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上海地区粒细胞缺乏伴肺部感染血液病患者呼吸道分离细菌及耐药性多中心回顾性研究 预览
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作者 李志超 朱骏 +21 位作者 王椿 胡炯 毛原飞 陈芳 朱坚轶 刘澎 顾史洋 施菊妹 刘银梅 梁爱斌 丁懿 侯健 何海燕 刘立根 谢英华 朱琦 俞夜花 姚永华 陈蔚 许惠利 韩秀华 郝思国 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1025-1031,共7页
目的了解上海地区中性粒细胞缺乏(粒缺)伴肺部感染血液病患者呼吸道分泌物检出病原菌的分布及耐药情况。方法回顾性收集2012年1月-2014年12月上海市12所医院血液科粒缺伴肺部感染住院患者呼吸道分泌物分离菌株的临床资料、药敏结果,分... 目的了解上海地区中性粒细胞缺乏(粒缺)伴肺部感染血液病患者呼吸道分泌物检出病原菌的分布及耐药情况。方法回顾性收集2012年1月-2014年12月上海市12所医院血液科粒缺伴肺部感染住院患者呼吸道分泌物分离菌株的临床资料、药敏结果,分析病原菌分布及其药敏数据,比较不同原发疾病病原菌分布之间的差异。结果共分离病原菌623株,其中革兰阳性菌138株(22.2%),革兰阴性菌485株(77.8%),非发酵菌占革兰阴性菌的60.2%(292株)。淋巴瘤患者标本中分离革兰阳性菌构成比(35.0%)高于急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病患者。居前5位的细菌分别是嗜麦芽窄食单胞菌(104株,16.7%)、肺炎克雷伯菌(88株,14.1%)、鲍曼不动杆菌(62株,10.0%)、铜绿假单胞菌(56株,9.0%)、金黄色葡萄球菌(48株,7.7%)。肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感率>98%,铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为24.3%、8.9%,嗜麦芽窄食单胞菌对左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺甲口恶唑敏感率>90%,鲍曼不动杆菌对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率低于10%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为71.4%,未发现耐万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺的金黄色葡萄球菌。结论粒缺伴肺部感染患者呼吸道分泌物分离菌株以革兰阴性菌占多数,其中非发酵菌占50%以上,细菌耐药率整体低于CHINET全国医院大样本监测结果。 展开更多
关键词 中性粒细胞缺乏 发热 肺部感染 细菌 耐药性
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应用二代测序技术分析急性髓系白血病患者基因突变及其对预后的影响
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作者 赵初娴 王健民 +14 位作者 李军民 邹善华 陈芳 梁爱斌 侯健 胡晓霞 张赟翔 顾史洋 朱坚轶 李萍 杜鹃 杨一宁 秦尤文 王小蕊 王椿 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第40期3145-3151,共7页
目的应用二代测序技术(NGS)分析急性髓系白血病(AML)患者的突变基因谱,讨论基因突变在疾病预后分层中的价值。方法分析2014年1月1日到2017年12月31日间在上海7家综合性医院血液科收治的新诊断的AML(除外急性早幼粒细胞白血病)患者的临... 目的应用二代测序技术(NGS)分析急性髓系白血病(AML)患者的突变基因谱,讨论基因突变在疾病预后分层中的价值。方法分析2014年1月1日到2017年12月31日间在上海7家综合性医院血液科收治的新诊断的AML(除外急性早幼粒细胞白血病)患者的临床资料。抽取患者的骨髓液,提取RNA和DNA后,应用白血病融合基因和髓系相关基因突变组套进行检测。分析白血病融合基因和基因突变检测结果,比较不同年龄组和不同染色体核型组的患者情况。Kaplan-Meier曲线用于患者生存分析。结果共纳入453例初诊AML患者,男女比例1.2∶1,中位年龄49.5(11~85)岁。其中289例患者共检测到了540个突变/融合基因,132例(29.1%)患者存在2个及以上的突变/融合基因。发生频率在10%以上的突变/融合基因有:NPM1突变12.8%,ETO 11.92%,TET2突变11.04%,以及WT1过表达者占10.6%。50岁以上的患者发生与表观遗传修饰相关的基因突变频率较高,ASXL111.93%,DMNT3A 13.99%,IDH1/IDH26.58%,TET213.17%。其中DMNT3A突变发生频率是50岁以下患者的3倍以上(P=0.017)。本研究中,低危核型组患者基因突变发生比例低。中危核型组中,NPM1、TET2、FLT3-ITD、DNMT3A、ASXL1、CEBPA双突变等都有较高的发生频率。高危核型组中ASXL1、TET2、DNMT3A、PHF6突变发生频率在10%以上,其中ASXL1和PHF6突变率明显高于低危和中危核型组(P<0.05)。正常核型AML(NK-AML)患者254例(占56%),其中伴有表观遗传修饰相关基因突变的患者56例,该组患者中位总生存期(OS)较无相关基因突变组患者短,中位无白血病生存期(LFS)差异无统计学意义。年龄大于50岁且有表观遗传修饰基因突变的NK-AML患者,其中位OS 12个月,中位LFS 10个月,而无相关基因突变的患者中位OS和LFS分别为18个月和12个月。结论不同年龄组和不同核型分组的AML患者基因突变发生频率有差异。>50岁的AML患者表观遗传修饰基因发生突变的频率 展开更多
关键词 白血病 髓样 急性 基因 突变 二代测序
上海多家三甲医院中性粒细胞缺乏伴发热淋巴瘤患者病原菌分布及耐药性分析 预览
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作者 励菁菁 朱琦 +6 位作者 王椿 胡炯 陈芳 施菊妹 郝思国 刘澎 俞夜花 《复旦学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期199-204,216共7页
目的探讨中性粒细胞缺乏(粒缺)伴发热淋巴瘤患者致病菌的分布及其耐药现状,为临床有效控制感染和合理选用抗生素提供依据。方法回顾性分析2012年1月至2014年12月上海12家三甲医院血液科收治的粒缺伴发热淋巴瘤患者的病原菌分布及药敏特... 目的探讨中性粒细胞缺乏(粒缺)伴发热淋巴瘤患者致病菌的分布及其耐药现状,为临床有效控制感染和合理选用抗生素提供依据。方法回顾性分析2012年1月至2014年12月上海12家三甲医院血液科收治的粒缺伴发热淋巴瘤患者的病原菌分布及药敏特点。结果108株临床分离菌中革兰阴性(G-)菌67株,占62.04%;革兰阳性(G^+)菌41株,占37.96%。G^-菌中肠杆菌科细菌最多,占全部致病菌的34.26%(37株);G^+菌中葡萄球菌属最多,占全部致病菌的24.07%(26株)。所有致病菌感染部位以呼吸道分布最多,共60株,占所有标本的55.56%,其次为伤口分泌物19株(17.59%)、导管12株(11.11%)、血液10株(9.26%)、其他标本7株(6.48%)。呼吸道分泌物培养出的菌株以肺炎克雷伯杆菌居多,伤口标本则为产酸克雷伯杆菌,导管以大肠埃希菌多见,而血液标本则以葡萄球菌感染为主。G^+菌对青霉素、红霉素、左氧氟沙星、头孢菌素及庆大霉素类抗生素均不同程度耐药,但对磷霉素、万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺敏感度可达92.9%~100%。G^-菌对部分青霉素及头孢菌素类抗生素耐药率较高之外,对阿米卡星、美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等抗生素均较敏感。结论粒缺伴发热淋巴瘤患者致病菌仍以G^-菌为主,分布较为广泛,多药耐药情况严重。利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁等仍可作为G^+菌感染的经验性用药;亚胺培南、美罗培南、阿米卡星等可作为G-菌感染的用药选择。 展开更多
关键词 淋巴瘤 中性粒细胞减少 发热 细菌 耐药性
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Notch1高表达急性T淋巴细胞白血病发病中细胞增殖的相关机制
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作者 李香 沈莉菁 +5 位作者 陈芳 高晓 钟华 蔡佳翌 张义炜 朱迪 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2018年第5期369-378,共10页
目的探讨Notch1高表达急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)发病中,细胞增殖的相关机制及靶向药物干预效价。 方法选择Notch1高表达的T-ALL细胞株(A3、MOLT-4、Jurkat细胞株)和来源于20例健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)为研究对象... 目的探讨Notch1高表达急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)发病中,细胞增殖的相关机制及靶向药物干预效价。 方法选择Notch1高表达的T-ALL细胞株(A3、MOLT-4、Jurkat细胞株)和来源于20例健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)为研究对象。采用不同浓度(0、50、100 nmol/L)的细胞周期抑制剂palbociclib处理T-ALL细胞株与PBMC,采用CCK-8法检测其细胞增殖状态,计算不同浓度palbociclib处理时的半数抑制浓度(IC50)值,细胞涂片观察细胞形态,并且采用流式细胞术分析T-ALL细胞株与PBMC的细胞周期变化,实时荧光定量(RT)-PCR检测相关基因mRNA的相对表达水平。采用t检验比较不同浓度palbociclib处理后T-ALL细胞株与PBMC相关基因mRNA的相对表达水平等呈正态分布计量指标。结果①A3、MOLT-4细胞株Notch1基因表达的灰度值百分比,分别为(62.3±3.40)%、(77.6±4.71)%,显著高于PBMC的(20.8±1.53)%,并且差异均有统计学意义(t=6.236、10.034,P=0.025、0.008);Jurkat细胞Notch1基因表达的灰度值百分比为(28.5±1.36)%,与PBMC比较,差异无统计学意义(t=1.257,P=0.430)。②相较于PBMC,MOLT-4细胞株增殖活性被palbocicib显著抑制,其次为A3细胞株,并且3种细胞增殖活性抑制呈明显时间和浓度依赖。经palbocicib处理48 h后,A3及MOLT-4细胞株的IC50值分别为(0.43±0.12)μmol/L和(0.10±0.06)μmol/L,显著低于PBMC的(0.83±0.15)μmol/L,前二者分别与后者相比,差异均有统计学意义(t=12.354、7.486,P=0.006、0.015)。③细胞形态结果显示,相较于PBMC,经palbocicib 100 nmol/L处理后,A3和MOLT-4细胞株的细胞增殖受到明显抑制,细胞分散,簇状增殖现象消失。④细胞周期检测结果显示,经palbocicib 50 nmol/L处理时S+G2期A3、MOLT-4细胞株的细胞比例较palbocicib 0 nmol/L处理时显著降低,并且差异均有统计学意义(t=5.358� 展开更多
关键词 白血病 T细胞 急性病 细胞增殖 受体 Notch1 Palbociclib
ASP2215联合SAHA对FLT3-ITD突变细胞株体外协同机制研究
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作者 朱庆锋 胡晓丽 +3 位作者 朱坚轶 郎雯竞 钟济华 陈芳 《诊断学理论与实践》 2018年第5期538-546,共9页
目的:探究FLl、3急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemh AML)抑制剂ASP2215联合组蛋白去乙酰化酶(histone deacetvlase inhibitor,HDAC)抑制剂SAHA,对伴FLT3一ITD突变的细胞株MV4—11的协同作用及其作用机制。方法:用不同浓度的ASP2... 目的:探究FLl、3急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemh AML)抑制剂ASP2215联合组蛋白去乙酰化酶(histone deacetvlase inhibitor,HDAC)抑制剂SAHA,对伴FLT3一ITD突变的细胞株MV4—11的协同作用及其作用机制。方法:用不同浓度的ASP2215、SAHA单药或两药联合处理白血病细胞株MV4—11,观察细胞形态变化.采用CCK一8试剂盒检测其细胞活力.用流式细胞仪检测细胞凋亡率.蛋白免疫印迹检测FLfT3及下游信号分子S’rAT5的磷酸化,分析凋亡调控蛋白Mcl一1、Bcl—xL、Bcl一2、Bax和caspase一9、caspase一3的蛋白含量。结果:①相较于FLIT3野生型细胞株THP一1,ASP2215能够特异性地抑制FLIT3一ITD突变AML细胞株MV4—11细胞的增殖。②ASP2215和SA—HA单药处理均能抑制MV4—11细胞的活性.这种抑制作用呈浓度和时间依赖性.且两药联合使用时能够协同抑制Mv4一11细胞株的活性,不同药物浓度联合的联合指数(combination index,cI)值皆小于1。③AsP2215和SAHA呈浓度和时间依赖性诱导MV4—11细胞凋亡,两者联合能够进一步增加MV4-11细胞凋亡。MV4-11细胞凋亡的过程中,伴caspase.3和caspase一9蛋白剪切活化,且活化程度随细胞凋亡增加而上升。相较于单药作用,两药联合能够引起更多的caspase一3和caspase一9剪切活化。形态学上,细胞凋亡和坏死改变随着药物浓度增加依次增多,且两药物联合能够引起细胞更明显的凋亡和坏死改变。④FLT3抑制剂ASP2215能够降低FLT3受体及下游分子STAT5的磷酸化水平,SAHA对n耶及下游STAT5分子磷酸化也有轻度抑制作用。ASP2215和SAHA都能引起Mcl一1和Bcl—xL抗凋亡蛋白水平的降低,轻度下调Bcl一2蛋白和轻度上调Bax蛋白表达水平。两药联合相较于单药能够进一步下调Mcl—1、Bcl。xL的蛋白表达水平和Bcl一2/Bax蛋白比例。结论:ASP2215联合SAHA能够协同抑制伴FLIT3一ITD突变MV4—11细胞株增殖,促进细胞凋亡,其机制涉及两药� 展开更多
关键词 MV4—11细胞株 FLT3抑制剂ASP2215 HDAC抑制剂SAHA 细胞抑制 凋亡
预激方案和标准方案治疗初治急性髓系白血病的临床观察 被引量:1
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作者 朱坚轶 路莎莎 +5 位作者 陈芳 蔡佳翌 韩晓凤 黄洪晖 钟华 钟璐 《内科理论与实践》 2017年第3期180-185,共6页
目的:比较预激方案与标准化学治疗(化疗)方案治疗初治急性髓系白血病(AML)的疗效、不良反应和生存情况。方法:回顾性分析175例可随访的初治AML患者,分成预激方案组(n=60)和标准方案组(n=115),标准方案组采用IA(去甲氧柔红霉... 目的:比较预激方案与标准化学治疗(化疗)方案治疗初治急性髓系白血病(AML)的疗效、不良反应和生存情况。方法:回顾性分析175例可随访的初治AML患者,分成预激方案组(n=60)和标准方案组(n=115),标准方案组采用IA(去甲氧柔红霉素、阿糖胞苷)或DA(柔红霉素、阿糖胞苷),预激方案组采用CAG(阿克拉霉素、阿糖胞苷和粒细胞集落刺激因子)或IAG(去甲氧柔红霉素、阿糖胞苷和粒细胞集落刺激因子)诱导治疗,2组患者均为一疗程缓解,同方案巩固2个疗程,或2个疗程缓解,同方案巩固一疗程,随后进入巩固维持治疗阶段。结果:预激方案组与标准方案组在完全缓解率、无病生存率和总生存率方面差异无统计学意义(均P〉0.05),但预激方案组患者化疗后骨髓恢复时间、感染发生率及单采血小板的输注量均低于标准方案组患者(均P〈0.05)。结论:预激方案在治疗初治AML的临床疗效和患者生存情况与标准方案相类似,但骨髓抑制及感染发生等不良反应较标准方案轻微,故可作为初治AML患者诱导治疗的可选方案之一。 展开更多
关键词 预激方案 标准方案 急性髓系白血病 初治
以反复流产为表现的阵发性睡眠性血红蛋白尿一例
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作者 韩晓凤 方怡 +2 位作者 朱坚轶 黄洪晖 陈芳 《诊断学理论与实践》 2017年第4期430-431,共2页
阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)是一种罕见的获得性溶血性贫血。本文报道1例以反复流产为表现的PNH患者,并结合文献讨论其特点。病例:患者为女性,33岁,因"流产4次,伴血红蛋白、血小板减少7年余... 阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)是一种罕见的获得性溶血性贫血。本文报道1例以反复流产为表现的PNH患者,并结合文献讨论其特点。病例:患者为女性,33岁,因"流产4次,伴血红蛋白、血小板减少7年余"入院。 展开更多
关键词 阵发性睡眠性血红蛋白尿 溶血 血栓
逆转录病毒结合位点-1蛋白在血液系统肿瘤中的研究进展
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作者 郎雯竞 朱坚轶 陈芳 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2017年第6期539-543,共5页
逆转录病毒结合位点(Evi)-1基因定位于人类染色体3q26,编码能够与特定DNA结合的转录因子Evi-1蛋白,参与RNA的转录调节。研究发现,Evi-1蛋白在多种血液系统肿瘤中均存在异常表达,参与调控血液系统肿瘤细胞的分化、凋亡、增殖及相... 逆转录病毒结合位点(Evi)-1基因定位于人类染色体3q26,编码能够与特定DNA结合的转录因子Evi-1蛋白,参与RNA的转录调节。研究发现,Evi-1蛋白在多种血液系统肿瘤中均存在异常表达,参与调控血液系统肿瘤细胞的分化、凋亡、增殖及相关信号转导等过程。笔者拟就Evi-1蛋白的基本生物学特征及其在血液系统肿瘤中的相关作用机制的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 Evi-1基因 血液肿瘤 细胞分化 细胞凋亡 分子靶向治疗
医学人文教学如何延伸至临床——一名血液科临床医生的思考 预览 被引量:1
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作者 倪蓓文 方怡 +3 位作者 殷婷玉 王婷 陈芳 韩晓凤 《卫生职业教育》 2017年第12期35-36,共2页
快速发展的医学科学技术,可以提高疾病治愈的可能性,但是滞后的医学人文教育显然无法与之相适应。医学人文的回归,也不能仅停留于笔端。医学人文教学应从课堂教授延伸至临床的践行。
关键词 医学人文教学 血液科 临床医生
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三氧化二砷影响EVI1基因调控造血转录因子的体外研究
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作者 朱坚轶 郎雯竞 +3 位作者 陈芳 徐卓然 沈莉菁 钟济华 《诊断学理论与实践》 2017年第1期42-47,共6页
目的:观察三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)在体外影响反转录病毒整合位点1基因(ecotropic viral integration site-1,EVI1)基因对造血转录因子的调控作用。方法:实验选取EVI1高表达的急性髓系白血病细胞株THP-1,利用健康成人外... 目的:观察三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)在体外影响反转录病毒整合位点1基因(ecotropic viral integration site-1,EVI1)基因对造血转录因子的调控作用。方法:实验选取EVI1高表达的急性髓系白血病细胞株THP-1,利用健康成人外周血单个核细胞作为对照,通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RFQ-PCR),检测EVI1基因及造血转录因子GATA1、GATA2、RUNX1、MPO、LMO2、CMYB、PU.1和SCL的m RNA相对表达量。分别以1μmol/L、3μmol/L、5μmol/L的ATO溶液处理THP-1细胞株后,再通过反转录RFQ-PCR检测EVI1基因及造血转录因子的m RNA相对表达量。结果:通过反转录RFQ-PCR检测证实,存在EVI1基因的THP-1细胞中GATA2和CMYB基因的表达上调,而GATA1、RUNX1、MPO、LMO2、PU.1及SCL基因的表达水平下调。ATO对EVI1基因的下调作用具有浓度与时间依赖性,并对其他造血转录因子进行调控。结论:通过体外研究发现,高表达EVI1基因的THP-1细胞有GATA2基因的表达上调,同时存在其他造血转录因子的表达异常,与促进原始细胞增殖及髓系、红系的分化成熟受抑密切相关。ATO可特异性地下调EVI1基因的表达,并抑制GATA2转录因子的激活。 展开更多
关键词 反转录病毒整合位点1基因 三氧化二砷 造血转录因子 急性髓系白血病
上海地区粒细胞缺乏伴发热血液病患者致病细菌的分布及耐药性分析的多中心、回顾性研究 被引量:1
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作者 朱骏 胡炯 +21 位作者 毛原飞 陈芳 朱坚轶 施菊妹 于丹丹 郝思国 陶荣 刘澎 顾史洋 侯健 何海燕 梁爱斌 丁懿 刘立根 谢英华 朱琦 俞夜花 姚永华 陈蔚 许惠利 韩秀华 王椿 《中华血液学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期945-950,共6页
目的了解上海地区中性粒细胞缺乏(粒缺)伴发热血液病患者致病细菌的分布及耐药情况。方法回顾性分析2012年1月至2014年12月上海市12家医院血液科粒缺伴发热住院患者的临床分离菌株,用纸片扩散法进行药敏试验,WHONET5.6软件分析病... 目的了解上海地区中性粒细胞缺乏(粒缺)伴发热血液病患者致病细菌的分布及耐药情况。方法回顾性分析2012年1月至2014年12月上海市12家医院血液科粒缺伴发热住院患者的临床分离菌株,用纸片扩散法进行药敏试验,WHONET5.6软件分析病原菌分布及药敏数据。结果从上海地区粒缺伴发热患者中共分离出1260株细菌,其中革兰阳性菌420株(33.3%),革兰阴性菌840株(66.7%)。排在前七位的分别是肺炎克雷伯菌158株(12,5%)、嗜麦芽窄食单胞菌120株(9.5%)、大肠埃希菌115株(9.1%)、铜绿假单胞菌109株(8.7%)、鲍曼不动杆菌83株(6.6%)、金黄色葡萄球菌70株(5.6%)和屎肠球菌63株(5.0%)。呼吸道分泌物标本中,非发酵菌占56.2%(350/623)。其中嗜麦芽窄食单胞菌占15.3%(95/623)。血液标本中,肠杆菌科细菌占42.3%(104/246),凝固酶阴性葡萄球菌占34.6%(85/246)。脓液标本中肠杆菌科细菌占39.4%(76/193),肠球菌属细菌占28.5%(55/193)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为54.3%和82.5%,未发现耐利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁葡萄球菌属菌株,耐万古霉素屎肠球菌的检出率为8.9%,肠球菌属未检出耐利奈唑胺的菌株。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物高度敏感。铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率已分别达34.1%和15.8%。嗜麦芽窄食单胞菌对米诺环素、左氧氟沙星、复方磺胺甲恶唑等药物敏感。鲍曼不动杆菌仅对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率低于10.0%。肺炎克雷伯菌、嗜麦芽窄食单胞菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等革兰阴性菌对大多常用抗菌药物的耐药率低于CHINET监测的数据。结论粒缺伴感染患者常见 展开更多
关键词 中性粒细胞减少 发热 抗药性 细菌
shRNA干扰己糖激酶Ⅱ基因表达对人淋巴瘤细胞恶性生物学行为的影响 被引量:3
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作者 许壁榆 邵霞 +3 位作者 张义炜 蔡佳翌 陈芳 王婷 《肿瘤》 CSCD 北大核心 2017年第4期313-323,432共12页
目的:观察shRNA干扰己糖激酶(hexokinase,HK)Ⅱ基因表达对人淋巴瘤Raji和SU-DHL-4细胞代谢、增殖、凋亡及耐药的影响,初步评价HKⅡ基因靶向治疗在淋巴瘤中的潜在应用前景。方法:构建慢病毒介导的shRNA靶向干扰HKⅡ基因表达的淋巴瘤... 目的:观察shRNA干扰己糖激酶(hexokinase,HK)Ⅱ基因表达对人淋巴瘤Raji和SU-DHL-4细胞代谢、增殖、凋亡及耐药的影响,初步评价HKⅡ基因靶向治疗在淋巴瘤中的潜在应用前景。方法:构建慢病毒介导的shRNA靶向干扰HKⅡ基因表达的淋巴瘤细胞株Raji和SU-DHL-4(HKⅡshRNA转染组),同时设置阴性shRNA转染对照组。采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测细胞中HKⅡmRNA和蛋白的表达水平。锥虫蓝拒染法检测细胞存活数并绘制生长曲线;CCK-8法检测多柔比星(doxorubicin,DOX)对淋巴瘤细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。FCM法分析细胞周期分布及细胞凋亡。蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白caspase-3及其剪切体、Bcl-2和Bcl-6的表达;分别应用乳酸和葡萄糖检测试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸和葡萄糖的浓度。结果:与空质粒转染对照组细胞相比,HKⅡshRNA转染组细胞中HKⅡmRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P值均〈0.05)。shRNA干扰HKⅡ基因表达能抑制2种淋巴瘤细胞的增殖活性(P值均〈0.01),并使细胞周期阻滞在G0/G1期(P值均〈0.05),同时促进细胞凋亡(P值均〈0.01)。与对照组细胞相比,HKⅡ基因沉默可降低DOX对2种淋巴瘤细胞的IC50值(P值均〈0.05),抑制细胞中葡萄糖消耗(P值均〈0.05),减少乳酸生成(P值均〈0.01)。与对照组细胞相比,HKⅡshRNA转染后2种淋巴瘤细胞中Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P值均〈0.05),而caspase-3剪切体表达水平明显升高(P值均〈0.05);加入DOX作用后,2种淋巴瘤细胞的Bcl-2表达水平无明显差异(P值均〉0.05),但HKⅡshRNA转染组细胞中caspase-3前体蛋白表达水平明显降低(P值均〈0.01),而caspase-3剪切体表达水平升高更加明显(P值均〈0.05)。结论:shRNA干扰HKⅡ基因表达可抑制淋巴瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,纠正� 展开更多
关键词 淋巴瘤 非霍奇金 己糖激酶Ⅱ 细胞凋亡 抗药性 肿瘤 糖酵解
硼替佐米联合有氧氧化抑制剂寡霉素靶向Burkitt淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用及机制 被引量:4
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作者 邵霞 蔡佳翌 +3 位作者 许壁榆 钟济华 陈芳 王婷 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期127-139,共13页
目的 :研究硼替佐米(bortezomib,BTZ)联合寡霉素(oligomycin,OM)对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法:采用不同浓度的BTZ(0、5、10、15、20、25和30 nmol/L)单药或联合OM(0.05μg/m L)作用于... 目的 :研究硼替佐米(bortezomib,BTZ)联合寡霉素(oligomycin,OM)对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法:采用不同浓度的BTZ(0、5、10、15、20、25和30 nmol/L)单药或联合OM(0.05μg/m L)作用于Raji细胞,CCK-8法检测对细胞增殖抑制率的影响;实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测原癌基因C-myc、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及其靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和葡萄糖转运体1(glucose transporter 1,GLUT1)m RNA及蛋白的表达,以及代谢途径中关键酶己糖激酶Ⅱ(hexokinaseⅡ,HKⅡ)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDHA)和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDHA)m RNA及蛋白表达水平的变化;葡萄糖检测试剂盒[己糖激酶(hexokinase,HK)法]和乳酸检测试剂盒分别检测Raji细胞培养液中葡萄糖和乳酸浓度的改变;FCM法检测细胞周期分布及细胞凋亡的改变。结果 :不同浓度的BTZ单药作用于Raji细胞后,可明显抑制Raji细胞的增殖且呈剂量依赖性(P值均〈0.01)。BTZ(5、10、15和20 nmol/L)联合OM对Raji细胞的增殖抑制率显著高于BTZ单药组(P值均〈0.01)。BTZ单药作用于Raji细胞后,可不同程度抑制细胞中C-myc、HIF-1α、VEGF、GLUT1、HKⅡ、LDHA及SDHA m RNA及蛋白的表达;联合OM处理Raji细胞后,代谢相关基因m RNA及蛋白的表达水平进一步下调(P值均〈0.05)。联合用药组抑制葡萄糖消耗及糖酵解代谢产物乳酸生成的能力明显高于BTZ单药组(P值均〈0.05)。BTZ单药组能明显促进Raji细胞的凋亡且呈剂量依赖性,BTZ浓度为25 nmol/L时,Raji细胞主要被阻滞于G2/M期;而联合用药组能进一步提高细胞的凋亡率,BTZ浓度为5和15 nmol/L时,Raji细胞主要被阻滞于G0/G1期。结论 :BTZ可抑制Raji细胞的糖酵解通路,联合OM可协同增强这一抑制作用,这种� 展开更多
关键词 淋巴瘤 非霍奇金 硼替佐米 寡霉素类 糖酵解 有氧氧化
利用基因表达谱芯片技术研究ALA-PDT对白血病细胞株HL-60的作用机制
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作者 韩晓凤 倪蓓文 +1 位作者 钟济华 陈芳 《应用激光》 CSCD 北大核心 2016年第2期233-238,共6页
目的:研究探讨5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)对白血病细胞株HL-60的作用机制。方法:以白血病细胞株HL-60为实验模型。实验分为2组,对照组(未处理组)及ALA+PDT组。利用人全基因组基因表达谱芯片技术研究ALA-PDT后HL-6... 目的:研究探讨5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)对白血病细胞株HL-60的作用机制。方法:以白血病细胞株HL-60为实验模型。实验分为2组,对照组(未处理组)及ALA+PDT组。利用人全基因组基因表达谱芯片技术研究ALA-PDT后HL-60细胞基因改变情况。结果:人全基因组芯片共检测了48 000个基因,用RT-PCR的方法验证了数据的可靠性,对芯片结果产生的数据分析发现:ALA-PDT影响了细胞的多种生命进程,如转录调控,抑制翻译过程;促进一系列应激反应;上调促凋亡基因的表达,抑制抗凋亡基因的表达,促进凋亡的发生。结论:ALA-PDT通过诱导凋亡的方式杀伤HL-60细胞。多种调控机制参与凋亡的发生:c-Abl和PML基因是上调基因网络中的主导基因,共同参与了凋亡的发生。线粒体途径和TNF途径激活,DEDD2及CDC2L2介导的凋亡通路也占了一定的地位。ERN1、Bcl2、及c-Jun等基因参与其中促进凋亡的发生。 展开更多
关键词 5-氨基乙酰丙酸 光动力学治疗 HL-60 细胞凋亡 基因表达谱芯片技术
妊娠合并原发免疫性血小板减少症患者的临床特点分析及T细胞分泌细胞因子水平的研究 被引量:2
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作者 韩晓凤 倪蓓文 +4 位作者 方怡 殷婷玉 陈云燕 朱照辉 陈芳 《诊断学理论与实践》 2016年第2期152-156,共5页
目的 :研究妊娠合并原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)(原发ITP,以下简称为ITP)患者的临床特点及围产期结局,同时研究T细胞分泌细胞因子水平的变化与发病间的关系。方法 :回顾性总结25例妊娠合并ITP患者、8例... 目的 :研究妊娠合并原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)(原发ITP,以下简称为ITP)患者的临床特点及围产期结局,同时研究T细胞分泌细胞因子水平的变化与发病间的关系。方法 :回顾性总结25例妊娠合并ITP患者、8例非妊娠的ITP患者及11例正常孕妇的临床资料,利用蛋白芯片技术检测其T细胞分泌的代表性细胞因子表达水平,并分析妊娠合并ITP患者的T细胞功能变化与其妊娠合并ITP发病间的关系。结果:13例患者(13/25)为妊娠前即有ITP病史,另12例(12/25)则于妊娠期间诊断为ITP;25例患者中的16例(64%)接受了ITP治疗,共分娩了24名新生儿,1例死胎,母亲血小板计数与新生儿间的血小板计数无相关性;蛋白芯片检测结果显示,妊娠合并ITP患者与正常孕妇相比,其肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)、IL-5、IL-6水平显著升高,IL-12p40和IL-16显著降低;同时,妊娠合并ITP患者与非妊娠期ITP患者相比,其IL-1α、IL-10及IL-13水平显著降低。结论:多数ITP孕妇母婴结局良好。T细胞分泌细胞因子水平的变化可能通过T细胞功能变化参与了妊娠合并ITP患者的发病机制,其中Th1细胞、Th17细胞及CD8+T细胞分泌的相关细胞因子水平升高可能是妊娠合并ITP患者的发病机制之一。 展开更多
关键词 妊娠 原发免疫性血小板减少症 T细胞
阿霉素对斑马鱼心脏毒性的评估及机制探索 被引量:2
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作者 徐卓然 陈芳 +3 位作者 沈莉菁 钟济华 郎雯竞 邵霞 《诊断学理论与实践》 2016年第1期30-36,共7页
目的 :通过观测阿霉素致斑马鱼胚胎产生心脏毒性的表型,及联用右丙亚胺保护剂,建立实验室心脏毒性药物评价及研究的模型。方法:选择受精后24 h的AB系野生型斑马鱼胚胎,分别暴露于不同浓度的阿霉素中后,选择心脏毒性表型最明显的阿霉... 目的 :通过观测阿霉素致斑马鱼胚胎产生心脏毒性的表型,及联用右丙亚胺保护剂,建立实验室心脏毒性药物评价及研究的模型。方法:选择受精后24 h的AB系野生型斑马鱼胚胎,分别暴露于不同浓度的阿霉素中后,选择心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度,将其分别联用或不联用右丙亚胺作用48 h。在斑马鱼胚胎发育至受精后72 h时,在显微镜下观察其心血管系统的形态学改变,记录心率变化,并分别抽提斑马鱼胚胎RNA,检测心脏发育相关基因及氧化、抗氧化相关指标。结果:随着阿霉素浓度的升高,斑马鱼出现了如胚胎发育畸形、心包水肿等改变,且死亡率升高,心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度为64.40μmol/L,而联用右丙亚胺(130.47μmol/L、260.93μmol/L)则可有效挽救阿霉素对斑马鱼心脏的毒性作用,并可分别将其胚胎生存率由35%显著提升至90%和88.3%(P〈0.001)。通过反转录聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测斑马鱼心脏发育相关基因NK2转录因子相关基因5、心肌肌球蛋白轻链2、心房肌球蛋白重链、心室肌球蛋白重链,均未发现显著改变。检测氧化抗氧化指标后发现,64.40μmol/L的阿霉素可致斑马鱼胚胎丙二醛含量显著上升(P〈0.001),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性则明显下降(P〈0.001),而右丙亚胺可有效清除丙二醛并恢复SOD活性。结论:成功建立了斑马鱼评价心脏毒药物的模型。阿霉素对斑马鱼胚胎的心脏毒性呈浓度依赖性增加,且与斑马鱼胚胎死亡率亦呈正相关,而右丙亚胺则可有效挽救阿霉素致斑马鱼胚胎的心脏毒性,并降低其死亡率,且此作用与斑马鱼心脏发育相关基因无关,但与氧化及抗氧化通路有明显的相关性。 展开更多
关键词 斑马鱼模型 阿霉素 右丙亚胺 心脏毒性
治疗中期~(18)F-FDG PET/CT与初诊弥漫大B细胞淋巴瘤患者疗效及预后的相关性 被引量:3
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作者 黄洪晖 肖菲 +8 位作者 韩晓凤 朱坚轶 徐岚 刘佳 陈虞梅 施一平 朱照辉 陈芳 王健民 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期194-201,共8页
目的 :探讨初诊弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者治疗中期18氟-氟代脱氧葡萄糖-PET/CT(18F-fluoro-2-deoxy-D-glucose-PET/CT,18F-FDG-PET/CT)的预后判断价值。方法 :回顾性分析69例初诊DLBCL患者的... 目的 :探讨初诊弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者治疗中期18氟-氟代脱氧葡萄糖-PET/CT(18F-fluoro-2-deoxy-D-glucose-PET/CT,18F-FDG-PET/CT)的预后判断价值。方法 :回顾性分析69例初诊DLBCL患者的临床资料。所有患者均接受R-CHOP/CHOP方案一线治疗,且化疗前及化疗3个疗程后均接受PET/CT检查(分别命名为PET0和PET3),计算肿瘤病灶的最大标准化摄取值(maximum standardized uptake value,SUVmax)。应用受试者工作特征曲线确定PET0至PET3的SUVmax下降指数[ΔSUVmax(PET0-3)]的最佳分界值。Pearsonχ2检验、Kaplan Meier法及COX比例风险模型评价ΔSUVmax(PET0-3)与治疗前临床特征及疗效的关系,以及对无进展生存(progression-free survival,PFS)和总生存(overall survival,OS)的判断价值。结果:ΔSUVmax(PET0-3)预测DLBCL患者疾病进展的最佳分界点为80%。ΔSUVmax(PET0-3)与血清乳酸脱氢酶水平、Ann Arbor分期和国际预后指数密切相关。ΔSUVmax(PET0-3)≥80%组的完全缓解率及总有效率均显著高于〈80%组;ΔSUVmax(PET0-3)≥80%组的3年PFS率及OS率均显著优于〈80%组(3年PFS率:86.5%vs 44.1%,P=0.000;3年OS率:95.2%vs 68.6%,P=0.004)。多因素生存分析结果显示,ΔSUVmax(PET0-3)〈80%是影响患者PFS和OS的独立预后因素(PFS:P=0.000,风险比为8.301;OS:P=0.016,风险比为7.191)。结论:接受R-CHOP/CHOP方案治疗的初诊DLBCL患者,以ΔSUVmax PET0-3)作为评判标准的治疗中期PET/CT是预测PFS和OS的重要因素,对患者的危险度分层具有重要的临床价值。 展开更多
关键词 淋巴瘤 大B细胞 弥漫性 正电子发射断层摄影术 氟脱氧葡萄糖F18 预后
原发性胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤的预后因素分析 被引量:3
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作者 王洁琼 韩晓凤 +5 位作者 肖菲 黄洪晖 王婷 钟璐 徐岚 陈芳 《内科理论与实践》 2015年第1期23-28,共6页
目的 :探讨原发性胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤(PGI-DLBCL)的临床特点、免疫表型及治疗方案与预后的关系。方法:收集我院2000年4月至2014年6月诊治的91例PGI-DLBCL患者的临床资料,对其临床特征、治疗方案、免疫分型以及疗效进行回顾性... 目的 :探讨原发性胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤(PGI-DLBCL)的临床特点、免疫表型及治疗方案与预后的关系。方法:收集我院2000年4月至2014年6月诊治的91例PGI-DLBCL患者的临床资料,对其临床特征、治疗方案、免疫分型以及疗效进行回顾性分析。结果:随访时间为3~166个月,中位随访时间49个月。91例PGI-DLBCL患者中,男女比例为1.22∶1,中位年龄57(17~79)岁。Ann Arbor分期Ⅰ~Ⅱ期49例(53.8%),Ⅲ~Ⅳ期42例(46.2%);血清乳酸脱氢酶(LDH)正常者75例(82.4%),升高者16例(17.6%);国际预后指数(IPI)低/低中危患者73例(80.2%),中/中高危患者18例(19.8%);生发中心B细胞(GCB)患者22例(34.9%),非GCB(non GCB)患者41例(65.1%);采用CHOP(环磷酰胺、长春地辛、表柔比星、甲泼尼龙)方案治疗的55例(60.4%),利妥昔单抗联合CHOP方案化学治疗(化疗)36例(39.6%),5年总生存(OS)率分别为75.5%、95.7%。单因素分析结果显示IPI、Ann Arbor临床分期、LDH水平、免疫分型以及是否联合利妥昔单抗化疗对生存率有显著影响(均P〈0.05)。结论:IPI、Ann Arbor分期、血清LDH水平、免疫分型以及是否联合利妥昔单抗化疗对PGI-DLBCL患者预后的估计有重要临床意义。 展开更多
关键词 胃肠道 弥漫大B细胞淋巴瘤 预后分析
三氧化二砷对Molt-4细胞株Notch信号通路作用机制的研究 被引量:1
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作者 刘海艳 沈莉菁 +4 位作者 陈芳 万海霞 钟济华 王婷 钟华 《内科理论与实践》 2015年第1期35-40,共6页
目的 :探讨三氧化二砷(As2O3)对急性淋巴细胞白血病细胞株Molt-4中Notch1基因的作用机制。方法 :采用反转录(RT)-PCR检测正常人外周血淋巴细胞与急性淋巴细胞白血病细胞株A3和Molt-4中Notch1基因m RNA的相对表达量,选取Notch1 m ... 目的 :探讨三氧化二砷(As2O3)对急性淋巴细胞白血病细胞株Molt-4中Notch1基因的作用机制。方法 :采用反转录(RT)-PCR检测正常人外周血淋巴细胞与急性淋巴细胞白血病细胞株A3和Molt-4中Notch1基因m RNA的相对表达量,选取Notch1 m RNA表达量较高的Molt-4细胞,分别经浓度0、2、4μmol/L As2O3处理细胞后,应用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞活力,显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Notch1 m RNA表达率,蛋白质印迹法检测细胞内Notch1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及胱天蛋白酶3(caspase-3)凋亡蛋白的表达情况。结果:As2O3能下调Molt-4细胞中Notch1基因及蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax蛋白比例,并促进凋亡蛋白胱天蛋白酶3的活化,2μmol/L As2O3处理后,随作用时间延长,Molt-4细胞的凋亡率逐渐增高(r=0.989,P〈0.05)。Molt-4细胞分别经2μmol/L和4μmol/L As2O3处理72 h后,流式结果显示,随As2O3浓度升高,Molt-4细胞凋亡率升高(r=1.000,P〈0.05)。As2O3以时间和浓度依赖的方式诱导Molt-4细胞凋亡。结论:As2O3通过抑制Molt-4细胞株Notch1信号通路的表达,抑制其增殖并诱导凋亡。 展开更多
关键词 NOTCH 1基因 三氧化二砷 MOLT-4细胞
粒细胞集落刺激因子和AMD3100增加白血病细胞对化疗敏感性的机制研究 被引量:1
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作者 盛贤福 钟华 +2 位作者 万海霞 钟济华 陈芳 《诊断学理论与实践》 2015年第2期120-125,共6页
目的:探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)和AMD3100增加白血病细胞对化疗敏感性的作用及其机制。方法:用G-CSF、AMD3100单药或联合处理HL-60细胞株后,与HS-5上清或HS-5细胞共培养,采用CCK-8法检... 目的:探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)和AMD3100增加白血病细胞对化疗敏感性的作用及其机制。方法:用G-CSF、AMD3100单药或联合处理HL-60细胞株后,与HS-5上清或HS-5细胞共培养,采用CCK-8法检测细胞活力,用AnnexinⅤ试剂盒检测细胞凋亡,流式细胞术和蛋白印迹法分别检测膜表面CXCR4蛋白、总CXCR4蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测mRNA表达情况。结果:HS-5上清或细胞能够保护HL-60细胞免于自发或药物诱导的凋亡,而G-CSF和AMD3100均能够部分逆转这种保护作用,两药联合时更明显;G-CSF能够降低细胞膜表面和细胞质内总CXCR4蛋白及CXCR4 mRNA的表达,同时上调micro RNA-146a(miR-146a)表达;AMD3100只能降低膜表面CXCR4表达,对细胞质内总CXCR4蛋白、CXCR4 mRNA和miR-146a表达无影响。结论:G-CSF和AMD3100通过不同机制降低白血病细胞的CXCR4表达而阻断CXCR4/CXCL12信号轴,从而打破骨髓微环境-白血病细胞间的相互作用,直接增强化疗药物杀伤作用。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 AMD3100 CXCR4/CXCL12信号轴 化疗耐药 骨髓微环境
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