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汉滩病毒核衣壳蛋白与宿主相互作用蛋白的分离与纯化
1
作者 刘赫 叶伟 +5 位作者 张亮 程林 马宏炜 董阳超 张芳琳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期97-102,共6页
目的构建带有亲和素标签的汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)表达质粒,转染HEK293T细胞并表达后,鉴定与其相互作用的宿主蛋白。方法合成亲和素标签基因(SF)与HTNV NP基因,先后克隆入哺乳动物真核表达载体pCAGGS,构建带有亲和标签SF的HTNV N... 目的构建带有亲和素标签的汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)表达质粒,转染HEK293T细胞并表达后,鉴定与其相互作用的宿主蛋白。方法合成亲和素标签基因(SF)与HTNV NP基因,先后克隆入哺乳动物真核表达载体pCAGGS,构建带有亲和标签SF的HTNV NP表达质粒,酶切鉴定重组质粒,获得的重组质粒命名为pCAGGS-SF-NP。将重组表达质粒瞬时转染到HEK293T细胞中, Western blot法检测重组质粒的表达;瞬时转染并收获蛋白样品,与StrepTrapTM HP琼脂珠混匀后, 4℃过夜孵育;转移到层析柱中,经缓冲液洗涤、脱硫生物素洗脱完成亲和层析,获得洗脱样本;洗脱样品进行SDS-PAGE,分离得到与NP相互作用的宿主蛋白。结果酶切鉴定结果表明成功构建pCAGGS-SF和pCAGGS-SF-NP,重组质粒成功表达串联SF与NP的融合蛋白;在亲和层析过程中,成功特异富集融合蛋白SF-NP;洗脱样品成功分离出与NP相互作用的宿主蛋白。结论构建的重组表达质粒可以在真核细胞中成功表达融合蛋白SF-NP并获得了与NP相互作用的宿主蛋白。 展开更多
关键词 汉滩病毒 核衣壳蛋白 亲和纯化
cxcr2 基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建与鉴定 预览
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作者 张莉 刘永飞 +3 位作者 叶传涛 边培育 侯立朝 《微生物学免疫学进展》 2019年第1期19-25,共7页
目的构建小鼠CXC型趋化因子受体2(CXCR2)基因cxcr2过表达的骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcell,BMSC)并进行鉴定。方法全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSC,采用流式细胞术检测干细胞抗原1(stemcellantigen-1,SCA-1)、CD44、CD43... 目的构建小鼠CXC型趋化因子受体2(CXCR2)基因cxcr2过表达的骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcell,BMSC)并进行鉴定。方法全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSC,采用流式细胞术检测干细胞抗原1(stemcellantigen-1,SCA-1)、CD44、CD43、CD45、IA/IE表达率,并诱导成骨分化。以含有小鼠cxcr2的质粒为模版进行PCR扩增,将获得的cxcr2克隆到慢病毒载体,命名为pLenti-cxcr2-GZ;将其与慢病毒包装质粒共转染HEK-293T细胞,收获慢病毒后,通过离心法感染BMSC,经过1μg/mLzeocin压力选择建立了稳定表达CXCR2的小鼠BMSC(CXCR2-BMSC)。采用流式细胞术和RT-PCR分别检测其CXCR2蛋白和mRNA表达水平,Transwell趋化实验检测其迁移能力。结果90%以上的第3代BMSC表达CD44、SCA-1,几乎不表达IA/IE、CD34、CD45,且成功诱导成骨分化。菌液PCR、质粒双酶切后,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果得到特异、大小正确的条带及测序鉴定正确,表明成功构建了pLenti-cxcr2-GZ表达质粒。流式细胞术和RT-PCR结果显示,CXCR2-BMSC的CXCR2蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组BMSC,差异有统计学意义(P<0.001)。Transwell结果显示,CXCR2-BMSC迁移能力高于对照组BMSC,差异有统计学意义(P<0.01)。结论利用慢病毒系统成功构建了稳定表达CXCR2的BMSC,cxcr2基因修饰BMSC后可明显增加BMSC的迁移能力。 展开更多
关键词 CXC型趋化因子受体2 小鼠 骨髓间充质干细胞 细胞迁移
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反转课堂对医学微生物学实验教学的启示 预览 被引量:1
3
作者 张芳琳 张亮 +3 位作者 柏银兰 吴兴安 吕欣 《基础医学教育》 2018年第5期372-374,共3页
医学微生物学是一门重要的专业基础课程,实验课教学不仅是对理论知识的巩固,更是培养学生动手操作及创新能力的重要手段。反转课堂的应用,能够激发学生学习热情,使其自主学习能力和创新能力得到更好的发挥。
关键词 医学微生物学 实验教学 反转课堂
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基孔肯雅病毒病毒样颗粒的制备及初步鉴定
4
作者 陈何嵩 程林 +5 位作者 马宏炜 叶伟 韩佩君 张亮 张芳琳 《热带医学杂志》 CAS 2017年第3期285-288,F0004共5页
目的通过杆状病毒表达系统表达制备基孔肯雅病毒(CHIKV)病毒样颗粒并进行初步鉴定。方法首先将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因C-E3-E2-6K-E1克隆入p Fast-Bac~(TM) Dual转移载体中并鉴定;然后将构建正确的重组转移载体转化DH10Bac感受... 目的通过杆状病毒表达系统表达制备基孔肯雅病毒(CHIKV)病毒样颗粒并进行初步鉴定。方法首先将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因C-E3-E2-6K-E1克隆入p Fast-Bac~(TM) Dual转移载体中并鉴定;然后将构建正确的重组转移载体转化DH10Bac感受态细胞后提取重组杆粒并鉴定;再将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞后获得重组杆状病毒,并利用免疫荧光法(IFA)鉴定其感染Sf9细胞后E2蛋白的表达;最后通过透射电镜(TEM)和Western-Blot鉴定CHIKV病毒样颗粒。结果成功获得了含有CHIKV结构蛋白基因的重组杆状病毒,该重组病毒经过IFA及WB验证在昆虫细胞中能够表达CHIKV的E蛋白,并在电镜下观察到了直径约60~80 nm的CHIKV病毒样颗粒。结论通过杆状病毒表达系统成功表达并获得CHIKV的病毒样颗粒,为CHIKV早期快速检测法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 杆状病毒表达系统 病毒样颗粒
肥大细胞在病毒感染中的作用 预览 被引量:3
5
作者 宫铭 郑安佑 《微生物学免疫学进展》 2017年第1期65-68,共4页
自从Paul Ehrlich于1878年首次发现肥大细胞以来,肥大细胞作为过敏反应中非常重要的效应细胞之一被广泛研究。直到近20年,人们才逐渐认识到肥大细胞参与多种病理、生理过程,尤其是在机体抗感染、免疫与免疫病理损伤中也发挥着重要作用... 自从Paul Ehrlich于1878年首次发现肥大细胞以来,肥大细胞作为过敏反应中非常重要的效应细胞之一被广泛研究。直到近20年,人们才逐渐认识到肥大细胞参与多种病理、生理过程,尤其是在机体抗感染、免疫与免疫病理损伤中也发挥着重要作用。随着人们对肥大细胞在细菌和寄生虫的抗感染、免疫中作用的理解不断深入,肥大细胞在病毒感染及病毒引起的相关疾病中的作用逐渐成为备受关注的研究热点,现就肥大细胞在不同病毒感染中的作用作一综述。 展开更多
关键词 肥大细胞 病毒 病毒感染 免疫病理作用
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HCV多中和抗原表位嵌合病毒样颗粒免疫获得血清内中和抗体评价 预览
6
作者 王晓岩 张海 +5 位作者 林芳 崔颖 李斌 张惠中 韦三华 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期707-711,720共6页
目的:纯化的HCV多中和抗原表位及HCV包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用。方法:纯化的HCV多中和抗原表位及包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒(... 目的:纯化的HCV多中和抗原表位及HCV包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用。方法:纯化的HCV多中和抗原表位及包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒(VLPs-MEp S、VLPs-E2S)10μg皮下接种新西兰兔,间隔2周共免疫3次,采集不同时间免疫兔血清,ELISA方法测定血清内的抗体,PBS组作为对照;制备1b型HCVpp,观察血清抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用,对免疫血清保护性进行初步评价。结果:免疫后血清中产生一定水平的中和抗体,血清中和抗体测定VLPs-MEp S明显高于VLPs-E2S(P〈0.05)。VLPs-MEp S与VLPs-E2S组均显著高于对照PBS组(P〈0.01)。对HCVpp抑制作用,VLPs-MEp S高于VLPs-E2S组(P〈0.05),最高中和率可达61.49%,二者均高于对照组(P〈0.01)。结论:嵌合病毒样颗粒免疫新西兰兔后产生一定水平中和抗体,该中和抗体具有保护作用,为研发中和抗体表位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 表位 病毒样颗粒 中和抗体 免疫
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高氧抑制LPS/ATP诱导的骨髓源性巨噬细胞的焦亡阴弯弯1李项瑞1闫晋琪1李楠1张二飞
7
作者 涂可 闫汝虎 +2 位作者 张莉 侯立朝 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第12期2232-2235,共4页
目的:研究不同浓度的氧气在LPS/ATP诱导的骨髓源性巨噬细胞焦亡中的作用。方法:提取C57BL/6小鼠的骨髓源性巨噬细胞,用1μg/ml脂多糖(LPS)刺激细胞24 h,用5 m M三磷酸腺苷(ATP)刺激细胞4 h,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞... 目的:研究不同浓度的氧气在LPS/ATP诱导的骨髓源性巨噬细胞焦亡中的作用。方法:提取C57BL/6小鼠的骨髓源性巨噬细胞,用1μg/ml脂多糖(LPS)刺激细胞24 h,用5 m M三磷酸腺苷(ATP)刺激细胞4 h,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β水平的变化。用5 m M ATP刺激细胞后,给予细胞40%、60%和100%的氧气处理1.5 h,ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β水平的变化。结果:1μg/m L LPS和5 m M ATP先后刺激下,骨髓源性巨噬细胞培养上清液中IL-1β的水平明显升高(P〈0.001),用caspase-1特异性抑制剂AC-YVAD-CMK刺激骨髓源性巨噬细胞后IL-1β水平明显降低(P〈0.001)。5 m M ATP刺激之后给予细胞不同浓度的氧气干预1.5 h后,细胞培养上清液中IL-1β的水平明显下降。结论:高氧抑制LPS/ATP诱导的骨髓源性巨噬细胞的焦亡。 展开更多
关键词 氧气 骨髓源性巨噬细胞 白细胞介素-1Β 焦亡
嵌合有HCV多中和抗原表位的乙肝S抗原病毒样颗粒的制备与鉴定
8
作者 王晓岩 张海 +6 位作者 林芳 崔颖 李斌 舒放 张惠中 韦三华 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期107-110,共4页
制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBVS抗原病毒样颗粒(virus—like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48... 制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBVS抗原病毒样颗粒(virus—like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48h后在培养上清中得到自我装配的嵌合HCV多中和表位及包膜蛋白E2的HBV病毒样颗粒(VLP—MEpS,VLP-M2S)。蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后。电化学发光法进行HBsAg定量测定、电镜分析和Western blotting鉴定。制备出的嵌合病毒样颗粒VLP—MEpS和VLP-E2S经浓缩后其HBsAg定量最高达到3×10^4ng/mL。实验表明我们成功制备出嵌合有HCV多中和抗原表位的HBVVLP,为进一步分析诱导的中和抗体研究奠定基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 中和表位 病毒样颗粒 制备
嵌合HCV串联多表位的乙肝S基因真核载体构建及表达
9
作者 王晓岩 +5 位作者 李翠 林芳 崔颖 舒放 张惠中 韦三华 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期12-17,共6页
[目的]构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)串联多中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达。[方法]将HCV基因中高度保守且具有广谱交叉中和活性的三个表位和一个... [目的]构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)串联多中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达。[方法]将HCV基因中高度保守且具有广谱交叉中和活性的三个表位和一个HVR1模拟表位串连。串联表位嵌合于HBV S基因的氨基端胞外区,形成嵌合基因MEpS;将基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组质粒pCI-MEpS。将质粒转染至293T细胞中,间接免疫荧光及Western Blot检测嵌合基因的表达情况。[结果]重组质粒经双酶切证实构建正确;pCI-MEpS转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western Blot显示pCI-MEpS在相对分子量约38 kDa处可见蛋白条带。[结论]构建了HBV S抗原嵌合HCV串联多中和抗原表位的重组质粒,成功在293T细胞中表达,为制备嵌合HCV串联多中和抗原表位的HBV S抗原VLPs,研究嵌合VLPs免疫动物后产生的中和抗体的保护作用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 中和抗原表位 乙型肝炎病毒 S抗原 基因表达
gas6基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定 预览
10
作者 边培育 叶传涛 +7 位作者 韩佩君 董阳超 叶伟 马宏炜 陈何嵩 张芳琳 贾战生 《生物技术通讯》 CAS 2016年第6期763-768,共6页
目的:制备携带生长停滞特异性基因6(gas6)的慢病毒,并构建和鉴定稳定表达生长停滞特异性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,用流式细胞术检测MSCs标志分子;根据Gen Bank中小鼠gas6... 目的:制备携带生长停滞特异性基因6(gas6)的慢病毒,并构建和鉴定稳定表达生长停滞特异性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,用流式细胞术检测MSCs标志分子;根据Gen Bank中小鼠gas6基因序列设计并合成上下游引物,以MSCs提取的m RNA制备的c DNA为模板扩增gas6基因片段,克隆入慢病毒表达载体,获得Lenti-gas6-GFP-zeocin质粒并测序鉴定;采用三质粒包装系统(穿梭质粒p Lenti-gas6-GZ、包装质粒p SPAX2和p MD2.G)包装慢病毒,并验证其表达目的基因情况;将浓缩的慢病毒离心感染第4代MSCs,用吉欧霉素(zeocin)筛选培养后获得稳定表达GAS6的MSCs,采用流式细胞术检测其阳性率以及表面标志分子表达情况。结果:构建了携带gas6基因的慢病毒,建立了gas6基因修饰的MSCs。结论:慢病毒载体可介导gas6基因在小鼠MSCs中过表达,且不会干扰MSCs的生物特性,为进一步研究gas6基因修饰的MSCs的治疗作用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 生长停滞特异性基因6 慢病毒载体 骨髓间充质干细胞
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间充质干细胞免疫调控作用可塑性的研究进展 预览 被引量:3
11
作者 边培育 +1 位作者 叶传涛 贾战生 《微生物学免疫学进展》 2016年第6期89-92,共4页
自1974年Friedenstein等首次发现并分离出兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)以来,MSC的基础和临床研究均有一定的进展,尤其是MSC具有免疫调控功能的发现突破了最初仅注重其在多向分化和再生功能方面研究的局限,为MSC的... 自1974年Friedenstein等首次发现并分离出兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)以来,MSC的基础和临床研究均有一定的进展,尤其是MSC具有免疫调控功能的发现突破了最初仅注重其在多向分化和再生功能方面研究的局限,为MSC的研究开辟了新方向。近年来,MSC在炎症中的作用备受关注,MSC在不同的局部微环境中可呈现出抗炎/促炎的可塑性,并可通过调节固有免疫和适应性免疫重塑局部炎症反应,实现免疫稳态。现就MSC免疫调控作用可塑性及机制方面的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 间充质干细胞 免疫调控可塑性 微环境稳态
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丙型肝炎病毒河北株E2蛋白胞外核心区的真核表达及应用
12
作者 叶传涛 边培育 +5 位作者 翁代慧 张会 杨敬 张颖 贾战生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期746-749,共4页
目的真核细胞表达丙型肝炎病毒(HCV)河北株E2蛋白胞外核心区(E2c)并利用E2c蛋白检测HCV患者血清中特异性抗E2蛋白抗体水平。方法以HCV1b型(河北株)基因序列为基础,设计HCV1b E2c基因序列并通过基因拼接的方法合成;将含有组织型纤... 目的真核细胞表达丙型肝炎病毒(HCV)河北株E2蛋白胞外核心区(E2c)并利用E2c蛋白检测HCV患者血清中特异性抗E2蛋白抗体水平。方法以HCV1b型(河北株)基因序列为基础,设计HCV1b E2c基因序列并通过基因拼接的方法合成;将含有组织型纤溶酶原激活物(t PA)信号肽的E2c扩增产物克隆入p CI-neo真核表达载体,获得p CI-tpa-1b E2c载体;将p CI-tpa-1b E2c真核表达载体转染HEK293T细胞,收集细胞上清后进行浓缩及纯化,Western blot法鉴定蛋白特异性;以获得E2c蛋白为抗原,建立基于雪花莲凝集素(GNA)的改良ELISA检测HCV患者血清特异性抗E2c抗体水平。结果成功利用真核表达系统表达获得E2c蛋白,建立了GNA改良ELISA检测HCV患者血清中抗E2蛋白抗体的方法。结论成功在HEK293T细胞表达HCV-1b E2c蛋白并进行了临床应用。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) E2蛋白胞外核心区(E2c)蛋白 真核表达 基于雪花莲凝集素的改良ELISA
医学微生物学课堂教学与网络课程的比较研究 预览 被引量:7
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作者 王媛 +3 位作者 黎志东 杨敬 寇甜甜 丁天兵 《基础医学教育》 2016年第4期310-311,共2页
高校网络课程的发展给传统课堂教学带来了挑战,同时也是传统课堂教学改革的重要契机。文章对这两种教学模式的优点和不足之处进行了深入分析,提出了网络课程和课堂教学进行优势互补和有效整合的几点意见,希望能够为高校医学微生物学探... 高校网络课程的发展给传统课堂教学带来了挑战,同时也是传统课堂教学改革的重要契机。文章对这两种教学模式的优点和不足之处进行了深入分析,提出了网络课程和课堂教学进行优势互补和有效整合的几点意见,希望能够为高校医学微生物学探索出一种高效的适应时代发展的新的教学模式,从而激发学生学习兴趣,提高教学质量。 展开更多
关键词 医学微生物 传统课堂教学 网络课程 有效整合
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HeLa细胞膜上日本脑炎病毒受体候选分子的初步鉴定 被引量:1
14
作者 王媛 时莹 +2 位作者 寇甜甜 丁天兵 《热带医学杂志》 CAS 2016年第1期18-21,27共5页
目的寻找HeLa细胞膜上可与日本脑炎病毒(JEV)结合的分子。方法采用免疫共沉淀(Co-IP)技术,分离HeLa细胞膜上可与JEV特异结合的分子,对SDS-PAGE特异条带进行质谱分析,并经Western blotting和酶联免疫吸附试验(ELISA)验证其与JEV的... 目的寻找HeLa细胞膜上可与日本脑炎病毒(JEV)结合的分子。方法采用免疫共沉淀(Co-IP)技术,分离HeLa细胞膜上可与JEV特异结合的分子,对SDS-PAGE特异条带进行质谱分析,并经Western blotting和酶联免疫吸附试验(ELISA)验证其与JEV的特异结合。结果 Co-IP复合物经SDS-PAGE分离出多个条带,选择最明显的3条带进行了质谱分析,结果显示分别为真核细胞翻译延长因子2(eEF2)、热休克蛋白90β(HSP90β)和微管蛋白α6。利用兔抗人HSP90β单克隆抗体进行Western blotting和ELISA实验,证实了细胞膜中确有HSP90β且可与JEV特异性结合。结论 HSP90β是HeLa细胞膜JEV受体的候选分子。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒 细胞膜蛋白 热休克蛋白90β
HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒的制备及纯化 被引量:5
15
作者 舒放 王晓岩 +6 位作者 林芳 王希 李斌 刘冲 张惠中 韦三华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期257-260,265共5页
目的制备丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并进行纯化和鉴定。方法采用脂质体法分别将4个HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合重组表达载体p CI-HBSE1、p CI-HB... 目的制备丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并进行纯化和鉴定。方法采用脂质体法分别将4个HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合重组表达载体p CI-HBSE1、p CI-HBSE2、p CI-HBSE3、p CI-HBSE4转染HEK293T细胞,48 h后收集培养上清,获得自我装配的嵌合HCV中和表位的HBV VLPs,分别命名为VLPs-SE1、VLPs-SE2、VLPs-SE3、VLPs-SE4,蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后,电镜观察VLPs,电化学发光法进行HBs Ag定量,ELISA法检测嵌合VLPs作为包被抗原与HCV感染患者血清的反应。结果电镜观察可见4种嵌合VLPs,大小约为22 nm;浓度最高的VLPs-SE2 HBs Ag含量达5.51×103ng/ml,该浓度可满足后续试验的要求;用混合VLPs作为包被抗原检测的HCV感染患者血清中和抗体水平稍高于单一VLPs作为包被抗原检测的水平。结论成功制备了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合VLPs,为进一步评价VLPs体内诱导的中和抗体及中和抗体的保护作用奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 中和抗原表位 乙型肝炎病毒 S抗原 嵌合 病毒样颗粒
HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒诱导的中和抗体应答及保护评价 被引量:2
16
作者 王晓岩 张海 +7 位作者 舒放 魏欣 林芳 崔颖 李斌 张惠中 韦三华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期945-950,共6页
目的用纯化的嵌合HCV中和抗原表位的HBV VLPs免疫Balb/c小鼠,测定小鼠血清中的中和抗体,并观察免疫血清对HCVpp和HCVcc感染Huh7.5的抑制作用。方法 500 ng纯化的嵌合病毒样颗粒抗原,免疫Balb/c小鼠3次,每2周尾静脉采血,用合成的表位肽和... 目的用纯化的嵌合HCV中和抗原表位的HBV VLPs免疫Balb/c小鼠,测定小鼠血清中的中和抗体,并观察免疫血清对HCVpp和HCVcc感染Huh7.5的抑制作用。方法 500 ng纯化的嵌合病毒样颗粒抗原,免疫Balb/c小鼠3次,每2周尾静脉采血,用合成的表位肽和HBs Ag阳性血清作为包被抗原检测小鼠血清中抗体。免疫血清和HCVpp及HCVcc预处理,观察其对HCVpp和HCVcc感染Huh7.5细胞的抑制作用。结果 Balb/c小鼠体内诱导出HBs Ab和一定水平的针对HCV中和抗原表位的中和抗体,混合VLPs免疫诱导的中和抗体水平高于单一VLPs诱导产生的中和抗体。用免疫小鼠血清预处理的HCVpp和HCVcc感染Huh7.5能力明显低于对照组。结论嵌合HCV中和抗原表位的HBV VLPs免疫小鼠可诱导产生针对中和抗原表位的中和抗体,该中和抗体能抑制HCVpp和HCVcc对Huh7.5的感染,具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 中和表位 病毒样颗粒 免疫 评价
2型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及其相互作用蛋白的纯化 被引量:2
17
作者 翁代慧 +5 位作者 董阳超 韩佩君 叶传涛 杨敬 王媛 尹文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1588-1592,共5页
目的构建2型登革病毒(DENV2)非结构蛋白3(NS3)与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化(TAP)法获得与NS3相互作用的蛋白。方法根据DENV2基因序列,设计引物;以DENV2 c DNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和... 目的构建2型登革病毒(DENV2)非结构蛋白3(NS3)与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化(TAP)法获得与NS3相互作用的蛋白。方法根据DENV2基因序列,设计引物;以DENV2 c DNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表达载体p CI-SF,获得重组表达质粒p CI-NS3-SF;将上述重组质粒通过转染试剂LipofectamineTM2000瞬时转染进入HEK293T细胞,Western blot法验证NS3融合蛋白的表达;通过TAP法分离纯化与NS3相互作用的蛋白。结果成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用TAP系统分离得到与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白。结论串联亲和纯化法可以有效的分离与DENV2 NS3相互作用的细胞蛋白。 展开更多
关键词 登革病毒 NS3 串联亲和纯化
丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建 预览
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作者 赵海卫 韩佩君 +7 位作者 姚敏 吕欣 杨敬 乔卿华 翁代慧 党品香 尹文 《生物技术通讯》 CAS 2015年第5期627-631,共5页
目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6... 目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3-5B蛋白 复制复合体 转基因小鼠模型
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基孔肯雅病毒疫苗的研究进展 预览
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作者 陈学敏 《微生物学免疫学进展》 2015年第5期64-68,共5页
基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒( Chikungunya virus,CHIKV)引起的一种急性传染病。基孔肯雅病毒属披膜病毒科甲病毒属。近年来,该病毒死灰复燃,在全球多处引发大规模疫情暴发,是重要的全球性公共卫生问题之一。目前尚无针对CHIKV的... 基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒( Chikungunya virus,CHIKV)引起的一种急性传染病。基孔肯雅病毒属披膜病毒科甲病毒属。近年来,该病毒死灰复燃,在全球多处引发大规模疫情暴发,是重要的全球性公共卫生问题之一。目前尚无针对CHIKV的疫苗和有效抗病毒药物。疫苗一直是CHIKV研究的热点领域,目前已经取得了很大的进展,就基孔肯雅病毒疫苗的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 疫苗 疫情暴发 公共卫生问题
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抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因的克隆与鉴定 被引量:1
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作者 寇甜甜 丁天兵 《中国医师杂志》 CAS 2014年第5期577-580,共4页
目的 克隆抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区(VH)基因.方法 从分泌抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2的杂交瘤细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增重链可变区基因.凝胶回收纯化后与pMD-18T载体连接,重组载体转化于宿主菌DH5α,挑取菌落PC... 目的 克隆抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区(VH)基因.方法 从分泌抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2的杂交瘤细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增重链可变区基因.凝胶回收纯化后与pMD-18T载体连接,重组载体转化于宿主菌DH5α,挑取菌落PCR鉴定后测序并进行分析.测序正确的质粒经EcoRI和XhoI酶切、纯化后的产物和原核表达载体pRSET A在SolutionI作用下连接,转化BL21(DE3)对重组质粒进行表达.经Tricine-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测重链可变区表达产物的表达水平,用ELISA检测表达产物能否与日本脑炎病毒结合.结果 确定了2F2VH基因序列,长度为354 bp,编码118个氨基酸,第22位和第96位残基是维持抗体结构的半胱氨酸,含有特异性CDR1、CDR2和CDR3区域,符合鼠源性免疫球蛋白基因的特征.ELISA检测结果显示原核表达的2F2重链可变区产物可与日本脑炎病毒特异性结合.结论 获得了抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因. 展开更多
关键词 脑炎病毒 日本 抗体 单克隆 克隆 分子
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