 预览 被引量:1
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作者 傅秋玲 刘伟 +9 位作者 黄瑜 傅光华 万春和 程龙飞 红梅 施少华 刘荣昌 林建生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期554-560,共7页
为制备抗鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)结构蛋白VP1的单克隆抗体(MAbs),本研究以pGEX-VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原,建立了筛选抗VP1蛋白阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法,经融合、筛选制备杂交瘤... 为制备抗鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)结构蛋白VP1的单克隆抗体(MAbs),本研究以pGEX-VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原,建立了筛选抗VP1蛋白阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法,经融合、筛选制备杂交瘤细胞及鉴定MAbs的稳定性、特异性、腹水效价和中和活性等生物学活性,获得了2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1A2和5G3)。MAbs腹水ELISA效价分别为1∶3.2×10^4和1∶2.0×10^6。亚类鉴定均为IgG1/κ型。Western blotting结果显示,2株MAbs均能与DHAV-1aVP1蛋白和DHAV-1a全病毒发生特异性反应。特异性试验结果显示2株MAbs能与鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)和DHAV-1a发生交叉反应。中和试验结果显示5G3株具有中和活性。结果表明2株MAbs的ELISA效价高、特异性强、稳定性好,均能与DHAV-1和DHAV-1a全病毒发生特异性反应,其中一株具有中和活性。 展开更多
关键词 鸭1型甲肝病毒亚型 单克隆抗体 生物学特性
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持续低产蛋率蛋鸭群主要病毒感染的检测与分析 被引量:1
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作者 傅秋玲 +8 位作者 红梅 施少华 傅光华 程龙飞 朱春华 万春和 林建生 黄瑜 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2288-2293,2299共7页
为了明确持续低产蛋率开产蛋鸭群的主要病毒病感染情况,应用已建立的间接ELISA方法和血凝抑制试验对2013年1月至2015年10月采自福建、广东、广西、江西、浙江、江苏和安徽等7省(区)免疫过H5亚型和H9亚型禽流感灭活疫苗但未免疫禽1型... 为了明确持续低产蛋率开产蛋鸭群的主要病毒病感染情况,应用已建立的间接ELISA方法和血凝抑制试验对2013年1月至2015年10月采自福建、广东、广西、江西、浙江、江苏和安徽等7省(区)免疫过H5亚型和H9亚型禽流感灭活疫苗但未免疫禽1型副黏病毒病疫苗和禽坦布苏病毒病疫苗,表现为持续低产蛋率的29个开产蛋鸭群的4737份血清样品进行抗体检测,同时采集蛋鸭卵巢组织进行RTPCR检测。结果显示,29个开产蛋鸭群中,H5亚型禽流感、H9亚型禽流感、禽1型副黏病毒病和禽坦布苏病毒病抗体的群阳性率分别为100.0%,100.0%,10.3%和100.0%,群内阳性率分别为79.4%~100.0%,82.5%~100.0%,0.0%~13.1%和33.7%~100.0%;蛋鸭卵巢组织中H5亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、禽1型副黏病毒和禽坦布苏病毒的阳性率依次为13.8%(4/29),0.0%(0/0),3.5%(1/29)和86.2%(25/29)。上述结果表明,我国以上7省(区)表现持续低产蛋率的开产蛋鸭群存在禽坦布苏病毒的严重感染,应引起养鸭生产者的高度重视。 展开更多
关键词 开产蛋鸭 持续低产蛋率 主要病毒感染 间接ELISA RT—PCR
半番鸭源鸭1型甲肝病毒亚型的分离鉴定及其VP1基因分析 预览
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作者 傅秋玲 傅光华 +7 位作者 程龙飞 万春和 施少华 红梅 朱春华 黄瑜 《福建农业学报》 北大核心 2017年第8期813-817,共5页
自胰腺泛黄的雏半番鸭中分离获得1株病毒(命名为FJ1605株),经RT-PCR检测为鸭1型甲肝病毒,通过鸭胚中和试验发现该株病毒可被鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)高免血清特异性中和,确定该株病毒为鸭1型甲肝病毒亚型。对该株病毒VP1基因进... 自胰腺泛黄的雏半番鸭中分离获得1株病毒(命名为FJ1605株),经RT-PCR检测为鸭1型甲肝病毒,通过鸭胚中和试验发现该株病毒可被鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)高免血清特异性中和,确定该株病毒为鸭1型甲肝病毒亚型。对该株病毒VP1基因进行分子特征分析,发现其核苷酸大小为714bp,与GenBank登录的DHAV-1a同源性为98.1%~99.7%,与DHAV-1FJ1220毒株同源性最高达99.7%;而与鸭2型甲肝病毒(DHAV-2)、鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)VP1基因的核苷酸同源性仅分别为65.7%和68.3%左右。基于VP1基因的遗传进化分析表明,FJ1605分离株属鸭1型甲肝病毒亚型谱系。以该株病毒对7日龄雏半番鸭进行人工感染试验,可完全复制出同于临床病例的病变。以上结果显示,雏半番鸭也可感染DHAV-1a,且表现为胰腺泛黄。 展开更多
关键词 鸭1型甲肝病毒亚型 半番鸭源 VP1基因
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不同养殖模式蛋鸭疫病的检测与分析 预览
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作者 傅秋玲 黄瑜 +12 位作者 程龙飞 卢立志 刘荣昌 张青 傅光华 万春和 沈军达 施少华 田勇 红梅 朱春华 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第3期6-9,共4页
自2013年初以来,对闽赣两省相近区域内的部分舍内地面加水域圈养、舍内地面饲养、网床小栏饲养和笼养4种模式下的同一品种开产蛋鸭群发生的疫病开展了定点跟踪调查和病毒性、细菌性疫病感染检测,发现4种不同养殖模式的蛋鸭疫病感染率、... 自2013年初以来,对闽赣两省相近区域内的部分舍内地面加水域圈养、舍内地面饲养、网床小栏饲养和笼养4种模式下的同一品种开产蛋鸭群发生的疫病开展了定点跟踪调查和病毒性、细菌性疫病感染检测,发现4种不同养殖模式的蛋鸭疫病感染率、发生的疫病种类及同一疫病的严重程度均存在较大差异,其中以舍内地面加水域圈养模式的蛋鸭病毒性和细菌性疫病感染率最高达84.4%,发生的疫病种类最多达10种,发生同一种疫病时感染的阳性率更高(如禽坦布苏病毒感染阳性高达22.9%),致病菌的耐药谱更宽(如分离鉴定的大肠杆菌耐10种及以上药物的菌株占84.2%);而网床小栏饲养、笼养两种模式下的蛋鸭发生的疫病种类相对较少,为5~6种,其主要疫病为禽坦布苏病毒病、禽流感和大肠杆菌病,尤其是笼养蛋鸭发生病毒性和细菌性疫病感染率为26.5%、发生同一种疫病时感染的阳性率最低(如致病性大肠杆菌感染的阳性仅为7.8%)。以上结果表明,蛋鸭养殖模式的良莠与疫病发生的种类及其感染的程度直接相关,可见促进蛋鸭养殖模式的转型升级是防控疫病重要的生物安全举措。 展开更多
关键词 养殖模式 蛋鸭 疫病防控
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半番鸭胚中鹅细小病毒的分离鉴定及其基因组分子特征分析 预览 被引量:2
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作者 傅秋玲 程龙飞 +8 位作者 万春和 傅光华 施少华 红梅 刘荣昌 朱春华 黄瑜 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期2148-2156,共9页
通过胶体金试验、电镜观察及PCR扩增等方法,自半番鸭胚及孵化的雏半番鸭中分离获得了鹅细小病毒(GPV)毒株(命名为MDE株),并进行了病毒全基因组分子特征分析。结果表明,该病毒粒子为直径20~24nm的球形、无囊膜粒子。胶体金试验结果呈... 通过胶体金试验、电镜观察及PCR扩增等方法,自半番鸭胚及孵化的雏半番鸭中分离获得了鹅细小病毒(GPV)毒株(命名为MDE株),并进行了病毒全基因组分子特征分析。结果表明,该病毒粒子为直径20~24nm的球形、无囊膜粒子。胶体金试验结果呈GPV阳性。该毒株基因组全长为5 106bp,与GenBank登录的15株GPV基因组序列相似性为93.2%~98.1%,其中与SH株及疫苗株SYG61v株等的相似性较高,而与半番鸭源的GPV重组病毒M15株相似性最低。基于病毒VP1和NS1基因的遗传进化分析表明,分离毒株MDE与GPV疫苗毒株的亲缘关系最近,处于同一个独立的分支上,与番鸭细小病毒的亲缘关系较远。与疫苗毒株SYG61v株比较,MDE株VP1区的糖基化位点增加了703NRTS糖基化位点。以上结果表明,本研究揭示了GPV可通过半番鸭胚垂直传播给雏鸭,丰富了GPV的生态学内容。 展开更多
关键词 半番鸭胚 鹅细小病毒 全基因 分子特征
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鸭巴泰病毒一步法RT-PCR检测方法的建立 预览
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作者 傅光华 +6 位作者 傅秋玲 刘荣昌 程龙飞 施少华 万春和 红梅 黄瑜 《福建农业学报》 北大核心 2017年第11期1193-1196,共4页
为建立鸭巴泰病毒(Bataivirus,BATV)的快速检测方法,本研究基于该病毒囊膜蛋白(M)基因序列的保守区域,经优化反应条件,对检测方法的特异性、敏感性及重复性进行了测定,建立了一种用于检测BATV的一步法RT-PCR快速诊断方法。所... 为建立鸭巴泰病毒(Bataivirus,BATV)的快速检测方法,本研究基于该病毒囊膜蛋白(M)基因序列的保守区域,经优化反应条件,对检测方法的特异性、敏感性及重复性进行了测定,建立了一种用于检测BATV的一步法RT-PCR快速诊断方法。所建立的检测方法可特异性扩增出BATVM基因480bp的序列片段,其最低检测病毒量为1×10^1,1TCID50,且重复性好,对禽坦布苏病毒、鸭甲肝病毒等5种鸭常见传染病病原均未扩增出相应的片段,特异性好。以上结果表明,所建立的RT-PCR检测方法具有很好的特异性和敏感性,可用于鸭BATV感染的早期快速诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 巴泰病毒 RT-PCR
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同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法的建立 预览 被引量:1
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作者 程龙飞 傅光华 +7 位作者 林群群 刘荣昌 傅秋玲 万春和 施少华 红梅 黄瑜 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期637-640,共4页
为建立同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法,本研究根据鸭疫里默氏菌外膜蛋白A基因和大肠杆菌的gapA基因的保守序列设计两对特异性探针,分别标记于猪线粒体基因片段的两端形成两种不同的捕获探针,将捕获探针与待检测菌... 为建立同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法,本研究根据鸭疫里默氏菌外膜蛋白A基因和大肠杆菌的gapA基因的保守序列设计两对特异性探针,分别标记于猪线粒体基因片段的两端形成两种不同的捕获探针,将捕获探针与待检测菌的基因组杂交、补平缺口、环化后,采用1对引物反向扩增捕获探针,建立检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法,扩增片段分别为540 bp和328 bp,本研究建立的方法对金黄色葡萄球菌、禽多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌的检测结果为阴性;能够检测出10 pg的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的基因组DNA,与常规PCR的符合率为100%。本研究建立的环介导间接PCR方法是一种特异性好、灵敏度高的快速病原学诊断方法,为同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌提供了一种可行的方法。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏菌 大肠杆菌 环介导间接PCR
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三株鸭源多杀性巴氏杆菌血清型与耐药表型的相关分析
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作者 刘小龙 程龙飞 +10 位作者 卢荣辉 傅光华 赖隆永 刘荣昌 傅秋玲 万春和 施少华 红梅 黄瑜 祁保民 《中国家禽》 北大核心 2017年第3期54-57,共4页
为探究当前鸭源多杀性巴氏杆菌血清型与耐药表型的相关性,选取3株多杀性巴氏杆菌(2015年福建地区送检的病死鸭中分离),采用PCR法琼脂扩散法、纸片法等分别对3株病原菌进行复苏、荚膜群鉴定和耐热菌体抗原型鉴定、药物敏感性测定。结... 为探究当前鸭源多杀性巴氏杆菌血清型与耐药表型的相关性,选取3株多杀性巴氏杆菌(2015年福建地区送检的病死鸭中分离),采用PCR法琼脂扩散法、纸片法等分别对3株病原菌进行复苏、荚膜群鉴定和耐热菌体抗原型鉴定、药物敏感性测定。结果显示:3株鸭源多杀性巴氏杆菌都屠于荚膜A群,其中FJFC881株的耐热菌体抗原型为14型,FJFC882株和FJFC883株的耐热菌体抗原型都为1型,三株多杀性巴氏杆菌对多种药物都不敏感,属于多重耐药的巴氏杆菌。表明相同的耐热菌体抗原型之间的耐药存在着相似之处,不同的耐热菌体抗原型之间的耐药也存在一定的差异。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 血清型 耐热菌体
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